:Sigma-Al化ich，型号： 17850。牛血清白蛋白（BSA):Sigma-Al化ich，A2058。
[0025] 庆大霉素半抗原的结构式如式I所示：
式I。
[0026] 环丙沙星半抗原的结构式如式Π 所示：
式Π 。
[0027] 实施例1、偶联物、特异性抗体和特异性抗体的的量子点标记物的制备 一、抗原制备 1、庆大霉素-载体蛋白偶联物的制备 (1)取26mg庆大霉素原料药，溶于4ml碳酸盐缓冲液（取63.6mg无水化C〇3和117.6mg NaHC〇3，用纯水定容至20mL)中。
[0028] (2)取BSA 60mg，溶于6ml所述碳酸盐缓冲液。
[0029] (3)将步骤（1)得到的庆大霉素溶液滴加到步骤(2)得到的BSA溶液中并室溫混匀 lOmin，然后加入48化1 1%(体积比）戊二醒水溶液并室溫揽拌（400巧m)过夜，然后滴加 Na册4溶液巧mg Na册4溶于50化1纯水，新制）并室溫揽拌比，然后置于透析袋中用纯水透析 (透析参数:4°C、l(K)rpm揽拌、2天、每天换液2次），再然后用PBS缓冲液(pH7.2、0.01M)进行 透析(透析过程参数:4°C、100巧m揽拌、2天、每天换液2次），然后4500rpm离屯、6min并取上清 液(庆大霉素-载体蛋白偶联物溶液），lml/管分装，-20°C保存。
[0030] (4)采用紫外分光光度法测定庆大霉素-载体蛋白偶联物溶液中庆大霉素与载体 蛋白的结合比（方法参考文献:罗舜菁，钟寒燕，刘成梅，陈婷婷，陈发荣，严杰琳;氯霉素免 疫抗原及包被抗原的制备;食品科学；2010, Vol. 31，No. 10,91-94)，庆大霉素与BSA的 摩尔结合比为8:1。
[0031] 2、环丙沙星半抗原的制备 (1) 称取环丙沙星33.3mg，溶于1.5mL去离子水中，用1M氨氧化钢溶液调pH9.0; (2) 冰浴中加入乙二醇二缩水甘油酸20化，室溫揽拌反应4h，混合液真空干燥，得到的 固体即为产物。
[0032] 3、环丙沙星-载体蛋白偶联物的制备 (1) 取11.3mg半抗原溶于1血0.1M碳酸钢缓冲液； (2) 逐滴加入牛血清白蛋白溶液巧Omg牛血清白蛋白溶于5mL0.1M碳酸钢缓冲液）； (3) 室溫揽拌过夜后装入透析袋，PBS 4度透析72小时，期间换透析液6 次，将透析液在无菌条件下过0.22 μπι孔径的滤膜，分装于安培瓶中，-20度保存； (4) 采用紫外分光光度法测定环丙沙星-载体蛋白偶联物溶液中环丙沙星与载体蛋白 的结合比（方法参考文献:罗舜菁，钟寒燕，刘成梅，陈婷婷，陈发荣，严杰琳;氯霉素免疫抗 原及包被抗原的制备;食品科学；2010, Vol. 31，No. 10,91-94)，环丙沙星与BSA的摩尔 结合比为7:1。
[0033] 二、特异性抗体的制备 1、庆大霉素鼠单克隆抗体的制备 (1)动物免疫程序 采用BALB/c小鼠作为免疫动物，W庆大霉素-载体蛋白偶联物为免疫原，单次免疫剂量 为50-100yg/只载体蛋白计）。首次免疫时将免疫原溶液与等体积的弗氏完全佐剂混合 制成乳化剂，颈背部皮下多点注射。首次免疫后，每间隔2周将免疫原溶液与等体积的弗氏 不完全佐剂混合乳化，进行加强免疫，颈背部皮下多点注射。第Ξ次加强免疫2周后将免疫 原剂量减半用0.5ml灭菌生理盐水稀释后，采用腹腔注射的方法加强免疫一次，3天后取脾 细胞。
[0034] (2)细胞融合与克隆化 步骤（1)得到的脾细胞，按（4-8):1的比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争 ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定 分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0035] (3)杂交瘤细胞株的保藏 将一株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞命名为庆大霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株 GEN-2A1 (简称杂交瘤细胞GEN-2A1)。杂交瘤细胞GEN-2A1已于2013年10月25日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、(简称CGMCC，地址为:北京市朝阳区北辰西路1 号院3号），保藏号为CGMCC No.8406。
[0036] (4)细胞冻存和复苏 用冻存液将杂交瘤细胞GEN-2A1制成细胞浓度为（1-5) X 106个/mL的细胞悬液，在液氮 中长期保存。复苏时，取出冻存管，立即放入37°C水浴中速融，离屯、去除冻存液后移入培养 瓶内培养。
[0037] 巧)单克隆抗体的制备与纯化 细胞培养基(7.4)的制备方法：向RPMI-1640培养基中添加小牛血清和碳酸氨钢，小牛 血清的终浓度为20%(质量百分含量），碳酸氨钢的终浓度为0.2%(质量百分含量）。
[0038] 将杂交瘤细胞GEN-2A1置于细胞培养基中，37°C培养2天，采用辛酸-饱和硫酸锭法 将得到的细胞培养上清液进行纯化，得到庆大霉素单克隆抗体溶液(-20°C保存）。
[0039] 庆大霉素单克隆抗体溶液中的蛋白质浓度(mg/ml )=1.45 X OD280-0.74 X OD260。
[0040] 采用W上公式计算单克隆抗体中的蛋白质浓度，为0.8mg/ml。
[0041] 2、环丙沙星鼠单克隆抗体的制备 用环丙沙星-载体蛋白偶联物代替庆大霉素-载体蛋白偶联物，其他同步骤1。
[0042] 环丙沙星单克隆抗体溶液中的蛋白质浓度(mg/m 1) =0.6mg/m 1。
[0043] Ξ、量子点标记的特异性抗体的制备 ①取2.5mg量子点，用抑4.7、0.1M的MES缓冲液洗涂，然后用1ml pH4.7、0.1M的MES缓冲 液重悬，加入0.96mg EDC和1.15mg N服，37°C反应30分钟，20000巧m离屯、5min，收集沉淀，即 为活化后的量子点。
[0044] ②取步骤①得到的活化后的量子点，用pH8.5、50mM的棚砂缓冲液洗涂，然后将 2.5mg活化后量子点、单克隆抗体(蛋白质含量为0.15mg)和P册.5、50mM的棚砂缓冲液混匀 (总体积为0.8ml)，25°C反应3.5小时(单克隆抗体和量子点形成稳定的肤键共价结合）。
[0045] ③取完成步骤②的液相，加入BSA并使其质量百分含量为5%(目的是对剩余活性氨 基位点进行封闭），37°C反应30分钟，20000rpm离屯、5min，收集沉淀，用抑7.4、0.02M的PBS缓 冲液洗涂，用1ml pH7.4、0.02M的PBS缓冲液重悬，4°C保存待用。
[0046] 实施例2、同时检测庆大霉素和哇诺酬类药物的量子点免疫巧光试剂盒的组装 量子点购自深圳市泰勒斯科技有限公司，产品目录号为TLS ? LumiQDTM20。该量子点的 表征如下:粒径为20皿、粒径的CV为15%，量子产率为60%，表面簇基含量为5X10-3mmol/mg， 水溶性，CdSe/化S核壳结构，激发光波长为345nm，发射波长是620nm;红色巧光量子点。量子 点上的簇基与蛋白质上的氨基形成肤键并连接起来。
[0047] 量子点免疫巧光检测试剂盒包括如下组件： 一、包被了包被原的微孔板 取实施例1制备的包被原溶液，用包被缓冲液稀释(包被缓冲液即抑9.6、0.05M的碳酸 盐缓冲液），得到蛋白浓度为5ng/mL的包被原稀释液。将lOg牛血清白蛋白、O.lmL proclin 300和lOOOmL pH7.4、0.01 M的憐酸盐缓冲液混合，得到封闭液。
[004引（1)将包被原稀释液加入微孔板αΟΟμL孔），37°C解育16小时。
[0049] (2)完成步骤(1)后，倾去孔内的液体，洗涂，拍干。
[0050] (3)完成步骤(2)后，每孔加入2(Κ)化封闭液，37°C溫育化。
[0051] (4)完成步骤(3)后，倾去孔内的液体，干燥后用侣膜真空密封保存。
[0052] 二、量子点标记的抗体工作液 将实施例1制备的单克隆抗体用抗体稀释液稀释65000倍，得到抗体工作液。
[00閲抗体稀释液:取BSAlOmg，用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液溶解并定容至lOOOmL，得到 抗体稀释液。
[0054] Ξ、标准品溶液 含不同梯度浓度庆大霉素和环丙沙星的标准品溶液1-6的溶剂为PBS缓冲液，溶质及 其浓度为庆大霉素0-40.5yg/L和环丙沙星0-24.3yg/L，具体如下： 标准品溶液1为含庆大霉素化g/L和环丙沙星化g/L的PBS缓冲液； 标准品溶液2为含庆大霉素0.扣g/L和环丙沙星0.化g/L的PBS缓冲液； 标准品溶液3为含庆大霉素1.扣g/L和环丙沙星0.化g/L的PBS缓冲液； 标准品溶液4为含庆大霉素4.扣g/L和环丙沙星2.化g/L的PBS缓冲液 标准品溶液5为含庆大霉素13.5yg/L和环丙沙星8.化g/L的PBS缓冲液； 标准品溶液6为含庆大霉素40.5yg/L和环丙沙星24.3yg/L的PBS缓冲液。
[005引四、稀释液 pH7.4、0.02M 的 PBS 缓冲液。
[0056] 五、浓缩洗涂液:将lOmL吐溫-20、5g叠氮化钢和990mL憐酸盐缓冲液混合，得到所 述洗涂液;所述憐酸盐缓冲液的浓度为0.01M pH值为7.4。 实施例3、同时检测庆大霉素和哇诺酬类药物的量子点免疫巧光试剂盒的使用方法 一、样本前处理方法 1、猪肉或鸡肉检测样本溶液的获得:准确称取1 ±0.01 g均质后的猪肉或鸡肉样品于 50 mL离屯、管中；加入20血样品提取液;室溫(23-27°C)下，高速满动