用作激酶抑制剂的氨基嘧啶的制作方法

专利名称：：用作激酶抑制剂的氨基嘧啶的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用作极光(Aurora)蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还提供了含有这类化合物的药学上可接受的组合物，以及利用这类化合物和组合物治疗各种障碍的方法，以及制备所述化合物的方法。
背景技术：
：才及光蛋白质是丝氨酸/苏氨酸激酶家族中的三个相关成员(^皮称为才及光-A，才及光-B，以及才及光-C),才及光蛋白质对于细胞周期的有丝分裂相的进行起到重要的作用。具体的说，极光-A在中心体的成熟和分裂、有丝分裂纺锤体的形成、以及染色体的忠实分裂过程中起到至关重要的作用。极光-B是一种染色体伴随蛋白，对于染色体在中期赤道板上的排列、纺锤体组装检查点以及l包质分裂的正确完成起到主要的调控作用。在很多人类肿瘤中可以观察到才及光-A、极光-B或者极光-C的过表达，这些肿瘤包括直肠腺癌，卵巢腺癌，胃腺癌以及浸润性导管腺癌。许多研究已经证明，通过siRNA、显性负性抗体或者中和抗体对人类肿瘤细i包系中的极光-A或者极光-B进4亍删除或者抑制，破坏了有丝分裂的进行，同时发生了4NDNA的聚集，在某些情况下，之后还伴随着核内复制以及细胞死亡。由于极光激酶与4艮多人类肿瘤相关，以及它们在这类肿瘤细胞的增殖过程中起到的作用，极光激酶被认为是尤其有吸引力的研究目标。理想的情况是提供一类极光激酶抑制剂，这种极光激酶抑制剂具有良好的类似药物的性质，例如抑制细胞增殖的能力。因此，需要提供一类能够抑制极光激酶的化合物，且该4匕合物表现出良好的类似药物的性质。
发明内容本发明提供了可用作极光蛋白激酶抑制剂的化合物及其药学上可接受的组合物。所述化合物为式I表示的化合物或其药学上可接受的盐，这里的变量如本发明所定义。上述化合物及其药学上可接受的组合物能够有效的在体外、在活体内、以及在体内抑制激酶活性。其用途包括治疗或者预防骨髓及外骨髓增殖障碍和增殖失调，例如黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤、以及肿瘤。其他的用途包括用于对激酶进行生物学现象和病理学现象的研究；用于对由所述激酶介导的胞内信号转导途径的研究；以及对新的激酶抑制剂的比4史评<介。具体实施方案本发明提供式I的4匕合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>或其药学上可接受的盐，其中r2是Cw烷基或环丙基；r5是CH2CH3,CH2CF3,CH2CH2CF3,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>或「1是H或CH，J2是C"4烷基;且Cy是c3.5环烷基,在本发明的某些方面，115选自CH2CF3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>,或CF3。在其他实施方案中，R5选自CH2CF3或CF3。在仍然其他的实施方案中，R5是CH2CF3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>本发明的另一个方面，Cy\八N—gCy、在一些实施方案中，RY是案中，Cy是环丙基。RY是W或N-在一些实施方在本发明的其他方面，R2是甲基,—方面，才是供了选自表1的化合物(或其药学上可4妄受的盐)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>1-21为了达到本发明的目的，依照元素周期表CAS版本，化学和物理手册75版来确定上述化学元素。此外，有机化学的普遍原则在本领域普通4支术人员已知的文章中有所描述，包4舌，例长口，"有才;M匕学，，，ThomasSorrell,UniversityScienceBooks(大学牙牛学手册)，Sausalito:1999,以及"March'sAdvancedOrganicChemistry"(March's高级有才几4匕学)，第5片反，由Smith,M.B.牙口March,J.，JohnWiley&Sons》扁著，纟丑纟勺2001,上述文章的全部内容在此通过引i正全部并入本文。如本发明所述，上述指定的原子的数量范围包括其中的任意整数。例如，具有1-4个原子的基团可以具有1个、2个、3个或者4个原子。如本发明所述，本发明的化合物可以任选的#1一个或者一个以上取代基所耳又代，例如前文大致描述的取代基，或者本发明列举的特定的类、子类和种类的取代基。本领域普通技术人员应该理解的是，术语"任选的被取代"可以与术语"取代或者未取代"相互替换。一^:来说，无论在术语"取代，，之前是否具有术语"任选的"，都是指使用特定的取代自由基来替代给定结构中的氢自由基。除非特别指明，任选被取代的基团可以在该基团的每个取代位置处具有取代基，而当任何给定结构中具有一个以上可以取代的位置、且被选自特定基团的一个以上取代基进行取代时，每个位置上的取代基可以是相同的或者是不同的。本发明预想的取代基的组合优选的是那些能形成稳定的或者化学可行性化合物的取代基。这里使用的术语"稳定的"指的是下述一类化合物当将该化合物置于允许其发生生产反应、检测反应、以及优选的还原反应、纯化反应的条件下时，以及将其应用于本发明公开的一种或者一种以上用途时，基本上不会发生改变的化合物。在某些实施方案中，稳定的化合物或者具有化学可行性的化合物是一种化合物，这种化合物当不存在水分或者其他化学活性条件时，在40。C或者更低的温度下保存至少一周后基本上不会发生改变。这里使用的术语"烷基"指的是不含支链活含有支链的、直链的烃基，所述烃基是完全饱和的，并且与所属分子的其他部分是单点连接的。烷基的具体例子包括，^旦不局限于，曱基，乙基，异丙基，正丙基，以及仲丁基。术语"环烷基"指的是完全饱和的、并且与所属分子的其他部分是单点连接的单环烃。适当的环烷基基团包括，但不局限于，环丙基，环丁基，以及环戊基。这里使用的术语"不饱和的"指的是具有一个或者一个以上不饱和单元的基团。术语"卣化烷基，，指的是发生了一个或者一个以上闺素原子取代的烷基。包括全氟化烷基，例如CF3。术语"卣素"指的是氟，氯，溴，或者碘。这里使用的术语"保护基团"指的是用来临时封锁多官能团化合物上一个或者一个以上需要封锁的活性位点的试剂。在某些实施方案中，保护基团具有下述性质中的一种或者一种以上下述性质，或者优选具有下述性质中的全部a)高产量的发生选择性反应，使得当一个或者一个以上其他活性位点发生反应的时候，被保护的物质对该反应是稳定的；以及b)能够高效率的被试剂选择性的去除，而不会破坏再生的官能团。范例性的保护基团在下述文献中有详细描述Greene,T.W.，Wuts,P.G,"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis"(有才几合成中的4果护基团)，第3版，JohnWiley&Sons,纽约1999，以及该手册的其4也X反本，上述文献的全部内容通过引i正在此全部并入本文。这里使用的术语"氮保护基团"指的是用来临时封锁多官能团化合物上一个或者一个以上需要封锁的氮活性位点的试剂。优选的氮保护基团同样具有上述列举的性质，某些范例性的氮保护基团同样在下述文献中有详细描述Greene,T.W.，Wuts，P.G,"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis"(有机合成中的4呆护基团)，第3版，第7章，JohnWiley&Sons，纽约1999，上述文献的全部内容通过引i正全部并入本文。除非特别指明，本发明描述的结构也意在包4舌该结构的所有同质异构体形式(例如，对映异构体，非对映异构体，以及几4可异构体(或者构象))；例如，每个不对称中心的R构型和S构型，(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明所述化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体、和几何异构体(或者构象)混合物都包括在本发明的范围之内。除非特别指明，本发明所述化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围之内。本领域的普通4支术人员能够理解，NHN一个吡哇基团可以有"i牛多种表示方法。例如，、n所示的结构也可以表示其他可能的互变异构体，例如\fi。同样的，H^1^^所示的结构也可以表示其他可能的互变异构体，例如除非特别指明，取代基可以围绕任意可旋转的4建进H4亍自由旋转。例如，^N所示的取代基也可以表示1^^。\，-N同样的，人B所示的取^基也可以表示此外，除非特别指明，本发明描述的结构同样意在包括那些区别仅在于具有一个或者一个以上富含同位素原子的化合物。例如，具有本发明所描述的结构、区别仅在于由氘或者氚代替氢，或者由130或者"C-富集的碳代替碳得到的化合物在本发明的范围之内。这类化合物可以在例如生物检测中用作分析工具或者探针。本发明所述的化合物可以依照i兌明书并且通过本领域普通技术人员已知的常用步骤进行制备。这类化合物可以通过已知的方法进行分析，所述已知的方法包括但不局限于LCMS(液才目色i普法)以及NMR(才亥》兹共振)。应当理解，下文戶斤示的具体条件仅仅是实施例，并不是意在用来限制制备本发明所述化合物的反应条件的范围。相反，本发明也包括本领域普通^l术人员依照本发明说明书对于本发明化合物的制备的描述而得到的显而易见的其他反应条件。除非特别指明，下述图解中的所有变量都如这里所定义的。本发明^吏用了下述缩写DIPEA是二异丙基乙胺DMF是二曱基甲酰胺n-BuOH是正丁醇t-BuOH是^又丁醇EtOH是乙醇MeOH是曱醇EtOAc是乙酸乙酉旨TFA是三氟乙酸DMSO是二曱基亚石风Rt是4亭留时间DCM是二氯曱烷MeCN是乙腈THF是四氢呋喃TBTU是2-(1氪誦苯并三唑墨l-基)-1,1，3,3-四曱基脲四氟硼酸HPLC是高岁文液4目色i普法LCMS是液相色镨柱法^画R是核磁共振总体图解上面所述的总体图解描述了制备本发明所述化合4勿的某些方法。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>图解I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>上述图解I描述了制备式4(图解I中)所示化合物的大致路线，其中JJ对应于这里所描述的氮杂环丁二烯上的耳又代基且其中R2和R5如这里所定义的。式1的二氯嘧啶与HQ-R^结合，生成式2所示的化合物。在某些实施方案中，在适当的溶剂的存在下(例如，4又丁醇)，将上述两种化合物加热16小时。在其他的实施方案中，在乙腈以及三乙胺的存在下，将上述两种化合物在0'C下混合1小时。然后，在适当的溶剂(例如，二曱基曱酰胺)和适当的碱(例如，二异丙基乙胺/碘化钠)的存在下，将式2所示的化合物与任选被取代的氨基吡唑进行加热，生成式3所示的化合物，在氮杂环丁二烯衍生物和适当的溶剂(例如，正丁醇)的存在下，加热式3所示的化合物，生成式4所示的化合物。图解II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>上述图解II描述了制备式6(图解II中)所示化合物的大致路线，其中JJ其中JJ对应于这里所描述的氮杂环丁二烯上的取4、基且其中R2和R5如这里所定义的。在嘧咬的存在下，将式5所示的化合物与适当的酸性氯化物(其中"X"是氯)结合，生成中间体化合物，将所述中间体化合物与甲醇钠以及曱醇进行混合，生成式6所示的化合物。在某些实施方案中，"X"可以是氢氧基，在这种情况下，使用适当的酸耦联剂，将酸与胺进行耦联。适当的酸耦联剂的例子包括，但不局限于，EDC(1-(3-二曱氧基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸)，DCI(二异丙基石灰二亚胺)，以及HOBT(l-羟基苯并三唑)。用于这类耦联反应的适当的溶剂包4舌，Y旦不局限于，THF(四氳呋喃)，CH2CL2(二氯甲烷)，以及二恶烷。下面的图解描述了合成不同类型的氮杂环丁二烯的方法。这些氮杂环丁二烯可以用于根据这里所描述的方法形成本发明4匕合物。APhPh、phi-PrOH,國>^phPd(OH)2,EtOH,H2「Nrn--「Nrn-lin厂？HJJJJJJ789上面所示的图解A描述了氬氧基取代的氮杂环丁.烯的总体制备途径，其中JJ是-CHJij2,或Cy。图解B1314图解B描述了环丙基-氟基_取代的氮杂环丁二烯的总体制备途径。在合适的条件下氧化化合物10从而形成化合物11，化合物11在合适的Grignard条件(格林尼亚条件)下能够与环丙基-溴化镁结合，形成环丙基取代的氮杂环丁二烯12。随后在适当的氟化作用条件下对化合物12进4亍氟化形成化合物13,在Pd/C条件下使化合物13与氩化合，形成去保护的游离氮杂环丁二烯14。因此，本发明涉及用来制备本发明所述化合物的方法。用于评^f介本发明所述的化合物的活性的方法(例如，激酶检测)是本领域已知的，也会在后面的实施例中有所描述。可以在体外、在活体内或者在细胞系内对本发明所述化合物的蛋白激酶抑制剂活性进行检测。活体内检测包括那些用来确定对^皮活化的激酶的激酶活性或者ATP酶活性的氺卩制性的检测。作为选择，活体内检测定量分析抑制剂对于蛋白激酶的结合能力，这可以通过在二者结合之前对抑制剂进4亍;故射性标记，之后分离抑制剂/激酶复合体，并且检测放射性标记结合的量来定量分析，或者通过进行竟争试-睑来定量分析，在竟争性试另全中，使用结合了已知放射性配体的激酶与新的抑制剂一起进行培养。本发明的另外一个方面涉及在生物样本中抑制、激酶活性的方法，该方法包括将所述的生物样本与式I所示化合物或者包含该化合物的组合物相接触的步骤。这里使用的术语"生物样本"指的是体外样本或者活体外样本，包括，但不局限于，细胞培养物或其提取物；从哺乳动物中获得的活体组织或其才是耳又物；以及血液、唾液、尿液、粪{更、津奮液、目艮泪或者其^也体液或者它们的提取物。抑制生物才羊本中的激酶活性能够有效的达到纟艮多目的，这些目的是本领域冲支术人员已知的。这类目的的范例包4舌，1旦不局限于，血液传输，器官移;f直，生物样本的保存，以及生物检测。抑制生物样本中的激酶活性同样能够有效的应用于对激酶进4亍生物学现象和病理学现象的研究；对由所述激酶介导的胞内信号转导途径的研究；以及对新的激酶抑制剂的比较评价。可以将才及光蛋白激酶抑制剂或其药学上可4妻受的盐制成药物组合物的形式，施用于动物或者人类。这类药物组合物属于本发明的另外一种实施方案，其包括能够有效剂量的能够治疗或者预防由才及光介导的病症的才及光蛋白抑制剂，以及药学上可接受的载体。这里^f吏用的术i吾"由极光介导的病症"或者"由极光介导的疾病"指的是已知的由极光(极光A,极光B，以及才及光C)起到主要作用的任何疾病或者其他有害的病症。这类病症包4舌，〗旦不局限于，肺瘤，增殖障碍，以及骨髓及外骨髓增殖障碍。骨髓及外骨髓增殖障碍的范例包括，〗旦不局限于，真性红细胞增多症，血小板增多症，伴有骨髓纤维变性的骨髓化生，'隄性骨髓性白血病(CML),'隄性骨髓单核J求性白血病，高嗜酸粒细胞综合症，青少年骨髓单核球性白血病，以及系统性月巴大细胞疾病。术语"肿瘤"也包括，但不局限于，下述肿瘤表皮样瘤；口内:口腔，嘴唇，舌头，嘴巴，咽；心脏的:肉瘤(血管肉瘤，纤维肉瘤，横紋肌肉瘤，脂肪肉瘤)，粘液瘤，横紋肌瘤，纤维瘤，脂肪瘤以及畸胎瘤；肺部:支气管肺癌(扁平细胞或者表皮样瘤，未分化的小细胞，未分化的大细^0腺癌)，齿槽(支气管)癌，支气管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，软骨型错构瘤，间皮瘤;胃肠内的食道(扁平细胞癌，喉，腺癌，平滑肌肉瘤，26淋巴瘤)，胃(癌，淋巴瘤，平滑肌肉瘤)，胰腺(胰腺导管腺癌，胰岛瘤，胰高糖素瘤，促胃液素瘤，良性肿瘤，血管活性肠肽癌)，小肠(腺癌，淋巴瘤，良性肿瘤，卡波西氏肉瘤，平滑月几瘤，血管瘤，脂肪瘤，纤维神经瘤，纤维瘤)，大肠(腺癌，管状腺瘤，绒毛状腺瘤，4晉构瘤，平滑力几瘤)，结肠，结直肠，结肠直肠，直肠，泌尿生殖道:肾(腺癌，威尔姆氏肿瘤肾母细胞瘤，淋巴瘤，白血病)，膀胱和尿道(扁平细胞癌，移4亍细胞癌，腺癌)，前列腺(腺癌，肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤，畸胎瘤，胚胎性癌，畸胎癌，绒毛膜癌，肉瘤，间质性细胞癌，纤维瘤，纤维腺瘤，腺癌样瘤，脂肪瘤)；肝部:肝细胞瘤(肝细l包癌)，月旦管细胞癌，肝母细月包瘤，血管肉瘤，细月包腺瘤，血管瘤，胆道；骨头:骨源性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维性组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤文氏肉瘤，恶性淋巴瘤(网状组织细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(骨软骨外生性骨疣)，良性软骨瘤，成软骨细胞瘤，软骨粘液样纤维瘤，骨样骨瘤以及巨细胞肿瘤；神经系统:头骨(骨瘤，血管瘤，肉芽瘤，黄瘤，变形性骨炎)，脑膜(脑膜瘤，脑膜肉瘤，神经月交质瘤病)，脑(星形细月包瘤，成神经管细月包瘤，神经月交质瘤，室鼓膜瘤，胚组织瘤+>果体瘤，多形性脑力交质母细胞瘤，少突神经胶质瘤，神经鞘瘤，成视网膜细胞瘤，先天性肿瘤)，骨髓纤维神经瘤，脑膜瘤，神经胶质瘤，肉瘤)；妇产科ii:子宫(子宫内膜癌)，子宫颈(子宫颈癌，肺瘤倾向性子宫颈发育异常)，卵巢(卵巢癌浆液性嚢腺癌，粘液性嚢腺癌，未分类癌，粒层细胞膜细胞瘤，支持-间质细胞瘤，无性细月包瘤，恶性畸胎瘤)，外阴(扁平细胞癌，上皮内癌，腺癌，纤维肉瘤，黑素瘤)，阴道(透明细万包癌，扁平细月包癌，葡萄形肉瘤(胚胎性横紋肌肉瘤)，输卵管(癌)，乳房；血液类的:血液(骨髓性白血病急性和慢性，急性淋巴母细胞白血病，慢性淋巴细J包白血病,骨髓;&外骨髓增殖疾病，多发性骨骨it瘤，骨髓异常增殖综合症)，霍奇金氏疾病，非霍奇金氏淋巴瘤恶性、淋巴瘤多毛细胞；淋巴障碍；皮肤:恶性黑素瘤，基细胞癌，扁平细月包癌，卡波西氏肉瘤，角化棘皮瘤，结构不良痣，脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕瘤，牛皮癣，甲状腺:乳突状甲状腺癌，滤泡状曱状腺癌；骨髓样曱状腺癌，未分化的曱状腺癌；多发性2A型内分泌肿瘤，多发性2B型内分泌肺瘤，家族性骨髓才莩曱状腺癌，嗜4各细万包瘤，副神经节瘤；以及肾上腺:成神经细胞瘤。因此，本发明使用的术语"肺瘤细胞"包括受上述列出的病症中的任意病症所4曼害的细月包。在某些实施方案中，所述的肺瘤选自结肠直肠月中瘤、曱状腺肿瘤、或者乳房胂瘤。在某些实施方案中，本发明所述的化合物能够有效的治疗肺瘤，例如结肠直肠肿瘤、甲状腺胂瘤、乳房肿瘤以及肺部肿瘤；和骨ft及外骨髓增殖障碍，例如真性红细月包增多症，血小板增多症，伴有骨髓纤维变性的骨髓化生，慢性骨髓性白血病，慢性骨髓单核球性白血病，高嗜酸粒细胞综合症，青少年骨髓单核5求性白血病，以及系统性月巴大细月包疾病。在某些实施方案中，本发明所述的化合物可以有效的治疗造血功能障碍，尤其是，急性骨髓性白血病(AML),十曼性骨髓性白血病(CML)，急性早幼粒细月包白血病(APL),以及急性淋巴细胞白血病(ALL)。除了本发明所述的4匕合物之外，该化合物的药学上可接受的衍生物或者药物前体也可以用来制备组合物从而治疗或者预防上述列出的病症。"药学上可接受的^t生物或者药物前体"是指本发明所述化合物的任何药学上可4妻受的酯、该酯的盐或者其4tM汙生物，在为接受者施用之后，上述衍生物或者前体能够直接的或者间接的为其提供本发明所述的化合物，或者提供本发明所述化合物的抑制性活性代谢物或残基。这类衍生物或者药物前体包括下述物质当为患者施用本发明所述的化合物时，那些能够增加所述化合物的生物可利用率的物质(例如，使口服给药的化合物更容易溶入血液当中)，或者是那些对母体化合物运送至与其相关的生物区室(例如，大脑或者i^巴系统)有促进、增强作用的物质。本发明所述4匕合物的药学上可接受的药物前体的范例包括，但不局限于，酉旨，氨基酸酯，磷酸酯，金属盐以及磺酸酯。本发明所述的化合物可以以游离的形式应用于治疗过程中，或者在适当的时候，可以以药学上可接受的盐的形式应用于治疗过程中。这里所^使用的术语"药学上可"^妄受的盐"指的是化合物的盐，这类盐经过了充分的医学判定，适合用于接触人类和低等动物的组织，不存在不适当的毒性、刺激性、过敏性反应等等，具有相称的合理效益/风险比。本发明所述化合物的药学上可接受的盐包括衍生于适当的无机酸碱和有才几酸碱的盐。可以在本发明所述化合物被最后分离和纯化的过程中原位制备这样的盐。酸加成盐可以通过下述步骤来制备1)将纯化过的化合物以自由基的形式与适当的有机酸或者无机酸进行反应，以及2)分离因此而生成的盐。适当的酸式盐的范例包4舌乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，安息香酸盐，苯基磺酸盐，》危酸氳盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷丙酸盐，葡萄糖酸盐，十二烷基石危酸盐，乙烷磺酸盐，曱酸盐，延胡索酸盐，葡#唐庚酸盐，甘油石粦酸盐，乙醇酸盐，半碌u酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸，氢溴酸，氲》舆酸，2-幾基乙烷磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，曱烷磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，pectinate,过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，磷酸盐，苦味酸盐，三甲基乙酸盐，丙酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐，辟b酸盐，酒石酸盐，辟u氰酸盐，曱苯磺酸盐以及十一酸盐。其他的酸，例如酢浆草酸，由于本身不是药学上可4妄受的的，因而可以在制备盐的过程中作为中间体物质，来获得本发明所述化合物及其药学上可接受的酸加成盐。碱加成盐可以通过下述步骤来制备1)将纯^f匕过的化合物以酸的形式与适当的有机碱或者无机碱进行反应，以及2)分离因此而生成的盐。由适当的碱书亍生所4寻的盐包4舌碱金属(例如，钠和钾)盐，碱土金属(例如，镁)盐，胺盐以及1^+(CM烷基)4盐。本发明也包括所述化合物的任何碱性含氮基团的季铵化作用得到的盐。通过这种季铵化作用可以得到水溶性的或者油溶性的或者分散性的产物。碱加成盐也包4舌碱金属盐和碱土金属盐。表小生的碱金属盐或者碱土金属盐包括钠，锂，钾，钓，镁，以及类似金属。在适当的情况下，其他的药学上可接受的盐包括无毒铵，季铵，以及由相反电荷的离子形成的阳离子铵，例如卣化物，氢氧化物，羧酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硝酸盐，低级烷基磺酸盐以及芳基磺酸盐。其他的酸和碱由于本身不是药学上可接受的，因而可以在制备盐的过程中作为中间体物质，来获得本发明所述化合物及其药学上可接受的&复加成盐。可以用在本发明所述药物组合物中的药学上可接受的载体包括，^L不局限于，离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵-粦脂，血清蛋白，例如人血清白蛋白，》爰冲物质例如-岸酸盐，氨基乙酸，山梨酸，山梨酸钾，々包和才直物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，盐类或者电解液，例如硫酸精蛋白，磷酸氪二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，硅胶，三硅酸，聚乙烯吡咯烷酮，基于纤维素的物质，聚乙二醇，羧曱基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌^殳共聚物，聚乙二醇以及羊毛脂。本发明户斤述的纟且4、4勿可以口月良给药，肠道夕卜纟会药，吸入喷雾给药，局部给药，直肠给药，鼻内给药，口腔内给药，阴道内给药或者通过才直入式灌l命给药。这里使用的术语"肠道外，，包括皮下，静脉内，月几肉内，关节内，滑膜内，胸骨内，鞘内，腹膜内，肝内，病灶内以及颅骨内注射或者输液^支术。本发明所述组合物的无菌注射剂形式可以是水相悬浮液或者油质悬浮液。可以依照本领域已知的技术，使用适当的分散剂或者润湿剂以及悬浮剂制备这类悬浮液。上述无菌注射剂形式也可以是存在于无毒的肠道外可接受性稀释剂或者溶剂中的无菌注射溶液或者悬浮液，例如存在于1,3-丁二醇中的溶液。在这些可接受性溶士某和溶剂当中，可以使用的是水，林格氏溶液以及等压氯4t钠溶液。除此之外，无菌的不挥发性油是通常4吏用的溶剂或者悬浮介质。为了达到上述目的，可以〗吏用温和的不挥发性油包括合成的单甘油酯或者甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可以用来制备注射剂，作为天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或者蓖麻油，特别的使用其聚氧乙烯化形式。这些油溶液或者悬浮液还可以含有长链酒精稀释剂或者分散剂，例如羧甲基纤维素或者类似的分散剂，这些试剂普遍被用来制备包括乳化剂以及悬浮剂在内的药学上可接受的剂型。其他的通常使用的表面活性剂，例如吐温、司盘，以及通常^t用来制备药学上可接受的固体、液体或者其他剂型的其他乳化剂或者生物可利用率增效剂也可以用来达到本发明的制备目的。本发明所述的药物组合物可以以任4可的口服可接受性剂型形式进行口服给药，这些剂型包括，但不局限于，胶嚢，片剂，水相悬浮液或者溶液。对于口服使用的片剂来说，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂，例如硬脂酸镁，也可以被加入。对于口服使用的胶嚢形式来说，有效的稀释剂可以包括乳净唐和干玉米淀4分。当需要使用水相悬浮液进4亍口服时，可以将其中的活性成分与乳化剂以及悬浮剂进行混合。如果需要，也可以加入某些甜P未剂，风P未剂或者着色剂。或者，本发明所述的药物纟且合物可以以纟全剂的形式用于直肠^^药。可以将试剂与适当的无刺激性赋形剂进^f亍混合，来制备上述组合物，所述的赋形剂在室温下呈固态，但是在直肠温度下呈液态，因此能够在直肠中溶化以释放药物。这类材泮+可以包4舌可可油，*奪蜡，以及聚乙二醇。本发明所述的药物组合物也可以进行局部施用，特别是当治疗目标包括那些局部给药容易接触的区域或者器官，包括眼部疾病，皮肤疾病，或者下肠道疾病。可以针对这些区域或者器官中的来制备适当的局部给药组合物。可以4吏用直肠栓剂症且合物(参见上文)或者4吏用适当的灌肠剂组合物来实现下肠道的局部给药。也可以^吏用局部透皮贴剂。对于局部》会药应用，所4吏用的药物组合物可以净皮制成逸当的药膏，在所述药膏中，活性成分被悬浮于或者溶解于一种或者一种以上载体中。用于进4亍局部《合药的本发明所述<匕合物的载体可以包4舌，<旦不局限于，矿物油，液体石油冻，白石油冻，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯化合物，乳化蜡以及水。作为选择，所4吏用的药物组合物可以;故制成适当的洗液或者乳液，其中的活性成分;l皮悬浮于或者溶解于一种或者一种以上药学上可接受的载体中。适当的载体可以包括，但不局限于，矿物油，单硬脂酸酸脱水山梨糖酯，聚山梨醇酯60,十六醇酯蜡，鲸蜡石更脂醇，2-辛基十二醇，苯曱醇以及水。对于眼用给药形式而言，所〗吏用的药物组合物可以被制成微粉化悬浮液的形式，悬浮于等压的、调节了pH的无菌生理盐水中，或者被制成溶液形式，溶解于等压的、调节了pH的无菌生理盐水中，添加或者不添加例如氯化苯甲基alkonium的防腐剂。或者，对于眼药形式而言，所^吏用的药物《且合物可以4皮制成以药膏存在的形式，例力口石油冻。本发明所述的药物组合物也可以以鼻内气雾剂或者吸入剂的形式施用。这类组合物可以#皮制成生理盐水溶液的形式，4吏用苯曱醇或者其他适当的防腐剂，能够提高组合物的生物可利用率的吸收促进剂，碳氟化合物，和/或其他传统的增溶剂或者分散剂。在制备单一剂型的组合物时，与载体材料进行混合的激酶抑制剂的量根据接受治疗的宿主、给药的特定形式、以及适应症的不同而改变。在一种实施方案中，配制所述组合物从而使施用该组合物的患者接受到的抑制剂的量为O.Ol-100毫克/千克体重/天。在另外一种实施方案中，配制所述组合物4吏施用该组合物的患者接受到的抑制剂的量为0.1-100毫克/千克体重/天。同冲羊可以理解的是，对于4壬意一个特定的患者而言，具体的给药剂量以及治疗方案取决于^艮多因素，包括使用到的具体化合物的活性，患者的年龄，体重，常规健康，性别，饮食，给药时间，排泄速率，药物组合，以及主治医师的诊断和4皮治疗的4争定疾病的严重程度。抑制剂的量也取决于存在于药物组合物中的特定化合物的种类。才艮据另外一种实施方案，本发明提供了治疗或者预防肿瘤、增殖障碍、或者骨髓及外骨髓增殖障碍的方法，包括向患者施用一种本发明所述的化合物或其药物组合物的步骤。这里使用的术语"患者"指的是动物，包括人类。在某些实施方案中，上述方法^皮用来治疗或者预防造血障碍，例如急性骨髓性白血病(AML)，急性早幼粒细月包白血病(APL),慢性骨髓性白血病(CML),或者急性淋巴细胞白血病(ALL)。在另外一些实施方案中，上述方法净皮用来治疗或者预防骨髓及外骨髓增殖障碍，例如真性红细万包增多症，血小才反增多症，伴有骨髓纤维变性的骨髓化生，慢性骨髓性白血病(CML),慢性骨髓单核J求性白血病，高嗜酸粒细胞综合症，青少年骨髓单核球性白血病，以及系统性肥大细胞疾病。在其^f也的实施方案中，上述方法^皮用来治疗或者预防胂瘤，例如乳腺癌，结肠癌，前列腺癌，皮肤癌，胰腺癌，脑癌，泌尿生殖道癌，、淋巴系统癌，胃癌，喉癌以及肺癌，包括肺部腺癌，小细胞肺癌，以及非小细胞肺癌。30075]另一种实施方案提供了治疗或者预防肿瘤的方法，该方法包才舌向患者施用式I所示的化合物或者包含该化合物的纟且合4勿的步骤。本发明的另外一个方面涉及抑制患者体内的激酶活性的方法，该方法包^舌向所述患者施用式I所示的^f匕合物或者包含该化合物的组合物的步骤。在某些实施方案中，所述的激酶是才及光》敫酶(才及光A,才及光B，才及光C),Abl，Abl(T315I),Arg，FLT-3,JAK隱2，MLK1,PLK4,Tie2,或TrkA。根据治疗或者预防所针对的特定病症，可以使用其他的药物与本发明所述的化合物一同施用。在某些情况下，这些其他的药物通常是^皮用来治疗或者预防同才羊的病症的。例如，可以将化疗剂或者其他抗增殖剂与本发明所述的化合物联合施用，用以治疗增殖性疾病。本发明的另外一个方面涉及为需要治疗的患者治疗肿瘤的方法，该方法包括按照次序施用或者一并施用本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐及其他的治疗剂。在某些实施方案中，所述的其他治疗剂选自抗肺瘤剂，抗增殖剂，或者化疗剂。在某些实施方案中，所述的其他治疗剂选自喜树碱，MEK(曱基乙基酮)抑制剂U0126,KSP(动力蛋白纺织体蛋白)抑制剂，多柔比星，干扰素，以及4自衍生物，例如顺柏。在另外的实施方案中，所述的其他治疗剂选自紫杉醇类；bcr-abl抑制剂(例如格列卫，达沙替尼，以及尼洛替尼)；EGFR(表皮生长因子受体)抑制剂(例如它塞瓦以及易瑞沙)；DNA损伤剂(例如顺鉑，奥沙利粕，卡钿，拓朴异构酶抑制剂，以及蒽环类)；以及抗^:射物(例如AraC以及5-FU)。在另外的实施方案中，所述的其他治疗剂选自喜树碱，多柔比星，伊达比星，顺铂，紫杉醇，泰索帝，长春新碱，它塞瓦，MEK(曱基乙基酮)抑制剂，U0126，KSP(动力蛋白纺织体蛋白)抑制剂，伏立诺他，格列卫，达沙替尼，以及尼洛替尼。在另外一种实施方案中，所述的其他治疗剂选自HER-2抑制剂(例如赫塞汀)；HDAC(组氨酸去乙酰化酶)抑制剂(例如伏立诺他)，VEGFR(血管内皮生长因子受体)抑制剂(例如阿瓦斯汀)，c-KIT以及FLT-3抑制剂(例如舒尼替尼)，BRAF抑制剂(例如拜尔公司的BAY43-9006)，MEK(甲基乙基酮)抑制剂(例如辉瑞的PD0325901);以及纺锤体毒素(例如埃;皮西龙)和紫杉醇蛋白结合颗粒(例如Abraxane⑧)。能够与本发明所述的抗肿瘤剂联合施用的其他治疗剂或者抗肿瘤剂包括外科手术，放射性治疗(在几个实施例中介绍了几个，Y-射线，中子束放射性治疗，电子束放射性治疗，质子治疗，短距离放射性治疗，以及系统性放射性同位素)，内分泌、治疗，生物反应<务饰物(干护C素，白细胞介素，以及肺瘤坏死因子(TNF))，超高温治疗和冷冻治疗，削弱任^T副作用的试剂(例如，止吐药)，以及其他被认可的化疗药物，其包括，但不局限于，烷基化药物(二氯曱基二乙胺，苯丁酸氮芥，环磷酰胺，左旋苯丙氨酸氮芥，异环磷酰胺)，抗代谢物(曱氨蝶呤)，嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯基噤呤，5-氟尿嘧吱，Cytarabile，吉西他宾)，纺4垂体病毒(长春^成，长春新碱，长春瑞宾，紫杉醇)，足叶草毒素(依托泊甙，依立替康，拓朴替康)，抗生素(多柔比星，博来霉素，丝裂霉素)，亚硝基脲(双氯乙基亚硝-脲，氮芥)，无才儿离子(顺钩，卡柏)，酶(天冬酰胺酶)，以及荷尔蒙(它莫西芬，亮丙瑞林，氟他胺，以及甲地孕酮)，格列卫TM，地塞米+>，以及环磷酰胺。本发明所述的化合物也可以与下述治疗剂联合治疗肿瘤阿巴瑞克(普来纳西depot);阿地白介素(Prokine);阿i也白介素(Proleukin);阿来组单抗(Campath);阿利维A酸(Panretin);别噪呤醇(Zyloprim);六曱蜜胺(Hexalen);氨磷汀(Ethyol);阿那曲唑(Arimidex);三氧化二砷(Trisenox);天冬酰胺酶(Elspar);阿扎月包苦(Vidaza);贝伐单抗(Avastin);i见黄醇胶嚢(Targretin);视黄醇凝月交(Targretin);博来霉素(Blenoxane);硼替佐米(Velcade);静脉内白消安(Busulfex);口服白消安(Myleran);卡鲁睾酮(Methosarb);卡培他宾(Xeloda);卡铂(Paraplatin);卡氯芥(BCNU,BiCNU);卡氯芥(Gliadel);带有聚苯胂酸20植入剂的卡氯芥(GliadelWafer);塞来昔布(Celebrex);西妥昔单抗(Erbitux);苯丁酸氮芥(Leukeran);顺铂(Platinol);克拉曲滨(Leustatin,2-CdA);氯法拉滨(Clolar);环磷酰胺(Cytoxan,Neosar);环磷酰胺(CytoxanInjection);环裤酰胺(CytoxanTablet);阿糖胞苷(Cytosar-U);阿糖胞苷脂质体(DepoCyt);达卡巴溱(DTIC-Dome);更生霉素，放射霉素D(Cosmegen);达依泊汀a(Aranesp);道诺霉素脂质体(DanuoXome);道诺霉素(Daunorubicin);道i若霉素(Cerubidine);i也尼白介素(Ontak);佑雷佐生(Zinecard);泰索帝(Taxotere);多柔比星(AdriamycinPFS);多柔比星(亚德、里亚霉素⑧，Rubex);多柔比星(亚德里亚霉素PFS注射剂②)；多柔比星脂质体(Doxil);屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone);屈他雄酮丙酸商旨(masterone注射剂⑧)；Elliott'sB溶液(Elliott'sB溶液⑧)；表柔比星(Ellence);阿法依泊汀(epogen);埃罗替尼(Tarceva);雌莫司汀(Emcyt);磷酸依托泊戒(Etopophos);依对乇泊戒，VP-16(Vepesid);依西美坦(Aromasin);非格司亭(Neupogen);氟脲苷(动脉内)(FUDR);氟阿糖腺苷(Fludara);氟尿嘧啶，5-FU(Adrucil);氟维司群(Faslodex);吉非替尼(Iressa);吉西他宾(Gemzar);吉妥珠单抗奥唑米星(Mylotarg);醋酸戈舍瑞林(ZoladexImplant);醋酸戈舍瑞林(Zoladex);醋酸组氨瑞林(Histrelinimplant);羟基脲(Hydrea);替l尹莫单抗(Zevalin);j尹达比星(Idamycin);异环磷酰胺(IFEX);曱磺酸伊马替尼(Gleevec);干扰素a2a(RoferonA);干扰素a2b(IntronA);依立替康(Camptosar);来那度胺(Revlimid);来曲喳(Femara);甲酰四氢叶酸(Wellcovorin,Leucovorin);醋酸亮丙瑞4木(Eligard);左咪唑(Ergamisol);洛莫司汀，CCNU(CeeBU);二氯甲基二乙胺氮芥(Mustargen);醋酸甲地孕酮(Megace);美法仑，L-PAM(Alkeran);巯基嘌呤，6-MP(Purinethol);巯乙磺酸钠(Mesnex);巯乙磺酸钠(Mesnextabs);甲氨蝶呤(Methotrexate);甲氧补骨脂素(Uvadex);丝裂霉素C(Mutamycin);米托坦(Lysodren);米托蒽醌(Novantrone);苯丙酸诺龙(Durabolin-50);奈拉宾(Arranon);诺非单抗(Verluma);奥普瑞白介素(Neumega);奥克赛铂(Eloxatin);紫杉醇(Paxene);紫杉醇(Taxol);紫杉醇蛋白结合颗粒(Abraxane);帕利夫明(Kepivance);帕米磷酸(Aredia);培拉嚷(Adagen(PegademaseBovine));培门冬酶(Oncaspar);非格司亭(Neulasta);培美曲塞二钠(Alimta);喷司他丁(Nipent);旅泊溴烷(Vercyte);普卡霉素，光神霉素(Mithracin);外非尔钠(Photofrin);曱基节肼(Matulane);奎钠克林(Atabrine⑧)；拉布立酶(Elitek);利妥普单抗(Rituxan);沙格司亭(Leukine);沙格司亭(Prokine);索拉非尼(Nexavar);链佐星(Zanosar);马来酸舒尼替尼(Sutent);滑石(Sclerosol);它莫西芬(Nolvadex);替莫唑胺(Temodar);替尼泊戒，VM-26(Vumon);睾内酯酮(Teslac);硫鸟嘌呤，6-TG(Thioguanine);瘗替派(Thioplex);拓朴替康(Hycamtin);托瑞米芬(Fareston);托西莫单抗(Bexxar);托西莫单抗/1-131托西莫单抗(Bexxar);群司珠单抗(Herceptin);维A酸，ATRA(Vesanoid);尿嘧咬氮芥(UracilMustardCapsules);戊柔比星(Valstar);长春碱(Velban);长春新碱(Oncovin);长春瑞宾(Navelbine);唑来磷酸(Zometa)以及伏立i若他(Zolinza)。为了全面的^:讨当今的肿瘤治疗4支术，可以参见http:〃www.nci.nih.gov/，在http:〃www,fda.gov/cder/cancer/druglistframe,htm中列有经FDA(食品药物管理局)^人可的肿瘤学药物，以及1999年出版的《默克手册》，第十七版。上述网页及文献的全部内容通过引i正在此全部并入本文。上述其他的试剂可以与含有激酶抑制剂的化合物或者组合物分开施用，作为多重给药方案中的一部分。作为选择，上述试剂可以作为单一剂量形式中的一部分，与激酶抑制剂进朽_混合，制成单一的组合物。为了使本发明更充分的被理解，在此列出了下述制备实施例以及检验实施例。这些实施例的目的仅仅在于阐述发明，并不以任何形式被解释为限制本发明的范围。本发明引用的所有文4牛的内容在》匕通过；jii全部并入本文。实施例使用MicroMassQuattroMicro质语仪对质谱样品进行分析，利用带有电喷射离子化的单一质镨。使用色错法将样品导入质谱仪中。所有的质谦分析所使用的流动相由10毫摩pH为7的醋酸铵和1:1的乙腈-曱烷混合液组成，柱洗脱的条件是使用5%-100%的乙腈-甲烷溶液梯度洗脱3.5分钟，在ACEC83.0x75毫米的柱中反应5分钟。流速为1.2毫升/分钟。利用BrukerDPX400仪器在400赫兹(MHz)处记录^-NMR光谱。下述式I所示的化合物采用如下方法进行制备和检测。实施例1]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>N-(4-(4，6-二氯嘧啶-2-基硫代)苯基)环戊烷羧酰胺向3-甲基-lH-吡唑-5-氨基(160毫克，1.63毫摩)和N-(4-(4,6-二氯嘧啶-2-基硫代)苯基)环戊烷羧酰胺(600毫克，1.63毫摩)在二曱基甲酰胺(10亳升)的溶液中加入二异丙基乙胺(248毫克，1.96毫摩，0.34毫升)。然后将混合物力口热到80°C18小时，并冷却到室温。加入EtOAc(40毫升)并用盐水清洗，干燥(使用碌u酸镁)，在真空中浓缩。随后，将粗品通过快速分离色镨纯化，7:3EtOAc:正己烷^EtOAcyE5%曱醇:EtOAc，从而得到灰白色固体状的标题化合物(431毫克，62%)。^NMR(薩SO-d6)1.50-1.55(2H,m),1.61—1.78(4H，m)，1.79—1.85(2H,m)，1.90(3H，brs),2.72—1.81(1H,m),5.21(1H,brs),6.46(1H,brs),7.52(2H，d),7.78(2H，d)，10.11(lH,s)，10.18(1H，brs),11.95(1H,brs).ES+429.实施例3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>N-(4-((4-(3-甲基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-(3-环丙基-3-羟基吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基)磺酰基)苯基)环戊烷羧酰胺(1-9)向N-(4-(4-(3-甲基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-氯代嘧啶-2-基疏代)苯基)环戊烷羧酰胺(200毫克，0.47毫摩)和3-环丙基吖丁咬-3-o1氢氯化物(70毫克，0.47毫摩)在n-BuOH(5毫升)的悬浮液中加入二异丙基乙胺(239毫克，1.88毫摩，0.30毫升)。将混合物加热到100。C维持16小时，随后，冷却到室温并用乙酸乙酯(30毫升)和饱和NaHCO-3稀释。用盐水洗涤有纟几相，干燥(石危酸4美)并浓缩。随后，将粗品通过快速分离色语纯化，EtOAc疋5%MeOH:EtOAc，从而得到灰白色固体状的标题化合物(70毫克，30%)HNMR(DMSO-d6)0.30-0.35(2H，m),0.39-0.44(2H，m)，1.16-1.21(1H,m),I.56-1.75(6H,m),1.83-1.90(2H,m)，2.00(3H,s),2.76-2.82(1H,m),3.65(4H，dd),5.35(1H,s),5.58(1H,s),7.47(2H,d)，7.72(2H，d)，9.19(lH,s),10.06(1H，s)，II.65(1H,s).ES+506.表2列出了根据图解I和实施例1-3描述的方法制备的某些范例性化合物的各种凄t据。化合物的编号与表l中描述的化合物相对应。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>(DMSO-d6):0.42-0.46(2H,m)，0.60-0.63(2H，m),1.4(1H，m)，1.98(3H,s)，2.59-2.68(4H,m)，1-17536.363.80-3.93(4H,m)，5.36(1H，brs)，5.75(lH，brs),7.50-7.52(2H,d),7.69-7.71(2H,d),9.37(lH，s),10.31(1H,s)and11.75(1H,brs);9.58实施例4N國(4-((4-(3-甲基-lH-吡唑-5垂基氨基)-6-(3-环丙基-3-羟基吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基)磺酰基)-3-氟代苯基)环丙烷羧酰胺(1-11)aHNHN'M6-氯代~^-(3-甲基-lH-吡唑-5-基)-2-(曱基硫代)嘧"定-4-胺向搅拌过的4,6-二氯-2-(甲基硫代)嘧啶(25克,0.128摩尔)的DMF(100毫升)溶液中加入二异丙基胺(19.8克，0.154摩尔)，随后在10分钟内分批加入3-氨基-5-曱基吡唑(13.7克，0.154摩尔)。将溶液加热到50。C维持16小时，再加热之后，所有的起始材料完全反应(通过LC/MS分析)。将混合物冷却至室温，倒入水中(250毫升)。过滤得到沉淀物，将湿的固体在二乙基醚(300亳升)中制成泥浆。将此固体重新过滤并在甲醇(100毫升)中重新制浆。在烧结物上将滤得的产品在空气中干燥，然后进一步在真空条件下干燥。从而得到灰白色固体状的标题化合物(22.1克，66%产率).&NMR(d6-DMSO)2.22(3H,s，CH3)，3.31(3H,s,CH3),6.00-7.50(2H，br,CH)，10.17(1H,s，NH),12.10(1H,s,NH);MSES+256.08,ES-254.25.HN'NCI'、N^S。2Me6-氯代-1^-(3-甲基-lH-吡唑-5-基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-胺在(TC下，向搅拌后的6-氯代->1-(3-曱基-lH-吡哇-5-基)-2-(甲基亚磺酰基)嘧啶-4-胺(8克，31.2毫摩)在甲醇(200毫升)的悬浮液中在10分钟之内分批加入过硫酸氬钾(44克，71.7毫摩)在水(100毫升)中的悬浮液。在0。C下搅拌混合物30分钟，之后升温至室温，在另外搅拌2小时。过滤反应混合物所得固体在重》友酸钠的水溶液中制成浆状。过滤混合物，并用水洗涤所得固体，然后用二乙基醚洗涤。将所得固体在乙基醋酸盐中制成浆状，过滤并干燥。得到灰白色固体状的标题化合物(7.9克，88%);^NMR(d6-DMSO)2.24(3H，s),3.35(3H,s)，5.85(0.5H，brs)，6.50(0.5H,brs),6.95(0.5H，brs),8.00(0.5H,brs),10.95(1H,s),12.28(1H,s);MSES+288.07,ES—286.25。N-(4-(4-(3-甲基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-氯代嘧啶-2-基硫代)-3-氟代苯基)环丙烷羧酰胺将N-(3-氟代-4-含氢硫基苯基)环丙烷-羧酰胺(1.0克，4.8毫摩)和6-氯代-N-(3-甲基-lH-吡唑-5-基)-2-(曱基磺酰基)嗜咬-4-胺(1.4克，4.8毫摩)在t-丁醇(10毫升)中的溶液加热到7(TC并维持18小时。将反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯(60毫升)稀释，用饱和NaHC03溶液(30毫升)，盐水(30毫升)洗涤，干燥U吏用碌u酸镁)，过滤并在真空条件下浓缩。使用硅土(EtOAc/汽油20到60%)快速色语法纯化粗品，从而得到白色固体状的标题化合物(800毫克，40%)。ES+419.HOFN-(4-((4-(3-甲基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-(3-环丙基-3-羟基吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基)磺酰基)-3-氟代苯基)环丙烷羧酰胺(1-11)微波加热将N-(4-(4-(3-曱基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-氯代嘧啶-2-基疏代)-3-氟代苯基)环丙烷-羧酰胺(160毫克，0.38毫摩)，3-环丙基吖丁啶-3-o1氢氯化物(70毫克，0.49毫摩)和DIPEA(0.20毫升)在正丁醇(1.5毫升)中的混合物力口热到130。C并维持1小时。随后将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯辨释(20毫升)，用饱和NaHC03溶液(10毫升)，水(2x10毫升)，盐水(IO毫升)洗涤，干燥(錄b酸镁)，过滤并在真空中蒸发。使用硅土(EtOAc/汽油30到80%)快速色谱法纯化粗品，从而得到白色固体状的标题化合物(55毫克，29%)。&NMR(DMSO-d6)0.33-0.36(2H,m),0.42-0.48(2H,m)，0.82-0.86(4H,m),1.21-1.24(2H,m)，1.85-1.89(1H，m),2.08(3H,s),2.10-2.15(1H,m),3.66-3.75(4H，m),5.42(1H,brs),5.67(1H,1H,s)，5.8(1H，brs),7.42(1H,d),7.52-7.58(1H,m),7.75(1H,d)，9.27(lH，s),10.65(1H,s)，11.9(1H，brs).ES+496.90.下面表3列出了才艮据图解(方法B)和实施例6描述的方法制备的某些范例性化合物的各种数据。化合物的编号与表1中描述的4b合物相对应。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>实施例5N-二苯甲基吖丁啶-3-酮向搅拌后的1-(二苯基甲基)-3-羟基氮杂环丁二烯(30克，0.126摩尔)在三乙胺(63克，0.628mol)中的浆状液中30分钟内逐滴加入无水DMSO(300毫升)中的石克磺三氧化嘧啶复合物(60克，0.376mol)。将所得混合物加热至50°C并维持30分4中。然后冷却反应;昆合物至室温，并倒入7jc(1L)和乙基乙酸盐(800毫升)的混合物中。分离有才几相用乙基乙酸盐(3x200毫升)提取水相。然后用水(3x200毫升)洗涤结合的有才几溶液，然后用々包和盐水(200毫升)洗涤，干燥(辟b酸4美)，过滤并浓缩。在义圭月交柱上纯化残留物，用5-10%乙基乙酸盐/汽油洗提。获得白色固体状产品(26.2克，86%);&NMRCDC134.07(4H,s),4.62(1H,s)，7.20-7.39(6H，m)，7.53(4H，d)。1-二苯曱基-3-环丙基吖丁啶-3-氲氯化物在氮气环境下，环丙基溴化镁在THF(0.5M,600毫升，0.5摩)中的溶液被冷却到-78。C。在此温度下开始出现沉淀。在30分钟内逐滴加入N-二苯甲基吖丁啶-3-酮(24.2克，0.102摩)在无水THF(130毫升)中的溶液。在-78。C下，另外搅拌混合物90分钟，随后緩f曼加入饱和重碳酸钠溶液(400毫升)和水(100亳升)。随后，使用乙酸乙酯(1L)稀释混合物，并l吏之温度升高至室温。然后分离有才几相(水相是4美盐的乳化液但是很容易从有机相中分离)同时用乙酸乙酯提取水相(3x300毫升)。之后用饱和盐水(300毫升)洗涤结合的有机溶液，干燥(石克酸镁)，过滤并浓缩得到灰黄色的油。在凝月史柱上纯化粗品，用20-30%的乙酸乙酯/石油洗涤。将得到的醇(28.3克)溶解到醚(350毫升)中，并将溶液冷却到0。C。之后在15:分钟内逐滴加入HC1在醚中的溶液(2M,130毫升)。盐酸盐从溶液中沉淀出来。在0。C下搅拌所得浆状液IO分钟，随后过滤。用醚(2x100毫升)洗涤所得滤饼并在真空条件下干燥所得固体。从而得到白色固体状的产品(28.2克，88%);!HNMRd6-DMSO0.31-0.50(4H,m),1.35(0.3H,m)，0.51(0.7H,m),3.41-4.10(5H,m),5.88(0.3H，d),6.05(0.7H,d),6.35(1H，brs)，7.30-7.50(6H，m)，7.61-7.82(4H，m);ES+280.71.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>l-二苯曱基-3-环丙基-3-氟代氮杂环丁二烯氢氯化物向l-二苯甲基-3-环丙基吖丁啶-3-o1氲氯化物(7.78克，24.50毫摩)在乙酸乙酯(100毫升)的悬浮液中加入饱和NaHC03(100毫升)。将混合物倒入一个单独的漏斗中，剧烈摇晃直到所有固体都^皮溶解。分离有机层，并进一步用乙酸乙酯(50毫升)提取水相。结合的有机萃取物被干燥(硫酸镁)并浓缩成一种油。将此油溶解在二氯4义曱烷(100毫升)中并冷却至-78°C。逐滴加入[双(2-曱氧基乙基)氨基]硫磺三氟化物(5.98克，27.05毫摩，5.0毫升)用在-78。C搅拌溶液30分钟随后力口热至0。C，继续搅拌l小时。用饱和NaHC03(50毫升)和盐水(50毫升)淬火反应，用氯代甲烷(50毫升)提取水相层。结合的有机提取物被干燥(硫酸镁)并浓缩生成一种黄色的油。在硅胶柱上纯化粗品，用5-10%乙基乙酸盐/汽油洗提。所得醇溶解在醚(100毫升)中并冷却至0°C。在5分钟内逐滴加入HC1在醚中的溶液(2M,25毫升)。盐酸盐/人溶液中沉淀出来。在0。C下搅拌所得浆状液IO分钟，随后过滤。用醚(20毫升)洗涤所得滤饼并在真空条件下千燥所得固体。从而得到白色固体S犬的产品(4.71克，61%).iHNMRdrMeOH0.30-0.52(4H,m),1.22(lH，brs),4.01-4.23(4H,m),5.50-5.60(1H,brs),7.13-7.46(10H,m);ES+282.HCI3-环丙基-3-氟代氮杂环丁二烯氢氯化物在氮气条件下，向湿10%钯碳催化剂(Degussa催化剂)中加入乙醇(100毫升)。将1-二苯曱基-3-环丙基-3-氟^氮杂环丁二烯氢氯化物(6.74克，21.23毫摩)在乙醇(50毫升)中的溶液添加到催化剂中，该混合物在60psi下在Parr混合器iU匕作用4义中氢4匕5小时。该反应用C盐过滤并浓缩成一种油。加入醚(50毫升)并将混合物冷却到0°C，4觉拌直至沉淀生成。过滤悬浮液用醚(20毫升)洗涤滤饼，并在真空条件下干燥所得固体。最后得到白色固体状产品(3.00克，93。/c).111NMRd6-DMSO0.52-0.56(2H,m),0.59-0.64(2H,m)，1.35-1.40(lH,m)，3.91-4.10(4H，m),4.01-4.23(4H，m),9.50(lH,brs)，9.63(1H,brs).实施例6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula>N画(4画(4-(3-曱基-lH-吡唑-5國基氨基)-6-(3-环丙基画3-氟代吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基硫代)苯基)-3,3，3-三氟代丙酰胺(化合物1-14)6-(3-环丙基-3-氟代吖丁啶-l-基)-N-(3-曱基-lH-吡唑匪5-基)-2-(甲基硫代)嘧咬-4-胺将6-氯代->^-(3-曱基-lH-吡唑-5-基)-2-(甲基硫代)嘧啶-4-胺(150克，0.58摩)和3-环丙基-3-氟代氮杂环丁二烯氢氯化物(132.2克，0.87摩)的混合物加入到二异丙基乙胺(208克，1.61摩尔)和异丙醇(1.125升)中，加热回流23小时。冷却反应使溶液緩慢降温至85。C，过滤并将所得均一溶液浓缩到最小体积。加入EtOAc(1升)并浓缩到最小体积。加入EtOAc(1升)和水(l升)4吏液层分离(在萃取过程中，有才几物开始结晶出产品)。用EtOAc(500毫升)进一步萃取水相层。浓缩第一有才几物并千燥产生一种白色固体。向第二有机萃取物中加入正己烷(750毫升)，在室温条件下搅4半浆状液，然后冷却到0°C30分4t。用大量庚烷过滤并洗涤。在真空条^f,下干燥滤饼。所得滤饼与第一次萃取得到的白色固体结合，4寻到总重为155.1克的所需产品(155.1克，77%)。]HNMR(DMSO，400MHz)0.44(2H,m),0.60(2H,m)，1.38-1.43(1H，m)，2.18(3H,s)，2.42(3H,s),3.89-3.97(4H,m),5.92(1H，brs),6.04(1H,brs),9.23(lH,s),11.86(1H,s).ES+3356-(3画环丙基-3-氟代吖丁啶-l-基)-N-(3-甲基-lH-吡唑-5曙基)-2-(甲基磺酰基)嘧咬-4-胺将6-(3-环丙基-3-氟代吖丁啶-l-基)-N-(3-曱基"H-吡唑-5-基)-2-(曱基疏代)嘧咬-4-胺(130克，389毫摩)在MeOH(5.2升)的溶液冷却至0。C。向浆状液中《爰'漫的加入过硫酸氢钾制剂(526克，855毫摩)在水(5.2L)中的溶液，并4呆持浆状液的温度一直低于5。C。加入之后，将反应物加热至室温并过夜。随后，加入10%的NaHS03(325毫升)溶液和10%的K2C03(2.6升)溶液来中和反应混合物，将溶液过滤，所得滤饼用水(3.3升)洗涤。将固体在水(2.6升)中制浆，过滤溶液并用水(3.3升)洗涤滤饼。在真空条件下干燥所4寻固体(72.3克，51%)。1HNMR(DMSO):0.47(2H,m),0.60(2H,m),1.43-1.46(1H,m),2.20(3H，s),3.25(3H，s),3.97-4.11(4H,m)，5.93(1H,brs),6.47(1H，brs).9.88(lH,s),12.01(1H,brs).ES+367<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>N-(4-(4-(3-曱基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-(3-环丙基-3-氟代吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基硫代)苯基)-3,3,3-三氟代丙酰胺(化合物1-14)6-(3-环丙基-3-氟代吖丁咬-l-基)-N-(3-曱基-lH-吡唑-5-基)-2-(曱基磺酰基)嘧啶-4-胺(61克，170亳摩)和3，3,3-三氟代-N-(4-含氢辟u基苯基)丙酰胺(41克，175毫摩)在CH3CN(1300毫升)中的浆状液被加热回流1.5小时。在此过禾呈中，在这段时间内，该浆状液从薄的樣t黄色变成厚的亮白色。随后将混合物冷却到0。C并在此温度下搅4半15分钟。过滤，并用冷的CHsCN(650毫升)洗涤。所得固体在38。C下载多^殳离心风机中被干燥20小时。所得白色固体成为一种合适的反应剂，与EtOAc(1300毫升)和NaHC03(饱和)(1300毫升)进行反应。搅拌混合物直到不再有固体存在。然后，分层并用乙酸乙酉旨(390毫升)洗涤水相。使用硫酸镁干燥结合的有机相，过滤，用乙酸乙酯(130毫升)洗涤并浓缩到最小体积。所得混合物在乙酸乙酯和正己烷中重结晶，从而产生作为白色固体的理想产品(56.2g，72%)。&NMR(MeOD,400MHz):0.40-0.45(2H,m),0.60-0.65(2H，m),1.3-1.4(1H,m)，2.05(2H，s),3.25-3.40(2H，m)，3.85-3.40(4H,m),5.40-5.50(2H,m),7.50-7.55(2H,d),7.65-7.70(2H，d).ES+522.表4列出了根据总体图解(方法A)和实施例6描述的方法制备的某些范例性化合物的各种数值。化合物的编号与表1中描述的4匕合物相对应。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula>N-(5-(4-(3-甲基-lH-吡唑-5-基氨基)-6-(3-环丙基-3-氟代吖丁啶-l-基)嘧啶-2-基硫代)p比咬-2-基)-3,3，3-三氟代丙酰胺(1-21)向2-(6-氨基他咬-3-基硫代)画6-(3-环丙基画3-氟代吖丁啶-l-基)-N-(3-曱基-lH-吡唑-5-基)嘧咬-4-胺(300毫克，0.7毫摩)和BOC20(220毫克，1亳摩)在4.5M氢氧化钠(0.470毫升)和DCM(10毫升)的溶液中加入DMAP(5毫克)。在室温下搅拌所得溶液三小时，然后用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤饼在真空中蒸发。用快速色谱法(12克Si02，EtOAc/汽油)纯化4且品，从而产生理想的中间产物(60毫克，17%)ES+513。这种中间产物(60毫克，0.12毫摩)溶解在吡咬(2毫升)中，且向溶液中逐滴加入3,3,3-三氟代丙酰氯(34毫克，0.23毫摩)，随后在室温下搅拌30分钟。再加入三滴3,3，3-三氟代丙酰氯，从而使中间产物在继续搅拌30分钟之后完全转变为产品。在真空条件下浓缩反应混合物，将残留液重新溶解在DCM(2毫升)/TFA(1毫升)中在室温条件下搅拌2小时。在真空条件下浓缩混合物，并通过预LCMS和冷冻干燥(MeCN/水/TFA)过程纯化4且品，从而得到白色固体状的标题混合物和三氟乙酸盐(25毫克，33。/0)HNMR(DMSO-d6)0.20-0.21(2H,m),0.36-0.38(2H,m),1.15-1.20(1H,m),1.77(3H，s)，3.40-3.50(2H,m)，3.57-3.72(4H,m),5.10-5.15(12H，s),7.75-7.80(1H，d),7.92-7.97(1H，d),8.22(1H,s)，9.20(1H,s),10.91(1H,s).ES+523。下图所示试验描述了实施例中4吏用的一些^f匕合物的制备方法。化合物a3,3，3-三氟代-N-(4-含氢硫基苯基)丙酰胺S-4-(3,3,3-三氟代丙醇胺)苯基3,3，3-三氟代硫代丙烷将4-氨基硫代苯酚熔化并倒入烧瓶中。加入除去瓦斯的乙酸乙酯(1950毫升)。向除去瓦斯的水(1300vol)中加入K2C03(92g，670毫摩)。将溶液冷却到0。C并緩慢加入3,3,3-三氟代丙酰氯(55.2克，600毫摩)并^吏温度一直4呆持《氐于10。C。将反应物加热至室温。分离有才几层并用盐水洗涤(1300毫升)。然后在》走转蒸发^f义上浓缩。所得固体在庚烷/乙酸乙酯(390毫升/390毫升)中制浆30分。加入庚烷(780毫升)然后将浆状液冷却到0°C30分钟。过滤浆状液。在真空条件下干燥滤々并从而得到所需的化合物(51.3g，87.2%)。3,3,3-三氟代-1^-(4-含氢硫基苯基)丙酰胺将S-4-(3，3,3-三氟代丙醇胺)苯基3,3,3-三氟代硫代丙烷(44.8g，189毫摩)和EtOH(70亳升)倒入烧杯中。緩'f"曼加入浓缩的HC1(22.5毫升)从而使温度保持低于30°C。然后将反应物加热到50。C并维持17.5小时。通过在50。C条件下真空蒸馏将反应混合物减少到41毫升。冷却反应物到室温并加入水H20(51毫升)。过滤浆状液并用水(3x35毫升)洗涤滤饼。在真空条件下干燥固体，得到理想化合物(19.9克，58%)。实施例9:对才及光-2(AuroraA)的抑制性检测利用标准的酶耦联检测法(Fox等人于1998年在ProteinSci(蛋白质科学)7，2249中所著的文章)对化合物抑制才及光-2的能力进行筛选。在100毫摩Hepes(羟乙基艰漆乙磺酸)(pH7.5)、10毫摩氯化4美、1毫摩DTT(二石克苏糖醇)、25毫摩氯化钠、2.5毫摩磷酸烯醇丙酮酸酯、300微摩NADH、30微克/毫升丙酮酸激酶以及10樣i:克/毫升乳酸脱氢酶的混合液中进4亍上述才企测。在该检测中，最终的底物浓度为400微摩ATP(标准化学品)和570微摩肽(Kemptide(肯普肽)，AmericanPeptide(美国小肽)，Sunnyvale,CA)。检测反应是在30。C以及40钠摩才及光-2的存在下进4亍的。00109]制备检测储备緩冲溶液，该溶液中含有上述列出的除4及光-2和被检测化合物之外的所有试剂。在96孔培养板中加入55樣史升的上述储备溶液，之后向其中加入2微升的DMSO(二曱基亚砜)储备液，该储备液中含有被检测化合物的连续稀释液(典型的，从最终浓度为7.5微摩开始)。在3(TC下对培养板进行预培养10分钟，之后，通过加入10微升的极光-2来激活反应。以10分4f为时间周期，利用MolecularDevicesSpectraMaxPlus培养板阅读器测定初始反应速率。利用Prism软件包(用于Macintosh的GraphPadPrism版本3.0cx，GraphPadIK牛，圣;也亚哥，加利福尼亚，美国)采用非线性回归分析，计算出IC50和Ki值。实施例10:对才及光-1(AuroraB)的抑制性;险测(i文射性测量)制备才企测《爰冲溶液，该溶液由25毫摩HEPES(羟乙基旅i秦乙磺酸)(pH7.5)、IO毫摩氯化镁、0.1。/。的BSA(牛血清白蛋白)以及10%的甘油组成。在检测緩冲器(buffer)中制备22钠摩极光-B溶液，该溶液中同样含有1.7毫摩DTT(二硫苏糖醇)和1.5毫摩Kemptide(肯普肽)(LRRASLG)。向装有22微升极光-B溶液的96孔培养板中加入2微升存在于DMS(X二曱基亚砜)中的化合物储备溶液，使得到的混合液在25。C下平衡10分钟。加入在检测緩沖器中制备的16微升[Y-"P]-ATP储备溶液(大约20nCi/微升)来激发酶反应，达到800樣么摩的最终检测浓度。3小时之后，通过加入16微升500毫摩的磷酸来终止反应，并且4吏用下述方法对导入到肽底物中的33P的水平进行测定。使用100孩t升的100毫摩磷酸对磷酸纤维素96孔培养板(Millipore,Catno.MAPHNOB50)进行预处理，之后向其中加入酶反应混合液(40微升)。停留30分钟，使所述溶液渗透到磷酸纤维素膜中，随后，使用200微升的IOO毫摩磷酸把培养板清洗四次。向干燥的培养板的每个孔中加入30微升的Optiphase"SuperMix，，闪烁液(PerkinElmer),之后进4亍闪烁计数(1450Microbeta闪烁计数器，Wallac)。向含有所有检测成分(这些成分能够使酶发生改性)的对照孔中加入16樣史升的500毫摩磷酸，用来测定非酶催化的背景辐射的水平，之后，向其中加入[Y-"P]-ATP溶液。从在每个抑制剂浓度处测量得到的数值中减去平均背景计数，就计算出酶催化的33P导入水平。在每个Ki值的测定中，一式两份的获得8个数值点，典型的包括了浓度范围为0-IO樣吏摩的化合物(二甲基亚石风储备液是通过10毫摩的初始化合物储备液与随后的l:2.5连续稀释液来制备的)。4吏用Prism库欠件包(Prism3.0,Graphpadl欠件，圣i也亚哥，加利福尼亚)，对初始速率^t据进4亍非线性回归分4斤，从而计算出Ki值。实施例11:对ltk的抑制性4全测基于放射性的检测使用基于放射性的检测方法，来评价本发明所述化合物作为人类Itk激酶抑制剂的活性。在20毫摩MOPS(3-吗啉丙磺酸)(PH7.0)、10毫摩氯化钠、0.1%的BSA(牛血清白蛋白)以及1毫摩DTT(二石充苏糖醇)的混合液中进行上述才企测。在该检测中，最终底物浓度为7.5樣￡摩的[Y-33P]-ATP(400juCi33PATPAf敖摩ATP,AmershamPharmaciaBiotech/SigmaChemicals)和3微摩的肽(sam68蛋白A332-443)。在25°C以及504内摩Itk存在的条4牛下进行检测反应。制备检测储备緩冲溶液，该溶液中含有上述列出的除ATP以及被;险测化合物之外的其他所有试剂。在96孔培养板中装入50孩t升的储备溶液，随后，向其中加入2微升的DMSO(二甲基亚砜)储备液，该储备液含有一式两份的被4企测化合物的连续稀释液(典型的，以经过了两倍连续稀释的最终浓度为50微摩开始)(最终DMSO浓度为2%)。在25。C下对培养板进行预培养10分钟，通过加入50微升的[y-33p]-atp(最终浓度为7.5微摩)来激发反应。10分4中之后，通过加入100樣i:升的0.2M的石粦酸+0.01%的吐温20来终止反应。利用100樣i升的0.2M的盐酸+0.01%的吐温20对微孔磷酸纤维素过滤器96孔培养板(Millipore,Catno.MAPHNOB50)进行预处理，之后向其中力口入170孩￡升的终止4企测混合液。使用4x200微升的0.2M的磷酸+0.01%的吐温20对培养板进行清洗。在干燥之后，向培养板的孑L中力口入30孩史升Optiphase"SuperMix，，闪烁液(PerkinElmer),随后进行闪烁计数(1450Microbeta闪烁计数器，Wallac)。4吏用Prisml欠件包(用于Macintosh的GraphPadPrism版本3.0cx，GraphPad寿欠4牛，圣;也亚哥，力口利福尼亚，美国)对初始速率数值进行非线性回归分析，从而计算出Ki(app)。实施例12:对JAK3的抑制性检测使用下面表述的4佥测方法对化合物抑制JAK的能力进4亍筛选。上述反应在激酶緩冲液中进行，所述的激酶緩沖液含有100毫摩HEPES(羟乙基哌。秦乙磺酸)(PH7.4)、1毫摩DTT(二硫苏糖醇)、IO毫摩氯化镁、25毫摩氯化钠、以及O.Ol%的BSA(牛血清白蛋白)。在该4企测反应中，底物浓度为5微摩ATP(200uCi/;徵摩ATP)以及1;微摩poly(Glu)4Tyr。反应是在25。C以及1钠摩JAK3的存在条件下进行的。向96孔培养板上的每个孔中加入1.5纟效升的待测JAK3抑制剂，以及50微升的激酶緩沖液，所述的激酶緩沖液中含有2微摩的poly(Glu)4Tyr以及10微摩的ATP。之后，将它们混合，然后加入含有2钠摩JAK3的50纟效升的激酶緩冲液，4吏反应开始进4亍。在室温环境下(25°C)反应20分4中之后，向其中加入含有0.4毫摩的ATP的20%的三氯乙酸(TCA)50微升，使反应停止。使用TomTek细胞收集器将每个孔内的全部反应物转移到96孔玻璃纤维过滤器培养板中。在进行清洗之后，加入60樣i升的闪烁流体，并且使用PerkinElmerTopCount测定导入其中的"P。实施例13:对JAK2的抑制性检测这种才企测方法与实施例13描述的相一致，不同之处仅在于使用JAK-2酶，最终poly(Glu)4Tyr浓度为15微摩，最终ATP浓度为12孩t摩。实施例14:对FLT-3的抑制性4全测使用it射性测量与过滤相结合的#r测方法(radiometricfilter-bindingassay)^H匕合4勿4中制FLT-3活性的能力进行筛选。这种检测方法对导入底物聚(谷氨酸，色氨酸)4:1(pE4Y)中的33p进行了监控。在含有100毫摩HEPES(羟乙基口底、秦乙磺酸)(pH7.5)、10毫摩氯化镁、25毫摩氯化钠、1毫摩DTT(二石克苏沣唐醇)、0.01%的BSA(牛血清白蛋白)以及2.5%的DMSO(二甲基亚砜)的溶液中进行反应。在该检测方法中，最终的底物浓度为90樣i摩ATP以及0.5毫克/毫升pE4Y(两种二逸剂均来源于SigmaChemicals,圣劳轮)Jf，MO)。本发明所述化合物的最终浓度一般在0.01微摩至5微摩的范围内。典型的，使用12点滴定法制备起始浓度为10毫摩的存在于DMSO(二曱基亚砜)储备液中的待测化合物的连续稀释液。反应在室温条件下进行。制备两种检测溶液。溶液1含有100毫摩HEPES(羟乙基哌。秦乙磺酸)(PH7.5)、10毫摩氯化镁、25毫摩氯化钠、1毫克/毫升pE4Y以及180毫摩ATP(在每个反应中含有0.3mCi的[y-33p]atp)。溶液2含有100毫摩hepes(羟乙基哌嗪乙磺酸)(pH7.5)、IO毫摩氯化镁、25毫摩氯化钠、2毫摩DTT(二疏苏糖醇)、0.02%的BSA(牛血清白蛋白)以及3钠摩FLT-3。通过将50微升的溶液1与2.5毫升的本发明所述化合物进4于混合，在96孔板上开始4企测反应。加入溶液2<吏反应开始。在室温条件下培养20分钟之后，向其中力口入含有0.4毫摩的ATP的20%的三氯乙酸(TCA)5(H效升，使反应停止。之后，使用TOMTEC(Hamden，CT)y〉司的Harvester(收集器)9600将全部的反应物转移到过滤器培养板中，并且使用5%的TCA(三氯乙酸)进4亍5青洗。4吏用PackardTopCountMicroplateScintillationCounter(微孔板闪烁计数器)(Meriden,CT)对导入到pE4Y中整合的33P的量进行分析。使用Prism软件对得到的数据进行整理，得出IC50或者Ki值。实施例15:孩i粒体稳定性检测通过各种不同物种(雄性CD-I小鼠，雄性斯普才立-道来氏大鼠，雄性小猎狗，雄性猕猴以及性别混合的人类)的孩￡粒体内产生的消耗时间曲线来监控樣史粒体的稳定性。通过对存在于DMSO(二曱基亚砜)中的化合物储备溶液(典型的10毫摩)进行稀释，从而得到存在于乙腈(0.5毫摩)中的溶液，来制备化合物示踪溶液(spikingsolutions)。化合物(最终浓度为5微摩)与最终的反应混合液(1000微升)、还原形式(NADPH)-再生系统(RGS)[由2毫摩的P-烟酰胺腺噪呤二核苷酸石粦酸(NADP)、20.5毫摩的异柠檬酸、0.5U的异柠檬酸脱氬酶/毫升、30亳摩的氯化镁、以及0.1MpH7.4的石岸酸緩沖液(PB)组成]，在0.1MPB(磷酸緩冲液)(pH7.4)存在的条件下，一起进行培养，所述的最终反应混合液由肝脏孩i粒体蛋白(1毫克/毫升)以及P-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸^奔酸组成。通过向预培养过的孩i粒体/VRT/PB混合液中加入预培养过的RGS(250微升)来激发反应(两次预培养均是在37。C下培养10分钟)。将样品置于艾本德(Eppendorf)管(1.5毫升)中，放置在加热振荡器(DPCMicromix5(设置；形式20，振幅4)，通过在其操作板上固定两个板式加热器并通过Packard手控加热器进行控制，将其加热至37°C)中进行培养，所述加热4展荡器连^妄了MultiprobeIIHTEx自动液体处理器。对所述的液体处理器进行编程(WinPREP软件)，使其在培养开始的0分钟、2分钟、10分钟、30分钟以及60分钟后对樣t粒体培养混合液进行采样，并将其等份的(100微升)转移至含有100微升冷冻曱烷的终止管(96孔管)中。通过加入适当体积的水相/有机相(典型的，100微升的50:50的曱烷水)，使终止混合液中的有机相百分凄t达到分析最优化的状态。在进4亍分析之前，将终止管置于振荡器(DPCMicromix5;IO分钟，形式20，振幅5)之上，用于将蛋白质沉淀出来。之后，对终止管进4亍离心(JouanGR412;2000rpm,15分钟，4'C)。将一份样品(200微升)转移到分析管中，在被送至分才斤之前，再一次对该管进4亍离心(JouanGR412;2000rpm,5分钟，4°C)。使用液相色谱-质i普耳关用4义(LC-MS/MS)对VRT的消失进行监控，从而确定消耗曲线。将样品(20微升；使用装配有自动采样器的Agilent1100液相色镨系统)注入到分析柱中。济u动才目由7jc+0.050/0(v/v)蚁f复(A)以及曱烷+0.05%(v/v)乙酸(B)组成。针对^皮检测的化合物，使用优化了参数的梯度法将化合物从分析柱中洗脱出来。全部的运行时间为6分钟，流速为0.35亳升/分钟。将全部的柱洗脱流出物加入到MicromassQuattroLC串联质谱的电喷射离子化源(阳性模式)中，运行0.5分钟至5.9分钟。针对被检测的化合物将质镨的参数调节到最优状态。重复进行所有的培养过程，将结果表示为相对于0分钟时的样品而言在30分4f或者60分钟时母体存在的百分数。实施例16:细力包增卩直以及生存力的分才斤4吏用下面描述的方法、4昔助来自于ECACC的Colo205细胞对化合物抑制细胞增殖的能力及其对细胞生存力的影响能力进行篩选。将Colo205细胞接种于96孑L培养板中，并且一式两份的向孔中加入连续稀释的化合物。对照组包括未经处理的细胞，化合物稀释液(只使用0.1%的二甲基亚砜)以及不含细胞的培养基。之后，在37。C下，在5%的二氧化碳/湿度95%的大气环境下培养细l包72小时或者96小时。为了测定增殖情况，在试'睑结束的3个小时之前，向每个孔中加入0.5|uCi的3H胸腺嘧，定。之后，收集细胞，并且使用Wallac樣UL4反闪烁计数器对导入其中的放射性进行计凄t。4吏用PromegaCellTiter96AQ进行非;故射性细胞增殖才企测，用以评价细胞的生存力。可以使用Prism3.0软件(GraphPad)或者SoftMaxPro4.3.1LS(MolcularDevices)软件来计算剂量应答曲线。实施例17:对Abl激酶活性抑制性的检测以及抑制性常凄tKi的测定使用标准的酶耦联检测系统(Fox等人于1998年在ProteinSci.(蛋白质科学)7，pp.2249中发表的文章)对化合物抑制N-末端截断(A27)的Abl激酶活性的能力进行筛选。反应是在含有100毫摩HEPES(羟乙基哌溱乙磺酸)(PH7.5)、10毫摩氯化镁、25毫摩氯化钠、300微摩NADH、1毫摩DTT(二硫苏糖醇)以及3%的DMSO(二曱基亚砜)的溶液中进行的。在该检测反应中，最终的底物浓度为110微摩ATP(SigmaChemicals,圣劳1仑斯，MO)以及70孩i摩的肽(EAIYAAPFAKKK，美国小肽，Sunnyvale,GA)。反应是在30。C以及21钠摩Abl;敫酶的存在下进4亍的。酶耦联4企测反应的各组分最终浓度为2.5毫摩的石粦酸烯醇丙酮酸，200樣i摩的NADH，60孩i克/毫升的丙酮酸激酶以及20孩t克/毫升的乳酸脱氢酶。制备检测储备緩冲溶液，所述溶液中含有上述列出的除ATP以及^皮检测化合物之外的其他所有试剂。在96孔培养板中，使用最终浓度在0.002微摩至30微摩范围内的被检测化合物2微升对检测储备緩冲溶液(60微升)进行培养，培养条件为3(TC下培养10分钟。典型的，在子培养板中对使用DMSO(二甲基亚砜)的被检测化合物的连续稀释液(从1毫摩的化合物储备液开始)进行12点滴定。通过向其中加入5微升ATP(最终浓度为110樣i摩)以激发反应。4吏用MolecularDevicesSpectramax微孔斧反阅读器(Sunnyvale,CA)在30。C下10分钟内测定反应速率。对残留速率的数值进行非线性回归分析(Prism3.0，Graphpad软件，圣地亚哥，加利福尼亚)，从而以抑制剂浓度函数的形式测得Ki的数值。实施例18:对突变Abl激酶(T315I)活性抑制性的检测以及抑制性常数IC50的测定在Upstate细月包4言号溶液(Dundee,英国)中，对化合物抑制人类Abl激酶的T315I突变形式的能力进ff筛选。在最终的25微升反应容器中，使用8毫摩MOPS(3-吗淋丙磺酸)(PH7.0)、0.2毫摩EDTA(乙二胺四乙酸)、50微摩EAIYAAPFAKKK、10毫摩醋酸4美、[Y-33P-ATP](具体活性大约为500cpm/pmol,最终检测浓度为10毫摩)以及最终浓度在0-40junM范围内的祐:才全测4匕合物与人类Abl的T315I变'l"生形式(5-10mU)—起进行培养。通过加入亳克ATP混合物来激发反应。在室温条件下培养40分4中之后，通过加入5樣i升3%的石粦酸溶液来终止反应。之后，将10孩i升的反应液点至(spotonto)P30干燥设备上，并且在进《亍之前4吏用75毫摩的磷酸进4亍3次5分钟的清洗，再^f吏用甲烷清洗一次。对残留的酶活性进4亍非线性回归分析，从而得到以抑制剂浓度函数形式存在的IC50抑制性值(Prism3.0,Graphpad软件，圣地亚哥，力口利福尼亚)。实施例19:Plk4抑制试-验:4吏用》文射性^粦酸盐掺入试验筛选化合物抑制Plk4的能力。在8mMMOPS(pH7,5),10mM毫克Cl2，0.1%BSA和2mMDTT的混合物中进行该实验。最终底物浓度是15微摩[画33p]ATP(227mCi33PATP/毫摩ATP,AmershamPharmaciaBiotech乂>司/Sigma4匕学品)和300樣￡摩肽(KKKMDATFADQ)。在25nMPlk4存在的条件下，在25°C中进行试验。制备一种试-验库存緩沖溶液，该緩冲溶液包括上面所列的所有试剂，除了ATP和重要的检测化合物之外。将30微升的库存緩冲液》文置在96孔寺反上，随后加入2樣吏升的DMSO库稀释的终浓度为IO纟鼓摩的溶液开始)(最终DMSO的浓度是5%)。在25。C对96孔板进行10分钟的预培养，通过加入8微升[-33P]ATP(最终浓度为15;微摩)开始反应。在反应180分钟之后，通过加入100孩￡升0.14M的石粦酸来中止反应。在加入125樣i升中止试-验混合物之前，用10孩￡升0.2M》粦酸预处理一种多4艮幕》丈映的磷酸纤维素过滤器96-孔4反(Millipore,产品编号MAPHN0B50)。用4x200孩i升0.2M磷酸洗涤96孔板。在干燥后，在闪烁计数之前(1450Microbeta液体闪烁发光计数测定仪,Wallac公司)像小孔中加入1004效升Optiphase'SuperMix,液体闪烁体(PerkinElmer公司)。在对声斤有数值点除去平均背景值之后，使用Prism软件包(GraphPadPrism公司Macintosh,GraphPad4欠4牛3.0cx版，圣i也亚哥，力口利福尼亚，美国)从非线性回归分析中计算Ki(app)。实施例20FGFRl,MLKl,Tie2,和TrkA的抑制性检测^吏用本领域普通4支术人员已知的筛选方法，筛选化合物抑制Arg(Abl-2),FGFP、1，MLK1,Tie2，和TrkA的能力。上述所有的酶都是在ATP浓度为或者接近于ATP的Km(米氏常数)常数的条件下进行筛选的。下面所列的表5描述了由实施例20所的的IC50的值表5<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>述表6列出了从实施例20得到的Ki值表6<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>下述表6列出了由实施例10-11及16所迷的方法中得到的数值表9、10和16。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>-下述表8列出了由实施例12-14和实施例17-18得到的数值。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>尽管我们描述了本发明的许多种实施方案，但很明显的是，可以通过改变基本实施例从而提供其他的实施方案，这种实施方案使用或者包括本发明所述的化合物、方法、或者步骤。因此，可以理解，本发明的范围是由所附权利要求来定义的。权利要求1.一种式ii-d化合物ii-d或其药学上可接受的盐，其中R2是C1-3烷基或环丙基；R5是CH2CH3，CH2CF3，CH2CH2CF3，id="icf0002"file="A2006800445830002C2.tif"wi="35"he="12"top="121"left="145"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>id="icf0003"file="A2006800445830002C3.tif"wi="32"he="12"top="137"left="34"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或id="icf0004"file="A2006800445830002C4.tif"wi="18"he="9"top="140"left="76"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>RY是id="icf0005"file="A2006800445830002C5.tif"wi="53"he="17"top="154"left="57"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或id="icf0006"file="A2006800445830002C6.tif"wi="22"he="11"top="160"left="120"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>J1是H或CH3；J2是C1-4烷基；且Cy是C3-5环烷基。2.根据权利要求1所述的化合物，其中R5选自CH2CF3,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage0</formula>3.根据权利要求2所述的化合物，其中rs选自CH2CF3或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>4.根据权利要求3所述的化合物，其中，r5是CH2CF35.根据权利要求1-4中任意一项所述的化合物，其中ry是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>6.根据权利要求5所述的化合物，其中ry是7.根据权利要求6所述的化合物，其中Cy是环丙基。8.才艮据权利要求1-7中任意一项所述的化合物，其中r2是曱基。9.根据权利要求1所述的化合物，选自以下化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>10.—种组合物，包括权利要求1-9中任意一项所述的化合物和一种药学上可接受的载体、辅剂或4某介物。11.一种在生物样品中抑制极光蛋白激酶活性的方法，包括将所述生物样品与4又利要求1-9中任意一项所述的化合物相4妻触。12.—种治疗患者的增殖障碍的方法，包4舌向所述患者给药前述4又利要求1-9中4壬意一项所述的化合物。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述的增殖障碍选自患者体内的黑素瘤，骨ft瘤，白血病，淋巴瘤，成4申经细月包瘤，或者是癌症，所述癌症选自结肠，乳房癌，胃癌，卵巢癌，子宫颈癌，肺癌，中枢神经系统(CNS)癌，肾癌，前列腺癌，力旁胱癌，力夷腺癌，脑癌(4申经力交质瘤)，头癌和颈癌，肾癌，肝癌，黑素瘤，肉瘤，或者甲状腺癌，其中所述的方法包括向所述患者施用前述权利要求1-9中任意一项所述的化合物。14.一种治疗需要治疗的患者体内癌症的方法，包括按顺序施用或者同时施用前述权利要求1-9中任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及其他的治疗剂。15.4艮据权利要求14所述的方法，其中所述治疗剂选自紫杉醇类、bcr-abl抑制剂、EGFR抑制剂、DNA损伤剂、以及抗代谢物。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述治疗剂选自紫杉醇，格列卫，达沙替尼，尼洛替尼，它塞瓦，易瑞沙，顺賴，奥沙利4白，卡賴，蒽环类，AmC以及5-FU。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述的治疗剂选自喜树碱，亚德里亚霉素，伊达比星，顺钿，紫杉醇，泰索帝，长春新碱，它塞瓦，MEK抑制剂，U0126,KSP抑制剂，伏立诺他，格列卫，达沙替尼，以及尼洛替尼。全文摘要本发明涉及一种用作蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还提供了含有这类化合物的药学上可接受的组合物，以及利用这类化合物和组合物治疗各种疾病、症状和障碍的方法。本发明还提供了制备本发明所述化合物的方法。文档编号A01N43/54GK101316597SQ200680044583公开日2008年12月3日申请日期2006年11月3日优先权日2005年11月3日发明者A·米勒,C·戴维斯,D·弗瑞斯,D·鲁宾逊,H·宾茨,J·平德,M·奥丹尼尔,M·莫蒂摩瑞,S·埃弗瑞特申请人:顶点医药品公司