基于细胞渗透性肽的激酶抑制剂的制作方法

专利名称：基于细胞渗透性肽的激酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞生物学、细胞渗透性肽、细胞渗透性肽组合物及其使用方法和蛋白质工程改造的方法。背景蛋白质分子的三维构象由其氨基酸序列决定，蛋白质构象的详细情况决定其化学性质。蛋白质通常由含所连接的侧链的多肽主链组成。化学上不同的氨基酸侧链序列使得每一种蛋白质各有区别。由非共价相互作用(例如氢键、离子键和范德华引力)来稳定蛋白质的折叠结构，所述非共价相互作用在多肽链的不同部分、链的一个部分与另一部分之间形成。由大量所述非共价键的联合力量来决定每一折叠形态的稳定性。每一种蛋白质具有四级结构组织水平。氨基酸序列是蛋白质的一级结构。二级结构由主链酰胺基和羧基之间的氢键模式(例如α螺旋、β-折叠)来限定，而不考虑侧链_主链和侧链_侧链氢键。多肽链的完整三维组织一三级结构，是其中蛋白质的片层和螺旋二级结构在它们自己之上折叠以限定三维结构的方式。四级结构是指形成为多于一条多肽链的复合体的蛋白质分子的完整结构。蛋白质结构域是或多或少彼此独立折叠形成球状紧密结构的结构单位。结构域通常含有约40-约350个氨基酸，是模块化的单位，很多大蛋白由其构成。蛋白质的不同结构域通常与不同功能相关。任何多肽链采用的最终折叠结构或构象通常是自由能最小的结构。1.激酶激酶是催化磷酰基从磷酸供体(通常为腺苷-5' _三磷酸(ATP))到受体底物的转移反应的十分普遍的酶群。尽管所有激酶基本上催化相同的磷酰基转移反应，但它们在其底物特异性、结构和它们所参与的途径方面表现出显著的多样性。对所有能得到的激酶序列(大约60，000个序列)的最近期分类表明，激酶可分组成25个同源蛋白质家族。这些激酶家族基于结构折叠的相似性进一步组合为12个折叠组。另外，25个家族中的22个(大约为所有序列的98. 8%)属于结构折叠已知的10个折叠组。在其它3个家族中，多磷酸激酶形成独特的折叠组，剩下的2个家族二者都是不可或缺的膜激酶，并构成最后折叠组。这些折叠组不仅包括某些分布最广泛的蛋白质折叠，例如罗斯曼(Rossmarm)样折叠(在拓扑次序β-α-β-α-β中由两个α螺旋连接的三个或更多个平行β链)、铁氧还蛋白样折叠(沿其主链含识别标志β α β β α β 二级结构的常见α+β蛋白质折叠)、TIM桶折叠 (意指由沿肽主链交替出现的8个α-螺旋和8个平行链组成的保守的蛋白质折叠) 和反平行桶折叠(β桶是扭转卷曲形成密闭结构的大折叠，其中第一条链由氢键合到最后一条链)，而且还包括蛋白质结构的所有的主要类别(所有α、所有β、α + β、α / β)。在折叠组内，每一家族的核苷酸结合结构域的核心具有相同的结构，蛋白质核心的拓扑学通过循环排列相同或相关。未暗示折叠组内家族间的同源性。I组(23，124个序列)激酶包括蛋白S/T-Y激酶、非典型蛋白激酶、脂质激酶和 ATP抓握(grasp)酶，并进一步包括蛋白S/T-Y激酶和非典型蛋白激酶家族(22，074个序列)。这些激酶包括胆碱激酶(EC 2. 7. 1，32)；蛋白激酶(EC 2. 7. 137)；磷酸化酶激酶 (EC 2. 7. 1. 38)；高丝氨酸激酶(EC 2. 7. 1. 39) ；I-磷脂酰肌醇 4-激酶(EC 2. 7. 1. 67)； 链霉素6-激酶(EC 2. 7. 1.72)；乙醇胺激酶(EC 2. 7. 1. 82)；链霉素3 ‘-激酶(EC 2. 7. 1. 87)；卡那霉素激酶(EC 2，7. 1. 95) ；5-甲硫核糖激酶(EC 2. 7. 1. 100)；紫霉素激酶 (EC 2. 7. 1. 103)；[羟甲基戊二酰-CoA还原酶(NADPH2)]激酶(EC 2. 7. 1. 109)；蛋白质-酪氨酸激酶(EC 2.7. 1. 112)；[异柠檬酸脱氢酶(NADP+)]激酶(EC 2.7. 1. 116)；[肌球蛋白轻链]激酶(EC 2. 7. 1. 117)；潮霉素-B激酶(EC 2. 7. 1. 119)；钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(EC 2. 7. 1. 123)；视紫红质激酶(EC 2. 7. 1. 125) ；[β-肾上腺素能受体]激酶(EC 2，7. 1. 126)；[肌球蛋白重链]激酶(EC 2. 7. 1. 129) ； [Tau 蛋白]激酶(EC 2. 7. 1. 135)； 大环内酯2'-激酶(EC 2. 7. 1. 136) ；I-磷脂酰肌醇3-激酶(EC 2. 7. 1. 137) ； [RNA-聚合酶]-亚基激酶(EC 2. 7. 1. 141)；磷脂酰肌醇-4，5- 二磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 153)；和磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 154)。I组进一步包括脂质激酶家族(321个序列)。 这些激酶包括I-磷脂酰肌醇-4-磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1. 68) ；ID-肌醇-三磷酸3-激酶(EC 2. 7. 1. 127)；肌醇-四磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1，140) ； I-磷脂酰肌醇_5_磷酸4-激酶(EC 2. 7. 1. 149) ； I-磷脂酰肌醇_3_磷酸5-激酶(EC 2. 7. 1. 150)；肌醇-多磷酸多激酶(EC 2. 7. 1. 151)；和肌醇-六磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 21)。I组进一步包括ATP抓握激酶 (729个序列)，所述激酶包括肌醇-四磷酸I-激酶(EC 2.7.1.134)；丙酮酸磷酸二激酶(EC 2. 7. 9. 1)；和丙酮酸、水二激酶(EC 2. 7. 9. 2)。II组(17071个序列)激酶包括罗斯曼样激酶。II组包括P-环激酶家族 (7732个序列)。这些包括葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 12)；磷酸核酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 19)； 胸苷激酶(EC 2.7. 1.21)；核糖基烟酰胺激酶(EC 2. 7. 1. 22)；脱磷酸-CoA激酶(EC 2.7. 1.24)；腺苷酰硫酸激酶(EC 2.7. 1.25)；泛酸激酶(EC 2. 7. 1. 33)；蛋白激酶(细菌)(EC 2.7. 1.37)；尿苷激酶(EC 2. 7. 1. 48)；莽草酸激酶(EC 2. 7. 1. 71)；脱氧胞苷激酶(EC 2.7. 1.74)；脱氧腺苷激酶(EC 2. 7. 1. 76)；多核苷酸5 ‘-羟基-激酶(EC 2.7.1.78) ；6-磷酸果糖-2-激酶(EC 2.7.1.105)；脱氧鸟苷激酶(EC 2.7.1.113)；四酰基二糖4'-激酶(EC 2. 7. 1. 130)；脱氧核苷激酶(EC 2. 7. 1. 145)；腺苷钴啉醇酰胺激酶 (EC 2. 7. 1. 156)；多磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 1)；磷酸甲羟戊酸激酶(EC 2. 7. 4. 2)；腺苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 3)；核苷-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 4)；鸟苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 8)；胸苷酸激 酶 (EC 2. 7. 4. 9)；核苷-三磷酸-腺苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 10)；(脱氧)核苷-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 13)；胞苷酸激酶(EC 2. 7. 4. 14)；和尿苷酸激酶(EC 2. 7. 4. -)。II组进一步包括烯醇丙酮酸磷酸羧激酶家族(815个序列)。这些酶包括蛋白激酶(HPr激酶/磷酸酶)(EC2. 7. 1. 37)；烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(GTP) (EC 4. 1. 1. 32)；和烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(ATP) (EC 4. 1. 1. 49)。II组进一步包含磷酸甘油酸激酶(1351个序列)家族。这些酶包括磷酸甘油酸激酶(EC 2. 7. 2. 3)和磷酸甘油酸激酶(GTP) (EC 2. 7. 2. 10)。II组进一步包括天冬氨酸激酶家族(2171个序列)。这些酶包括氨基甲酸激酶(EC 2. 7. 2. 2)；天冬氨酸激酶 (EC 2. 7. 2. 4)；乙酰基谷氨酸激酶(EC 2. 7. 2. 8 1)；谷氨酸5-激酶(EC 2. 7. 2. 1)和尿苷酸激酶(EC 2. 7. 4. -)。II组进一步包括磷酸果糖激酶样激酶家族(1998个序列)。这些酶包括6-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 11) ；NAD(+)激酶(EC 2. 7. 1. 23) ；I-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 56) ；二磷酸-果糖-6-磷酸I-磷酸转移酶(EC 2. 7. 1. 90) ；二氢鞘氨醇激酶(EC 2. 7. 1. 91) ；二酰基甘油激酶(EC 2. 7. 1. 107)；和神经酰胺激酶(EC 2. 7，1. 138)。II组进一步包括核糖激酶样家族(2722个序列)。这些酶包括葡糖激酶(EC 2. 7. 1. 2)；己酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 3)；果糖激酶(EC 2. 7. 1. 4) ；6-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 11)；核糖激酶(EC 2. 7. 1. 15)；腺苷激酶(EC 2. 7. 1. 20)；吡哆醛激酶(EC 2. 7. 1. 35) ；2-脱氢-3-脱氧葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 45)；羟甲基嘧啶激酶(EC 2. 7. 1. 49)；羟乙基噻唑激酶(EC 2. 7. 1. 50)； I-磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 56)；肌苷激酶(EC 2. 7. 1. 73) ；5-脱氢-2-脱氧葡糖酸激酶(EC 2. 7. 1. 92)；塔格糖-6-磷酸激酶(EC 2. 7. 1. 144) ；ADP依赖性磷酸果糖激酶(EC 2. 7. 1. 146) ；ADP依赖性葡糖激酶(EC 2. 7. 1. 147)；和磷酸甲基嘧啶激酶(EC 2. 1. 4. 7)。II 组进一步包括硫胺素焦磷酸激酶家族(175个序列)，所述激酶家族包括硫胺素焦磷酸激酶 (EC 2.7.6.2)。II组进一步包括甘油酸激酶家族(107个序列)，所述激酶家族包括甘油酸激酶((EC 2. 7. 1.31) ο
III组激酶(10973个序列)包括铁氧还蛋白样折叠激酶。III组进一步包括核苷_ 二磷酸激酶家族(923个序列)。这些酶包括核苷-二磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 6)。III组进一步包括HPPK激酶家族(609个序列)。这些酶包括2-氨基-4-羟基-6-羟甲基二氢蝶啶焦磷酸激酶(EC 2. 7. 6. 3)。III组进一步包括胍基激酶家族(324个序列)。这些酶包括胍乙酸激酶(EC 2. 7. 3. 1)；肌氨酸激酶(EC 2. 7. 3. 2)；精酸激酶(EC 2. 7. 3. 3)；和蚯蚓磷脂激酶(EC 2. 7. 3. 5)。III组进一步包括组氨酸激酶家族(9117个序列)。这些酶包括蛋白激酶(组氨酸激酶)(EC 2.7.1.37)；[丙酮酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7.1.99)； 和[3-甲基-2-氧丁酸脱氢酶(硫辛酰胺)]激酶(EC 2.7. 1. 115)。IV组激酶(2768个序列)包括核糖核酸酶H-样激酶。这些酶包括己糖激酶(EC 2.7. 1. 1)；葡糖激酶(EC 2.7. 1.2)；果糖激酶(EC 2.7. 1.4)；鼠李树胶糖激酶(EC 2.7. 1.5)；甘露糖激酶(EC 2.7. 1.7)；葡糖酸激酶(EC 2.7. 1. 12) ；L-核酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 16)；木酮糖激酶(EC 2. 7. 1. 17)；赤藓糖醇激酶(EC 2. 7. 1. 27)；甘油激酶(EC 2. 7. 1.30)；泛酸激酶(EC 2.7.1.33) ；D-核酮糖激酶(EC 2.7.1.47) ；L-岩藻酮糖激酶(fucolokinase) (EC 2.7.1.51) ；L-木酮糖激酶(EC 2.7.1.53)；阿洛糖激酶(EC 2.7.1.55) ；2-脱氢-3-脱氧半乳糖酸激酶(EC 2.7.1.58) ；N-乙酰葡糖胺激酶(EC 2.7.1.59) ；N-酰基甘露糖胺激酶(EC 2. 7. 1. 60)；多磷酸-葡萄糖磷酸转移酶 (EC 2. 7. 1.63) 糖苷激酶(EC 2. 7. 1. 85)；乙酸激酶(EC 2. 7. 2. 1) ； 丁酸激酶(EC 2. 7. 2. 7)；支链-脂肪酸-激酶(EC 2. 7. 2. 14)；和丙酸激酶(EC 2. 7. 2.-)。V组激酶(1119个序列)包括ΤΙΜβ/α-桶激酶。这些酶包括丙酮酸激酶(EC 2. 7. 1. 40)。
VI组激酶(885个序列)包括GHMP激酶。这些酶包括半乳糖激酶(EC 2.7. 1.6)； 甲羟戊酸激酶(EC 2.7. 1.36)；高丝氨酸激酶(EC 2.7.1.39) ；L-阿拉伯糖激酶(EC 2. 7. 1. 46)；岩藻糖激酶(EC 2. 7. 1. 52)；莽草酸激酶(EC 2. 7. 1. 71) ;4_ (胞苷 5 ‘ -二磷酸)-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(EC 2. 7. 1. 148)；和磷酸甲羟戊酸激酶(EC 2. 7. 4. 2)。VII组激酶(1，843个序列)包括AIR合成酶样激酶。这些酶包括硫胺素-磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 16)和硒化物、水二激酶(EC 2. 7. 9. 3)。VIII组激酶(565个序列)包括核黄素激酶(565个序列)。这些酶包括核黄素激酶(EC 2. 7. 1. 26)。IX组激酶(197个序列)包括二羟基丙酮激酶。这些酶包括甘油酮激酶(EC 2. 7. 1. 29)。 X组激酶(148个序列)包括推定的甘油酸激酶。这些酶包括甘油酸激酶(EC 2. 7. 1. 31)。XI组激酶(446个序列)包括多磷酸激酶。这些酶包括多磷酸激酶(EC 2. 7. 4. 1)。XII组激酶(263个序列)包括整合膜激酶。XII组包括多萜醇激酶家族。这些酶包括多萜醇激酶(EC 2. 7. 1. 108)。XII组进一步包括十一萜醇激酶家族。这些酶包括十一萜醇激酶(EC 2. 7. 1. 66)。激酶在多种细胞代谢及信号传导途径中起着必不可少的作用，它们属于在结构、 生物化学及细胞水平方面研究最彻底的酶。尽管事实上所有激酶使用相同的磷酸供体(大部分情况下为ATP)，并且表面上催化同样的磷酰基转移反应，但它们在其结构折叠及底物识别机制方面表现出显著的多样性。这很大程度上是由于它们底物的结构和性质极为多样化的特性。2.促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶(MK2和MK3)不同组的MAPK活化蛋白激酶(MAP-KAPK)界定了促分裂原活化蛋白激酶(MAPK) 下游。这些酶将信号转导到并非为MAPK直接底物的靶标蛋白，因此，起着用MAPK级联将磷酸化依赖的信号传递转到多种细胞功能的作用。由三种MAPKAPK形成这些组之一 MK2、 MK3 (亦称为3pK)和ΜΚ5 (亦定名为PRAK)。促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2 (亦称为“ΜΑΡΚΑΡΚ2”、“ΜΑΡΚΑΡ-Κ2”、“ΜΚ2”)是丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶家族的激酶。 MK2与MK3高度同源(大约75%氨基酸同一性)。MK2和MK3的激酶结构域与钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)、磷酸化酶b激酶和核糖体S6激酶(RSK)同种型的C-末端激酶结构域(CTKD)最相似(大约35% -40%同一性)。mk2基因编码两种可变剪接的370个氨基酸(MK2A)和400个氨基酸(MK2B)的转录物。mk3基因编码一个382个氨基酸的转录物。 MK2蛋白和MK3蛋白高度同源，但MK2A具有较短的C-末端区。MK2B的C-末端含有较短的 MK2A同种型中不存在的功能二分的核定位序列(NLS) (Lys-Lys-Xaa10-Lys-Arg-Arg-Lys-L ys)，表明可变剪接决定MK2同种型的细胞定位。MK3具有相似的核定位序列。在MK2B和 MK3 二者中发现的核定位序列都包含D结构域(Leu-Leu-Lys-Arg-Arg-Lys-Lys)，研究显示所述D结构域介导MK2B和MK3与ρ38 α和ρ38 β之间的特异性相互作用。ΜΚ2Β和ΜΚ3亦具有位于NLS和D结构域的N-末端的功能核输出信号(NES)。ΜΚ2Β中的NES足以在刺激后引发核输出，该过程可用来普霉素B抑制。ΜΚ2和ΜΚ3中的催化结构域的N-末端序列富含脯氨酸，并含有一个(ΜΚ3)或两个(ΜΚ2)推定的Src同源3(SH3)结构域结合位点，研究显示，对于MK2而言其介导体外与c-Abl的SH3结构域的结合。最近的研究表明，该结构域参与MK2介导的细胞迁移。MK2B和MK3主要位于静止细胞的细胞核中，而MK2A存在于细胞质中。MK2B和MK3 二者都在应激刺激后经由染色体区维持蛋白(chromosome region maintenance protein , CRM1)依赖性机制迅速输出到细胞质中。MK2B的核输出似乎是通过激酶激活介导，因为激酶的激活环内的Thr334的模拟磷酸化突变(phosphomimetic mutation)提高MK2B的细胞质定位。不受理论的束缚，认为MK2B和MK3可含有组成型活性NLS和磷酸化调节的NES。MK2和MK3似乎遍在表达，主要是在心脏、骨骼肌和肾脏组织中表达。2. 1.激活ρ38α和ρ38 β的各种激活剂有效刺激ΜΚ2和ΜΚ3活性。ρ38在四个脯氨酸定向位置介导ΜΚ2的体外和体内磷酸化Thr25、Thr222、Ser272和Thr334。这些位置中只有 Thr25在MK3中是非保守的。不受理论的束缚，尽管尚不知道磷酸化Thr25的功能，但其在两个SH3结构域结合位点之间的位置，提示其可调节蛋白质之间的相互作用。MK2中的 Thr222 (MK3中的Thr201)位于激酶结构域的激活环中，业已证明其对MK2和MK3激酶活性不必可少。MK2中的Thr334 (MK3中的Thr313)位于催化结构域的C-末端，并对激酶活性必不可少。业已解析MK2的晶体结构，在不受理论的束缚的情况下，该晶体结构表明Thr334 磷酸化对MK2核输入和输出起开关作用。Thr334磷酸化亦可减弱或干扰MK2的C末端与催化结构域的结合，这暴露了 NES并促进核输出。研究显示，尽管p38能够在细胞核中使MK2和MK3活化，但实验证据表明MK2和MK3 的激活和核输出偶联磷酸化依赖性构象开关，所述开关亦支配P38的稳定性和定位，p38本身的细胞定位受MK2并可能受MK3控制。另外的研究显示，在磷酸化并激活MK2后，细胞核 P38呈与MK2的复合物输出到细胞质中。p38和MK2之间的相互作用对于p38的稳定性可能重要，因为研究表明在MK2缺陷型细胞中p38水平低，并且无催化活性的MK2蛋白的表达恢复P38水平。2. 2.底物和功能MK2与MK3共享很多底物。两种酶具有类似的底物偏好，且以相似的动力学常数使肽底物磷酸化。发现被MK2有效磷酸化所需的最小序列为Hyd-Xaa-Arg-Xaa-Xaa-pSer/ Thr，其中Hyd为体积大的疏水残基。实验证据支持p38在调节细胞因子生物合成和细胞迁移中的作用。定向缺失小鼠的mk2基因表明，尽管p38介导很多相似激酶的激活，但MK2似乎是负责这些p38依赖性生物过程的关键激酶。失去MK2导致(i)脂多糖(LPS)诱导的细胞因子例如肿瘤坏死因子 α (TNFa)、白介素-6(IL_6)和、干扰素(IFN-γ)合成缺陷；和(ii)改变小鼠胚胎胎成纤维细胞、平滑肌细胞和嗜中性粒细胞的迁移。与MK2在炎性反应中的作用一致，MK2缺陷型小鼠显示对单核细胞增生利斯特氏特菌(Listeria monocytogenes)感染的易感性提高， 和局灶性缺血后炎症介导的神经细胞死亡降低。因为在MK2缺陷型细胞中亦显著降低p38 蛋白水平，分清这些表型是否仅仅由于失去MK2是必要的。为达到此目的，在MK2缺陷型细胞中表达MK2突变体，结果表明，MK2催化活性对于恢复p38水平并不必要，但却为调节细胞因子生物合成所需。2. 3. mRNA翻译的调节
研究显示，MK2通过提高TNF α的mRNA的翻译速率来提高TNF α产生；在ΜΚ2缺陷型小鼠中不能检测到TNFa转录、加工和释放的明显降低。已知p38途径在调节mRNA稳定性中起重要作用，MK2代表p38通过其来介导该功能的很可能靶标。用MK2缺陷型小鼠进行研究表明，MK2的催化活性为其对细胞因子产生及迁移的作用所必需，在不受理论的束缚的情况下，这表明MK2使涉及mRNA稳定性的靶标磷酸化。与此一致，MK2显示结合和/ 或磷酸化不均一核的核糖核蛋白(hnRNP)AO、tristetraprolin、聚(A)-结合蛋白PABPl和 HuR(遍在表达的RNA结合蛋白的elav(黄猩猩果蝇(Drospholia melanogaster)中的胚胎致性异常视觉)家族成员)。已知这些底物与在3'非翻译区富含AU元件的mRNA结合或共纯化，这表明MK2可调节富含AU的mRNA例如TNF α的稳定性。目前尚不知道ΜΚ3是否起相似作用，但ΜΚ2缺陷型成纤维细胞的LPS处理完全废除了 hnRNPAO的磷酸化，这表明 MK3不能补偿MK2的损失。 MK3与MK2 —起参与真核生物延伸因子2 (eEF2)激酶的磷酸化。eEF2激酶使eEF2 磷酸化并使其钝化。eEF2活性对于翻译期间的mRNA延伸很关键，eEF2在Thr56上的磷酸化导致终止mRNA翻译。eEF2激酶在Ser377上的MK2和MK3磷酸化，表明这些酶可调节eEF2 激酶活性并藉此调节mRNA翻译的延伸。2. 4.通过MK2和MK3的转录调节与很多MK相似，细胞核MK2促进cAMP应答元件结合(CREB)蛋白、血清应答因子 (SRF)和转录因子ER81的磷酸化。野生型和MK2缺陷型细胞的比较显示，MK2是应激诱导的主要SRF激酶，这提示MK2在应激介导的立即早期应答中的作用。MK2和MK3 二者都在体内与碱性螺旋-环-螺旋转录因子E47相互作用，并在体外使E47磷酸化。发现MK2介导的E47磷酸化抑制E47的转录活性，并藉此抑制E47依赖性基因表达，这表明MK2和MK3可调节组织特异性基因表达及细胞分化。 2. 5. MK2和MK3的其它靶标亦鉴别了几种其它MK2和MK3底物，所述底物反映了 MK2和MK3在若干生物学过程中的多样功能。支架蛋白14-3-3ζ是生理性ΜΚ2底物。研究表明，14-3-3ζ与多种细胞信号转导途径组分相互作用，所述组分包括蛋白激酶、磷酸酶和转录因子。另外的研究显示，ΜΚ2介导的14-3-3 ζ在Ser58上的磷酸化危及其结合活性，这表明MK2可影响几种通常受14-3-3 ζ调节的信号转导分子的调节。另外的研究显示，ΜΚ2亦与7元Arp2和Arp3复合物的pl6亚基(pl6_Arc)相互作用并使其在Ser77上磷酸化。pl6-Arc在肌动蛋白细胞骨架调节中起作用，这表明MK2可参与该过程。另外的研究显示，MK2使小的热休克蛋白HSP27、淋巴细胞特异性蛋白LSP-I 和波形蛋白磷酸化。HSP27尤其引人关注，因为其形成大寡聚物，所述大寡聚物可起分子伴侣作用并保护细胞免遭热休克和氧化应激。HSP27在磷酸化后即失去其形成大寡聚物的能力，且不能阻断肌动蛋白聚合，这表明MK2介导的HSP27的磷酸化起自身稳定作用，自身稳定的目标是调节肌动蛋白动力学，否则在应激期间肌动蛋白动力学将失稳。MK3亦显示在体外和体内使HSP27磷酸化，但尚未阐明其在应激情况期间的作用。MK2和MK3亦可使5_脂加氧酶磷酸化。5_脂加氧酶催化炎性中介物白细胞三烯形成的初始步骤。亦显示MK2使酪氨酸羟化酶、糖原合酶和Akt磷酸化。最后，MK2使肿瘤阻抑蛋白马铃薯球蛋白(tuberin)的Serl210磷酸化，形成了 14_3_3的停靠位点。马铃薯球蛋白和错构素(hamartin)通常形成功 能复合物，所述复合物通过拮抗mTOR依赖性信号转导调节细胞生长，这表明P38-介导的MK2激活可通过提高14-3-3与马铃薯球蛋白的结合来调节细胞生长。3.激酶抑制真核生物蛋白激酶构成通过其催化结构域而相关联的最大的同源蛋白超家族之一。最相关的蛋白激酶特异性针对丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸磷酸化。蛋白激酶在细胞对细胞外刺激物的应答中起不可或缺的作用。因此，认为蛋白激酶的刺激是信号转导系统中最常见的激活机制之一。已知很多底物通过多种蛋白激酶经历磷酸化。业已出版了关于各种蛋白激酶的催化结构域的一级序列的大量信息。这些序列共享参与ATP结合、催化作用和保持结构完整性的大量残基。大部分蛋白激酶具有极为保守的30-32kDa的催化结构域。研究已试图鉴定和利用蛋白激酶的调节元件。这些调节元件包括抑制剂、抗体和封闭肽。3. 1.抑制剂酶抑制剂是与酶结合并藉此降低酶活性的分子。结合抑制剂可阻止底物进入酶的活性位点和/或妨碍酶催化其反应。抑制剂结合可逆或不可逆。不可逆抑制剂通常与酶作用并在化学上使其改变(例如通过修饰酶活性所需的关键氨基酸残基)，以使其不再能够催化其反应。与此相反，可逆抑制剂非共价结合，根据这些抑制剂是否结合酶、酶-底物复合物或二者而产生不同的抑制类型。酶抑制剂通常通过其特异性和效价来评估。在本文范围内所用的术语“特异性” 是指抑制剂与其它蛋白质的选择性连接或其没有与其它蛋白质结合。本文所用术语“效价” 是指抑制剂的解离常数，所述常数表示抑制酶所需的抑制剂的浓度。已研究用作蛋白激酶活性调节工具的蛋白激酶抑制剂。业已研究了将抑制剂用于例如细胞周期蛋白-依赖性(Cdk)激酶、MAP激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶、Src家族蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸激酶、钙调蛋白(CaM)激酶、酪蛋白激酶、限制点激酶(Chkl)、糖原合酶激酶3(GSK-3)、c-Jim N-末端激酶(JNK)、促分裂原活化蛋白激酶1 (MEK)、肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)、蛋白激酶A、Akt (蛋白激酶B)、蛋白激酶C、蛋白激酶G、蛋白质酪氨酸激酶、Raf激酶和Rho激酶。3. 2.抗体抗体为血清蛋白，其分子具有与其靶标上的小化学基团互补的表面小面积。每个抗体分子至少有2个所述互补区(称为抗体结合位点或抗原结合位点)，在某些类型的抗体分子中有10个、8个，或在某些种类中多至12个互补区，它们可与抗原上其相应的互补区 (抗原决定簇或表位)互相作用以将多价抗原的若干分子连接在一起形成网格(lattice)。全抗体分子的基本结构单位由四条多肽链组成，两条相同的轻链(L)(每一条含有约220个氨基酸)和两条相同的重链(H)(每一条通常含有约440个氨基酸)。两条重链和两条轻链通过非共价键和共价键(二硫键)组合结合在一起。所述分子包含两个相同的一半，每一个含有相同的抗原结合位点，包含轻链N-末端区和重链N-末端区。轻链和重链二者通常合作形成抗原结合表面。人抗体表现两种轻链κ和λ ；免疫球蛋白的各个分子通常仅有一种或另一种。在正常血清中，发现60%的分子具有κ决定簇，30%为λ。发现很多其它物种显示两种轻链，但其比例不同。例如，小鼠和大鼠中有λ链但整体百分比很小；在狗和猫中，K链极低；马未显示具有任何K链；兔可具有5-40%的λ，视品系和b-基因座同种异型而定；和鸡轻链与λ比与κ更同源。在哺乳动物中，有5类抗体IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，每一种有其自己的重链种类-α (对于IgA)、δ (对于IgD)、ε (对于IgE)、Y (对于IgG)和μ (对于IgM)。另外， 有分别具有Y 1、Y 2、γ 3和γ 4重链的4种IgG免疫球蛋白亚类(IgG1UgG^ IgG3、IgG4)。 IgM在其分泌形式中为五聚物，由5个4-链单元组成，共提供10个抗原结合位点。每个五聚物含有一个J链拷贝，其共价插入到两个相邻的尾区之间。所有5种免疫球蛋白种类不同于其它血清蛋白质，因为它们显示宽范围的电泳迁移率且不均一。这种异质性——即单个IgG分子例如在静电荷方面彼此不同——是免疫球蛋白的固有性质。可通过让来自免疫供体的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系融合产生确立的小鼠杂交瘤克隆来产生单克隆抗体(mAb)，所述小鼠杂交瘤克隆在选择性培养基中生长。杂交瘤细胞为永生化杂交细胞，其因分泌抗体的B细胞与骨髓瘤细胞在体外融合而产生。体外免疫是指初次激活培养中的抗原特异性B细胞，这是另一种已广泛接受的产生小鼠单克隆抗体的手段。亦可通过聚合酶链反应(PCR)扩增来扩增来自外周血淋巴细胞的免疫球蛋白重链(Vh)和轻链(Vk和VJ可变基因的多种库。可通过用PCR让重链和轻链V-基因随机组合，来制备编码单个多肽链的基因，所述多肽链中重链和轻链可变结构域经由多肽间隔物 (单链Fv或scFv)连接。然后可通过与噬菌体末端的次要衣壳蛋白融合来克隆用于在丝状噬菌体表面展示的组合库。指导选择的技术基于用啮齿动物免疫球蛋白V基因的人免疫球蛋白V基因改组。 所述方法需要(i)用小鼠单克隆抗体的重链可变区(VH)结构域改组人λ轻链谱，所述小鼠单克隆抗体与目的抗原有反应性；(ii)选择针对该抗原的半-人Fab; (iii)在第二次改组中用所选择的λ轻链基因作为人重链库的“停靠结构域(docking domain)”，以分离具有人轻链基因的克隆Fab片段；(ν)通过用含有所述基因的哺乳动物细胞表达载体电穿孔来转染小鼠骨髓瘤细胞；和(vi)表达Fab的V基因，其作为完整的IgGl与抗原反应，该 IgGl为小鼠骨髓瘤λ抗体分子。举例而言，本文所用术语“抗体”包括天然存在和非天然存在的抗体二者。具体而言，术语“抗体”包括多克隆抗体和单克隆抗体及其片段。此外，术语“抗体”包括嵌合抗体和全合成抗体及其片段。抗原决定簇或表位为分子上的抗原位点。连续的抗原决定簇/表位基本上是线性链。在规则结构例如螺旋状聚合物或蛋白质中，抗原决定簇/表位基本上是该结构表面内或表面上的限定区或小块，其包括来自分子不同部分能彼此靠近的氨基酸侧链。这些为构象性决定簇。本文所用表位可为激酶抑制肽上的抗原决定簇/抗原结合位点。表位可为相关的一级、二级或三级序列。互补性原理(通常与锁钥适合性比较)涉及相对弱的结合力(疏水键和氢键、范德华力和离子相互作用)，只有当两个反应分子彼此可极为接近并实际上接近到一个分子的突出组成原子或原子基团可融入另一个分子的互补凹陷或凹槽时，所述弱结合力才能有效发挥作用。抗原-抗体相互作用显示高度特异性，所述特异性以多种水平显示。就分子水平而言，特异性意指抗体与抗原的结合位点具有与非相关抗原的抗原决定簇完全不相似的互补性。在两个不同抗原的抗原决定簇具有某种结构相似性时，一个决定簇可能对另一个决定簇的某些抗体的结合位点出现某种程度的适合，这种现象产生交叉反应。交叉反应在理解抗原-抗体反应的互补性或特异性中具有重要意义。免疫学特异性或互补性，使得检测抗原中的少量杂质/污染物成为可能。业已研究将某些抗体和蛋白激酶之间相互作用的特异性用于蛋白激酶活性调节。 业已将抗体分离用于例如MAP激酶途径、蛋白激酶A、蛋白激酶B、蛋白激酶G、丝氨酸/苏氨酸激酶、糖原合酶激酶-3(GSK-3)、应激活化蛋白(SAP)激酶途径和酪氨酸激酶。另外，业已将抗体分离用于蛋白激酶抑制剂和蛋白激酶底物。
3. 3.封闭肽肽为由两个或更多个氨基酸的链组成的化合物，其中链中的一个氨基酸的羧基经由肽键与另一个氨基酸的氨基连接。肽已尤其用于研究蛋白质的结构和功能。合成肽尤其可用作探测物以探测蛋白质-肽相互作用发生的位置。抑制性肽尤其可用于临床研究以检查肽对蛋白激酶、癌蛋白和其它病症抑制的作用。业已研究了数种封闭肽的应用。例如，细胞外信号调节激酶(ERK)，这是对细胞增殖和分化必不可少的MAPK蛋白激酶。MAPK激活需要级联机制，藉此MAPK通过上游 MAPKK(MEK)被磷酸化，MAPKK又被第三激酶MAPKKK (MEKK)磷酸化。ERK抑制肽通过与ERK 结合起MEK诱铒的作用。其含有MEKl的氨基-末端的13个氨基酸(GMPKKKPTPIQLN) [SEQ ID NO 1]并与ERK结合。这阻断MEK对ERK的激活，因为ERK不能与MEK相互作用。ERK 抑制肽亦含有源自触角足(Antennapedia)的蛋白质转导(PTD)序列(DRQIKIWFQNRRMKWKK) [SEQ ID NO :2]，所述序列使得肽可渗透细胞。其它封闭肽包括autocamtide-2相关抑制肽(AIP)。该合成肽具有高度特异性，是 Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II (CaMKII)的有效抑制剂。AIP是autocamtide-2的不能磷酸化的类似物，是CaMKII的高选择性肽底物。AIP以IOOnM的IC5tl (IC5tl是获得50%抑制所需的抑制剂浓度)抑制CaMKII。AIP抑制对于syntide-2 (CaMKII肽底物)和ATP为非竞争性的，但对于autocamtide-2为竞争性的。抑制不受是否存在Ca2+/钙调蛋白的影响。 CaMKII活性完全被AIP (1 μ Μ)抑制，而PKA、PKC和CaMKIV不受影响。AIP的氨基酸序列为 KKALRRQEAVDAL(Lys-Lys-Ala-Leu-Arg-Arg-Gln-Glu-Ala-Val-Asp-Ala-Leu)[SEQ ID NO 3]。其它封闭肽包括细胞分裂蛋白激酶5(Cdk5)抑制肽(CIP)。Cdk5当与p25缔合时，使阿尔茨海默氏病特异性磷酸化表位的微管蛋白tau磷酸化。p25是截短的激活剂，其在生理Cdk5激活剂p35与淀粉样蛋白β(Α丨)肽接触后产生。当神经细胞感染CIP后， CIP选择性抑制p25/Cdk5活性，并阻抑皮层神经元中异常的tau磷酸化。由CIP所显示的特异性的原因尚未完全了解。业已研究以下将另外的封闭肽用于细胞外调节性激酶2 (ERK2)、ERK3、p38/ H0G1、蛋白激酶C、酪蛋白激酶II、Ca2+/钙调蛋白激酶IV、酪蛋白激酶II、Cdk4、Cdk5、DNA 依赖性蛋白激酶(DNA-PK)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PAK3、磷酸肌醇(PI)-3激酶、PI-5激酶、PSTAIRE(cdk高度保守序列)、核糖体S6激酶、GSK-4、生发中心激酶(GCK)、SAPK(应激活化蛋白激酶)、SEKl (应激信号转导激酶)和黏着斑激酶(FAK)。3.4.蛋白质转导结构域 蛋白质转导结构域(PTD)是能够渗透哺乳动物细胞细胞质膜并能将多种类型和分子量的化合物转运跨过膜的肽种类。这些化合物包括效应器分子(例如蛋白质、DNAjf 合肽、寡核苷酸)和小颗粒(例如脂质体)。当PTD化学上与其它蛋白质连接或融合时，得到的融合蛋白仍能进入细胞。尽管不知道转导的准确机制，但认为这些蛋白质的内化不是由受体介导的或转运蛋白介导的。PTD通常长10-16个氨基酸，可按其组成分类，例如富含精氨酸和/或赖氨酸的肽。能够将效应器分子转运到细胞中的PTD的用途在药物设计中越来越有吸引力， 因为其促进细胞吸收货物分子。这些通常视其序列分为两亲(意指具有极性及非极性两端)或阳离子的细胞渗透性肽，为大分子提供非侵入式递送技术。PTD通常亦被称为“特洛伊肽(Trojan ρ印tide) ”、“膜易位序列”或“细胞渗透性蛋白”(CPP)。PTD亦可用于帮助新型HSP27激酶抑制剂渗透细胞膜(参见2008年1月10提交的美国专利申请序号 11/972，459，标题为“Polyp印tic Inhibitors of HSP27 Kinase and Uses Thereof (HSP27 激酶的多肽抑制剂及其用途)”;和2008年8月7日提交的序号12/188，109，标题为“Kinase Inhibitors and Uses Thereof (激酶抑制剂及其用途)”，以其整体在此引作参考)。3. 4. 1.含有病毒PTD的蛋白阐述为具有转导性质的第一种蛋白为病毒来源的蛋白。这些蛋白仍为用于PTD作用的最常用的模型。HIV-I转录反式激活蛋白(TAT)和HSV-I VP 22蛋白是表征最为清楚的含病毒PTD的蛋白。TAT(HIV-1反式激活蛋白基因产物)是86个氨基酸的多肽，其作为整合的HIV-I 基因组的强力转录因子起作用。TAT在潜伏感染的细胞中对病毒基因组作用刺激病毒复制。 TAT蛋白的易位特性使得其能够激活静止的被感染细胞，其可通过调节包括细胞因子在内的多种细胞基因来参与引发未感染细胞的随后感染。TAT的最小PTD是9个氨基酸的蛋白序列RKKRRQRRR(TAT49_57) [SEQ ID NO :4]。用较长TAT片段进行的研究成功显示转导了大至 120kDa的融合蛋白。加入多种TAT-PTD以及合成TAT衍生物业已显示可介导膜易位。已将含有TAT PTD的融合蛋白在涉及癌症、将死亡-蛋白转运到细胞中和神经变性性疾病的疾病模型的实验中用作治疗部分。VP22是HSV-I间层蛋白，是HSV病毒粒子的结构部分。VP22能够不依赖于受体易位，并在细胞核中聚集。VP22的这种性质将该蛋白归类为含PTD的肽。包含全长VP22的融合蛋白已被有效跨过细胞质膜易位。3. 4. 2具有细胞间易位性质的同源异型蛋白同源异型蛋白为参与形态学过程的高度保守的反式激活转录因子。它们通过60 个氨基酸的特殊序列与DNA结合。DNA结合同源异型域是同源异型蛋白最高度保守的序列。 业已阐述了几种同源异型蛋白以展现PTD-样活性；它们能够以不依赖能量且不依赖胞吞作用的方式有效跨过细胞膜易位而无细胞类型特异性。触角蛋白(Antp)是能够跨过细胞膜易位的反式激活因子；能够易位的最小序列是16个氨基酸的肽，其相应于蛋白质的同源异型域(HD)的第三个螺旋。该螺旋在4°C发生内化，这表明该过程不依赖于胞吞作用。作为含AntpHD的融合蛋白产生的大至100个氨基酸的肽渗透穿过细胞膜。能够易位的其它同源异型域包括果蝇ftz蛋白(Fushi tarazu, Ftz))和果蝇En蛋白(EngrailecbEn))同源异型域。很多同源异型域共享高度保守的第
三螺旋。 3.4.3.合成的 PTD业已合成了几种PTD肽。这些合成肽中很多基于现有的记录全面的肽，而其它的根据其碱性残基和/或正电荷而选择，通常认为这些残基对PTD功能很关键。合成肽包括但不限于PTD-4 (YARAAARQARA) [SEQ ID NO 5] ；PTD-5 (RRQRRTSKLMKR) [SEQ ID NO 6] ；MST-I(AAVLLPVLLAAR)[SEQ ID NO 7] ；L-R9(RRRRRRRRR)[SEQ ID NO 8]；和肽 2(SGffFRRffKK)[SEQ ID NO 9]。3.4.4.人 PTD人PTD被引入人患者后可绕过可能的免疫原性问题。含PTD序列的肽包括 Hoxa-5、Hox-A4、Hox-B5、Hox-B6、Hox-B7、H0X-D3、GAX、M0X-2 和 FtzPTD。这些蛋白质都共有在 AntpPTD 中发现的序列(RQIKIWFQNRRMKWKK) [SEQ ID NO :10]。其它 PTD 包括 Islet-Ι、白介素-1 β、肿瘤坏死因子和来自卡波西(Kaposi)-成纤维细胞生长因子(K-FGF或FGF-4) 信号肽的疏水序列，它们能够不依赖能量、受体和胞吞作用易位。未确定的PTD包括成纤维细胞生长因子(FGF)家族成员。4.病症炎性病症本文所用术语“炎症”是指血管化组织响应损伤的生理过程。参见例如 FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY，第 4 版，William Ε· Paul 编辑 Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia(1999)，第1051-1053页，其在此引作参考。在炎症过程中，参与解毒与修复的细胞被炎性中介物迁移到危害位置。炎症通常特征为白细胞尤其是嗜中性粒细胞(多形核细胞)在炎症位置强烈浸润，。这些细胞通过在血管壁或未损伤组织内释放有毒物质促进组织损伤。传统上，炎症被分为急性和慢性反应。本文所用术语“急性炎症”是指对急性损伤的快速短暂(几分钟到几天)相对一致的反应，特征为流液、血浆蛋白和嗜中性白细胞的聚积。在急性炎症中，除去刺激物阻止单核细胞(在适当激活后成为巨噬细胞)募集到炎症组织，已有的巨噬细胞经由淋巴系统离开组织。引起急性炎症的伤害因子实例包括但不限于病原体(例如细菌、病毒、寄生虫)、 来自外源(例如石棉)或内源(例如尿酸盐结晶、免疫复合物)来源的外来物体和物理因素(例如烧伤)或化学剂(例如腐蚀剂)。本文所用术语“慢性炎症”是指较长持续时间的炎症，其具有不明确的无限期的终止期。当急性炎症因为不完全清除初始发炎物质或由于在同一位置出现的多个急性事件而持续时，慢性炎症接管。包括淋巴细胞和巨噬细胞流入及成纤维细胞生长的慢性炎症，可在延长或反复的炎性活动位点中导致组织瘢痕形成。在慢性炎症中，已有的巨噬细胞被束缚在适当位置，并刺激巨噬细胞增殖。不管引发剂是什么，伴随急性炎症的生理学变化包括四个主要特征(1)血管舒张，其导致血流量净增加，是对急性组织损伤的最早的物理响应；(2)因响应炎性刺激物， 微静脉衬里的内皮细胞收缩，加宽了细胞内连接以产生间隙，导致提高血管渗透性，这使得血浆蛋白渗漏及血细胞溢出血管；(3)炎症特征通常为白细胞尤其是嗜中性粒细胞(多形核细胞)在炎症位置强烈浸润。这些细胞通过在血管壁或未损伤组织中释放毒性物质来促进组织损伤；和(4)因响应特殊刺激物而从白细胞释放的热原引起的发热。在 炎症过程中，炎性反应的可溶性炎性中介物以系统化方式与细胞组分一起发挥作用，试图抑制并消除引起身体痛苦的物质。本文所用术语“炎性中介物”是指炎症过程的分子中介物。这些可溶性可扩散的分子在组织损伤和感染的位置局部及更远的位置两处起作用。某些炎性中介物通过炎症过程激活，而其它的因响应急性炎症或通过其它可溶性炎性中介物从细胞来源合成和/或释放。炎性反应的炎性中介物实例包括但不限于血浆蛋白酶、补体、激肽、凝血蛋白和溶纤维蛋白、脂质中介物、前列腺素、白细胞三烯、血小板活化因子(PAF)、肽和胺(包括但不限于组胺、血清素和神经肽)、促炎性细胞因子(包括但不限于白介素-1、白介素-4 (IL-4)、白介素-6 (IL-6)、白介素_8 (IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素-Y和白介素12(IL-12))。几种与炎症有关的病症是多种疾病的原因。这些包括但不限于哮喘、自身免疫性疾病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病(IBD)、盆腔炎(PID)、再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎和高敏感性。哮喘哮喘是涉及呼吸系统的慢性病，其中气道通常可因响应一种或多种引发物而偶发地收缩、发炎并衬有过量的黏液。这些引发物可包括但不限于接触环境刺激物，所述环境刺激物为例如但不限于变应原、烟、冷或热空气、香水、宠物毛屑、潮湿空气、锻炼或出汗或情志刺激。气道窄化表现例如但不限于以下症状哮鸣、呼吸急促、胸部紧迫感、咳嗽、呼吸困难和喘鸣。在支气管哮喘病理生理学中，表明哮喘受试者与正常对照受试者相比IL-6的血清水平高。Yokoyama，Α.等，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 151 (5) 1354-58 (1995)。研究亦表明，基于观察，在哮喘患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中检测到显著的TNF-α和IL-6 水平，而无症状哮喘患者的患者BALF中的IL-I β水平变平，激活肺泡巨噬细胞和T细胞 (Broide, D. H.等，J. Allergy Clin. Immunol. 89(5) :958_67，1992)。自身免疫性疾病强直性脊柱炎(AS、别赫捷列夫氏病、别赫捷列夫综合征、马_施病)是慢性炎性关节炎和自身免疫性疾病。它主要影响脊柱关节和骨盆骶髂(sacroilium)，引起脊柱的最终融合。研究报道，AS患者中TNF- α和IL-6增加(而IL-I β水平未增加)，且IL-6与该疾病活动紧密相关(Gratacos，J.等，Br. J. Rheumatol. 33 (10) :927_931. 1994)。AS 的症状包括但不限于脊柱下面部分或有时是整个脊柱的慢性疼痛和僵硬，通常疼痛指一边或另一边臀部或骶髂关节大腿后部；眼睛发炎(虹膜睫状体炎、葡萄膜炎)，其引起发红、眼睛疼痛、视力受损、飞蚊症、畏光；疲劳、恶心、主动脉炎、肺尖纤维化和荐神经根鞘扩张。1型糖尿病是自身免疫性疾病，其中胰岛细胞受到T-细胞攻击，这使得身体不能产生胰岛素。据报道细胞破坏性胰岛炎与IL-I和TNF-α表达增加有关。另外，非糖尿病倾向小鼠和非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的胰岛β-细胞中细胞因子的转基因表达，提示 IFNa ,IFN γ , IL-2和IL-10在胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)发展中的病原性作用及IL-4、 IL-6 禾口 TNF-a 的保护作用(Rabinovitch, A. Diabetes Metab. Rev. 14 :129_151，1998)。1 型糖尿病症状包括但不限于多尿症、烦渴和体重减轻。格-巴(GuilliamS-Barre)综合征是急性炎性脱髓鞘性多神经病(影响外周神经系统的自身免疫性疾病)。其经常很严重，通常表现为上行性麻痹，特点为腿部疲软，随着完全失去深部腱反射扩展到上肢和脸部。研究报道，IL-li3、IL_6*TNF-a在该疾病动物模型中的差异表达说明了这些细胞因子的主要作用(Zhu，J.等，Clin. Immunol. Immunopathol,84(l) :85_94. 1997)。格-巴综合征症状包括但不限于对称性疲软，通常首先影响下肢，并快速以上行性方式发展；有或无触痛的“橡皮腿(rubbery leg) ” ；延髓无力(口咽性咽下困难)；呼吸困难；面神经无力；感觉缺失(本体感受)；血压大幅度变化； 直立性低血压；和心率失常。狼疮是慢性自身免疫性结缔组织病，影响身体的任何部位，引起炎症和组织损伤。 狼疮最常损害心脏、关节、皮肤、肺、血管、肝脏、肾脏和神经系统。研究显示，在狼疮肾炎患者肾脏中活跃合成 IL-6 和 TNF-α (Herrera-Esparza, R.等，Lupus. 7 (3) 154-158，1998)。 另外的研究报道，在狼疮肾炎动物模型中TNF-α和IL-I β的表达提高了(BoswellJ.等， J. Immunol. 141 (9) :3050_3054，1988)。狼疮症状包括但不限于疲劳、发热、增重或减重、 关节疼痛、僵硬、肿胀、面颊疹、皮肤损伤、嘴疼、脱发、呼吸急促、胸痛、目涩和雷诺氏现象 (Raynaud，s phenomenon) 0多发性硬化(MS)是影响脑和脊髓中的有髓神经元的自身免疫性疾病。MS因损伤了髓鞘而引起；当这种遮盖物被损伤后神经冲动减慢或停止。研究报道在MS病例中TNF-a 表达增加了(Cannella，D.等，Ann. Neurol. 37(4) :424_435，2004)，在 MS 患者病灶中 IL-6 表达增加了 (Lock, C.等，Nature Medicine, 8 =500-508,2002) 多发性硬化的症状包括但不限于平衡缺失、肌肉痉挛、在任何区域麻木或异常感觉、移动手臂或腿及步行有问题、一条或多条手臂或腿震颤、便秘、大便渗漏、失禁、复视觉、眼睛难受、面部疼痛和听力缺失。银屑病是影响皮肤和关节的慢性非传染性的自身免疫性疾病。其通常引起红色鳞状斑出现在皮肤上。这些银屑病斑是发炎和产生过多皮肤的部位。皮肤在这些部位快速聚积，呈现银白色外观。斑可影响任何区域，包括肘、膝、头皮和生殖器。研究报道银屑病患者中有高水平的 TNF-α、IL-I β 和 IL-6 (Mizutani，H.等，J. Dermatol. Sci, 14(2) 145-153. 1997)。硬皮病是分布广泛的结缔组织病，其涉及皮肤、血管、肌肉和内部器官变化。研究报道在硬皮病患者血清中比对照血清中更经常检测到IL-6，并在两类患者组中检测到同样的TNF-α水平，而从任一组中都未检测出IL-I β (Needleman, B. W.等，Arthritis Rheum. 35(1) :67_72，1992)。皮肤症状包括但不限于热烫、因响应热和冷手指和脚趾发蓝或发红(雷诺氏现象)、掉头发、皮肤变硬、皮肤异常地发黑或发白、皮肤变厚和手及前臂发光、指尖或脚趾溃疡。骨和肌肉症状包括但不限于关节疼痛、脚麻木和疼痛、手指和关节疼痛、僵硬和肿胀、手腕疼痛。另外的症状包括但不限于便秘、腹泻、干咳、哮鸣和吞咽困难。斯耶格伦病(米库利奇病、干燥综合征)是自身免疫性疾病，其中免疫细胞攻击并破坏产生眼泪及唾液的外分泌腺。研究显示斯耶格伦病患者和正常健康对照者之间的 IL-I β、IL-6 和 TNF-α 水平显著不同(Szodoray，P.等，Scand. J, Immunol, 59 (6) 592-599)。斯耶格伦病的症状包括但不限于口干、目涩、皮肤干燥、鼻干燥和阴道干燥。肾小球肾炎肾小球肾炎(血管球性肾炎，GN)是特征为肾脏小血管(肾小球)炎 症的肾病。研究报道炎性细胞因子IL-I和TNF-α每一种都在肾小球肾炎的免疫/炎性过程中起作用， 封阻它们的作用会减轻疾病(Atkins, R. C. .Nephrology. 7 (si) :S2_S6，2007) Johnson,RJ. , Nephron. 73 (4) =506-514,1996) 0另外的研究报道，IL-6亦在肾小球肾炎中起作用 (Takemura,T.等，Virchows Archiv. 424(5) :459_464，1"4)。肾小球肾炎的症状包括但不限于水肿、高血压和尿中存在红细胞。泌尿系(urologic)慢性骨盆疼痛 泌尿系慢性骨盆疼痛综合征是指与以下有关的疼痛综合征膀胱(即间质性膀胱炎(IC)、疼痛性膀胱综合征(PBS))和前列腺(慢性前列腺炎(CP)、慢性骨盆疼痛综合征(CPPS))。慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)特征为持续3个月以上的骨盆或会阴疼痛而无尿道感染迹象。研究报道，具有炎性和非炎性CPPS组与对照组相比，IL-I β、TNF-α 和 IL-6 水平显著提高(Orhan, I.等，Int. J. Urol. 8(9) :495_9，2001 ； Alexander, R. B.等，Urology. 52 (5) 744-749,1998 Jang, Τ. L.和 Schaeffer, A. J.，World J. Urol. 21 (2) :95-99，2003)。这些综合征的症状可阴晴不定。疼痛可介于温和不适到使人虚弱的范围，并可从背和直肠辐射，这使得起坐困难。排尿困难(难以排尿或排尿疼痛)、关节痛(关节疼痛)、肌痛(肌肉疼痛)、不明疲劳、腹痛、阴茎持续性灼疼和频繁性都可存在。 频繁排尿及增加紧迫感可提示间质性膀胱炎(炎症集中于膀胱而不是前列腺)。射精可能疼痛，因为在精液射出过程中前列腺收缩，但神经介导和肌肉介导的射精后疼痛更常见。某些患者报告性欲低下、性功能不全和勃起困难。射精后疼痛是区分CP/CPPS和良性前列腺增生(BPH)男人或正常男人的极为特异性的自诉。炎性肠病(IBD)术语“炎性肠病(IBD) ”是指大肠和小肠的炎性病况群。IBD包括克罗恩氏病 (Crohn’ s disease,⑶)和溃疡性结肠炎(UC)。其它形式的IBD包括胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、改道性结肠炎、贝切特综合征、感染性结肠炎和不明结肠炎。 很多这些病症可呈现以下症状腹痛、呕吐、腹泻、便血(大便中鲜红色血液)、体重减轻和诸如关节炎、坏疽性脓皮症和原发性硬化性胆管炎等各种有关的自诉或疾病。通常通过用病理损伤活检的结肠镜检查来诊断。研究报道，细胞因子例如IL-6、IL-l*TNF_a在调节肠免疫系统中起中心作用，在IBD中很多促炎性和抗炎性细胞因子的黏液浓度及全身浓度提高(Rogler, G.和 Andus，T. World J. Surg. 22 (4) :382_9，1998)。研究亦显示，克罗恩氏病患者中TNF-α、IL-I β和IL_6水平高，及活检培养物上清液中IL-I β和IL-6的浓度， 与由内窥镜检查及组织学分级二者测量的组织参与程度正相关(Reimimd，J.等，Gut, 39 684-689，1996)。盆腔炎(PID)盆腔炎(PID)是指雌性子宫、输卵管和/或卵巢炎症，当其发展到瘢痕形成时与附近组织及器官粘连。PID可导致组织坏死和脓肿形成。研究报道，在用抗生素治疗前，PID 患者中的IL-I β ,IL-6和TNF-α显著提高(与治疗后相比)，这些细胞因子可在PID发病机制中起重要作用(Lee, S. Α.等，Clin. Chem. Lab，Med. 46 (7) :997_1003，2008)。再灌注损伤再灌注损伤是指当缺血一段时间后血液供应回到组织时引起的组织损伤。缺乏来自血液的氧和营养产生这样的状况，其中恢复血液循环通过氧化应激的诱导产生炎症和氧化性损伤而不是恢复正常功能。研究报道，IL-6通过减量调节TNF-α防止肝脏热缺血/再灌注损伤(Camargo，C.等，H印atology. 26 (6) 1513-1520，2003)。症状包括但不限于高白细胞水平、细胞凋亡和自由基聚积。类风湿性关节炎(RA)类风湿性 关节炎(RA)是慢性全身性自身免疫性疾病，其最常引起关节及腱鞘炎症和组织损伤(关节炎)连同贫血。RA亦可在肺、心包膜、胸膜和眼睛巩膜还有接节性病灶中产生弥漫性炎症，最常见于皮肤下的皮下组织。RA可为使丧失能力并疼痛的病况，其可导致基本失去功能和移动。研究报道，在RA和幼年型关节炎患者的血清中IL-Ιβ、IL-6和 TNF-α 水平升高(Ziolkowska，Μ.等，J. Immunol. 164 :2832_2838，2000)。RA 症状可在以下地方显现关节(肿胀、疼痛、压痛、局部热感、僵硬和移动受限)；皮肤(类风湿性结节)； 肺(纤维化、卡普兰综合征、胸腔积液)；肾脏(肾淀粉样变性)；心脏和血管(动脉粥样硬化、心肌梗塞、中风)；和眼睛(巩膜外层炎、干性角膜结膜炎)。脉管炎“脉管炎”是指特征为血管(动脉和静脉)炎性破坏的病症。研究报道TNF-α、IL_1 和IL-6为治疗全身性脉管炎的潜在生物学靶标(Levine，S. Μ.和Stone，J. H. Best Prac. Res. Clin. Rheumatol. 15 (2) =315-333, 2001)。脉管炎症状通常为全身性单器官或多器官功能障碍。这些症状可包括疲劳、衰弱、发热、关节痛、腹痛、高血压、肾机能不全和神经功能障碍。另外的症状可包括多数性单神经炎、可触知的紫癜(皮肤上的紫色斑)和肺-肾综合征。高敏感性脉管炎(HSV)是因对外来物质的免疫应答而起的继发性脉管炎。研究报道活动性HSV患者比健康对照组的血清IL-6和TNF-α显著较高(Nalbant，S.等，Rheumatol. Int. 22(6) :244-248，2002)。5.病症纤维化纤维化是器官或组织中因部分损伤或炎症或因干扰其血液供应而产生的过量的纤维性结缔组织的形成或发展。其可为导致瘢痕的正常愈合反应的结果，或其可为异常的反应过程。存在若干种纤维化类型，包括但不限于胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化 (injection fibrosis)、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化和肾原性系统性纤维化(η印hrogenic systemic fibrosis)。囊性纤维化(CF、muCOvidOSiS、粘液粘稠病(mucovisidosis))是遗传性的常染色体隐性病。其为美国最常见的致死性遗传病之一，影响约30，000名个体，在白种人群中最普遍，每3，300名新生儿中有1名。囊性纤维化涉及的基因(在1989年被鉴定)，编码称为囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)的蛋白。CFTR正常由遍及身体的外分泌上皮细胞表达，调节氯化物离子、重碳酸盐离子和谷胱甘肽进出细胞。在囊性纤维化患者中，CFTR基因的突变造成CFTR蛋白功能的改变或完全失去，导致外分泌分泌物的渗透性、pH和氧化还原性质缺失。在肺中，CF本身通过存在堵塞气道的厚粘液分泌物显现。在其它外分泌器官例如汗腺中，CF本身可不通过阻塞性表型显现，而是通过分泌物中异常的盐组成来显现(因此用临床汗液渗透性测定来检测CF患者)。囊性纤维化患者疾病和死亡的首要原因是进行性肺病。认为阻塞气道的CF黏液厚度由分泌物的同渗容摩异常性以及由存在大量源自炎性细胞亚类(称为嗜中性粒细胞)的DNA、肌动蛋白、蛋白酶和过氧化物酶造成。实际上，CF 肺病特征为对病毒及细菌病原体二者的早期极度活跃的嗜中性粒细胞介导的炎性反应。CF 肺的高炎性(hyperinflammatory)综合征具有若干基础，其中据报道促炎性趋化因子(主要是IL-8)和抗炎性细胞因子(主要是IL-10)之间的平衡起主要作用。参见Chmiel等， Clin Rev Allergy Immunol. 3(1) :5_27(2002)。研究报道，囊性纤维化患者的支气管肺泡灌洗液比健康对照支气管肺泡灌洗液中的TNF-α、IL-6和IL-I β水平高些(Bondf ield， T.L.等，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 152(1) :2111_2118，1995)。
注射性纤维化(IF)是肌内注射的并发症，通常发生在婴儿和儿童的四头肌、 三头肌和臀肌肌肉中，其中受试者不能完全弯曲受影响的肌肉。其通常无疼痛感，但不断发展。研究报道糖蛋白骨桥蛋白(OPN)在组织重建中起作用(Liaw，L.等，J.Clin. Invest. 101(7) :1469_1478，1998)，该促炎性中介物诱导人单核细胞中IL-I β增量调节， 并伴随提高 TNF-α 和 IL-6 产生(Naldini，Α·等，J. Immunol. 177 :4267_4270，2006 ；Weber, G. F.禾口 Cantor，H.Cytokine Growth Factor Reviews. 7(3) :241 248，1996)。心内膜心肌病(高嗜酸性粒细胞综合征(HS))是特征为血液中持续高嗜酸性粒细胞计数(彡1500个嗜酸性粒细胞/mm3)的疾病过程。HS同时影响很多器官。研究报道 IL-Ιβ、IL_6和TNF-α在病毒诱导的心肌炎患者中以高水平表达(Satoh，M.等，Virchows Archiv. 427(5) =503-509,1996)。症状可包括心肌病、皮肤损伤、血栓栓塞性疾病、肺病、神经病、肝脾肿大(肝脏和脾脏同时增大)和心室大小减小。治疗可包括用皮质类固醇降低嗜酸性粒细胞水平。特发性肺纤维化(IPF、隐原性纤维化肺泡炎)是不明原因的慢性进行性间质性肺病。其与通常的间质性肺炎的组织学模式有关，特征可为纤维化组织在肺间质组织中异常并过量沉积且与炎症的相关性极小。研究报道在特发性肺纤维化(IPF)患者中，TNF-α和 IL-6 释放显著增加(Zhang, Y.等，J. Immunol. 150 (9) :4188_4196，1993)，这归因于 IL-1 β 的表达水平(KoIb，M.等，J. Clin. Invest. 107(12) 1529-1536，2001)。症状包括呼吸困难， 但亦包括干咳、杵状变(手指畸形)和爆裂音(吸入期间肺中的爆裂音)。纵隔纤维化(MF)特征为集中于淋巴结的扩散性的钙化纤维化，其封阻大血管和气道。MF为组织胞浆菌病的晚期并发症。纤维化鼠模型中的研究报告IL-I β和TNF-α显著提高(Ebrahimi，B.等，Am. J. Pathol. 158 :2117_2125，2001)。骨髓纤维化(髓样化生、慢性特发性骨髓纤维化、原发性骨髓纤维化)是其中骨髓经历纤维化的骨髓病。骨髓纤维化导致进行性骨髓功能衰竭。平均存活期为5年，死亡原因包括感染、出血、器官衰竭、门静脉高压和白血病转化。业已报道TNF-α和IL-6水平在病毒诱导的骨髓纤维化动物模型中升高(Bousse-Kerdiles，Μ.等，Ann. Hemato 1. 78 =434-444, 1999)。腹膜后纤维化(奥蒙德(Ormond)氏病)是特征为腹膜后腔纤维性组织增殖的疾病。腹膜后腔是含有肾脏、主动脉、肾道和其它结构的体腔。业已报道11^1、11^-6和1顺-(1 在腹膜后纤维化发病机制中起关键作用(Demko, T.等，J.Am. Soc. Nephrol. 8 =684-688, 1997)。腹膜后纤维化症状可包括但不限于下背疼痛、肾衰竭、高血压和深部静脉血栓形成。肾原性系统性纤维化(NSF、肾原性纤维化皮肤病)涉及皮肤、关节、眼睛和内部器官的纤维化。NSF可与接触钆有关。患者形成大面积的硬化皮肤且有纤维化结节和斑块。 亦可出现伴随限制运动范围的屈曲挛缩。NSF显示真皮成纤维细胞和树突细胞增殖、胶原束增厚、弹性纤维增加和粘蛋白沉积。某些报道提示，促炎性状态提供引起肾原性系统性纤维化的诱病因素(Saxena, S.等，Int. Urol. N印hrol. 40 :715_724，2008)，在肾原性系统性纤维化动物模型中 TNF-α 水平提高了 (Steger-Hartmann, Τ.等，Exper. Tox. Pathol. 61 (6) 537-552，2009)。 6.病症内皮细胞功能障碍内皮细胞功能障碍(内皮功能障碍)指由内皮执行的正常生化过程的生理学功能障碍，所述正常生化过程为例如介导凝血、血小板粘附、免疫功能和调控血管内和血管外空间的体积及电解质含量。内皮功能障碍可因疾病过程(例如感染性休克、高血压、血胆固醇过多和糖尿病)以及因环境因子(例如来自吸烟的烟草产物)而引起。研究报道在诸如例如IL-6、IL_li3和TNF-α等细胞因子影响下，可损害内皮依赖性扩张，内皮可丧失其响应循环激素或自身有效物质的能力。该作用可有利于倾向血管痉挛、血栓形成或动脉粥样化形成(Vila, Ε.和 Salaices，M. Am. J，Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 :H1016_H1021， 2005)。另外，研究表明，由IL-Ιβ和TNF-α调节的IL-6的过表达在内皮细胞功能障碍中起重要作用(Kornman, K.等，J. Perio. Res. 34 (7) 353-357 (2006) ；Libby, P.等， Circulation. 86(6 Supp1) :III47_52(1992))。内皮功能障碍特征可为动脉和微动脉不能因响应适宜的刺激物而完全扩张。例如，功能障碍的内皮细胞(具有低血管舒张)不能以与健康内皮细胞同样的程度产生一氧化氮(NO)。该差异可通过多种方法来检测，所述方法包括乙酰胆碱的离子电渗疗法、动脉内给予各种血管活性物质、局部加热皮肤及通过给血压表套袖加压到高压来暂时阻塞动脉。 亦可在冠状动脉本身中进行检测，但除非有冠状动脉内插管的临床理由，否则通常不实施这种侵袭性操作。认为这些技术刺激内皮释放N0，NO扩散到周围血管平滑肌引起血管舒张。允许递送生物学活性重组蛋白和肽治疗剂的系统一直是众多研究的主题。用于局部递送治疗剂的系统使得这类物质的生物学作用达到更大的功效。体内递送重组蛋白到期需靶标一直是艰巨的任务。尽管在蛋白质转导肽领域有进展，但经由腺伴随病毒、腺病毒、慢病毒、疱疹病毒载体和质粒表达载体递送编码蛋白质的基因的典型方法，仍然是蛋白质表达的优先选择。由于病毒载体递送特异性基因到许可细胞的天然能力，认为病毒载体介导的基因表达是在分裂活跃的细胞类型或分裂后封阻的细胞类型中从头表达功能蛋白的最有效和可靠的方法。但是，总是需要大剂量的病毒载体来达到目的蛋白的治疗表达水平。此外，病毒载体可与宿主染色质物质整合。这些性质对宿主遗传系统施加长期作用，因此，安全性仍是其最终临床应用的严重忧虑。更安全的备选方法是外源地产生重组蛋白，然后将其系统或通过局部注射递送到靶标器官。然而，将重组蛋白递送到细胞或组织及其生物利用度需要进一步改善。尽管若干研究提示PTD在药物发现及将大至120kDa的蛋白质转导到不同细胞中的潜力，但关于 PTD介导的蛋白质转导的效力问题仍然未解决。甚至某些研究业已显示PTD介导的融合蛋白在体外/体内转导失败以及无诱导免疫应答的能力。此外，某些研究显示，PTD融合蛋白或其它非分泌蛋白的细胞内表达可能不像重组蛋白一样实现同样的生物分布，并且难以让 PTD通过血脑屏障进入。本发明提供治疗抑制剂肽用于抑制激酶，提供包含治疗结构域和蛋白质转导结构域的肽类作为激酶活性抑制剂的用途，和PTD作为多种病症治疗剂的用途。简述 本发明提供含有治疗量的抑制至少一种激酶的治疗抑制剂肽的激酶抑制组合物， 用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法，和用所述激酶抑制组合物治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法。一方面，本发明提供用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的激酶抑制组合物，所述组合物包含(a)治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶，其中所述治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中第一结构域包含蛋白转导结构域并位于第二结构域的近侧，其中第二结构域包含治疗结构域并位于第一结构域的近侧；和(b)药学上可接受的载体，其中所述组合物直接或间接降低至少一种炎性细胞因子的表达。按照一个实施方案，治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11 ]具有基本同一性的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域与氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的转导结构域与氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的转导结构域与氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA [SEQ ID NO 12]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44] 具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体,所述变体与SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12、SEQ ID N0:13禾口 SEQ ID NO :15中的至少一种有至少90%同一性，并抑制TNF-α分泌。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体，所述变体与 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO 15 中的至少一种有至少90%同一性，并抑制IL-Ιβ分泌。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体，所述变体与 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO :12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID N0:15 中的至少一种有至少90%同一性，并抑制IL-6分泌。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 2。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。根据另一实施方案， 激酶为Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶。根据另一实施方案，其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症为选自以下的至少一种病症哮喘、强直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴综合征、狼疮、银屑病、硬皮病、斯耶格伦病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎、高敏感性脉管炎、内毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病(localized inflammatory disease)、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、缺血、内膜增生、 狭窄、再狭窄、平滑肌瘤、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛(Prinzmetal's angina)、 心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、雷诺病(Raynaud’ s disease)、溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、血管病变、充血性心力衰竭、心肌顿挫、舒张期功能障碍、神经胶质增生、慢性阻塞性肺病、骨质减少、变性关节炎、脓毒病、肝硬化、间质纤维化、结肠炎、阑尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、耳炎、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、心代谢综合征(cardiometabolic syndrome)、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾原性系统性纤维化、乳腺癌、前列腺癌和内皮细胞功能障碍。根据另一实施方案，所述至少一种炎性细胞因子为IL-6、TNFa和IL_1 β中的至少一种。根据另一实施方案，将所述组合物置于生物医学装置的上面或里面。
另一方面，本发明提供用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法，所述方法包括以下步骤(a)提供激酶抑制组合物，其中所述激酶抑制组合物包含(i)治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶， 其中治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中第一结构域包含位于第二结构域的近侧的蛋白质转导结构域，其中第二结构域包含位于第一结构域的近侧的治疗结构域；和 ( )药学上可接受的载体；(b)将所述激酶抑制组合物给予有需要的受试者，从而抑制至少一种激酶；和(c)降低至少一种炎性细胞因子的表达，从而治疗所述病症。按照一个实施方案，治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列YARRAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID N0:11]具有基本同一性的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域与氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO :43]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。 根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体,所述变体与SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13禾口 SEQ ID NO :15中的至少一种有至少90%同一性，并抑制TNF-α分泌。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体，所述变体与 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO 15 中的至少一种有至少90%同一性，并抑制IL-Ιβ分泌。根据另一实施方案，多肽包含至少一种变体，所述变体与 SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID N0:15 中的至少一种有至少90%同一性，并抑制IL-6分泌。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶 2。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。根据另一实施方案， 激酶为Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶。根据另一实施方案，其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症为选自以下的至少一种病症哮喘、强直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴综合征、狼疮、银屑病、硬皮病、斯耶格伦病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病、盆腔炎、 再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎、高敏感性脉管炎、内毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、缺血、内膜增生、狭窄、再狭窄、平滑肌瘤、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛、心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、雷诺病、溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、血管病变、充血性心力衰
23竭、心肌顿挫、舒张期功能障碍、神经胶质增生、慢性阻塞性肺病、骨质减少、变性关节炎、脓毒病、肝硬化、间质纤维化、结肠炎、目尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、耳炎、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、心代谢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾原性系统性纤维化、乳腺癌、前列腺癌和内皮细胞功能障碍。根据另一实施方案，所述至少一种炎性细胞因子为IL-6、TNF α和IL_1 β中的至少一种。根据另一实施方案，通过植入生物医学装置进行给予步骤(a)，其中将所述组合物置于所述装置的上面或里面。根据另一实施方案，给予步骤(a)为胃肠外给予。附图简述

图1显示活性(相对于对照的％ )与抑制剂肽浓度(PM)的关系曲线图。图2显示活性(相对于对照的％)与抑制剂肽浓度(PM)的关系曲线图。图3显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图。RFU/s = 每秒相对荧光单位。图4显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图。RFU/s = 每秒相对荧光单位。图5显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图。RFU/s = 每秒相对荧光单位。图6显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图。RFU/s = 每秒相对荧光单位。图7显示IL-6的平均浓度(pg/ml/105个细胞)与时间的关系曲线图。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID N0:11]。"f =显著高于 Ing/mL 的 IL-1 β 处理的样品。* =显著低于11^/!^的11^-10处理的样品。误差条代表三个样品间的标准偏差。图8显示IL-6的平均浓度(pg/ml//105个细胞)与时间的关系曲线图。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] ；FAK = FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]。*=显著低于Ing/mL的TNF-α处理的样品。误差条代表三个样品间的标准偏差。图9显示IL-6的平均浓度(pg/ml/105个细胞)与时间的关系曲线图。YARA = YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] ； FAK = FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]。*=显著低于lOng/mL的TNF-α处理的样品。误差条代表三个样品间的标准偏差。图10显示来自每一处理组的平均IL-I β浓度(pg/ml)的图⑴ImM MK2i (治疗抑制剂肽 YARAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO :11])及 TNF-α (5ng/ml) ； (ii)3mM MK2i 及 TNF-α (5ng/ml) ； (iii) ImM MK2i R TNF-α (lOng/ml)；和(iv)3mM MK2i R TNF-α (lOng/ ml) ο图11显示来自每一处理组的平均IL-6浓度(pg/ml)的图(i)阴性对照(只有培养基)；(ii) TNF-α (5ng/ml) ； (iii) TNF-α (10ng/ml) ； (iv) TNF-α (5ng/l)和 MK2i (ImM 治疗抑制剂肽 YARAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO :11]) ； (v) TNF- α (10ng/ml)和 MK2i (ImM) ； (vi)TNF-a (5ng/ml)禾口 MK2i (3mM)；禾口 (vii)TNF-a (lOng/ml)禾口 MK2i (3mM)。详述本发明提供治疗性激酶抑制组合物和可用于抑制促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶的方法。
术语汇编本文所用氨基酸缩写为常规使用的缩写A = Ala =丙氨酸；R = Arg =精氨酸；N =Asn =天冬酰胺；D = Asp =天冬氨酸；C = Cys =半胱氨酸；Q = Gln =谷氨酰胺；E = Glu =谷氨酸；G = Gly =甘氨酸；H = His =组氨酸；I = lie =异亮氨酸；L = Leu =亮氨酸；K = Lys =赖氨酸；M = Met =甲硫氨酸；F = Phe =苯丙氨酸；P = Pro =脯氨酸；S =Ser =丝氨酸；T = Thr =苏氨酸；W = Trp =色氨酸；Y = Tyr =酪氨酸；V = Val =缬氨酸。氨基酸可为L-或D-氨基酸。氨基酸可用合成氨基酸置换，如此改变是为了延长肽的半衰期或提高肽的效价或增加肽的生物利用度。本文所用术语“给予”是指配药、供给、施用、给予、分配或投递。术语“给药”或“给予”可互换使用，包括体内给予以及直接给予离体组织。组合物通常可呈含有所需常规无毒药学上可接受的载体、佐剂和溶媒的剂量单位制剂，经口、含服、胃肠外、局部、通过吸入或吹入(即通过嘴或通过鼻)或直肠来全身给予，其；或可通过例如但不限于注射、植入、移植、局部施用或胃肠外等手段局部给予。本文所用术语“胃肠外”是指通过注射引入身体内 (即注射给予)，包括例如皮下(即在皮肤下注射)、肌内(即注射到肌肉中)、静脉内(即注射到静脉中)、鞘内(即注射到脊髓周围空间或大脑的蛛网膜下)、胸骨内注射或输注技术。胃肠外给予组合物用针(例如外科用针)来递送。本文所用术语“外科用针”是指任何适于递送流体(即能够流动)组合物到所选择的解剖结构的针。可用合适分散剂或湿润剂和助悬剂按照已知技术调配可注射制剂，例如无菌注射用水性或油性混悬剂。可进行另外的给予，例如静脉内、经心包、经口、经由植入、跨粘膜、透皮、肌内、皮下、腹膜内、鞘内、淋巴管内、病灶内(intralesionally)或硬脑外给予。可例如实行一次、 多次和/或经一个或多个延长期给予。本文所用术语“局部给予”和“局部施用”可互换使用，是指递送肽、核酸或包含肽或核酸的载体到组织或细胞的一个或多个表面，包括上皮表局部给予与透皮给予相比，通常提供局部而不是全身性作用。除非另外指出或暗示，否则本文所用术语“局部给予”和“透皮给予”可互换使用。本文所用术语“缔合”及其不同语法形式，是指直接、间接、主动、被动、惰性、非惰性、完全或不完全地连接、关联或结合。本文所用术语“生物相容性”是指基于临床风险/利益评估对对活组织不引起临床相关组织刺激、损伤、毒性反应或免疫学反应。本文所用术语“可生物降解的”，是指将通过简单化学过程、通过身体酶的作用或通过人体内其它类似机制随时间主动或被动降解的材料。本文所用术语“载体”是指天然或人工合成的有机或无机成分，其与活性成分结合有利于应用，其对有机体不产生显著刺激，且不抵消本发明组合物的生物学活性和性质。载体应该纯度足够高且毒性足够低，以使其适于给予待治疗的受试者。载体可为惰性，或其可具有药学益处、美容益处或二者都有。本文所用术语“病况”是指各种健康状态，意指包括由任何潜在机理或紊乱、损伤以及健康组织和器官的促进引起的病症或疾病。本文所用术语“使…接触”是指带入或进入接触中。本文所用术语“接触”是指触及或者紧靠或局部接近的状态或情况。可通过技术人员已知的任何给予手段来进行使组合物与靶标目的物(例如但不限于器官、组织、细胞或肿瘤)接触。本文所用术语“可控调节元件”是指能够影响核酸或其肽或蛋白质产物表达的核酸序列。可控调节元件可可操作地与本发明核酸、肽或蛋白质连接。例如但不限于控制序列的可控调节元件，不必与它们控制其表达的核酸、肽或蛋白质邻接，只要起指导其表达的作用即可。因此，例如，启动子序列和本发明核酸之间可存在间插的非翻译但转录的序列， 仍然可认为该启动子序列与编码序列“可操作地连接”。其它所述控制序列包括但不限于聚腺苷酸化信号、终止信号和核糖体结合位点。术语“控释”意指其中从制剂释放药物的方式及分布谱受控的含有任何药物的制剂。这是指即释制剂以及非即释制剂，非即释制剂包括但不限于缓释制剂和延释制剂。本文所用术语“细胞因子”是指由细胞分泌的可溶性小蛋白物质，其对其它细胞具有多种作用。细胞因子介导很多重要生理学功能，包括生长、发育、伤口愈合和免疫应答。它们通过与位于细胞膜上的其细胞特异性受体结合发挥作用，这使得在该细胞中开始独特的信号转导级联，最终将导致靶标细胞的生化及表型变化。细胞因子通常在局部起作用。它们包括1型细胞因子，其包括多种白介素以及几种造血生长因子；II型细胞因子，包括干扰素和白介素-10 ；肿瘤坏死因子(“TNF”)-相关分子，包括TNF α和淋巴毒素；免疫球蛋白超家族成员，包括白介素1( “IL-1”)；和趋化因子，在多种免疫和炎性功能中起关键作用的分子家族。同样的细胞因子可能视细胞状态而定对细胞具有不同作用。细胞因子通常调节其它细胞因子的表达并引发级联。本文所用术语“延释”按其常规意义提及药物制剂，其中在给予制剂及药物从制剂释放之间有时间延迟。“延释”可涉及或在涉及经延长时期内逐渐释放药物，因此可以是或不是“缓释”。本文所用术语“疾病”或”病症”通常是指损害健康或异常的功能状态。与本发明有关的病症可包括但不限于炎性病症、纤维化、内毒素休克、胰腺炎、哮喘、局限性炎性疾病、动脉粥样硬化性心血管疾病、阿尔茨海默氏病、肿瘤病、神经缺血、类风湿性关节炎、 克罗恩氏病、炎性肠病、内膜增生、狭窄、再狭窄、动脉粥样硬化、平滑肌细胞肿瘤和转移、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛、缺血、心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、未足月产、先兆子痫、子痫、雷诺病或现象、溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、与平滑肌痉挛有关的缺血性肌肉损伤、血管病变、缓慢性心律失常 (bradyarrythmia)、充血性心力衰竭、心肌顿挫、肺动脉高压、舒张期功能障碍、神经胶质增生(意指星形胶质细胞增殖，其可包括中枢神经系统损伤区的细胞外基质(ECM)沉积)、慢性阻塞性肺病(意指特征为气流阻塞或受限的呼吸道病；包括但不限于慢性支气管炎和肺气肿)、骨质减少、内皮功能障碍、炎症、变性关节炎、强直性脊柱炎、斯耶格伦病、格-巴病、 传染病、脓毒病、内毒素休克、银屑病、放射性小肠炎、硬皮病、肝硬化、间质纤维化、结肠炎、 阑尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、胰腺炎、耳炎、再灌注损伤、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、狼疮、变态反应、心代谢病、肥胖症、II型糖尿病、I型糖尿病和NASH/肝硬化。本文所用术语“结构域”是指或多或少独立折叠形成球状紧密结构的蛋白质结构单位。本文所用术语“药物”是指用于预防、诊断、缓解、治疗或治愈疾病的治疗剂或除食物外的任何物质。
术语“杂交”是指两个单链核酸分子通过碱基配对彼此结合。核苷酸在正常条件下结合其互补序列，因此两条完全互补的链容易彼此结合(或“退火”)。然而，由于核苷酸的不同分子几何学，两条链之间的单一不一致性将使它们之间的结合在能量上更为不利。可通过定量测定两条链退火的速率来测量碱基不相容性的作用，这可提供关于两条退火的链之间的碱基序列相似性的信息。本文所用术语“水凝胶”是指导致产生固态、半固态、假塑性或塑料结构的物质，其含有必需水性组分以产生胶状或果冻样团块。水凝胶吸收并保留大量H2O,这最终在水性环境存在下达到平衡含量。本文所用术语“亲水的”是指对极性物质例如水具有亲和力的材料或物质。本文所用术语“身体内”、“孔隙体积”、“切除口袋(resection pocket)”、“凹陷 (excavation)”、“注射位点”、“沉积位点”或“植入位点”意在包括身体所有组织而无限制； 作为其非限制性实例，可指因注射、手术切除、肿瘤或组织除去、组织损伤、脓肿形成而在其中形成的空间，或指通过对疾病或病理的临床评估行为、治疗或生理学反应而形成的任何其它相似空腔、空间或袋。本文所用术语“抑制”用于指降低过程的量或速率、完全停止过程或减少、限制或阻断其作用或功能。当与参考物质相比时，抑制可包括将量、速率或作用功能或过程降低或减少至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少45%、 至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%，其中所述参考物质为不被抑制的物质。本文所用术语“损伤”是指由外在因素或外来力(为物理伤害或化学的)引起的身体结构或功能的损害或伤害。术语“分离的”是指以下物质(例如核酸、肽或蛋白质)，其(1)大体上或基本上不含通常在其天然存在环境中存在的与其伴随或互相作用的组分。术语“大体上或基本上不含”用于指以下物质，其至少80%不含通常在其天然存在环境中存在的与其伴随或互相作用的组分。分离的物质任选包含在其天然环境中不存在的物质；或( 若物质在其天然环境中，则所述物质通过有意的人为介入被合成地(非天然地)改变成组合物和/或被置于细胞中的某个部位(例如基因组或亚细胞器)，该细胞对该环境中存在的物质而言是非天然的。可对处于其天然状态的物质实施改变，或从其天然状态除去，以产生人工合成物质。例如，通过在其来源的细胞内实施人为介入，如果天然存在的核酸被改变了，或如果其从被改变的DNA转录，则其成为分离的核酸。参见例如，Compounds and Methods for Site Directed Mutagenesis in Eukaryotic Cells (用于在真核细胞中定点诱变的化合物禾口方法)，Kmiec,美国专利号 5，565，350 ;In Vivo Homologous Sequence Targeting in Eukaryotic Cells (真核细胞中体内同源序列靶标)；Zarling等，PCT/US93/03868。同样地，天然存在的核酸(例如启动子)，如果通过非天然存在的手段被引入对该核酸非天然的基因组的基因座，也变成分离的。本文定义的“分离的”核酸亦被称为“异源”核酸。本文所用术语“激酶”是指将磷酸基团从高能供体分子转移到特异性靶标分子或底物的酶类型。高能供体类可包括但不限于ATP。本文所用术语“激酶活性”是指激酶介导的激酶底物的磷酸化作用。本文所用术语“激酶底物”是指可被激酶磷酸化的底物。
本文所用术语“不稳定的”以其各种语法形式指易于改变或很可能改变。不稳定的化合物为能够改变状态或成为无活性的化合物。本文所用术语“亲脂性”是指与极性或水性环境相比，优先亲和非极性环境或对非极性环境具有亲和力。本文所用术语“长期释放”意指将植入物构建或配置以递送治疗水平的活性成分达至少7天或约30-约60天。本文所用术语“哺乳动物细胞”是指源自哺乳动物纲动物的细胞。本文所用哺乳动物细胞可包括正常、异常和转化细胞。在本发明中使用的哺乳动物细胞实例包括但不限于 神经细胞、表皮细胞、肌肉细胞、血液细胞、免疫细胞、干细胞、骨细胞、内皮细胞和母细胞。本文所用术语“调节”意指调节、改变、使适合或调整到某种量度或比例。术语“正常”是指大组别的标准、模型、中值或平均值。术语“正常健康受试者”是指不具有炎性病症症状或其它迹象的受试者。术语“核酸”是指呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，除非另外限制，否则包括具有天然核苷酸的基本特性的已知类似物(例如肽核酸)，所述基本特性为其以与天然存在的核苷酸相似的方式与单链核酸杂交。术语“核苷酸”是指由杂环碱基、糖及一个或多个磷酸基团组成的化合物。在最常见的核苷酸中，碱基为嘌呤或嘧啶的衍生物，糖为戊糖脱氧核糖或核糖。核苷酸是核酸的单体，其中3个或更多个核苷酸键合在一起以形成核酸。核苷酸是RNA、DNA和若干辅因子的结构单位，所述辅因子包括但不限于CoA、FAD、DMN、NAD和NADP。嘌呤包括腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)；嘧啶包括胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。措词“可操作地连接”是指一个或多个第一序列或结构域足够靠近一个或多个第二序列或结构域，以使所述一个或多个第一序列或结构域，可对所述一个或多个第二序列或结构域或在所述第二序列或结构域控制下的区域施加影响。本文所用术语“粒子”是指极小的组分(例如纳米粒、微粒子或在某些情况下大一点的粒子)，其可含有本文所述激酶抑制组合物的全部或部分。本文所用术语“肽”是指通过肽键连接的两个或更多个氨基酸。本文术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基聚合物。所述术语适用于其中一个或多个氨基酸残基为相应天然存在氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物。天然存在氨基酸的这类类似物的基本特性在于，当将其纳入到蛋白质中时，该蛋白质与完全由天然存在的氨基酸组成的同一蛋白质弓I出的抗体有特异性反应性。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”亦包括修饰，所述修饰包括但不限于糖基化、脂质连接、硫酸盐化、谷氨酸残基的Y-羧基化、羟基化和ADP-核糖基化。应该了解，如人们所熟知及如上所述，多肽可以不完全为线性。例如，多肽可因遍在蛋白化而有分支，其可通常因翻译后事件而为含或不含分支的环状，所述翻译后事件包括天然加工事件及天然不存在的人为操作带来的事件。亦可通过非翻译的天然加工及通过完全人工合成方法，来合成环状、分支及分支环状多肽。本文所用术语“肽模拟物”是指设计以模拟肽的小蛋白样链。肽模拟物通常是从已有的肽修饰产生，以便改变分子的性质。本文所用术语“药学上可接受的载体”是指适用于给予人或其它脊椎动物的一种或多种相容的固态或液态填充剂、稀释剂或包封物质。本文所用术语“聚合物”是指由较小的相同的分子(称为单体)连接在一起制备的不同化合物中的任一种。聚合物通常具有高分子量。分子连接在一起形成聚合物的过程称为“聚合”。术语“多核苷酸”是指脱氧核糖多核苷酸、核糖多核苷酸或其具有天然核糖核苷酸的基本特性的类似物，所述基本特性为它们在严格杂交条件下与基本上与天然存在核苷酸相同的核苷酸序列杂交，和/或可以翻译为与一种或多种天然存在的核苷酸相同的一种或多种氨基酸。多核苷酸可为天然或异源结构基因或调控基因的全长或亚序列。除非另外指出，否则该术语包括所提及的特定序列以及其互补序列。因此，具有因稳定性或其它原因而修饰的主链的DNA或RNA，为如本文术语所意指的“多核苷酸”。此外，包含罕有碱基(例如次黄嘌呤核苷)或经修饰的碱基(例如三苯甲基化碱基)的DNA或RNA (仅举出两个实例)， 为如本文所用术语的多核苷酸。应该理解，已对DNA和RNA进行大量修饰，所述修饰可用于本领域技术人员已知的多种有用目的。本文所采用的术语多核苷酸包括诸如化学修饰、酶修饰或代谢修饰的多核苷酸形式，以及病毒和细胞特有的DNA和RNA的化学形式，所述细胞尤其包括简单细胞和复杂细胞。本文所用术语“一级序列”是指氨基酸序列。本文所用术语“前药”意指呈无活性形式且在给予受试者后通过生物学转化转化成活性形式的肽或衍生物，。本文所用以下术语阐述两种或更多种核酸或多核苷酸之间的序列关系(a) “参考序列，，、(b) “比较窗”、(c) “序列同一性”、(d) “序列同一性百分比”和(e) “基本同一性”。
术语“参考序列，，是指用作序列比较的基础的序列。参考序列可为特定序列的子集或全部；例如，全长cDNA或基因序列的区段，或完全的cDNA或基因序列。术语“比较窗”是指多核苷酸序列的连续的特定区段，其中所述多核苷酸序列可与参考序列比较，其中比较窗中的多核苷酸序列部分与参考序列(不包含添加或缺失)相比， 可包含添加或缺失(即空位)用于两个序列的最佳比对。通常比较窗长度为至少20个连续核苷酸，任选可为至少30个连续核苷酸、至少40个连续核苷酸、至少50个连续核苷酸、 至少100个连续核苷酸长或更长。本领域技术人员应理解，为了避免由于在多核苷酸序列中包含空位而与参考序列高度相似，通常引入空位罚分，并从匹配数字中减去空位罚分。用于比较的序列比对方法在本领域众所周知。可通过以下方法进行用于比较的序列最佳比对Smith和Waterman的局部同源性算法，Adv. Appl. Math. 2 :482(1981)； Needlemar^Prnmsch 的同源性比对算法，J. Mol. Biol. 48 :443(1970) ；Pearson 和 Lipman 的相似性搜索方法，Proc. Natl. Acad. Sci,85 :2444(1988)；这些算法的计算机执行，包括但不限于PC/ 基因程序中的 CLUSTAL，Intelligenetics, Mountain View, Calif ；Wisconsin 遗传学软件包(Genetics Software Package)中的 GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA 和 TFASTA， Genetics Computer Group (GCG),575 Science Dr. , Madison, Wis. , USA ；由 Higgins 禾口 Sharp 恰当阐述的 CLUSTAL 程序，Gene 73:237-244(1988) ；Higgins 和 Sharp，CABIOS 5 151-153(1989) ；Corpet,等，Nucleic acids Research 16 10881-90(1988) ;Huang 等， Computer Applications in the Biosciences 8:155-65(1992)；禾口 Pearson 等，Methods in Molecular Biology 24:307-331(1994)。可用于数据库相似性搜寻的BLAST程序家族包括用于针对核苷酸数据库序列的核苷酸查询序列的BLASTN ；用于针对蛋白质数据库序列的核苷酸查询序列的BLASTX ；用于针对蛋白质数据库序列的蛋白质查询序列的BLASTP ； 用于针对核苷酸数据库序列的蛋白质查询序列的TBLASTN ；和用于针对核苷酸数据库序列的核苷酸查询序列的 TBLASTX。参见 Current Protocols in Molecular Biology，第 19 章， Ausubel 等编辑，Greene Publishing 禾口 Wiley-Interscience, New York(1995)。除非另外指出，否则本文提供的序列同一性/相似性值，是指用BLAST 2. 0程序组用默认参数获得的值。Altschul 等，Nucleic acids Res. 25 :3389-3402 (1997)。用于进行BLAST分析的软件可例如通过生物技术信息国家中心(National Center for Biotechnology-Information) (http://www. hcbi. nlm. nih. rov/)公开获得。该算法包括首先通过确定查询序列中长度W的短字串(word)来确定高得分序列对(HSP)，该短字串当与数据库序列中同样长度的字比对时，与某些正阀值分T匹配或符合。T被称为邻近字串分数阀值(Altschul等，见上述)。这些初始邻近字串命中作为用于启始搜寻以发现含有它们的更长HSP的种子。然后只要累积比对分数可以增加，字串命中以两个方向沿着每一个序列延伸。对于核苷酸序列，用参数M(匹配残基对的奖分；总是> 0)和N(不匹配残基的罚分；总是<0)计算累积分数。对于氨基酸序列，用打分矩阵来计算累积分数。当以下情况出现时，停止每一个方向的字串命中延伸累积比对分数从其最大获得值减少数量X ； 由于一个或多个负得分残基比对的累积所致，累积分数为0或低于0 ；或到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度及速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列) 用以下默认值字长(W)为11，期望值(E)为10，阀值为100，M = 5，N = -4，两条链都进行比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序用以下默认值和BL0SUM62打分矩阵字长(W)为3，期望值(E)为 10 (参见 Henikoff & Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915)。除计算序列同一性百分比外，BLAST算法亦进行两个序列间的相似性统计学分析 (参见例如 Karlin & Altschul，Proc. Natl. Acad. ki. USA 90:5873-5787(1993))。BLAST 算法提供的一种相似性量度是最小和概率(P(N))，其提供两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然出现匹配的可能性的指标。BLAST搜索假定蛋白质可作为随机序列建模。然而，很多真实蛋白质包含非随机序列区域，它们可以是同聚合物区域(homopolymeric tract)、短期重复或富含一个或多个氨基酸的区域。可在不相关的蛋白质之间比对所述低复杂度区域，虽然所述蛋白质的其它区域完全不相似。可采用许多低复杂度过滤程序来减少所述低复杂度比对。例如，可单独采用或联合采用SEG(Wooten和Federhen, Comput. Chem.，17 149-163(1993))和 XNU (Claverie 和 States, Comput. Chem. , 17 :191-201(1993))低复杂度过滤器ο本文在两个核酸或多肽序列情况下所用“序列同一性”或“同一性”，是指在特定比较窗内针对最大一致性进行比对时，这两个序列中相同的的残基。当在提及蛋白质时使用序列同一性百分比时，应认识到不同一的残基位置通常是因保守氨基酸取代而不同，即在这些位置氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的其它氨基酸残基取代， 因而并不改变分子的功能特性。当序列因保守取代而不同时，可向上调整序列同一性百分比以校正取代的保守特性。认为因所述保守取代而不同的序列具有“序列相似性”或“相似性”。用于进行这种调整的手段为本领域技术人员所熟知。通常这包括将保守取代记分为部分不匹配而不是完全不匹配，藉此提高序列同一性百分比。因此，例如当将相同氨基酸记为1分而非保守取代赋予0分时，将保守取代赋予0和1之间的分值。例如，按照例如在程序 PC/GENEantelligenetics，Mountain View, Calif.，USA)中执行的 Meyers 和 Miller (Computer Applic. Biol, Sci.，4 :11-17(1988))算法计算保守取代得分。本文所用“序列同一性百分比”，意指通过在比较窗内比较两个最佳比对的序列而测定的值，其中比较窗中的多核苷酸序列部分与参考序列(不包含添加或缺失)相比可包含添加或缺失(即空位)用于两个序列的最佳比对。百分比如下计算通过测定两个序列中出现相同的核酸碱基或氨基酸残基的位置数，以产生匹配位置数，用匹配位置数除以比较窗中的位置总数，再将该结果乘以100，获得序列同一性百分比。多核苷酸序列的术语“基本同一性”，意指用所述比对程序之一，使用标准参数与参考序列相比，多核苷酸包含具有至少70%序列同一性、至少80%序列同一性、至少90% 序列同一性和至少95%序列同一性的序列。技术人员应该认识到，可通过考虑密码子简并性、氨基酸相似性、读框定位等，适当调整这些值以确定由两个核苷酸序列编码的蛋白质的相应同一性。为了这些目的，氨基酸序列的基本同一性通常意指至少60%或至少70%、至少80%、至少90%或至少95%的序列同一性。核苷酸序列基本上同一的另一指标，是两个分子在严格条件下是否彼此杂交。然而，如果其编码的多肽基本上同一，则在严格条件下彼此不杂交的核酸仍然基本上同一。这可例如当用遗传密码所允许的最大密码子简并性形成核酸拷贝时发生。两个核酸序列基本上同一的一个指标是，第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽有免疫学交叉反应。在肽情况中的术语“基本同一性”，表示肽在特定比较窗内包含与参考序列具有至少70 %序列同一性、至少80 %、至少85 %、至少90 %或95 %序列同一性的序列。任选用 Needleman和Wunsch，J. Mol. Biol. 48 =443(1970)的同源性比对算法进行最佳比对。两个肽序列基本上同一的指标是，一条肽与针对第二肽产生的抗体有免疫学反应。因此，例如当两条肽仅仅因保守取代而不同时，一条肽基本上与第二肽同一。“基本上相似”的肽除了不同一的残基位置可因保守氨基酸变化而不同之外，共有如上所述序列。本文所用术语“蛋白质转导结构域”(亦称为“PTD”、“特洛伊肽”、“膜易位序列”、 “细胞渗透性蛋白质”、“CPP”)，是指通常能够渗入哺乳动物细胞细胞质膜的肽类。PTD通常为10-16个氨基酸长，并能够将多种类型和分子量的化合物转运跨过哺乳动物细胞。这些化合物包括但不限于效应器分子(例如蛋白质、DNA、缀合肽、寡核苷酸)和小粒子(例如脂质体)。当PTD在化学上与其它蛋白质连接或融合形成融合蛋白时，这些融合蛋白仍能够渗透细胞质膜并进入细胞。本文所用术语“减低”或“降低”是指在程度、强度、状态、状况或限度方面降低或减少。术语“调控序列”(亦称为“调节区”或“调节元件”)是指启动子、增强子或其它 DNA区段，其中调控蛋白例如转录因子优先结合在此以控制基因表达从而控制蛋白质表达。术语“受试者”或“个体或“患者”可互换使用，是指哺乳动物来源的动物物种成员， 包括但不限于小鼠、大鼠、猫、山羊、绵羊、马、仓鼠、雪貂、鸭嘴兽、猪、狗、豚鼠、兔和灵长类， 例如猴、猿或人。术语“缓释”(亦称为“延释”)在此以其常规含义使用，是指在延长时期内提供药物的逐渐释放的药物制剂，尽管不是必需但优选在延长时期内产生基本上恒定的血液药物水平。本文所用术语“症状”是指病症或疾病的征兆或迹象，尤其是当个体随正常功能、 感觉或外观改变而经历的征兆或迹象。本文所用术语“综合征”是指指示某些疾病或病况的症状模式。本文所用术语“治疗剂”是指提供治疗效果的药物、分子、核酸、蛋白质、代谢物、 肽、组合物或其它物质。本文所用术语“活性”是指负责预期治疗效果的本发明组合物的成分、组分或要素。本文中术语“治疗剂”和“活性剂”可互换使用。本文所用术语“治疗分量(therapeutic component) ”是指消除、减少或防止一定百分比群体中特定疾病表现的进展的治疗有效剂量(即给药剂量和给药频率)。常用的治疗分量的实例是ED50，其阐述在50%群体中对特定疾病表现治疗有效的特定用量中的剂量。本文所用术语“治疗结构域”是指与肽KALNRQLGVAA[SEQ ID NO :13]或其区段具有基本同一性的肽、肽区段或其变体或衍生物。治疗结构域通常不能渗透哺乳动物细胞的细胞质膜，当其与激酶接触时，抑制激酶使得该激酶的激酶活性降低。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约99%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约95%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约90%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约85%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约80%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约75%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约70%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约80%。 治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约75%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约70%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约65%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约60%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约55%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约50%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约45%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约40%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约35%。 治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约30%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约25%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约20%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约 15%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约10%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约9%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约8%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约7%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约6%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约5%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约4%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约3%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约2%。 治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约1%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约0. 1%。治疗结构域可抑制激酶使得该激酶活性为未被抑制的激酶的约0. 01%。本文所用术语“治疗抑制剂肽”是指由第一结构域和第二结构域构成的肽。第一结构域包含蛋白质转导结构域(PTD)，并位于第二结构域的近侧。位于第一结构域的近侧的第二结构域包含治疗结构域。本文所用术语“近侧”是指在空间、时间或次序方面极为靠近或贴近。本文所用术语“治疗效果”是指治疗结果，其是经判断为希望得到并有益的结果。 治疗效果可包括直接或间接阻止、减轻或消除疾病表明现。治疗效果亦可包括直接或间接阻止、减轻或消除疾病显现进展。术语本发明一种或多种活性剂的“治疗有效量”或“有效量”，为足以提供治疗效果的量。本发明可采用的活性剂的有效量通常介于约0. OOOOOlmg/ kg体重-约100mg/kg体重之间。然而，剂量水平基于多种因素而定，所述因素包括损伤类型、患者的年龄、体重、性别、医疗条件、病况的严重程度、给药途径及所采用的特定活性剂。 因此，剂量方案可在大范围变化，但可由医师用标准方法常规确定。存在将核酸转导及转染到细胞中的方法。本文所用术语“转导(transduction或 transduce) ”，是指穿过生物膜的过程。穿过生物膜可为从一个细胞到另一个细胞、从细胞外环境到细胞内环境或穿过细胞膜或核膜。可经历转导的物质包括但不限于蛋白质、融合蛋白、肽、多肽、氨基酸、病毒DNA和细菌DNA。本文所用术语“治疗”是指实现以下目标中一个或多个(a)减轻病症的严重程度；(b)限制待治疗病症特有的症状的发展；(c)限制待治疗病症特有的症状的恶化；(d) 限制先前有病症的患者的病症复发；和(e)限制先前有病症症状的患者的症状复发。本文所用术语“变体”及其不同语法形式，是指基本上与参考核苷酸序列或参考氨基酸序列分别具有同一性的核苷酸序列或氨基酸序列。序列差异可为序列或结构方面自然地改变或通过设计改变的结果。天然改变可在特定核酸序列的正常复制或自然复制过程期间产生。有计划的改变可针对特定目的而特别设计，并为特定目的将其引入到序列中。所述特定改变可在体外用多种诱变技术实施。所述特定产生的序列变体可被称为原始序列的 “突变体”或“衍生物”。技术人员同样可产生具有单个或多个氨基酸取代、缺失、添加或置换的多肽变体。 这些变体可尤其包括(a)其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸取代的变体；(b)其中添加一个或多个氨基酸的变体；(c)其中至少一个氨基酸包含取代基的变体； (d)其中靶标蛋白与另一肽或多肽(例如融合配偶体、蛋白质标记或其它化学部分)融合的变体，所述融合可赋予靶标蛋白有用的性质，例如抗体的表位。用于获得所述变体的技术包括遗传(阻制、缺失、突变等)、化学和酶技术，其为技术人员所知。本文所用术语“突变” 是指在有机体的基因或染色体内DNA序列的变化，导致产生在亲代类型中未发现的新的品质或性状；或是指通过改变编码基因的DNA的核苷酸序列或通过改变染色体的物理排列而在染色体中发生这类变化的过程。突变的三种机制包括取代(一个碱基对交换另一个碱基对)、添加(插入一个或多个碱基到序列中)和缺失(失去一个或多个碱基对)。本文所用术语“取代”是指DNA中的一个或多个碱基交换为另一个或多个碱基。 取代可为同义取代或非同义取代。本文所用“同义取代”是指在编码蛋白质的基因外显子中一个碱基取代另一个碱基使得所产生的氨基酸序列未经改变。本文所用术语“非同义取代”是指在编码蛋白质的基因外显子中一个碱基取代另一个碱基使得产生的氨基酸序列改变了。在本文中术语“缺失”和“缺失突变”可互换使用，是指从DNA丢失了一个或多个碱基。本文所用术语“添加”是指将一个或多个碱基或一个或多个氨基酸插入到序列中。以下代表彼此保守取代的氨基酸组1)丙氨酸㈧、丝氨酸⑶、苏氨酸⑴；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E) ；3)天冬酰胺(N)、谷氨酸(Q) ；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K) ；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸 (W)。组合物治疗性激酶抑制剂肽一方面，本发明提供用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的激酶抑制组合物，所述组合物包含(a)治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶，其中治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中第一结构域包含蛋白质转导结构域(PTD)，并位于第二结构域的近侧，其中位于第一结构域的近侧的第二结构域包含治疗结构域，其中所述组合物直接或间接降低至少一种炎性细胞因子的表达。按照一个实施方案，第一结构域位于第二结构域的5'。根据另一实施方案，第二结构域位于第一结构域的3'。按照一个实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约 100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约0. 0000lmg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约0. OOOlmg/ kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约 0. 001mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约0. 0lmg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约0. lmg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约lmg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约10mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约20mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约30mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约40mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约50mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约60mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约70mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约80mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制性肽的治疗有效量为约90mg/kg体重-约100mg/kg体重的量。根据另一实施方案， 治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约90mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约80mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约70mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约60mg/kg 体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约
3450mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. OOOOOlmg/ kg体重-约40mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约 0. 00000lmg/kg体重-约30mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约20mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约10mg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约lmg/kg体重的量。根据另一实施方案， 治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约0. lmg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约0. lmg/kg体重的量。 根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约0. 0lmg/kg 体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. 00000lmg/kg体重-约 0. 00lmg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约0. OOOOOlmg/ kg体重-约0. 000lmg/kg体重的量。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗有效量为约 0. 00000lmg/kg 体重-约 0. 0000lmg/kg 体重的量。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根据另一实施方案， 本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。 根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO 11]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 16]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根据另一实施方案， 本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO :18]的肽。 根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO 19]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO 20]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]的肽。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID N0:13]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列 KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGVA[SEQ ID NO :29] 的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KKKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:30]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列 KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的结构域。根据另一实施方案， 本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的结构域。根据另一实施方案，本发明治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLAVAA[SEQ ID NO 27]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的 PTD为具有氨基酸序列WjRRIKA[SEQ ID NO ;32]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO :33]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列mJ RIKAWLRRI [SEQ ID NO 34]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列FAKLAARLYR[SEQ ID NO :35]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的 PTD为具有氨基酸序列KAFAKLAARLYR[SEQ ID NO :36]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]的结构域。根据另一实施方案，第一结构域位于第二结构域的5'。根据另一实施方案，第二结构域位于第一结构域的3'。根据另一实施方案，第一结构域可操作地与第二结构域连接。根据另一实施方案，第二结构域可操作地与第一结构域连接。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根据一些这类实施方案，激酶为MK2。根据一些这类实施方案，激酶为MK3。根据另一实施方案，激酶为 CaMK0根据一些这类实施方案，炎性病症为纤维化。根据一些这类实施方案，炎性病症为内皮细胞功能障碍。根据一些这类实施方案，炎性病症为内毒素休克。内毒素休克(感染性休克)是其中因存在炎性物质所致循环系统不能为身体组织提供充足循环的病况。研究报道血清 TNF-α水平决定内毒素休克的致死或非致死进程(Mozes，Τ.等，Immunol. Lett. 27 (2) 157-62，1991)，而感染性休克患者的IL-6水平显著提高了 (ffaage, A.等，J. Exp. Med. 169 333-338，1989)。内毒素休克的症状包括但不限于轻度发烧、缺乏饥饿感、轻微精神和身体抑郁、心率增快、低脉压、脱水和腹泻。根据一些这类实施方案，炎性病症为胰腺炎。胰腺炎是胰腺炎症。急性胰腺炎是突然性的，而慢性胰腺炎特征为再发性或持续性腹痛，有或没有脂肪泻或糖尿病。有大量证据显示促炎性细胞因子(例如TNF-α、IL-I β)在急性胰腺炎病理生理学中起关键作用，并可通过起近侧中介物(proximal mediator)作用来介导急性胰腺炎的全身并发症，该中介物诱导产生其它中介物，包括IL-6和IL-8。已表明IL-I β和TNF-α作为导致疾病进展的物质，IL-6 和 IL-8 作为严重程度指示剂(Pooran，N.等，J. Clin. Gastroenterol. 37(3) 263-266,2003).胰腺炎的症状包括但不限于严重上腹部痛且辐射至背部、恶心、呕吐、血压波动(高或低)、心率提高、呼吸频率提高、腹部压痛并且肠鸣音可降低。根据一些这类实施方案，炎性病症为哮喘。根据一些这类实施方案，炎性病症为局限性炎性疾病。研究报道循环IL-6和 TNF-α在诱导局部炎性反应中起重要作用(Xing, Ζ. J. Clin, Invest. 101 (2) :311-320, 1998)。根据一些这类实施方案，炎性病症为动脉粥样硬化性心血管病(动脉粥样硬化， ASVD)。ASVD是其中因累积脂肪物质例如胆固醇所致动脉壁增厚的病况。其为以下综合征，其部分地由于巨噬细胞白细胞聚积而影响动脉血管(动脉壁中的慢性炎性反应)，并被低密度脂蛋白促进，功能性高密度脂蛋白未能从巨噬细胞充分除去脂肪和胆固醇。研究表明，在动脉粥样硬化的发展和临床后遗症中IL-Ιβ为调节蛋白(Moyer，C. F.等， Am. J.Pathol. 138(4) ；951-960，1991)。另外的研究报道IL-6和TNF-α亦与动脉粥样硬化风险因子有关(Haddy, N.等，Atherosclerosis. 70(2) :277-283. 2003) 动脉粥样硬化性心血管病的症状包括但不限于心脏病发作、心脏性猝死(在症状开始后1小时内死亡)、 外周动脉闭塞性疾病、动脉粥样化形成(粥样斑块的形成过程)和狭窄。根据一些这类实施方案，炎性病症为阿尔茨海默氏病。阿尔茨海默氏病(AD)是痴呆的形式。AD特征为在大脑皮质和某些皮质下区域中失去神经元和突触。这种失去导致受影响区域的总体萎缩，包括颞叶和顶叶以及部分额皮质和扣带回退化。AD的起因及进展尚未完全了解，但通常认为涉及神经原纤维缠结及淀粉样蛋白β。某些研究提示AD中淀粉样蛋白生成是IL-I β /IL-6介导的大脑中急性期反应的结果(VandenabeelhP.和Fiers， W. Immunol. Today. 12(7) :217-9. 1991)。另外的研究提示 TNF-α 及 IL-1 β 表达水平和认知缺损之间的相关性(Alvarez，X.等，Mol. Chem. Neuropathol. 29 (2-3) :237-252. 1996)。 AD症状包括但不限于记忆丧失、意识错乱、易激惹、攻击性、情绪波动和死亡。根据一些这类实施方案，炎性病症为肿瘤病。肿瘤病包括但不限于上皮来源的癌症，例如但不限于乳腺癌和前列腺癌。根据某些实施方案，所述病症为乳腺癌。根据某些实施方案，所述病症为前列腺癌。乳腺癌为在乳腺组织中形成的癌症，所述组织通常是导管(将乳输送到乳头的管道)和小叶(产乳的腺体)。乳腺癌有四个分期。0期(原位癌)，包括原位小叶癌(“LCIS”) 和原位管癌(“DCIS”)，其中癌细胞分别存在于小叶或导管衬里内。1期为浸润性乳腺癌的早期阶段，其中肿瘤不超过2cm跨度，癌细胞未扩散到乳腺之外。在II期中，肿瘤为(i) 直径不超过2cm，癌已扩散到臂下的淋巴结；(ii)直径在2-4cm之间，癌可扩散到臂下的淋巴结；或(iii)癌直径大于5cm，癌未扩散到臂下的淋巴结。III期可为大肿瘤，但癌尚未扩散到乳腺及附近淋巴结之外。其为局部晚期癌症。在IIIA期中，肿瘤直径可小于或可不小于5cm，并已扩散到臂下淋巴结。在IIIB期中，肿瘤业已长到胸壁或乳腺皮肤，癌扩散到胸骨后的淋巴结。在IIIC期，肿瘤为任何大小，并扩散到臂下、胸骨后及锁骨下或上的淋巴结。IV期为远距离转移癌，其中癌业已扩散到身体的其它部分。研究报道在转移性乳腺癌患者中 IL-6 水平提高了 (Zhang, GJ.和 Adachi，I. Anticancer Res. 19 (2B) :1427-1432,1999)，且TNF-α可增强IL_6刺激乳腺肿瘤中雌激素合成的能力(Reed, MJ.和Purohit， A. Endocrine Rev. 18(5) :701-715,1997) 另外的研究报道肿瘤相关IL-1 β存在于肿瘤微环境中，并可在调节乳腺肿瘤生长和转移中起关键作用(Kurtzman，S. H.等，Oncology Reports. 6(1) :65-70,1998)，前列腺癌为在前列腺(在膀胱下和直肠前面存在的雄性生殖系统腺体)组织中形成的癌。前列腺癌有4个分期。在1期中，直肠指检期间不能感觉到癌，且在声波图中观察不到。其在当为另一原因进行外科手术时偶然被发现。1期癌仅在前列腺中，级别为Gl (或 Gleason分数不高于4分)。在II期中，肿瘤比1期更为晚期或级别更高，但肿瘤未延伸到前列腺之外。其可在直肠指检中感觉到，或其在声波图中观察到。在III期中，肿瘤延伸到前列腺外，可侵入到精囊中，但仍未扩散到淋巴结。在IV期中，肿瘤可侵入膀胱、直肠或附近结构(超出精囊)。其可扩散到淋巴结、骨头或身体的其它部位。研究报道转移性疾病患者的IL-6和TNF-α血清水平比局限性疾病患者显著高，这两种细胞因子的水平都直接与疾病程度相关(Michalaki, V.等，Br. J. Cancer. 90(12) :2312-6, 2004)。另外的研究报道 IL-I β为不同肿瘤细胞的体内血管生成和侵袭性所需(Voronov，E.，等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA,100(5) :2645-沈50，200；3)。患有前列腺癌的人可无任何症状。对于有症状的人而言，常见症状包括但不限于排尿问题、阳痿、尿血或精血和下背、臀部或大腿上部经常疼痛。根据一些这类实施方案，炎性病症为缺血。缺血是通常因血管因素导致的血液供应受限，因而导致组织功能障碍。研究报道在缺血后的早期再循环期间IL-6、IL-I β和 TNF-α 水平升高了(Saito，K.等，Neurosci. Lett. 206 (2-3) 149-152，1996)。缺血的症状包括但不限于血液供应中氧和葡萄糖短缺。根据一些这类实施方案，所述病症为神经缺血。根据一些这类实施方案，炎性病症为类风湿性关节炎(RA)。根据一些这类实施方案，炎性病症为克罗恩氏病。根据一些这类实施方案，炎性病症为炎性肠病。根据一些这类实施方案，炎性病症为内膜增生。内膜增生为血管内膜(动脉或静脉的最内层)增厚，其为再造程序或动脉内膜切除术(手术剥离脂肪包裹的增厚动脉衬里以便打开或加宽动脉用于改善血液循环)的并发症。其涉及机械、细胞及体液因子对平滑肌细胞的协调刺激以诱导细胞激活程序，所述细胞激活程序导致增殖、迁移和细胞外基质沉积。内膜增生是血管对损伤的普遍存在的反应。研究报道IL-6的过表达(受IL-I β 和TNF-α调节)在粥样斑相关细胞中起重要作用(Kornman, K.等，J. Perio. Res. 34(7) 353-357. 2006 ；Libby, P.等，Circulation. 86 (6 Supp 1) :11147-52. 1992))。根据一些这类实施方案，炎性病症为狭窄。狭窄是血管或其它管状器官或结构异常变窄。产生的综合征视受影响的结构而定。研究报道IL-6的过表达(受IL-Ιβ和TNF-a 调节)在粥样斑相关细胞(Id)中起重要作用。狭窄症状可包括但不限于发绀(皮肤和黏膜发蓝)、萎缩性改变(例如毛发脱落和皮肤发光)、体温降低、脉搏减弱、感觉异常和瘫痪。 根据一些这类实施方案，所述病症为再狭窄(狭窄复发)。根据一些这类实施方案，炎性病症为平滑肌细胞肿瘤和转移。业已研究了几种平滑肌细胞肿瘤及其转移。这些包括平滑肌瘤。这些新生物通常为良性平滑肌新生物，它们不是癌变前的肿瘤，可发生在任何器官中，例如子宫、小肠和食管。子宫纤维瘤是子宫平滑肌的平滑肌瘤。尽管是良性肿瘤，子宫纤维瘤仍可导致经血过量、贫血和不育。皮肤平滑
38肌瘤包括孤立性皮肤平滑肌瘤、多发性皮肤(或毛发)平滑肌瘤，其产生于立毛肌肌肉； 血管平滑肌瘤(血管的平滑肌瘤)；肉膜状(或生殖器)平滑肌瘤，其起源于生殖器、乳晕和乳头的肉膜肌肉；和血管脂肪平滑肌瘤。研究报道在平滑肌瘤、子宫内膜异位和子宫内膜息肉团中的子宫腔含有高水平细胞因子，例如IL-Ιβ和TNF-α (Inagaki, N.等，Eur. J. Obst. Gyn. 111(2) 197-203，2003)。另外的研究报道IL-6亦在平滑肌瘤中表达(Luo, X 等，Endocrinology. 146(3) :1097-1118,2005) 根据一些这类实施方案，炎性病症为平滑肌痉挛。平滑肌痉挛为突发的无意识的平滑肌(肌肉群)收缩。研究报道抵抗动脉中的血管反应性与IL-I β、IL-6和TNF-α 之间的平衡相关(Vila, Ε.和 Salaices, Μ. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 H1016-H1021,2005)。根据一些这类实施方案，炎性病症为心绞痛(angina，angina pectoris)。心绞痛为因心肌缺血而引起的严重胸痛。研究报道在不稳定心绞痛中常见高水平的IL-6，且其与预后不良有关(Biasucci，L.等，Circulation. 94 :874-877. 1996)。另外，研究报道了 IL-6 和TNF-α的表达水平与冠脉死亡率之间的关联(Koukkunen, H.等，Annals Med. 33(1) 37-47.2001)。心绞痛的症状包括但不限于胸部不适、胸痛、压迫感、沉闷、憋闷、窒息、胸口、腹上部灼烧感或窒息感、背痛、颈部区疼痛、下颂疼痛、肩胛疼痛、恶心、呕吐和脸色苍白。根据一些这类实施方案，炎性病症为普林兹迈托心绞痛(变异型心绞痛)。普林兹迈托心绞痛发生在正常冠状动脉或不明显的动脉粥样硬化患者中。症状包括但不限于心绞痛的那些症状，通常在循环中静止时(而不是在运行时)发生。根据一些这类实施方案，炎性病症为心动过缓(缓慢性心律失常)。心动过缓是指静息心率在每分钟60拍以下。研究报道IL-I β、IL-6和TNF-α水平提高与心动过缓有关 (Fukuhara,Y.等，Toxicol. 41 (1) :49-55. 2003)。根据一些这类实施方案，炎性病症为缓慢
性心律失常。根据一些这类实施方案，炎性病症为高血压。高血压是指升高的血压(高血压)。研究报道IL-I β、IL-6和TNF-α提高水平与心动过缓有关(Fukuhara，Y.等， Toxicol. 41 (1) :49-55. 2003)。高血压症状包括但不限于头痛、嗜眠、意识错乱、视力障碍、 恶心、呕吐、癫痫、易激惹和呼吸窘迫。根据一些这类实施方案，炎性病症为心脏肥大(心脏增大)。心室肥大是心脏的心室变大。心室肥大通常与因高血压(或其它疾病状态)而引起的病理变化有关。研究报道 IL-I β和TNF-α足以刺激增大性生长反应，提示过表达IL_6可导致心脏肥大(Yokoyama， Τ.等，Circulation. 95 :1247-1252. 1997)。心脏肥大的症状可包括但不限于头痛、嗜眠、 意识错乱、视力障碍、恶心、呕吐、癫痫、易激惹和呼吸窘迫。根据一些这类实施方案，炎性病症为肾衰竭。当肾脏不能适当地运行时肾衰竭(肾脏衰竭)发生。研究报道了 IL-I β和TNF-α (Descamps-Latscha， B.等，J. Immunol. 154 ) :882-892. 1995)及增加的 IL-6 (Herbelin，A.等，Kidney Internat' 1. 39 :954-960. 1991)与肾衰竭的关联。肾衰竭症状包括但不限于血液中高水平的尿、血液中磷酸盐聚积、恶心、呕吐、体重减轻、夜尿、发痒、心律失常、腿、踝或脚膨胀以及背或肋疼痛。
根据一些这类实施方案，炎性病症为中风。中风是因扰乱了对大脑的血液供应而引起的大脑功能丧失。研究报道中风后IL-6和TNF-α的血清水平增加了 O^rrareseiC 等，J. Cerebral Blood Flow Metabol. 19 1004-1009，1999)，并在局灶性脑缺血后增量调节IL-I β的表达水平(Wang, X.等，Stroke. 28 155-162，1997)。中风症状包括但不限于 偏瘫、麻木、感觉降低或振动感觉、嗅觉改变、眼睑下垂、平衡问题、失语症、失用症、记忆缺失和眩晕。根据一些这类实施方案，炎性病症为肺动脉高压。肺动脉高压是指肺动脉、肺静脉或肺毛细血管血压升高。研究报道在肺动脉高压患者中TNF-α水平升高了，IL-6血清水平没有差异(Joppa, P.等，Chest. 130( :326-333. 2006) 肺动脉高压症状包括但不限于呼吸急促、头昏、昏厥、外周性水肿和心力衰竭。根据一些这类实施方案，炎性病症为妊娠毒血症。妊娠毒血症(妊娠高血压病症) 总的来说是指先兆子痫和子痫。根据一些这类实施方案，炎性病症为先兆子痫。先兆子痫是与尿中大量蛋白有关的妊娠产生高血压的病况。研究报道先兆子痫妇女与正常妊娠晚期妇女相比，IL-6 和 TNF-α 的血浆水平提高了 (Conrad, K.等，Am. J. R印ro. Immunol. 40 (2) 102-111,1998)。此外，在受试群(Id.)之间IL-1 β水平似乎未改变。症状包括但不限于血压升高、母亲内皮、肾脏和肝脏广泛受损。根据一些这类实施方案，炎性病症为子痫。子痫特征为出现强直阵挛发作(癫痫大发作)。根据一些这类实施方案，炎性病症为未足月产。根据一些这类实施方案，炎性病症为雷诺病/现象。雷诺病为当暴露于冷温度或因响应心理应激时，影响到骨端(手指、脚趾、鼻和耳)的血流量的血管病症。研究报道IL-6 和 TNF-α (Rychlik, W.，等，Int. Angiol. 25(4) :436.2006)在雷诺氏现象发病机制中起一定作用。雷诺病的症状包括但不限于发绀和脸色苍白。如果症状是特发的，则诊断为雷诺病，而雷诺氏现象因多种其它病况而继发发生，所述其它病况为例如但不限于结缔组织病症、系统性红斑狼疮、关节炎和其它风湿性疾病。根据一些这类实施方案，炎性病症为溶血性尿毒症。研究报道，TNF- α和IL_1在溶血性尿毒症综合征期间诱导炎性中介物vero细胞毒素-1 (verocytotoxin-Ι)中起重要作用(van de Kar, N. C.等，Blood. 80 (11) =2755-2764,1992) 另外的研究报道 IL-6 水平亦提高了 (Karpman, D.等，Ped. N印hrol. 9 (6) =694-699,1995) 溶血性尿毒症是特征为溶血性贫血(红血细胞异常破裂)、急性肾衰竭(尿毒症)和低血小板计数(血小板减少) 的疾病。根据一些这类实施方案，炎性病症为肛裂。肛裂为肛管皮肤的自然裂开或撕裂。大部分肛裂因肛门粘膜伸展超过其能力而引起。表面或浅肛裂通常将自愈。某些肛裂成为慢性和深部肛裂，不会痊愈。非痊愈性的最常见原因是内部肛门括约肌肌肉痉挛，导致损害了到肛门粘膜的血液供应。研究报道，在肛门周围克罗恩氏病患者中比在小肠克罗恩氏病患者和健康对照者中的直肠粘膜IL-I β、IL-6和血清IL-6及TNF-α更高(Ruffolo，C等， Infl. Bowel Dis. 14(10) 1406-1412，2008)。根据一些这类实施方案，炎性病症为失弛缓症。失弛缓症(食管失驰缓、贲门失驰缓、贲门痉挛、食管蠕动停止)是食管运动性失调。食管的平滑肌层失去正常蠕动，食管下端的括约肌不能因响应吞咽而合适地放松。研究报道与对照患者相比，食管炎患者粘膜中产生的 IL-6 和 IL-I β 的量显著更多(Rieder，F.等，Gastroenterol. 132 (1) :154-165, 2007)。症状包括但不限于吞咽困难、反胃、体重减轻、咳嗽和胸痛。根据一些这类实施方案，炎性病症为阳痿。勃起机能障碍(ED)是特征为不能使阴茎勃起或不能保持阴茎勃起的性功能障碍。发生勃起是因为血液进入并保留在阴茎海绵体内而产生的液压作用所致。研究报道，ED患者中增加的IL-6、IL-I β和TNF-α血液水平与性表现负相关(Vlachopoulos，C.等，Eur. Heart. J. 27(22) :2640-2648. 2006)。ED 可有心血管病的症状。根据一些这类实施方案，炎性病症为偏头疼。偏头疼是特征为剧烈头痛、恶心和身体知觉改变的神经综合征。研究报道偏头疼发作期间IL-6和TNF-α血清水平增加 (Peterlin，B.，等，Cephalagia. 27 (5) =435-446. 2007)。偏头疼性头痛是单边脉冲式疼痛， 持续4小时-72小时；症状包括但不限于恶心、呕吐、畏光和恐响症。根据一些这类实施方案，炎性病症为与平滑肌痉挛有关的缺血性肌肉损伤。研究报道，IL-1、IL-6和TNF-α产生负性肌力作用，在遭受缺血-再灌注的心肌膜中诱导细胞凋亡作用(Saini, H. K. Exp. Clin. Cardiol. 10(4) :213-222,2005) 根据一些这类实施方案，炎性病症为血管病变。血管病变是指特征为血管炎性破坏的异质病症群。动脉和静脉二者都可受影响。研究报道，IL-6是心脏移植相关的冠状血管病变的重要风险因子(Densem,C.等，J.Heart Lung Transpl, 24 (5) :559_565，2005)。血管病变症状包括但不限于发热、体重减轻、紫癜、网状青斑、肌痛或肌炎、关节痛或关节炎、 多发性单神经炎(mononeuritis muliplex)、头痛、中风、耳鸣、视力敏锐度减退(reduced visual acutity)、急性视力丧失、心肌梗塞、高血压、坏疽、鼻出血、咳血、肺浸润、腹痛、血便和肾小球肾炎。根据一些这类实施方案，炎性病症为充血性心力衰竭(CHF)。充血性心力衰竭是其中心脏不能维持身体内充足的血液循环的病况。研究报道，CHF患者与正常健康受试者相比时 IL-6 和 TNF-α 水平提高(Aukrust，P.等，Am. J. Cardiol. 83(3) :376-382. 1999)。CHF 的典型症状包括但不限于呼吸急促、咳嗽、脚及踝肿胀、腹部肿胀、增加体重、不规则脉或疾脉、疲惫、虚弱、心律失常、贫血和甲状腺功能亢进。根据一些这类实施方案，炎性病症为心肌顿抑或冬眠心肌。本文所用术语“慢性心肌缺血(CMI) ”是指因冠状血管变窄而引起的心肌缺血的长期亚急性或慢性状态，其中心肌“冬眠”意指心肌减量调节或降低其收缩性，因此要求其心肌氧与降低的灌注匹配，藉此保存细胞存活力并防止心肌坏死。这种冬眠心肌在恢复足量血液供应后能够回到正常或接近正常功能。一旦冠状血流量恢复到正常或接近正常，缺血就解决了，然而，冬眠心肌仍不能收缩。这种流量-功能不匹配导致的在解决缺血后心肌功能慢速回复，称为顿抑。功能恢复的时间长度相当不定，介于数天到数月之间，视多种参数而定，所述参数包括初始缺血性损伤的持续时间、初始损伤期间缺血的严重程度和动脉流恢复的充分程度。多个研究提供了冬眠心肌中的炎症的证据。Heusch, G.等，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 984-99 000 。研究亦报道，促炎性细胞因子例如IL-6和TNF-α在不复杂的冠状血管重建后提高了，可促成手术后的心肌缺血和节段性壁异常(Rankin，J. J. Thorac. Cardiovas. Surg. 108 :626-35. 1994)。根据一些这类实施方案，炎性病症为舒张期功能障碍。舒张期功能障碍是指在心
41舒期期间心脏(即左心室)充血异常。心舒期是当心脏(即心室)不收缩而是实际上松弛并填充从身体(进入右心室)或从肺(进入左心室)回来的血液时的心脏周期时期。研究表明，IL-6、IL_li3和TNF-α在全身脓毒病和其它形式的心脏功能障碍中介导心肌抑制 (Kelly, R.和 Smith，Τ. W. Circulation，95 :778-781,1997) 症状包括但不限于肺水肿、高血压、大动脉狭窄、瘢痕性心脏组织和糖尿病。根据一些这类实施方案，炎性病症为神经胶质增生(意指星形胶质细胞增殖，其可包括细胞外基质(ECM)在中枢神经系统的损伤区域沉积)。研究报道IL-I和IL-6促进神经胶质瘢痕形成，而不诱导11^-6释放的1顺-(1不诱导神经胶质增生(Woiciechowsky^ 等，Med. Sci. Monit. 10 (9) :BR325_330. 2004)。根据一些这类实施方案，炎性病症为慢性阻塞性肺病(COPD)(意指特征为气流阻塞或受限的呼吸道病；其包括但不限于慢性支气管炎和肺气肿)。在COPD患者的痰中测量到 IL-6、IL-I β 和 TNF- α 的水平提高了 (Chung, K. Eur. Respir. J. 18 :50s_59S，2001)。根据一些这类实施方案，炎性病症为骨质减少。骨质减少是其中骨矿物质密质 (其表明骨的密度和强度)低于正常健康受试者但未低到被分类为骨质疏松症的病况。骨质减少可定义为骨矿物质密质T分在-1. 0和-2. 5之间，如通过双能X线吸收计量术(DEXA) 所测。研究报道IL-I β、IL-6和TNF-α在骨吸收诱导中起一定作用(Rifas, L. Calcif. Tissue Int. 64 :1-7. 1999)。根据一些这类实施方案，炎性病症为变性关节炎(骨关节炎，OA)。骨关节炎是由一个或多个关节的软骨分解及最终损失引起的关节炎类型。骨关节炎通常影响手、 脚、脊椎和负荷大重量的关节，例如臀和膝。研究报道，伴随促炎性细胞因子(IL-la、 IL-I β、TNF- α )产生的慢性炎性改变是早期OA患者滑膜的特征(Smith，Μ. D.，等， J. Rhematol. 24 (2) :365_371，1997)。骨关节炎的症状包括但不限于在反复使用后受影响的一处或多处关节疼痛、膨胀、温暖感和受影响的一处或多处关节嘎吱作响。根据一些这类实施方案，炎性病症为强直性脊柱炎。根据一些这类实施方案，炎性病症为斯耶格伦病。根据一些这类实施方案，炎性病症为格-巴综合征。根据一些这类实施方案，炎性病症为硬皮病。根据一些这类实施方案，炎性病症为脓毒病。脓毒病是特征为全身性炎性状态 (全身炎症反应综合征(S^S))并存在已知感染或怀疑有感染的病况。身体可对血液、尿、 肺、皮肤或其它组织中的微生物形成该炎性反应。研究表明，IL-6和TNF-α为脓毒病有关的炎症、发病率及与致死率中的关键中介物(Leon，L等，Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 275 :R269_R277. 1998)。脓毒病症状包括但不限于遍及整个身体的急性炎症表现、发热、白细胞计数升高、恶心和呕吐、心率加快和呼吸频率增加。根据一些这类实施方案，所述病症为内毒素休克。败血症是伴随由于来自局部感染的致病力强的细菌侵入血流中所致毒性的全身性疾病。症状包括但不限于寒战、发热和疲劳。根据一些这类实施方案，炎性病症为银屑病。根据一些这类实施方案，炎性病症为放射性小肠炎。放射性肠病(放射性小肠炎)为由于放疗所致的小肠衬里炎症(膨胀)。研究报道辐射后IL-I β和TNF-α的 mRNA 水平提高了，且 IL-6 表达提高了(Linard，C.等，Int. J. Rad. Oncol. Biol. Phy. 58 O) 427-434. 2004)。放射性小肠炎的症状包括但不限于厌食、腹泻、恶心、呕吐和体重减轻。CN 102316731 A
说明书
39/70 页根据一些这类实施方案，炎性病症为肝硬化。肝硬化是因慢性肝病(CLD)引起的肝脏瘢痕形成和肝脏功能不良。研究报道，在慢性肝病患者中IL-Ιβ、TNF_a和IL_6的血清水平升高了，CLD患者的肝硬化组比无肝硬化的病例显示更高的IL-I β、IL-6和TNF-α 血清水平(Tilg，H.等，Gastroenterology. 103(1) :264-74. 1992)。肝硬化的症状包括但不限于出血性疮、意识错乱、阳痿、黄疸病、恶心和呕吐、体重减轻、胃气胀、腹部消化不良、 发热、腹痛和尿排出量减少。根据一些这类实施方案，炎性病症为间质纤维化。间质性肺病或ILD包括超过180 种慢性肺病，其可为慢性非恶性(非癌性)和无传染性的。间质性肺病因肺气囊之间称为间质组织的组织而得名，该组织为被纤维化(瘢痕形成)影响的组织。间质性肺病亦可称为间质性肺纤维化或肺纤维化。研究报道，IL-I β的高水平表达伴随IL-6和INF-α的局部增加及有明显组织损伤的剧烈的急性炎性组织反应(Kolb, Μ.等，J. Clin. Invest 107(12) 1529-1536,2001)。这些疾病中每一种的症状及过程可因人而异，但在多种形式的ILD之间共同的联系是，它们都是从炎症开始，例如细支气管炎(涉及细支气管(小气道)的炎症)； 肺泡炎(涉及肺泡(气囊)的炎症)；或脉管炎(涉及小血管(毛细血管)的炎症)。超过 80%的间质性肺病被诊断为尘肺病、药物诱导的疾病或超敏感性肺炎。其它类型为结节病；特发性肺纤维化；梗阻性细支气管炎；组织细胞增多症X ；慢性嗜酸性肺炎；胶原血管病；肉芽肿性脉管炎；古德帕斯丘综合征和肺泡蛋白沉着症。根据一些这类实施方案，炎性病症为结肠炎。结肠炎是大肠(结肠)炎症(膨胀)。结肠炎可有很多不同的原因，例如急性和慢性感染、炎性病症(溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、淋巴细胞性和胶原性结肠炎)、血流量缺乏(缺血性结肠炎)和大肠辐射后。研究报道，结肠炎动物模型中抑制TNF- α导致降低IL-I和IL_6水平，并减轻结肠炎的严重程度 (Neurath，M.等，Eur. J. Immunol. 27(7) :1743-1750,2005) 结肠炎的症状包括但不限于腹部出血、腹痛、血便、脱水、腹泻和肠积气增加。根据一些这类实施方案，炎性病症为阑尾炎。阑尾炎是阑尾发炎。阑尾是连在大肠上的小袋。研究报道，IL-6高水平表明是急性阑尾炎诊断的最好动向(I^ajanen，H.等， Scan. J. Clin. Lab. Invest. 62(8) =579-584,2002)。另外的研究报道，在阑尾炎患者的腹膜液中 TNF-α 与低水平的 IL-6 一起存在(Fernando, Α.等，Ann. Surg. 237(3) =408-416, 2003)。阑尾炎症状包括但不限于腹痛、发热、食欲降低、恶心、呕吐、寒战和便秘。根据一些这类实施方案，炎性病症为胃炎。胃炎是胃衬里的炎症。胃炎的常见原因包括例如酒精、吸烟和细菌感染。研究报道在感染幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的患者(所有的都患有慢性胃炎)中比在幽门螺杆菌阴性且胃粘膜组织学上正常的患者中， 人胃粘膜产生的 TNF-α 和 IL-6 显著高些(Crabtree，J.等，Gut. 32 1473-1477，1991)。胃炎的症状包括但不限于腹痛、腹部消化不良、黑便、食欲不振、恶心、呕吐和吐血或咖啡渣样物质。根据一些这类实施方案，炎性病症为喉炎。喉炎是咽喉(喉)炎症。喉炎通常与丧失声音的声嘶有关。喉位于气管顶部，含有声带。当声带发炎或感染时，其肿胀。这可引起声嘶，有时可堵塞气道。研究报道，在由鼻胃插管诱导的喉炎病例中IL-I β、IL_6和TNF-α 增加(Lima-Rodrigues，M.等，Larynscope. 1 18(1) :78-86. 2008)。喉炎症状包括发热、声嘶和颈部淋巴结或腺体肿胀。
根据一些这类实施方案，炎性病症为脑膜炎。脑膜炎是覆盖脑和脊髓的膜发炎，其影响脑脊髓液。研究报道，重组形式的IL-6和TNF-α可诱导脑膜炎或血脑屏障损伤，这表明在脑脊髓液内原位产生IL-I (有或没有TNF)能够介导脑膜发炎和血脑屏障损伤两者， 血脑屏障损伤如在各种中枢神经系统感染中所见(Quagliarello，V.等，J.Clin. Invest, 87(4) :1360-1366,1991)。脑膜炎的症状包括但不限于发热和寒战、精神状态变化、恶心和呕吐、畏光、剧烈头痛、假性脑膜炎、激动和呼吸急促。根据一些这类实施方案，炎性病症为耳炎。耳炎是指耳朵感染或发炎。耳炎可影响耳朵的内部或外部部分。按照其是突然短时间发生(急性)还是经长时间反复发生(慢性)可对该病况进行分类。研究报道在中耳炎动物模型中IL-I β和TNF-α水平升高了 (Sato,K.等，Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 108(6) :559_63，1999)。另外的研究报道在有渗出液的中耳炎患者中 IL-6 水平提高了 (Jang, C.和 Kim, Y. Int. J. Ped. Otorhinol. 66(1) 37，2002)。症状包括但不限于寒战、腹泻、耳流出物、耳朵痛、耳鸣或嗡嗡响、发热、听力受损、易激惹、恶心和呕吐。根据一些这类实施方案，炎性病症为再灌注损伤。根据一些这类实施方案，炎性病症为外伤性脑损伤。外伤性脑损伤由击打或震动头部引起，或由扰乱大脑正常功能的穿通性头部损伤引起。不是对头部的所有击打或震动都导致外伤性脑损伤。外伤性脑损伤的严重程度可介于“轻微”(精神状态或意识的短暂变化)到严重(损伤后长时间无意识或遗忘)。研究报道，在严重外伤性脑损伤患者中IL-6 禾口 TNF-α 二者水平都提高了 (Csuka, E.等，J. Neuroimmunol. 101(2) :211-21,1999) 外伤性脑损伤的症状包括但不限于头痛或脖子痛、记忆、集中精力或做决定困难、疲劳、情绪改变、恶心、畏光、视力模糊、耳鸣和丧失味觉或嗅觉。根据一些这类实施方案，炎性病症为脊髓损伤。脊髓创伤或损伤为对脊髓的损伤，其可因对脊髓本身的损伤直接产生，或因对周围骨、组织或血管的损伤间接产生。 研究报道在损伤的脊髓中TNF-α、IL-6和IL_1 β的表达水平变高(Hayashi，Μ.等， J. Neurotrauma. 17(3) =203-18, 2000) 0脊髓损伤的症状包括但不限于虚弱和对损伤点或以下部位感觉缺失、呼吸困难、丧失正常的肠和膀胱控制、麻木、痉挛状态和疼痛。根据一些这类实施方案，炎性病症为周维神经病变。术语“周维神经病变”是指对周维神经系统的损伤。据报道在实验性轴索显微外科术后过表达IL-6，并在损伤(神经粉碎)后逐渐提高 IL-I 和 TNF-α 水平(Creange，Α.等，Eur. Cytokine Network. 8 (2) 145-51,1997)。症状与受影响的神经类型有关，可在数天、数星期或数年时期内观察到。肌无力是运动神经损伤最常见的症状。其它症状可包括疼痛性痉挛和肌束震颤(皮肤下可见的不受控制的肌肉颤搐)、肌肉损失、骨退化和皮肤、头发及指甲变化。感觉神经损伤引起更复杂的症状范围，因为感觉神经具有更广的更高度特化的功能范围。包裹在髓磷脂中的较大的感觉神经纤维记忆感受震动、轻触和位置感觉。对大感觉纤维的损伤降低了感受震动和触觉的能力，导致麻木的总感觉，尤其是在手和脚中。没有髓磷脂鞘的较小的感觉纤维传播疼痛和温度感觉。自主神经损伤的症状多种多样，视受影响的器官或腺体而定。自主神经损伤的常见症状包括不能正常出汗，这可导致热耐受不良；失去膀胱控制，这可引起感染或失禁；和不能控制肌肉，所述肌肉扩张或收缩血管以维持安全血压水平。丧失对血压的控制可引起头昏、头晕或甚至当人突然从坐着位置移动到站立位置时昏厥(称为体位性或直立性低血压的病况)。胃肠症状经常伴随自主神经病发生。控制肠肌肉收缩的神经经常失灵，导致腹泻、便秘或失禁。根据一些这类实施方案，炎性病症为多发性硬化。根据一些这类实施方案，炎性病症为狼疮(系统性红斑狼疮)。根据一些这类实施方案，炎性病症为心代谢综合征。心代谢综合征(X综合征， CMS)被定义为存在以下病况中的任何三种(i)腰周围超重；(ii)高水平甘油三酯；(iii) 低水平HDL(好胆固醇)；(iv)高血压；和(ν)高禁食血糖水平。CMS越来越盛行与肥胖症相关，肥胖症在很多年龄组中增加了。目前认为CMS预测心血管死亡率和/或2型糖尿病的发展。CMS通过改变身体组成及脂肪再分布进一步复杂化，通常与胰岛素敏感性改变有关。很多糖尿病病人同时有这些病况中的几种。根据一些这类实施方案，炎性病症为肥胖症。肥胖症由国家卫生院(NIH)定义为体重指数(BMI)为30及更高。体重指数是体重与身高的标准化比率，通常用作健康的一般指标。可通过将体重(以千克计)除以身高(以米计)的平方来计算BMI。认为18. 5和24. 9之间的BMI对大部分成年人为正常。根据一些这类实施方案，炎性病症为II型糖尿病。2型糖尿病(非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)， 成年开始的糖尿病)是主要特征为胰岛素抗性(当存在胰岛素时细胞无适当反应)、相对胰岛素缺乏和高血糖症的代谢病症。IL-6不仅损害胰岛素敏感性，而且还是肝产生C反应蛋白(该炎性标记的最重要来源)的主要决定因素。对2型糖尿病患者的研究显示，IL-6 的循环水平与内脏脂肪面积(VFA)强相关，颈动脉僵硬(动脉粥样硬化的指数)与VFA和 IL-6及C-反应蛋白水平二者都相关，这表明源自腹内脂肪细胞的IL-6可参与加速2型糖尿病患者的动脉粥样硬化(Despres，J，Eur. Heart J. Supp 1. 8(B) :B4_B12，2006)。2 型糖尿病症状包括但不限于多尿和烦渴。根据一些这类实施方案，炎性病症为I型糖尿病。根据一些这类实施方案，炎性病症为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。NASH为不是由于过量使用酒精引起的肝脏脂肪性炎症。在NASH中，在肝脏中积聚脂肪，最终引起瘢痕组织。NASH可导致肝硬化。研究报道在NASH患者中TNF-α水平提高了(Bahceicoglu， H.等，！fepatoenterology. 52(65) 1549-53，2005)。另外的研究报道在 NASH 患者中 IL-6 水平(Kugelmas, M.等，H印atology. 38 O) 413-9 ；2003)和 IL-I β 水平(Brun, P.等， Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292 :G518_G525，2007)升高。NASH症状包括但不限于疲劳、不适和不明的右上象限腹部不适。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为与氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为与氨基酸序列 KALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域为与氨基酸序列 WLRRIKAWLRR1KA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域为与氨基酸序列 WLRRIKAffLRRI [SEQ ID NO 34]具有基本同一性的结构域。另一方面，本发明提供分离的核酸，所述核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少85%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少86%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14] 的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少87%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。 在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少88%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少89%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少90%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列m^RRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少91%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少92%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少93%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14] 的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少94%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。 在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少95%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WiLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少96%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少97%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列m^RRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID N0:14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少98%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，分离的核酸编码与治疗抑制剂肽具有至少99%氨基酸序列同一性的多肽，其中所述治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽，其中所述多肽抑制激酶的激酶活性。在一些这类实施方案中，具有氨基酸序列WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]的治疗抑制剂肽可操作地与可控调节元件连接。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列WfLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 14]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11] 的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO 16]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO :18]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21] 的肽。根据另一实施方案，可将其中期需局部递送组合物的激酶抑制组合物调配用于通过注射胃肠外给予，例如通过弹丸注射或连续输注。用于注射的制剂可呈单位剂型，例如在安瓿或在多剂量容器中，且添加防腐剂。组合物可采取诸如在油性或水性溶媒中的混悬剂、 溶液剂或乳剂形式，可含有调配用剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。用于胃肠外给予的药物制剂包括呈可水溶形式的活性化合物的水性溶液剂。另外，活性化合物的混悬剂可制备为合适的油性注射混悬剂。合适的亲脂溶剂或溶媒包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射混悬剂可含有提高混悬剂的粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选混悬剂亦可含有合适的稳定剂，或提高化合物的溶解度使其可用于制备高浓度的溶液剂的物质。或者，活性化合物可呈粉末形式用于在使用前用合适的溶媒例如无菌无热原水构成。药物组合物(即激酶抑制组合物)亦可包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。 所述载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物例如聚乙二醇。将合适的液态或固态药物制剂形式例如与一种或多种赋形剂(视合适的情况而定)微囊化、蜗形化(encochleated)、包被到微型金颗粒上；包含在脂质体、小丸中，用于植入到组织中；或干燥到待擦入到组织中的物体上。所述药物组合物亦可呈以下形式颗粒剂、珠粒、散剂、片剂、包衣片剂、(微)胶囊剂、栓剂、糖浆剂、乳剂、混悬剂、霜剂、滴剂或延长释放活性化合物的制剂，在所述制剂中如上所述常规使用赋形剂和添加剂和/或辅助剂，例如崩解剂、粘合剂、涂层剂、膨胀剂、润滑剂或增溶剂。药物组合物适用于多种药物递送系统。关于用于药物递送的方法简述，参见Langer 1990 Science M9，1527-1533，其在此引作参考。激酶抑制组合物和任选其它治疗药物，可以本身(纯的)或以药学上可接受的盐形式给予。当用于药物中时，所述盐应该为药学上可接受的盐，但非药学上可接受的盐可合宜地用于制备其药学上可接受的盐。所述盐包括但不限于从以下酸制备的盐盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、对甲苯磺酸、酒石酸、柠檬酸、甲烷磺酸、蚁酸、丙二酸、琥珀酸、2-萘磺酸和苯磺酸。所述盐亦可制备为碱金属盐或碱土金属盐，例如羧酸基团的钠、钾或钙盐。“药学上可接受的盐”意指以下盐，其在可靠医学判断范围内适用于与人和低级动物的组织接触而无不当的毒性、刺激性、变态反应等，且具有合理的利益/风险比。药学上可接受的盐在本领域众所周知。例如，P，H. Mahl等在“Handbook of Pharmaceutical Salts properties, Selection, and Use (药用盐手册性质、选择禾口使用)” (Wiley VCH, Zurich, Switzerland 2002)中详细阐述了药学上可接受的盐。所述盐可在最后分离及纯化本发明所述化合物期间原位制备，或可通过让游离碱性官能团与合适的有机酸反应来单独制备。代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(羟乙基磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、 草酸盐、扑酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐。含氮碱性基团亦可用诸如以下物质季铵化低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯； 长链商化物，例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卤化物，例如苄基溴化物和苯乙基溴化物等。由此获得水溶性或油溶性或可分散产物。 可用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸等无机酸及诸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸等有机酸。可在最后分离及纯化本发明所述化合物期间，通过让含羧酸部分与合适的碱(例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与铵或有机伯胺、仲胺或叔胺反应，来原位制备碱加成盐。药学上可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子，例如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等；和无毒季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺等。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、 乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。亦可用本领域熟知的标准程序获得药学上可接受的盐，例如通过让诸如胺等足够碱性的化合物与提供生理学上可接受阴离子的合适酸反应。亦可制备羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或碱土金属(例如钙或镁)盐。可以以单位剂型的形式适宜地提供制剂，可通过制药领域熟知的任何方法来制备制剂。所有方法包括让激酶抑制肽或其药学上可接受的酯、盐、水合物、溶剂化物或前药 (“活性化合物”)与构成为一种或多种辅助剂的载体缔合的步骤。一般而言，通过让活性剂与液态载体或细粒固态载体或二者均勻并紧密缔合，然后在需要时让产物形成所期需制剂的形状，来制备制剂。药用剂或其药学上可接受的酯、盐、水合物、溶剂化物或前药可与不损害所期需作用的其它活性物质混合，或与补充所期需作用的物质混合。用于胃肠外、皮内、皮下、鞘内或局部使用的溶液剂或混悬剂可包括但不限于例如以下组分无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸，或重亚硫酸钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和调整渗透压的物质，例如氯化钠或葡萄糖。胃肠外制剂可包封在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制造的多剂量小瓶中。静脉内给予的特定载体为生理盐水或磷酸缓冲盐水(PBS)。用于胃肠外注射的药物组合物包含药学上可接受的无菌水性或非水性溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，和用于再构成无菌注射溶液剂或分散剂的无菌粉末。通常认为“溶液剂”为两种或更多种物质的均勻混合物。它通常是但并不一定是液态。在溶液剂中，溶质分子(或溶解的物质)在溶剂中均一分布。本文所用“分散系统”或”分散剂”是指两相系统，其中一相作为粒子或液滴分散在第二相或连续相中。本文所用术语“混悬剂”是指不溶解的细粒物质分散在液态溶媒中的制剂。混悬剂的颗粒物质可从其分散的液态溶媒中慢慢沉降；因此，混悬剂应该在使用前充分摇晃以确保固体在溶媒中均一分布，藉此确保均一和合适的剂量。本文所用“乳剂”是指胶体系统，其中分散相和分散介质二者都为不混溶的液体，其中分散的液体分布在遍及分散介质液体的小球中。稳定的基础乳剂含有至少两种液体和乳化剂。常见的乳剂类型为水包油，其中油为被分散的液体，水性溶液例如水为分散介质；和油包水，其中正好相反，水性溶液为被分散相。亦可能制备非水性乳剂。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或溶媒的实例，包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯例如油酸乙酯。可例如通过使用包衣例如卵磷脂，通过在分散液的情况下保持所需粒径，和通过使用表面活性剂，来保持合适的流动性。这些组合物亦可含有佐剂，包括防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)来确保防止微生物的作用。亦可期需包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。可通过使用延迟吸收的物质例如单硬脂酸铝和明胶，带来延迟吸收的可注射药物形式。混悬剂除活性化合物外还可含有助悬剂，例如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、琼脂、西黄蓍胶及其混合物。通过形成药物在可生物降解聚合物(例如聚交酯-聚乙醇酸交酯)中的微囊化基质，制备可注射长效制剂形式。药物释放速率可依赖药物与聚合物的比率及所采用的特定聚合物的性质来控制。可用合适的聚合物质或疏水物质(例如作为可接受油中的乳剂)或离子交换树脂或作为微溶的衍生物(例如作为微溶性盐)来调配所述长期作用的制剂。其它可生物降解聚合物实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。亦通过将药物埋在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备可注射贮库性制剂。可对局部注射制剂进行灭菌，例如通过阻留细菌的过滤器过滤，或通过将灭菌剂掺入到无菌固态组合物形式中，所述无菌固态组合物可恰好在使用前溶解于或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。注射制剂例如无菌注射水性或油性混悬剂，可按照已知技术用合适的分散剂或湿润剂和助悬剂来调配。无菌注射制剂亦可为在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂、混悬剂或乳剂，例如在1，3_ 丁二醇中的溶液剂。在可采用的可接受溶媒和溶剂中有水、林格氏溶液(美国药典)和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油常规地采用，或作为溶剂或作为悬浮介质。为此目的可采用任何温和不挥发性油， 包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，在制备注射剂中使用脂肪酸，例如油酸。胃肠外(包括但不限于皮下、皮内、肌内、静脉内、鞘内和关节内)给予的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和赋予制剂与目的受体血液等渗的溶质；和水性和非水性无菌混悬剂，其可包括助悬剂和增稠剂。制剂可以以单位剂量或多剂量容器呈提，例如密封安瓿和小瓶中，并可以以冻干(冷冻干燥)状态储
49存，仅需在临用前加入无菌液体载体，例如盐水、注射用水。可由先前所述类型的无菌粉末、 颗粒和片剂制备临时的注射溶液剂和混悬剂。调配本文所述组合物的另一方法涉及让本文所述化合物与提高水溶解性的聚合物缀合。合适聚合物的实例包括但不限于聚乙二醇、聚-(d-谷氨酸)、聚-(1-谷氨酸)、 聚-(1-谷氨酸)、聚-(d-天冬氨酸)、聚-(1-天冬氨酸)、聚-(1-天冬氨酸)及其共聚物。 可使用具有约5，000-约100，000分子量及分子量为约20，000-约80，000的聚谷氨酸，具有分子量为约30，000-约60，000的聚谷氨酸亦可使用。用基本上如美国专利号5，977，163 所述的方案，聚合物经由酯键与本发明治疗抑制剂肽的一个或多个羟基缀合，所述专利在此引作参考。合适的缓冲剂包括乙酸和盐(1-2 % w/v)；柠檬酸和盐(1-3 % w/v)；硼酸和盐(0. 5-2. 5 % w/v)；和磷酸和盐(0. 8-2 % w/v)。合适的防腐剂包括苯扎氯铵 (0. 003-0. 03% w/v)；氯丁醇(0. 3-0. 9% w/v)；对羟基苯甲酸酯(0. 01-0. 25% w/v)和硫柳汞(0. 004-0. 02% w/v)。在某些实施方案中，激酶抑制组合物为药物组合物。本发明中所述的药物组合物含有治疗有效量的激酶抑制组合物和任选包含在药学上可接受的载体中的其它治疗剂。活性成分可为激酶抑制组合物、治疗抑制剂肽、PTD或治疗结构域或其组合。药物组合物的各组分亦能够以使得没有本质上损害所期需的药物功效的相互作用的方式混合。可以以颗粒提供包括激酶抑制组合物在内的一种或多种治疗剂。所述颗粒可在被包衣包围的核心中含有一种或多种治疗剂。一种或多种治疗剂亦可分散在整个颗粒中。一种或多种治疗剂亦可被吸附在颗粒的至少一个表面上。颗粒可具有任何级别释放的动力学，包括零级释放、一级释放、二级释放、延迟释放、持续释放、立即释放等及其任何组合。除一种或多种治疗剂外，颗粒还可包含在制药及医药领域常规使用的任何物质，包括但不限于可侵蚀的、不可侵蚀的、可生物降解或不可生物降解的物质或其组合。颗粒可为含有呈溶液或呈半固体状态的激酶抑制组合物的微胶囊。颗粒可为几乎任何形状。不可生物降解和可生物降解的聚合物质二者都可用于制备颗粒，用于递送一种或多种治疗剂。所述聚合物可为天然的或合成的聚合物。基于所需释放时间选择聚合物。特别引人关注的生物粘附聚合物包括Sawhney等在Macromolecules (1993) 26，581-587中所述的生物可蚀解的水凝胶，其中的教导并入本文中。这些包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)，聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚 (甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸基酯)、聚(甲基丙烯酸十二烷基酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)和聚(丙烯酸十八烷基酯)。在控释系统中可含有一种或多种治疗剂。为了延长药物的作用效果，通常需要减慢从皮下、鞘内或肌内注射的药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液态混悬剂来实现。然后药物的吸收速率视其溶解速率而定，溶解速率可取决于晶体大小及晶形。或者，通过将药物溶解于或悬浮于油性溶媒中实现胃肠外给予的药物形式的延迟吸收。用长期持续释放植入物可尤其适于治疗慢性病况。长期持续释放植入物为本领域普通技术人员所熟知，包括本文所述的某些释放系统。
在另一实施方案中，激酶抑制组合物进一步包含凝胶、缓慢释放的固态或半固态化合物，其中所述凝胶、缓慢释放的固态或半固态化合物包含治疗有效量的治疗抑制剂肽和包衣。包衣可为任何所期需材料，优选聚合物或不同聚合物的混合物。任选可在成粒期间使用聚合物以形成具有活性成分的基质，由此获得活性成分的所期需释放型式。所述凝胶、缓慢释放的固态或半固态化合物能够在所期需时期内释放活性剂。可将所述凝胶、缓慢释放的固态或半固态化合物植入最接近的期需位置，藉此活性剂的释放产生局部化的药理学作用。在另一实施方案中，激酶抑制组合物进一步包含半固态递送系统，所述递送系统使用半固态、可生物降解、生物相容的递送系统，或使用分散并悬浮于半固态、可生物降解、 生物相容性可生物降解的递送系统中的可生物降解、生物相容的多颗粒，用于注射、沉积或植入在身体内或身体上，以便促进局部治疗作用。在一些这类实施方案中，治疗剂为激酶抑制组合物、治疗抑制剂肽、PTD、治疗结构域或其药学上可接受的盐。在另一实施方案中，半固态递送系统部分或全部包含生物相容的、可生物降解的、 粘性半固体，其中所述半固体包括水凝胶。在一个实施方案中，在下文中称为GMO的单油酸甘油酯是预期的半固态递送系统或水凝胶。然而，就粘度/刚性而言具有相似物理/化学性质的很多水凝胶、聚合物、烃组合物和脂肪酸衍生物，可起半固态递送系统的作用。例如， 可使用硫酸化的多糖，例如但不限于肝素。在一个实施方案中，如下制备凝胶系统通过将GMO加热到其熔点G0-50°C )以上，并通过加入温暖的水基缓冲液或电解质溶液，例如磷酸盐缓冲液或生理盐水，从而产生三维结构。水基缓冲液可由其它水性溶液或含有半极性溶剂的组合组成。GMO提供主要基于脂质的水凝胶，其具有纳入亲脂材料的能力。GMO进一步提供纳入并递送亲水化合物的内部水性通道。应认识到在室温(大约25°C)时，凝胶系统可表现出包含宽广范围的粘度量度的不同相。在一个实施方案中，因其在室温和生理温度(约37°C )和pH(约7. 4)时的性质而使用双凝胶系统相。在双凝胶系统相中，第一相为大约5% -大约15% H2O含量和大约 95%-大约85% GMO含量的层状相。层状相为具有适度粘度的流体，其可易于操作、倾倒和注射。第二相为由大约15% -大约40% H2O含量和大约85% -60% GMO含量组成的立方体相。其具有大约35%重量-大约40%重量的平衡水含量。本文所用术语“平衡水含量”是指存在过量水时的最大水含量。因此立方体相纳入大约35%重量-大约40%重量的水。立方体相高度粘稠。可例如经由Brookfield粘度计测量粘度。粘度超过1.2X106厘泊(cp)；其中1.2X IO6Cp是经由Brookfield粘度计的杯锤配置所能获得的粘度的最大量度。在一些这类实施方案中，可将治疗剂纳入半固体中，以便提供持续不间断地释放所述治疗剂的系统。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗抑制剂肽。在一些这类实施方案中，治疗剂为PTD。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗结构域。在一些这类实施方案中，可将其它治疗剂、生物学活性剂、药物、药剂和惰性物质纳入到半固体中，用于以各种释放速率在身体内提供局部生物学作用、生理学作用或治疗作用。在某些实施方案中，使用备选的半固体、经修饰的制剂及生产方法，以便改变半固体的亲脂特性，或作为选择，改变半固体中含有的水性通道。因此，不同浓度的各种治疗剂可以以不同速率从半固体扩散，或经由半固体的水性通道随时间从其中释放。可通过改变水性组分的粘度、流动性、表面张力或极性，使用亲水物质来改变半固体的稠度或治疗剂的释放。例如，除了在脂肪酸部分的碳9和碳10为双键而不是单键外，结构上与GMO相同的单硬脂酸甘油酯(GMQ，在加热并加入水性组分后不形成胶冻，而GMO则会形成胶冻。然而，因为GMS为表面活性剂，GMS在H2O中可混溶，直到大约20%重量/重量。本文所用术语“表面活性剂”是指表面活性物质，因此其以有限浓度在H2O以及极性物质中可混溶。加热和搅拌后，80% H20/20% GMS组合产生具有类似于润手乳液的稠度的可铺展糊剂。然后该糊剂与熔化的GMO组合，以便形成具有前述高粘度的立方体相凝胶。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗抑制剂肽。在一些这类实施方案中，治疗剂为PTD。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗结构域。在另一实施方案中，用水解明胶例如市购Gelfoam 来改变水性组分。分别可将大约6. 25% -12. 50%重量浓度的Gelfoam 置于大约93. 75% -87. 50%重量浓度的H2O或其它水基缓冲液中。加热和搅拌后，H2O (或其它水性缓冲液)/Gelfoam 组合形成稠密的胶状物质。让得到的物质与GMO组合，因而如此形成的产物膨胀并形成高度粘稠的半透明凝胶， 其与单独的纯GMO凝胶相比延展性小些。在另一实施方案中，可用聚乙二醇(PEG)来改变水性组分以有助于药物增溶。分别将大约0.5% -40%重量浓度的PEG (视PEG分子量而定)置于大约99. 5% -60%重量浓度的H2O或其它水基缓冲液中。加热和搅拌后，H2O(或其它水性缓冲液)/PEG组合形成粘稠液体到半固态物质。让得到的物质与GMO组合，因而如此形成的产物膨胀并形成高度粘稠的凝胶。在不受理论的束缚的情况下，假设治疗剂可设想地以双相方式从半固体通过扩散释放。第一相涉及例如包含在亲脂性膜中的亲脂性药物由亲脂性膜扩散到水性通道。第二相涉及药物从水性通道扩散到外部环境中。药物因为亲脂性可将自己定位在其假定的脂质双层结构内的GMO凝胶里面。因此，将多于大约7. 5%重量的药物例如激酶抑制组合物纳入到GMO中，使得失去三维结构的完整性，藉此凝胶系统不再保持半固态立方体相，并回复到粘稠的层状相液态。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗抑制剂肽。在一些这类实施方案中，治疗剂为PTD。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗结构域。在另一实施方案中，在生理温度将约1-约45%重量的治疗剂纳入到GMO凝胶中，而不破坏正常的三维结构。结果，该系统获得药物剂量灵活性显著增加的能力。因为该递送系统具有延展性，其可在植入部位被递送和操作，以便粘附并适应身体壁、空间或其它空隙的轮廓以及完全填充存在的所有空隙。该递送系统确保在整个植入部位的药物分布及均一递送药物。通过半固态递送装置促进易于递送和操作在空间内的递送系统。半固态递送装置有利于递送系统的靶向和可控递送。在一个实施方案中，多颗粒组分包含生物相容的可生物降解的聚合物或非聚合物系统，其用于形成固态结构，包括但不限于糖粒(nonpareil)、小丸、晶体、团块、微球体或纳米粒。在另一实施方案中，多颗粒组分包含丙交酯-乙交酯共聚物 (poly(lactic-co-glycolide)，PLGA)。PLGA为用于治疗剂在体内受控和延长的递送的可生物降解聚合物材料。所述递送系统与经常性的定期系统给药相比，提供增强的治疗功效， 并降低总毒性。不受理论的束缚，假定由不同摩尔比的单体亚单元组成的PLGA系统，会促进在改造用于适应靶向治疗剂递送的精确释放概况方面的更大灵活性，所述改造通过改变聚合物降解速率来进行。在一个实施方案中，PLGA组合物足够纯，以便为生物相容性的并在生物降解后保持生物相容。在一个实施方案中，设计PLGA聚合物并使其成形为具有埋入其中的治疗剂或药物的微球体，藉此治疗剂随后由其中释放。在一些这类实施方案中，治疗剂为激酶抑制剂。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗抑制剂肽。在一些这类实施方案中，治疗剂为PTD。在一些这类实施方案中，治疗剂为治疗结构域。在另一实施方案中，多颗粒组分包含d，1丙交酯-己内酯共聚物。这提供用于治疗剂在体内受控和延长的递送的可生物降解聚合物材料，其具有与PLGA聚合物相似的药物释放机制。在一个实施方案中，还用可生物降解和/或生物相容的非聚合物材料例如GMS 产生多颗粒微球体。在另一实施方案中，通过用于将多颗粒组分装入胶囊或对其进行包被的方法进一步修饰多颗粒组分，所述方法使用含相同或不同药物物质的相同组合物的聚合物，使用含相同或不同药物物质的不同聚合物，或用不含药物、含相同药物、含不同药物或含多种药物物质的多次涂层处理。这使得产生多层(胶囊化)的多颗粒系统，其同时对单种或多种药物具有大范围的药物释放谱。在另一实施方案中，可单独或与前述实施方案及预想实施方案协同，来使用控制药物从多颗粒物理扩散的速率的包衣材料。在另一实施方案中，激酶抑制组合物进一步包含使用PLGA的递送系统。PLGA聚合物含有易于水解的酯键。当H2O渗入PLGA聚合物中时，其酯键被水解，水溶性单体离开 PLGA聚合物，由此随时间促进包埋药物(例如但不限于激酶抑制组合物)的物理释放。在一些这类实施方案中，可使用用于治疗剂在体内受控和延长的递送的其它种类的合成的可生物降解、生物相容的聚合物，包括聚酐、聚(磷酸盐/酯)、聚二氧杂环己酮、纤维素类和丙烯酸酯类，其作为非限制性实例提供。在一些这类实施方案中，可使用用于治疗剂在体内受控和延长的递送的非聚合物材料，包括但不限于固醇类、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸类和胆固醇酯类，其作为非限制性实例提供。在另一方面，激酶抑制组合物进一步包含半固态递送系统，其充当局部递送治疗剂的溶媒，包含亲脂性、亲水或两性固态或半固态物质；将其加热到其熔点以上，此后接着加入温暖水性组分，以便产生基于水含量粘性可变的凝胶状组合物。在混合并形成半固态系统之前，将一种或多种治疗剂纳入并分散到熔化的亲脂组分或水性缓冲液组分中。将凝胶状组合物置于半固态递送装置内用于随后放置或沉积。凝胶系统因为延展性而易于经由半固态递送装置在植入部位递送和操作，在此处粘附并适应植入部位外形、空间或其它体内空隙以及完全填充存在的所有空隙。或者，用包含生物相容聚合物或非聚合物系统的多颗粒组分来产生具有埋入其中的治疗剂的微球体。在最后处理方法后，将微球体纳入到半固态系统中，并随后置于半固态递送装置内，以便易于从其中递送到植入部位或类似空间， 藉此治疗剂随后通过一种或多种药物释放机制从其中释放。在另一方面，本发明还提供生物医学装置，其包含至少一种分离的治疗抑制剂肽， 其中将一种或多种分离的治疗抑制剂肽置于装置上面或里面。在一些这类实施方案中， 所述至少一种治疗抑制剂肽为至少一种具有选自具有以下氨基酸序列的肽的氨基酸序列的肽WLRRIKAWLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]、FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]、KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]、YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO:
5311], YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :16]、YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO: 17]、YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO 18], YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]、 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]和 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]。另一方面，本发明提供与编码包含PTD氨基酸序列的肽的mRNA特异性杂交的分离核酸。本文所用术语“特异性杂交”是指其中核酸与DNA的至少一条链的互补区区别性地或明确地形成碱基对的过程，所述DNA并非最初地与所述核酸配对的DNA。例如，可认为可与编码包含CPP序列的肽的细胞mRNA的至少部分结合或杂交的核酸，为特异性杂交的核酸。 选择性杂交的核酸在严格杂交条件下经历所述核酸序列与特定核酸靶标序列的杂交，该杂交以比该核酸序列与非靶标核酸序列的杂交更高程度地进行(例如至少为背景的2倍)且基本上排除与非靶标核酸的杂交。选择性杂交序列通常彼此具有约至少80%序列同一性、 至少90%序列同一性或至少100%序列同一性(即互补)。根据另一实施方案，本发明提供与编码包含治疗抑制剂肽氨基酸序列的肽的mRNA特异性杂交的分离核酸。提取RNA的方法在本领域众所周知，并被阐述于例如J. Sambrook等，“Molecular Cloning :A Laboratory Manual，，(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y,, 1989),第 1 卷，第 7 章，"Extraction, Purification, and Analysis of Messenger RNA from Eukaryotic Cells (来自真核细胞的信使RNA的提取、纯化和分析)”， 其在此引作参考。其它分离和提取方法亦众所周知，例如载于F. Ausubel等，” Current Protocols in Molecular Biology”，John Wiley & Sons，2007)中的方法。通常在离液剂 (例如盐酸胍或硫氰酸胍)存在下进行分离，但可选择性使用其它去污剂或提取剂。通常通过经寡(dT)-纤维素或具有结合mRNA分子的聚腺苷酸化3'部分的能力的其它色谱介质的色谱法，从提取的总RNA分离mRNA。作为选择但较不优选的是，可使用总RNA。然而，通常优选从哺乳动物来源分离聚(A)+RNA。方法抑制激活细胞因子的激酶的方法另一方面，本发明提供用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法，所述方法包括以下步骤(a)提供激酶抑制组合物，其中治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶，其中所述激酶抑制组合物包含治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中所述治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中第一结构域包含位于第二结构域的近侧的蛋白质转导结构域(PTD)，其中第二结构域包含位于第一结构域的近侧的治疗结构域； (b)将激酶抑制组合物给予有需要的受试者，从而抑制至少一种激酶；和(c)降低至少一种炎性细胞因子的表达，从而治疗所述炎性病症。按照一个实施方案，其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症为选自以下的至少一种病症选自哮喘、强直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴综合征、狼疮、银屑病、硬皮病、斯耶格伦病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎、高敏感性脉管炎、内毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、缺血、内膜增生、狭窄、再狭窄、平滑肌瘤、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛、心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、雷诺病、溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、血管病变、充血性心力衰竭、心肌顿挫、舒张期功能障碍、神经胶质增生、慢性阻塞性肺病、骨质减少、变性关节炎、脓毒病、肝硬化、间质纤维化、 结肠炎、阑尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、耳炎、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、心代谢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾原性系统性纤维化、乳腺癌、前列腺癌和内皮细胞功能障碍。根据另一实施方案，第一结构域位于第二结构域的5'。根据另一实施方案，第二结构域位于第一结构域的3'。根据另一实施方案，第一结构域与第二结构域可操作地连接。根据另一实施方案，第二结构域与第一结构域可操作地连接。根据另一实施方案，激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。根据一些这类实施方案，激酶为MK2。根据一些这类实施方案，激酶为MK3。根据另一实施方案，激酶为 CaMK0根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为与氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为与氨基酸序列 KALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域的氨基酸序列为 KAANRQLGVAA[SEQ ID NO :22]。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALARQLGVAA[SEQ ID NO :23]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNAQLGVAA[SEQ ID NO :24]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRALGVAA[SEQ ID NO :25]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQAGVAA[SEQ ID NO 26]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列 KALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGVA[SEQ ID NO :29]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KKKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :30]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KAANRQLGVAA[SEQ ID NO 22]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列 KALNAQLGVAA[SEQ ID NO 24]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQAGVAA[SEQ ID NO :26]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGAAA[SEQ ID NO :28]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLGVAA[SEQ ID NO :13]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALARQLGVAA[SEQ ID NO 23]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列 KALNRALGVAA[SEQ ID NO 25]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽的治疗结构域为具有氨基酸序列KALNRQLAVAA[SEQ ID NO :27]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的蛋白质转导结构域为与氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的蛋白质转导结构域为与氨基酸序列 WLRRIKAffLRRI [SEQ ID NO 34]具有基本同一性的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的PTD为具有氨基酸序列
55wlrrikawlrrika[seq id no :31]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的 ptd为具有氨基酸序列wjrrika[seq id no :32]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列yaraaarqara[seq id no 5]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列ygrkkrrqrrr[seq id no :33]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列mj rikawlrri [seq id no :34]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列faklaarlyr[seq id no :35]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的 ptd为具有氨基酸序列kafaklaarlyr[seq id no :36]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列yaraaarqara[seq id no :5]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列faklaarlyrka[seq id no 43]的结构域。根据另一实施方案，治疗性激酶抑制剂肽的ptd为具有氨基酸序列 kafaklaarlyrka[seq id no 44]的结构域。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA [SEQ ID NO 14]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :12]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO :15]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :16] 的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO 17]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列 YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO 18]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]的肽。根据另一实施方案，治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO 20]的肽。根据另一实施方案， 治疗抑制剂肽为具有氨基酸序列yaraaargqrakalnrqlgvaa[seq ID NO =21]的肽。根据另一实施方案，激酶抑制组合物还包含药学上可接受的载体。根据另一实施方案，激酶抑制组合物经胃肠外给予。根据另一实施方案，激酶抑制组合物经由生物医学装置给予，所述生物医学装置包含至少一种分离的治疗抑制剂肽，其中将所述一种或多种分离的治疗抑制剂肽置于所述装置上面或里面。在一些这类实施方案中，所述至少一种治疗抑制剂肽为具有选自以下的氨基酸序列的至少一种肽 WLRRIKAffLRRIKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :14]、FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 12]、 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 15], YARAAARQARAKALARQLGVAA[SEQ ID NO :11]、 YARAAARQARAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO : 16]、YARAAARGQRAKALARQLAVA[SEQ ID NO: 17]、 YARAAARGQRAKALARQLGVA[SEQ ID NO : 18]、YARAAARGQRAKALNRQLAVA[SEQ ID NO :19]、 YARAAARGQRAKALNRQLGVA[SEQ ID NO :20]和 YARAAARGQRAKALNRQLGVAA[SEQ ID NO :21]。可用于本发明的分子遗传学和遗传工程的一般方法阐述于以下文献中当前版的 Molecular Cloning :A Labatory Manual(Sambrook 等，1989, Cold Spring Harbor Labatory Press)；基因表达技术(Methods in Enzymology，第 185 卷，由 D. Goeddel 编
1991. Academic Press, San Diego, CA) > Methods in Enzymology 巾白勺“胃白M^feftl 指南”(Μ· P. Deutshcer 编辑(1990) Academic Press, Inc.) ；PCR Protocols :A Guide toMethods and Applications(Innis等，1990.Academic Press,San Diego,CA) ；Culture of Animal Cells :A Manual of Basic Technique,第 2 版(R. I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY)；禾口 Gene Transfer and Expression Protocols,第 109-128 页，EJ. Murray 编辑，The Humana Press Inc.，Clifton，N. J.)。用于遗传操作的试剂、克隆载体和试剂盒可自商业供应商获得，例如 BioRad、Stratagene> Invitrogen、ClonTech 禾口 Sigma-Aldrich Co。除非上下文另外明确指出，否则当提供数值范围时，应该理解的是，在该范围的上限和下限之间的每一个介于其间的值(到下限单位的十分之一)、在该范围的任何其它规定值或介于其间的值都包括在本发明内。可独立包括在较小范围内的这些较小范围的上限和下限亦包括在本发明内，在规定范围内服从任何明确的排除限制。当规定范围包括一种或两种限制时，排除那些所含限制的任一种的范围亦包括在本发明中。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。尽管与本文所述方法及材料相似或等同的任何方法及材料亦可用于本发明实施或试验中，但现在陈述优选的方法及材料。本文提及的所有出版物在此引作参考，以揭示和阐述与该出版物关连引用的方法和/或材料。应该注意，除非上下文明确另外指出，否则在本文及随附权利要求中所用的单数形式“一个”、“和”及“所述”包括复数提及物。本文所用的所有技术与科学术语具有相同的含义。本文公开的出版物仅因其公开内容先于本发明提交日期而提供。任何事物在此不能理解为承认由于先前发明本发明无早于所述出版物的权利。另外，提供的出版物的日期可能不同于实际出版日期，所述实际出版日期可能需要独立确认。
实施例提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何获得和使用本发明的完整公开内容和阐述，并非意欲对本发明人认为的其发明范围的限制，亦非意欲代表以下实验为全部实验或仅仅实施这些实验。一直努力确保有关所用数值(例如量、温度等)的准确性，但某些实验误差和偏差在所难免。除非另外指出，否则等份为重量等份，分子量为重量平均分子量，温度为摄氏温度，压力为大气压或接近大气压。方法肽合成和纯化在 Symphony 肽合成仪(Protein Technologies, Inc.)的 Rink-酰胺或Knorr-酰胺树脂(Synbiosci Corp.)上用标准FMOC化学来合成肽。氨基酸的偶联试剂(Synbiosci Corp.)为2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲.锚六氟磷酸盐/N-甲基马来酰亚胺(HBTU/NMM)。合成后，将肽用基于三氟乙酸的混合物从树脂上裂解，在醚中沉淀，通过离心回收。让回收的肽在真空中干燥，重悬于MilliQ纯水中，并用配备有22/250 C18制备型柱(Grace Davidson)的快速蛋白液相色谱(FPLC) ( AKTA Explorer,GE Healthcare)纯化。用含恒定浓度的0.1%三氟乙酸或0.1%乙酸的乙腈梯度实现纯化。通过飞行时间基质辅助激光解吸附电离(MALDI)质谱法用4800 Plus MALDI T0F/T0FTM分析仪(Applied BioSystems)来确证所期需的分子量。
实施例1. MK2的治疗抑制剂肽的必需氨基酸的测定用Ala和D-氨基酸取代鉴定MK2的治疗抑制剂肽必需氨基酸。100 μ M的 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]抑制73%的ΜΚ2活性。首先，用Ala独立置换治疗结构域 (KALNRQLGVAA) [SEQ ID NO 13]中的每一个氨基酸。然后，用其D-氨基酸独立置换所述肽的治疗结构域的每一个氨基酸。基于荧光的激酶活性测定用针对MAPKAP-K2 试剂盒(Invitrogen，Carlsl3ad，CA)的 Omnia.激酶测定来测定
在表1中所列每一种肽存在和不存在下的MK2反应速度。试剂盒含有专用的反应缓冲液， 其中加入以下物质(所给为最终浓度)lmM ATP、0. 2mM DTTUOyM MAPKAP-K2 Sox-修饰的肽底物、5ng MK2和目的抑制剂肽(终体积为50 μ L)。人ΜΚ2购自hvitrogen。在试剂盒提供的低蛋白质结合的96-孔板的孔中于30°C进行反应，用SpectraMax M5分光光度计 (Molecular Devices)在20分钟内每30秒取样进行荧光读数测定(激发光=360nm，发射光=485nm)。根据相对荧光单位与时间关系曲线图的斜率确定每一个反应孔的反应速度。 每一抑制剂肽测定至少四个浓度12. 5,25,50和100微摩尔(一式三份)。在表1中，“a”代表所示结果为对所有肽100 μ M时的结果；“b”代表ΜΚ2反应速度对未取代的肽(KALNRQLGVAA) [SEQ ID NO :13]在100 μ M浓度时的百分比变化；“C”代表 3个样品间报告为标准偏差的误差。表1.在基于荧光的激酶活性测定中检测的肽
所检测的抑制剂肽aKALNRQLGVAAe [SEQ ID NO: Wj反应速度 (+VOSD>c 的》/。SEQ ID NO:丙氨酸取代KAANRQLGVAA+52(6)22KALARQLGVAA-61(2)23KALNAQLGVAA+258(14)24KALNRQLGVAA+258(26)13JCALNRQAGVAA+18(7)26KALNRQLAVAA-28(5)27KALNRQLGAAA+273(22)28p-M·酸取代KAdLNRQLGVAA46(7)KALdNRQLGVAA-5(10)中牢*KALNdRQLOVAA+206(7)* * *KALNRdQLGVAA+176(5)KALNRQdLGVAA+257(17)* * *KALNRQLGdVAA+160(23)其它修饰KALNRQLGVA0(5)29KKKALNRQLGVAA-9(8)30WLRHIKAWLRRIKALNRQLGV-132(10)36细胞渗透性肽结构域WLRRIKA (非功能性)4306(21)32WLRRIKAWLKRIKA-83(4)31YGRKEiRRQRRR+44(17)33YARAAARQARA+149(13)5 D-氨基酸和Ala扫描显示对于ΜΚ2抑制而言，Asn不是必不可少的(参见表1、图 3和图4)。
图3显示反应速度(荧光单位/秒)(RFL/s))与MK2抑制剂肽浓度(μ Μ)的关系曲线图，其中抑制剂肽掺入了丙氨酸取代。置换Asp和Ala增强了 ΜΚ2抑制。Ala取代Gly 稍微增加抑制。Ala扫描亦显示Arg、Gln和Val对ΜΚ2抑制必不可少。尽管两个Leu不是很必需的氨基酸，但将其除去减弱了治疗抑制剂肽的功效。图4显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图，其中抑制剂肽掺入D氨基酸取代。没有D-氨基酸取代实质地增强ΜΚ2抑制；大部分D-氨基酸取代实质地降低ΜΚ2抑制剂肽的功效。图5显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂肽浓度(μ M)的关系曲线图，其中抑制剂肽经过修饰。表1和图5显示C-末端Ala(IOOyM)不提高ΜΚ2抑制，抑制剂肽中的另外两个Lys稍微增加抑制。然而，一旦除去C-末端Ala或添加两个N-末端Lys，较低浓度的抑制剂肽降低MK2抑制。实施例2. MK2的PTD抑制用三种PTD 来证明 PTD 的 MK2 抑制:1)WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31] ；2) YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO 33]；和 3)YARAAARQARA[SEQ ID NO :5]。图6显示反应速度(RFU/s)与MK2抑制剂浓度(μ Μ)的关系曲线图，其中抑制剂肽为蛋白质转导结构域。表1和图4显示，不管PTD肽浓度怎样，ΜΚ2抑制极少受PTD肽 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]的影响。PTD 肽 YGRKKRRQRRR[SEQ ID NO :33]在广泛的 PTD 肽浓度范围内(从100 μ M PTD抑制61 %到25 μ M PTD抑制48% )抑制ΜΚ2活性。ΜΚ2受到PTD肽WfLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]的有效抑制；该PTD肽比治疗结构域肽提供更高的ΜΚ2抑制。表1进一步显示PTD肽WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO :31]和治疗结构域 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO: 13]组合，提供协同抑制作用。实施例3.对治疗结构域的修饰影响IC5tl对治疗抑制剂肽的治疗结构域进行修饰以影响IC5tl值。然后用放射性测定分析经修饰的治疗抑制剂肽。放射性测量的IC5tl和激酶活性测定用商业放射性测定服务(Millipore，Billerica, ΜΑ)来检测含有偶联的转导结构域和治疗结构域的肽(下文称为“完整肽”)的特异性和效价。在这些测定中，若激酶未受到抑制剂肽的抑制，则来自ATP的放射标记的磷酸基团使带正电荷的底物磷酸化。所述带正电荷的底物被吸引到带负电荷的过滤膜，用闪烁计数器定量测定，与100%的活性对照相比。选择ATP的表观Km在15 μ M之内的ATP浓度，因为靠近该Km的ATP浓度可让激酶具有相同的相对量的磷酸化活性。表2显示包括在屏幕中的激酶的缓冲液组成；(h)=人，(m)=小鼠，(r)=大鼠， 和(y)=酵母
权利要求
1.一种用于治疗炎性病症的激酶抑制组合物，所述病症的病理生理学包括炎性细胞因子表达，所述组合物包含(a)治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中所述治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶，其中所述治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中所述第一结构域包含蛋白质转导结构域并位于第二结构域的近侧，其中所述第二结构域包含治疗结构域并位于第一结构域的近侧；和(b)药学上可接受的载体，其中所述组合物直接或间接降低至少一种炎性细胞因子的表达。
2.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列 YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11]具有基本同一性的肽。
3.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的治疗结构域与氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。
4.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的转导结构域与氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。
5.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。
6.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。
7.权利要求6的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的转导结构域与氨基酸序列 FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。
8.权利要求1的组合物，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。
9.权利要求8的组合物，其中所述治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO: 15]具有基本同一性的肽。
10.权利要求1的组合物，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一个具有至少 90% 同一性，并抑制TNF-α分泌。
11.权利要求1的组合物，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO IUSEQ ID NO 12,SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一个具有至少 90% 同一性，并抑制IL-I β分泌。
12.权利要求1的组合物，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO IUSEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13 禾口 SEQ ID NO :15 中的至少一个有至少 90% 同一性，并抑制IL-6分泌。
13.权利要求1的组合物，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。
14.权利要求13的组合物，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2。
15.权利要求13的组合物，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。
16.权利要求1的组合物，其中所述激酶为Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶。
17.权利要求1的组合物，其中所述其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症为选自以下的至少一种病症哮喘、强直性脊柱炎、I型糖尿病、格-巴综合征、狼疮、银屑病、硬皮病、斯耶格伦病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎、高敏感性脉管炎、内毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、缺血、内膜增生、狭窄、再狭窄、平滑肌瘤、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛、心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、雷诺病、 溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、血管病变、充血性心力衰竭、心肌顿挫、舒张期功能障碍、神经胶质增生、慢性阻塞性肺病、骨质减少、变性关节炎、脓毒病、肝硬化、间质纤维化、结肠炎、阑尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、耳炎、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、心代谢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾原性系统性纤维化、乳腺癌、前列腺癌和内皮细胞功能障碍。
18.权利要求1的组合物，其中所述至少一种炎性细胞因子为IL-6、TNFa和IL_1β中的至少一种。
19.权利要求1的组合物，其中将所述组合物置于生物医学装置上面或里面。
20.一种用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法，所述方法包括以下步骤(a)提供激酶抑制组合物，其中所述激酶抑制组合物包含(i)治疗有效量的治疗抑制剂肽，其中所述治疗有效量的治疗抑制剂肽抑制至少一种激酶，其中所述治疗抑制剂肽包含第一结构域和第二结构域，其中所述第一结构域包含位于第二结构域的近侧的蛋白质转导结构域，其中所述第二结构域包含位于第一结构域的近侧的治疗结构域；和( )药学上可接受的载体；(b)将所述激酶抑制组合物给予有需要的受试者，从而抑制至少一种激酶；和(c)降低至少一种炎性细胞因子的表达，从而治疗所述病症。
21.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列 YARRAAARQARAKALARQLGVAA [SEQ ID NO 11]具有基本同一性的肽。
22.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的治疗结构域与氨基酸序列 KALNRQLGVAA[SEQ ID NO 13]具有基本同一性。
23.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 WLRRIKAWLRRIKA[SEQ ID NO 31]具有基本同一性。
24.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 YARAAARQARA[SEQ ID NO 5]具有基本同一性。
25.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 FAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 43]具有基本同一性。
26.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 FAKLAARLYRKALARQLGVAA[SEQ ID NO 12]具有基本同一性。
27.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽的蛋白质转导结构域与氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKA[SEQ ID NO 44]具有基本同一性。
28.权利要求20的方法，其中所述治疗抑制剂肽为其氨基酸序列与氨基酸序列 KAFAKLAARLYRKALARQLGVAA [SEQ ID NO 15]具有基本同一性的肽。
29.权利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO=IU SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 15中的至少一个有至少90%同一性，并抑制 TNF-α分泌。
30.权利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO=IU SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 15中的至少一个有至少90%同一性，并抑制 IL-I β分泌。
31.权利要求20的方法，其中所述多肽包含至少一种变体，所述变体与SEQID NO=IU SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13和SEQ ID NO :15中的至少一个有至少90%同一性，并抑制 IL-6分泌。
32.权利要求20的方法，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶。
33.权利要求32的方法，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶2。
34.权利要求32的方法，其中所述激酶为促分裂原活化蛋白激酶活化蛋白激酶3。
35.权利要求20的方法，其中所述激酶为Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶。
36.权利要求20的方法，其中所述其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症为选自以下的至少一种病症哮喘、强直性脊柱炎、I型糖尿病、格_巴综合征、狼疮、银屑病、 硬皮病、斯耶格伦病、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、炎性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、类风湿性关节炎、脉管炎、高敏感性脉管炎、内毒素休克、胰腺炎、局限性炎性疾病、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、缺血、内膜增生、狭窄、再狭窄、平滑肌瘤、平滑肌痉挛、心绞痛、普林兹迈托心绞痛、心动过缓、高血压、心脏肥大、肾衰竭、中风、肺动脉高压、妊娠毒血症、雷诺病、溶血性尿毒症、肛裂、失弛缓症、阳痿、偏头疼、血管病变、充血性心力衰竭、心肌顿挫、舒张期功能障碍、神经胶质增生、慢性阻塞性肺病、骨质减少、变性关节炎、脓毒病、肝硬化、间质纤维化、结肠炎、阑尾炎、胃炎、喉炎、脑膜炎、耳炎、外伤性脑损伤、脊髓损伤、周维神经病变、多发性硬化、心代谢综合征、非酒精性脂肪性肝炎、胰和肺的囊性纤维化、注射性纤维化、心内膜心肌纤维化、肺的特发性肺纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、肾原性系统性纤维化、乳腺癌、前列腺癌和内皮细胞功能障碍。
37.权利要求20的方法，其中所述至少一种炎性细胞因子为IL-6、TNFα和IL-I β中的至少一种。
38.权利要求20的方法，其中通过植入生物医学装置进行给予步骤(a)，其中将所述组合物置于所述装置上面或里面。
39.权利要求20的方法，其中给予步骤(a)为胃肠外给予。
全文摘要
本发明提供含有治疗量的抑制至少一种激酶的治疗抑制剂肽的激酶抑制组合物、用于治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法、和用所述激酶抑制组合物治疗其病理生理学包括炎性细胞因子表达的炎性病症的方法。
文档编号A61K38/00GK102316731SQ200980156800
公开日2012年1月11日 申请日期2009年12月9日 优先权日2008年12月10日
发明者A·帕尼奇, B·西尔 申请人:普渡研究基金会