专利名称：抑制p24蛋白产生或促进p24蛋白消除的方法和药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的方法和药物组合物。
背景技术：
本发明涉及药物领域，可用于抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除。在人体内检出的P24蛋白在本领域是已知的(参见Papadopulos-Eleopulos E,Turner VF,Papadimitri ou JM.1s a positive western blot proof of HIV infection Biotechnology(NY)，1993 年六月；11(6):696-707)。使用缀合有抗趋化因子受体的抗CD4分子抗体来治疗HIV-1在本领域是已知的(WO 01/43779A2，A61K 47/48，2001)。然而，在所述来源中缺少关于这一药物的治疗效力的
实验数据。Dr.0leg 1.Epshtein已发现了经顺势疗法技术强化的极度稀释形式(或极低形式)抗体(活性强化形式，activated potentiated form)的治疗效果。例如，美国专利号7，582，294公开了通过给予抗前列腺特异性抗原(PSA)的、顺势疗法活性形式的抗体来治疗良性前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia)或前列腺炎(prostatitis)的药齐U。极低剂量的抗Y干扰素抗体已显示出在病毒病因疾病的治疗和预防中有用。参见美国专利号7，572，441，以引用的方式将其内容整体并入本文。免疫细胞的⑶4受体或⑶4(表面抗原分化簇4, cluster of differentiation
4)为在免疫细胞表面表达的糖蛋白，所述免疫细胞例如白血球、辅助性T细胞(T helpercells)、调节T细胞(regulatory T cells)、单核细胞、巨噬细胞以及树突状细胞(dendrytic cells)。类似于许多细胞表面受体/细胞表面标记物，CD4为免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily)中的一员。0)4是辅助T细胞受体(TCR)与抗原递呈细胞的共受体(co-receptor)。CD4利用其处于T细胞内部的部分通过募集(recruiting)酶放大由TCR产生的信号，所述酶已知为淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶，在活化T细胞中对多种参与信号级联(signalling cascasde)的分子的活化是必不可少的。⑶4还利用其胞外域(extracellular domain)直接与抗原递呈细胞表面的MHC II类分子相互作用。HIV-1利用⑶4获得进入宿主T细胞的入口，并通过将已知为gpl20的病毒包膜蛋白结合至⑶4来完成这一过程。与⑶4的结合使gpl20的构象产生变化，允许HIV-1结合至宿主细胞上表达的共受体。这些共受体为趋化因子受体CCR5或CXCR4，在感染过程中这些共受体中何者得以利用取决于病毒感染的是巨噬细胞还是辅助T细胞。在另一病毒蛋白(gp41)结构改变之后，HIV将融合肽(fusion peptide)插入宿主细胞，允许病毒外膜与细胞膜融合。参见 Miceli MC, Parnes JR(1993), “Role of CD4 and CD8 in T cell activation anddifferentiation，，，Adv.1mmunol.53:59_122。本发明针对抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的方法和药物组合物。对现有问题的解决方案具有用于抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的药物组合物的形式，所述药物组合物包含活性强化形式的抗⑶4受体抗体。
发明内容
在一个方面，本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含活性强化形式的抗CD4受体抗体。在一个实施方式中，所述药物组合物进一步包含固态载体，其中，将所述活性强化形式的抗CD4受体抗体浸溃至固态载体上。在一个变型中，药物组合物处于片剂形式。优选地，包含所述活性强化形式的抗⑶4受体蛋白抗体的药物组合物处于C12、C30和C200顺势疗法稀释液(homeopathic dilutions)的混合物形式。特别在考虑之列的是，将所述C12、C30和C200顺势疗法稀释液的混合物浸溃至固态载体上。优选地，包含所述活性强化形式的抗CD4受体抗体的药物组合物处于C12、C30和C50顺势疗法稀释液的混合物形式。特别在考虑之列的是，将所述C12、C30和C50顺势疗法稀释液的混合物浸溃至固态载体上。活性强化形式的抗CD4受体抗体可为单克隆抗体、多克隆抗体或天然抗体。特别在考虑之列的是，活性强化形式的抗CD4受体抗体为多克隆抗体。本发明提供了针对抗原的活性强化形式的抗体，所述抗原具有说明书中所述和所附的权利要求书中所要求保护的序列。在一个变型中，药物组合物包含通过连续的百倍稀释(successive centesimaldilutions)、且每次稀释时伴以振荡而制备的活性强化形式的抗CD4受体抗体。特别在考虑之列的是竖直振荡(vertical shaking)。在另一方面，本发明提供了抑制`P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的方法，所述方法包括给予活性强化形式的抗CD4受体抗体，从而抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除。优选地，活性强化形式的抗⑶4受体抗体以药物组合物的形式给药。在一个实施方式中，药物组合物以固体口服剂型的形式给药，所述固体口服剂型包含药学上可接受的载体和浸溃至所述载体上的所述活性强化形式的抗CD4受体抗体。在一个变型中，所述固体口服剂型是片剂。提供了变型和实施方式。根据本发明的方法方面，可将药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药1-4次。在一个变型中，药物组合物每日给药2次，每次给药由2种口服剂型组成。在一个变型中，药物组合物以1-2单位剂型给药，各剂型每日给药2次。可将关于本发明组合物方面所述的所有变型与实施方式以本发明的方法方面进行使用。
具体实施例方式参考所附的权利要求书对本发明进行限定。考虑到权利要求书，下述术语汇编提供了有关定义。本文所使用的术语“抗体”的意味着特异性地结合至另一分子的特定空间和极性结构、并因此被定义为与另一分子的特定空间和极性结构互补的免疫球蛋白。权利要求书中所列举的抗体可包括完全免疫球蛋白或其片段，可为天然抗体、多克隆抗体或单克隆抗体，并可包括多个类及同种型，例如IgA、IgD、IgE、IgGl、IgG2a、IgG2b和IgG3、IgM等。免疫球蛋白的片段可包括Fab、Fv和F(ab' )2以及Fab'等。单数“抗体(antibody) ”包括复数“抗体(antibodies)”。
相对于本文所列举的抗体，术语“活性强化形式”或“强化形式”分别用于表示任意的抗体初始溶液的顺势疗法强化产物。“顺势疗法强化”表示利用顺势疗法的方法对有关物质的初始溶液赋予顺势疗法效力(potency)。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如结合外部处理、尤其是竖直(机械)振荡的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分(即抗体溶液)的优选过程为:使用抗体初级基质溶液(primarymatrix solution)(原始ET剂，mother tincture)分别被稀释 10012、1003CI 和 IOO200 倍的 3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液(C12、C30和C200);或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释10012、1003°和1005°倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液(C12、C30和C50)。在美国专利号7，572，441和7，582，294中描述了顺势疗法强化的实例，以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的。同时，术语“活性强化形式”用在权利要求书中，术语“极低剂量”用在实施例中。术语“极低剂量”在通过研究和使用顺势疗法稀释和强化形式的物质而产生的领域中成为行业术语。术语“极低剂量”意味着完全支持并与权利要求书中的所使用的术语“活性强化”形式基本上同义。换句话说，当存在三个因素时，抗体处于“活性强化”或“强化”形式。首先，“活性强化”形式的抗体为顺势疗法领域广泛接受的制备方法的产品。其次，“活性强化”形式的抗体必须具备通过现代药物学广泛接受的方法确定的生物活性。第三，“活性强化”形式的抗体所表现出的生物活性不能由顺势疗法方法终产物中的抗体分子形式的存在加以解释。例如，抗体的活性强化形式可通过使处于分子形式的初始独立抗体经受联合外部作用(如机械振荡)的连续多重稀释而制备。浓度降低过程中的外部处理还可通过例如暴露至超声、电磁或其它物理因素 来完成。V.Schwabe, “Homeopathic medicines”, M., 1967,美国专利号7，229，648和4，311，897 (以引用的方式将其内容整体并入本文并用于所述目的)描述了顺势疗法领域中广泛接受的顺势疗法强化方法。这一过程使得初始分子形式抗体的分子浓度的均匀降低。重复这一过程直至获得期望的顺势疗法效力。对于单独的抗体，可通过将中间稀释液在期望的药理学模型中进行生物测试来确定所需的顺势疗法效力。尽管不限于此，但是“顺势疗法强化”可包括例如与外部处理、尤其是竖直(机械)振荡相结合的重复的连续稀释。换句话说，根据顺势疗法技术，对抗体的初始溶液进行连续的重复稀释并对每次获得的溶液进行多次竖直振荡。抗体处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备各组分(即抗体溶液)的优选过程为:使用抗体初级基质溶液(原始酊剂)分别被稀释10012、1003°和1002°°倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200 ;或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释10012、1003°和1005°倍的3种水稀释液或水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C50。例如在美国专利号7，229，648和4,311,897中，也提供了如何获得期望效力的实例，以引用方式将其并入本文用于所述目的。在下文将更加详细地描述适用于本文所述的“活性强化”形式抗体的过程。关于用顺势疗法对人类受试者进行治疗已有许多争议。虽然本发明依靠已接受的顺势疗法方法来获得“活性强化”形式的抗体，但是其并不仅仅依赖于在人类受试者中进行顺势疗法来证明其活性。本申请的发明人出乎预料地发现、并在已接受的药理学模型中充分证明，由起始分子形式的抗体进行连续多次稀释而最终得到的溶剂具有明确的活性，且与痕量分子形式抗体在目标稀释液中的存在无关。将本文所提供的“活性强化”形式的抗体在广泛接受的药理学活性模型中测试其生物活性。下文进一步提供的实验提供了在此类模型中的生物活性的证据；其与以下作用相关:更高的抗病毒作用以及可能的免疫趋向作用(immunotropic action)、⑶4淋巴细胞活性增强以及⑶4细胞表面上受体数量的富集。同样，所要求保护的“活性强化”形式的抗体仅涵盖溶液或固体制剂，所述溶液或固体制剂的生物活性不能由初始、起始溶液中余留的分子形式抗体的存在进行解释。换句话说，虽然“活性强化”形式的抗体可包含痕量的初始分子形式抗体也在考虑之列，但是由于连续稀释后余留的分子形式抗体的浓度极低，因此本领域技术人员不能以任何程度的合理性将在已接受的药理学模型中观察到的生物活性归因于余留的分子形式抗体。虽然本发明并不受任何具体理论的限制，但是本发明的“活性强化”形式抗体的生物活性并不归因于初始分子为处于液体形式或固体形式的、“活性强化”形式的抗体，其中分子形式抗体的浓度低于阿伏伽德罗常数。在分子形式治疗物质的药物学中，通常制作剂量-响应曲线，在该曲线中，以药理学响应水平对所给予受者或在体外进行测试的活性药物的浓度作图。产生任何可检测的响应的药物最低水平被称为阈剂量(threshold dose)。特别在考虑之列并优选的是，“活性强化”形式的抗体以低于所给定生物学模型中的分子形式抗体的阈剂量的浓度包含分子抗体(如果有的话)。本发明提供了药物组合物，所述药物组合物包含:活性强化形式的抗⑶4受体抗体，如下文中更加详细的描述，所述抗体根据强化的顺势疗法技术通过重复、持续的稀释和中间产物的外部振荡作用来制备。本发明的药物组合物在抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除方面特别有用。如实施例中所示，本发明的药物组合物具备预料不到的治疗效果，这显示了药物组合物本身在与P24蛋白产生增加相联系的疾病的治疗方面具有特别疗效。本发明的药物组合物扩展了可用于抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的制剂库。根据本发明的这一方面的药物组合物可处于液态或固态形式。药物组合物中所含的活性强化形式抗体由初始分子形式的抗体通过顺势疗法领域所接受的方法制备。起始抗体可为根据已知方法制备的单克隆抗体或多克隆抗体，所述已知方法例如Immunotechniques, G.Frimel, M., “Meditsyna”，1987,第 9-33 页;“Hum.Antibodies.Monoclonal and recombinant antibodies, 30years after，，，Laffly E., Sodoyer R.著，2005，Vol.14.，Nl-2.，第33-55页中所述，以引用的方式将其内容并入本文。单克隆抗体可通过如杂交瘤技术获得。所述方法的初始步骤包括基于已在多克隆抗血清制备过程中开发出的原则进行免疫。工作的进一步步骤包括制备出产生具有相同特异性的抗体克隆的杂交细胞。其各自的分离使用与多克隆抗血清制备情况中相同的方法进行。多克隆抗体可通过动物的主动免疫获得。为了这一目的，例如使合适的动物(如兔)接受适当抗原(CD4 受体)的一系列注射。动物的免疫系统产生相应的抗体，以已知方法从动物中进行收集。这一过程使得能够制备富含单特异性抗体的血清。如果需要的话，包含抗体的血清例如可通过使用亲和色谱、盐沉淀分级分离或离子交换色谱进行纯化。可将所得到的经纯化的、富含抗体的血清用作制备活性强化形式抗体的起始材料。所得到的处于溶剂(优选水或水-乙醇混合物)中的初始抗体溶液的优选浓度范围为约0.5mg/ml至约5.0mg/ml。制备本发明所述复合药物的各组分的优选过程为:使用抗体初级基质溶液分别被稀释10012、IOO30和1005°倍的3种水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C50 ;或者使用抗体初级基质溶液分别被稀释10012、1003°和1002°°倍的3种水-醇稀释液的混合物，相当于百倍顺势疗法稀释液C12、C30和C200。为制备固体剂型，将固态载体通过顺势疗法方法用所获得的期望稀释液进行处理。为获得本发明复合物的固体单位剂型，用各稀释液对载体物质进行浸溃。为制备期望的复合剂型，两种浸溃顺序都是适合的。在优选的实施方式中，用于制备包含本发明所述药物组合物的活性强化形式的起始材料是针对相应抗原的动物产多克隆抗体，即，CD4受体。为获得活性强化形式的抗CD4受体多克隆抗体，可将期望的抗原作为免疫原注射入实验动物、优选兔中。抗CD4受体多克隆抗体可使用以下序列的人CD4受体的整个分子获得:SEQ ID NO:1 Met Asn Arg Gly Val Pro Phe Arg His Leu Leu Leu Val Leu GlnI51015Leu Ala Leu Leu Pro Ala Ala Thr Gln Gly Lys Lys Val Val Leu16202530Gly Lys Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gln31354045Lys Lys Ser lie Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn Gln lie Lys46505560lie Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys61657075Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp Gln Gly76808590Asn Phe Pro Leu lie lie Lys Asn Leu Lys lie Glu Asp Ser Asp9195100105Thr Tyr lie Cys Glu Val Glu Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu106110115120Leu Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn Ser Asp Thr His Leu Leu Gln121125130135Gly Gln Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu Ser Pro Pro Gly Ser Ser136140145150Pro Ser Val Gln Cys Arg Ser Pro Arg Gly Lys Asn lie Gln Gly151155160165Gly Lys Thr Leu Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu Gln Asp Ser Gly166170175180Thr Trp Thr Cys Thr Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys Val Glu Phe
权利要求
1.一种抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的方法，所述方法包含给予活性强化形式的抗CD4受体抗体从而抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体针对的是具有SEQ ID NO:1的完整CD4受体。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体针对的是具有下述序列的CD4受体片段，所述序列选自于由以下序列所组成的组:SEQ ID NO:2,SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体处于C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，所述混合物浸溃至固态载体上。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体处于C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，所述混合物浸溃至固态载体上。
7.一种用于抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的药物组合物，所述药物组合物包含活性强化形式的抗CD4受体抗体。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体针对的是具有SEQ ID NO:1的完整⑶4受体。
9.如权利要求7所述的药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体针对的是具有下述序列的CD4受体片段，所述序列选自于由以下序列所组成的组:SEQ ID N0:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID N O:4、SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
10.如权利要求7所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体通过连续的百倍稀释、且每次稀释时均伴以振荡而制备。
11.如权利要求7所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体处于C12、C30及C50顺势疗法稀释液的混合物形式，所述混合物浸溃至固态载体上。
12.如权利要求7所述的复合药物组合物，其中，所述活性强化形式的抗CD4受体抗体处于C12、C30及C200顺势疗法稀释液的混合物形式，所述混合物浸溃至固态载体上。
全文摘要
本发明涉及包含活性强化形式的抗CD4受体抗体的药物组合物，以及抑制P24蛋白产生或促进P24蛋白消除的方法。
文档编号A61P31/18GK103179987SQ201180038840
公开日2013年6月26日 申请日期2011年7月15日 优先权日2010年8月6日
发明者奥列格·伊里奇·爱泼斯坦, 谢尔盖·亚历山德罗维奇·塔拉索夫 申请人:奥列格·伊里奇·爱泼斯坦