一种药物组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明一种药物组合物及其应用，属于中医药【技术领域】。所述药物组合物由胡桃苷B和淫羊藿素按照重量比1:1组成。本发明还公开了所述药物组合物在制备治疗肝癌药物中的应用。本发明具有配制简单，疗效好，无副作用，安全性高，有利于患者及时减轻病状，具有良好的开发前景及社会和经济效益的优点。
【专利说明】一种药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中医药【技术领域】，具体涉及一种药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 原发性肝癌（primary hepatic carcinoma, PHC)简称肝癌（hepatoma)，是指原发 于肝细胞或肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤，被称为"肿瘤之王"。其死亡率位列全世界第五， 我国第三。根据世界卫生组织统计，在2030年前，肝癌都将保持持续增长，其死亡率将高居 第二位。
[0003] 目前，国内对晚期肝癌没有好的治疗方法。传统治疗方法有手术、放疗、化疗和介 入治疗。这些治疗手段不仅价格昂贵，而且治疗过程常给患者带来巨大的痛苦。如国内外 公认的晚期肝癌靶向药物索拉菲尼一年的单一药费就十几万，而且对患者生命的延长时间 只有几个月，同时可能会伴有腹泻、皮疹、高血压等较严重不良反应。因此，寻找高效、安全、 经济的抗肿瘤药物也成为医药学者的重要课题。
[0004] 抗癌药物的研发一直是药学研究的热点，抗肿瘤药物中有超过70%是天然产物或 其衍生物，如紫杉醇及其衍生物是目前临床应用效果较好的抗肿瘤药物之一。因此，从天然 植物中寻找抗癌化合物或前体化合物，并将其有效组合对于肿瘤的治疗具有重要意义。
【发明内容】
[0005] 胡桃苷B(Juglanoside B)为（4S)-4,5_ 二羟基-α-四氢萘酮-4-0-β-?-批喃葡 糖苷，结构式如图1所示，为一种天然的苷类化合物，其大量存在于青龙衣中。青龙衣为胡 桃科胡桃属植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.)未成熟的外果皮，主产于河北、山 东、东北等地，资源极为丰富。古代诸家多以其清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效入药。 现代研究表明，青龙衣在临床应用广泛，可用于治疗多种癌症，如胃癌、肺癌等，且其治疗效 果显著。近年来，随着人们对青龙衣化学成分和药理作用研究的不断深入，人们发现胡桃苷 B表现出一系列的药理学功能，包括抗炎、抗肿瘤、促进凋亡、保护肝损伤等作用。
[0006] 淫羊藿素（Icaritin)是淫羊藿苷的水解产物，分子量为386. 4,结构式如图2所 示，存在于淫羊藿中。淫羊藿又名仙灵脾、羊藿叶等，为小檗科植物淫羊藿属的干燥叶。中 国淫羊藿资源极为丰富，约占世界总资源量的80%左右。主要有坚筋骨、补肾阳、强心力等 药用价值。现代药理研究表明，淫羊藿中的单一成分淫羊藿素能保护心血管系统，促进骨骼 生长、调节免疫、抗肿瘤等功能。
[0007] 本发明的目的在于公开了一种药物组合物。
[0008] 本发明的另一个目的在于公开了上述药物组合物的应用。
[0009] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0010] 一种药物组合物，其中，所述药物组合物由胡桃苷B和淫羊藿素组成，其中胡桃苷 B与淫羊藿素之间的重量比为1:1。
[0011] 上述技术方案所述的药物组合物，其中，所述药物组合物用于制备治疗肝癌的药 物。
[0012] 上述技术方案所述的药物组合物，其中，药物组合物的剂型为医学上可接受的剂 型。
[0013] 上述技术方案所述的药物组合物，其中，药物组合物的剂型为粉剂、注射液、胶囊、 片剂或口服液中的一种。
[0014] 上述技术方案所述的药物组合物在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0015] 上述技术方案所述的应用，其中，药物组合物的具有降低JAK2和STAT3的mRNA水 平的作用。
[0016] 上述技术方案所述的应用，其中，药物组合物的剂型为医学上可接受的剂型。
[0017] 上述技术方案所述的应用，其中，药物组合物的剂型为粉剂、注射液、胶囊、片剂或 口服液中的一种。
[0018] 本发明具有以下有益效果：
[0019] 1、在体外培养的人肝癌细胞Η印G2和鼠肝癌瘤株H22中，本发明的药物组合物与单 独使用胡桃苷B或淫羊藿素相比，可以显著抑制两种肝癌细胞的活性。
[0020] 2、在利用Η印G2细胞和H22细胞构建的小鼠转移瘤中，本发明的药物组合物与单独 使用胡桃苷B或淫羊藿素相比，可以显著抑制肿瘤的生长。
[0021] 3、本发明的药物组合物对肿瘤细胞生长抑制具有一定特异性，在相同浓度作用 下，药物组合物对正常大鼠肝细胞BRL-3A的生长无明显影响。因此，本发明的药物组合物 可用于肝癌的治疗，即其既可以发挥对肿瘤细胞的抑制作用，又可以发挥对正常肝细胞的 保护作用。
[0022] 4、本发明的药物组合物能够降低JAK2和STAT3的mRNA水平，说明本发明的药物 组合物抑制肝癌细胞的增殖是通过JAK-STATs通路发挥作用，为治疗肝癌提供了一种新的 药物和方法。
[0023] 5、本发明的药物组合物不仅配制简单，疗效好，无副作用，安全性高，有利于患者 及时减轻病状，具有良好的开发前景及社会和经济效益。
【专利附图】
【附图说明】：
[0024] 1、图1是胡桃苷B结构式；
[0025] 2、图2是淫羊藿素结构式；
[0026] 3、图3是各给药组对HepG2细胞生长抑制率的影响；
[0027] 4、图4是各给药组对H22细胞生长抑制率的影响；
[0028] 5、图5是各给药组对小鼠 Η印G2移植性肿瘤生长的影响；
[0029] 6、图6是各给药组对小鼠 Η22移植性肿瘤生长的影响；
[0030] 7、图7是本发明药物组合物对RH-35细胞活性的效果；
[0031] 8、图8是RT-PCR分析JAK2基因 mRNA水平的变化情况；
[0032] 9、图9是ImageJ图像分析软件分析JAK2基因 mRNA水平表达情况；
[0033] 10、图10是RT-PCR分析STAT3基因 mRNA水平的变化情况；
[0034] 11、图11是ImageJ图像分析软件分析STAT3基因 mRNA水平表达情况。
【具体实施方式】：
[0035] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本发明药物组合物（胡 桃苷B与淫羊藿素组合物）的制备作进一步说明。
[0036] 实施例1 :本发明药物鉬合物的制各:
[0037] 按照胡桃苷B与淫羊藿素之间的重量比为1:1称取原料，将两者混合均匀，即得本 发明药物组合物。
[0038] 以下结合具体实验例对胡桃苷B与淫羊藿素组合药物即本发明药物组合物（胡桃 苷B+淫羊藿素）在肝癌治疗中的应用作进一步说明。
[0039] 一、实验材料：
[0040] 1、药物及试剂：
[0041] 胡桃苷B的提取方法参照刘丽娟等人发表在《中国现代应用药学》第46-48页的 《北青龙衣中胡桃苷B的分离及含量测定方法的建立》一文。淫羊藿素均购自上海源叶生物 科技有限公司，生产批号为20130715。生理盐水、MTT (四甲基偶氮唑盐）、苦味酸均由国药 集团化学试剂北京有限公司提供，生产批号为20131012。胎牛血清购置于四季青公司，生 产批号20130623。RNA提取试剂盒购置于北京庄盟国际生物基于科技有限公司，生产批号 20130501。MTT、DMS0购置于Sigma公司，生产批号20130215。PCR引物由北京奥科鼎盛生 物科技有限公司合成，生产批号20130322。
[0042] 2、细胞及动物：
[0043] (1)细胞株：HepG2细胞系，RH-35细胞系，BRL细胞系，H22肝癌瘤株，均由军事医 学科学院提供。
[0044] ⑵动物：BALB/c小鼠，清洁级，雄性，6-8周龄，体重（20±2)g，购自军事医学科学 院，动物合格证号SCXK-(军）2007-004。
[0045] 3、材料及仪器：
[0046] Costar 96孔细胞培养板（美国Corning公司）；一次性0· 22 μ m针筒式微孔滤膜 (上海兴亚净化材料厂）。Forma恒温(1)2培养箱（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.) ;BioTek 多功會泛酶标仪（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.)； ABI7500荧光定量PCR仪（美国CY-TECH) ;FA2004分析天平（上海天平仪器厂）；ALC4239 低温高速离心机（美国Sigma公司产品）；725型超低温冰箱（美国Forma公司）。
[0047] 二、实验项目
[0048] 所有处理数据均以；is表示，使用SPSS19. 0统计软件中的单因素方差分析处理数 据，用LSD法进行组间比较；否则采用非参数秩和检验，P < 0. 05表示有差异，P < 0. 01表 示有显著性差异。
[0049] 实骀例1 :MTT法检测各给药组对人肝癌细胞株IfepG2的影响：
[0050] 培养Η印G2细胞系，细胞生长至50-60%融合时，将实验对象分为4组即胡桃苷B 组、淫羊藿素组、胡桃苷Β+淫羊藿素组和对照组。在各组的培养液中对应的加入200 μ g/mL 的胡桃苷B、200yg/mL的淫羊藿素、本发明药物组合物（其中胡桃苷B 200yg/mL+淫羊藿 素200 μ g/mL)和溶解化合物所用的DMS0 (二甲基亚砜），各100 μ L。培养细胞24小时，使 用ΜΤΤ法测定细胞活力。方法如下：去上清，磷酸盐缓冲液（PBS)洗2遍，MTT、37°C孵育4 小时，PBS洗2遍，DMS0溶解结晶，490nm测定吸光度，并计算生长抑制率。
[0051]
【权利要求】
1. 一种药物组合物，其特征在于：所述药物组合物由胡桃苷B和淫羊藿素组成，其中胡 桃苷B与淫羊藿素之间的重量比为1:1。
2. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物用于制备治疗肝 癌的药物。
3. 根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：药物组合物的剂型为医学上可接 受的剂型。
4. 根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：药物组合物的剂型为粉剂、注射 液、胶囊、片剂或口服液中的一种。
5. 权利要求1?4所述的药物组合物在制备治疗肝癌药物中的应用。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于：药物组合物的具有降低JAK2和STAT3的 mRNA水平的作用。
7. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于：药物组合物的剂型为医学上可接受的剂 型。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于：药物组合物的剂型为粉剂、注射液、胶囊、 片剂或口服液中的一种。
【文档编号】A61K31/7034GK104147025SQ201410361020
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年7月25日 优先权日:2014年7月25日
【发明者】赵艳玲, 肖小河, 王伽伯, 陈哲, 郑全福 申请人:中国人民解放军第三〇二医院