通过不同的翻译后修饰改变和调节蛋白质活性的制作方法

专利名称：：通过不同的翻译后修饰改变和调节蛋白质活性的制作方法
技术领域：
：本发明大体上涉及生物
技术领域：
。更具体地说，本发明的实施方案涉及蛋白质的翻译后修饰。
背景技术：
：直到最近，人们认为细菌通常并未使其蛋白质糖基化。虽然已报道一些例子，但这些被当作罕见的异常情况而摒弃(Borman2006)。现在人们逐渐接受细菌以比真核生物可能更多的方式使其蛋白质糖基化，尽管这种看法尚未得到广泛认同(Schaffer等，2001)。在最近的评论文章中声明，已显示糖基化有助于蛋白质稳定性、调节物理性质(如溶解性)、保护蛋白质免受水解、改变活性和靶向外化(Upreti等，200。1994年，一组人员从酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillusacidocaldarius)中纯化淀粉酶并表示该淀粉酶在活性生长期间与细胞结合(khwermarm等，1994)。随着培养进入稳定期，细胞将活性可溶糖基化形式的淀粉酶释放至培养基中(khwermarm等，1994)。未尝试比较各种形式的淀粉酶的活性。
发明内容本发明的实施方案包括通过用化学糖基化的方式和/或分离的或部分纯化的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白、包含糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞提取物，和/或在包含一种或多种糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞中改变极端酶或其它蛋白质的酶活性的方法。本发明的实施方案包括翻译后修饰蛋白质的方法。在一些实施方案中，翻译后修饰可通过使用糖基化(包括化学糖基化)、聚乙二醇化、磷酸化、甲基化或其它形式的翻译后修饰的方式进行，和/或是分离的或部分纯化的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白，包含糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞提取物，和/或在包含一种或多种糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞中。本发明的实施方案包括翻译后修饰蛋白，所述翻译后修饰蛋白包括但不限于SEQIDNOS:307(celB)、331(内切葡聚糖酶C)、333(肽聚糖N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶)、335(β-半乳糖苷酶)、337(阿拉伯呋喃糖苷酶)和338(α-木糖苷酶)。因此实施方案包括上述蛋白质的糖基化形式。本发明的第一方面涉及从极端微生物分离的酶，所述酶在温度高于约80°C和pH低于约2时显示最佳的酶活性。本发明的另一方面涉及来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的半纤维素酶。本发明的再一方面涉及用于降解复合生物分子的酶。更进一步地，本发明的再一方面涉及可用于同时糖化和发酵过程以将生物质糖转化为终产物的酶。本发明的再一方面涉及处理生物质的方法，所述方法包括以下步骤提供具有生物质糖的生物质源，用来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的水溶性半纤维素酶预处理生物质以产生终产物。本发明的再一方面涉及制备半纤维素酶的方法，所述方法包括以下步骤提供酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)源；在有上清液的微生物营养培养基中培养酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)；从营养培养基上清液中分离酸热脂环酸芽孢杆菌的细胞；以及从营养培养基上清液回收并纯化来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的半纤维素酶。而且，本发明的再一方面涉及水解多糖的方法，所述方法包括以下步骤提供来源于微生物的水溶性半纤维素酶；在PH低于约2时用水溶性半纤维素酶进行多糖的水解。以下将更详细地描述本发明的这些和其它方面。附图简述图1分另Ij描述了SEQIDNO:1(RAAC00164)与ref|YP_001223775.11、ref|YP_729290.1|、ref|ZP_01084440.1|、ref|ZP_01079150.1|禾口ref|ZP_01471594.l|(SEQIDNOS:3_7)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDN0:1指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图2分别描述了SEQIDNO18(RAAC00517)与ref|ZP_00589533.11、refIZP_01386435.11、ref|YP_378533.11、ref|ZP_00513158.11和ref|YP_374173.11(SEQIDNOS20-24)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:18指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图3分别描述了SEQIDNO35(RAAC00650)与ref|YP_001127183.11、refIΖΡ_02038504.1|、ref|ΥΡ_001647987.1|、ref|YP_001377114·1|禾口ref|NP_835081.l|(SEQIDNOS:37-41)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDN0:35指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图4分别描述了SEQIDNO52(RAAC00991)与ref|ZP_02327412.11、refIΥΡ_001487207.11、ref|ΖΡ_01172765.11、ref|NP_831314.11和ref|NP_844008.11(SEQIDNOS54-58)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:52指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图5A和5B分别描述了SEQIDNO:69(RAAC01110)与ref|YP_001519856.11、ref|YP_711688.11、ref|ZP_01331931.11、ref|YP_001076955.11和ref|YP_336440.11(SEQIDNOS71-75)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:69指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图6A禾口6B分别描述了SEQIDNO86(RAAC01166)与gb|AAR99615.1|、gb|ABM68334.2|,ref|ZP_01372248.11、ref|ΥΡ_519555·11和ref|ΖΡ_022;34077·11(SEQIDNOS88-92)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:86指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图7分另Ij描述了SEQIDNO103(RAAC01167)与ref|ZP_01515212.11、refIΥΡ_001277643.1|、ref|ΖΡ_02291400.1|、ref|ΥΡ_001633727·1|禾口ref|YP_001434357.1(SEQIDNOS:105-109)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:103指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图8A和8B分别描述了SEQIDNO120(RAAC01170)与ref|YP_001324592.11、ref|YP_342776.1|、ref|NP_780975.1|、ref|YP_001636830.1|禾口ref|YP_001299026.1(SEQIDNOS:122-126)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:120指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图9分别描述了SEQIDNO137(RAAC01248)与ref|ZP_02170160.11、refIΖΡ_01171895.1Uref|YP_076646.1Uref|YP_590910.11和ref|ZP_02175410.11(SEQIDNOS:139-143)之间的序列比对，所述序列具有对表1中SEQIDNO137指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图IOA和IOB分别描述了SEQIDNO154(RAAC01348)与ref|ZP_01665^9.11、refIΖΡ_01643350.11、gb|AAW77167.11、ref|YP_452722.11和ref|ZP02241787.11(SEQIDNOS=156-160)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:巧4指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图11分别描述了SEQIDNO171(RAAC01377)与ref|YP_147952.11、refIΥΡ_520670·1|、ref|ΥΡ_001395809·1|、ref|ΥΡ_001309701·1|禾口ref|YP_001643660.1(SEQIDNOS:173-177)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:171指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图12分别描述了SEQIDNO188(RAAC01611)与ref|YP_146214.11、refIΥΡ_001124463.11,ref|NP_865262.11,ref|YP_426013.11和ref|ΖΡ_01885526·1(SEQIDNOS=190-194)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:188指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图13A禾Π13Β分别描述了SEQIDNO:205(RAAC01612)与ref|YP_146215.11、refIYP_001124464.1|、ref|ΥΡ_074948·1|、ref|ΥΡ_001039503·1|禾口ref|NP_621770.1(SEQIDNOS:207-211)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDN0:205指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图14A和14B分别描述了SEQIDNO:222(RAAC01926)与ref|YP_001038202.11、refIΖΡ_01667587.1|、ref|ΖΡ_01575301.1|、ref|ΥΡ_001211020·1|禾口ref|YP_516465.1(SEQIDNOS:224-228)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDN0:222指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图15分别描述了SEQIDNO239(RAAC01998)与ref|NP_348940.11、refINP_721244.11、dbj|BAC75700.11、ref|ZP_00605123.11和ref|YP_015329.11(SEQIDNOS=241-245)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:239指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图16分别描述了SEQIDNO256(RAAC02011)与ref|YP_754819.11、refIYP_184322.11、ref|NP_577787.11、ref|NP_142068.11和ref|NP_125751.11(SEQIDNOS=258-262)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:256指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图17A和17B分别描述了SEQIDNO:273(RAAC02381)与ref|NP_622177.11、ref|YP_848858.11、ref|ΥΡ_001374688·11、ref|ΝΡ_470039·11和ref|ΖΡ_01^9325·1(SEQIDNOS:275-279)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDNO:273指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图18分别描述了SEQIDNO290(RAAC02421)与ref|ZP_01721811.11、refIΝΡ_241897·1|、ref|ΥΡ_001486101·l|、ref|ZP_01170532.1|禾口ref|ZP_02327994.1(SEQIDNOS=292-296)之间的序列比对，所述序列均具有对表1中SEQIDN0:290指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。图19为描述温度对如本发明所提供的木聚糖酶活性的影响的图表。图20为描述在pH4.0时温度对如本发明所提供的纤维素酶活性的影响的图表。图21为描述在温度为60°C时pH对本发明的纤维素酶活性的影响的图表。图22为描述在温度为60°C时pH对本发明的木聚糖酶活性的影响的图表。图23为描述在不同PH和温度下用小麦阿拉伯木聚糖(WAX)测定的SEQIDNO307的木聚糖酶活性的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在大肠杆菌(E.coli)(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。图M为描述在不同pH和温度下用羧甲基纤维素(CMC)测定的SEQIDNO:307的纤维素酶活性的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。图25为描述在不同pH和温度下如图23和M测定的SEQIDNO:307的纤维素/木聚糖酶活性比的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。pH为5.5时对于大肠杆菌中产生的酶的柱顶端左侧开口，表明所述比例高于10。图沈为描述在不同pH和温度下用小麦阿拉伯木聚糖(WAX)测定的SEQIDNO307的木聚糖酶活性的图表。毕赤酵母(Pichiapastoris)(黑色柱)或大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。图27为描述在不同PH和温度下用羧甲基纤维素(CMC)测定的SEQIDNO:307的纤维素酶活性的图表。毕赤酵母(黑色柱)或大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。图28为描述在不同pH和温度下如图沈和27测定的SEQIDNO:307的纤维素/木聚糖酶活性比的图表。毕赤酵母(黑色柱)或大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。PH为5.5时对于大肠杆菌中产生的酶的柱顶端左侧开口，表明所述比例高于10。图四为描述在不同PH和温度下用小麦阿拉伯木聚糖(WAX)测定的SEQIDNO307的木聚糖酶活性的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在毕赤酵母(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。图30为描述在不同pH和温度下用羧甲基纤维素(CMC)测定的SEQIDNO:307的纤维素酶活性的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在毕赤酵母(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。图31为描述在不同pH和温度下如图四和30测定的SEQIDNO:307的纤维素/木聚糖酶活性比的图表。从酸热脂环酸芽孢杆菌(黑色柱)分离所述酶或在毕赤酵母(白色柱)中产生所述酶。没有在pH为5.5(60°C和80°C)时从酸热脂环酸芽孢杆菌分离的酶的数据。图32为描述在不同pH和温度下用小麦阿拉伯木聚糖(WAX)测定的缺乏C端203个氨基酸的SEQIDNO:307的木聚糖酶活性的图表。在毕赤酵母(黑色柱)或大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。图33为描述在不同pH和温度下用羧甲基纤维素(CMC)测定的缺乏C端203个氨基酸的SEQIDNO:307的纤维素酶活性的图表。在毕赤酵母(黑色柱)或带N端组氨酸标签的大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。图34为描述在不同pH和温度下如图32和33测定的缺乏C端203个氨基酸的SEQIDNO307的纤维素/木聚糖酶活性比的图表。在毕赤酵母(黑色柱)或大肠杆菌(白色柱)中产生所述酶。图35为描述大肠杆菌中产生的RAAC00307(SEQIDNO:337)的阿拉伯呋喃糖苷酶活性比的图表。示出在不同pH下在50°C(菱形)、60°C(正方形)、70°C(三角形)、80°C(“x”)、90°C(“*，，)时的活性。在pH为2时，所述酶无活性。图36为描述大肠杆菌中产生的RAAC00307(SEQIDNO:337)的β-木糖苷酶活性比的图表。示出在不同PH下在50°C(菱形)、60°C(正方形)、70°C(三角形)、80°C(“χ”)、90°C(“*”)时的活性。在pH为2时，所述酶无活性。图37为描述毕赤酵母中产生的RAAC00307(SEQIDNO:337)β-木糖苷酶活性比的图表。示出在不同pH下在60°C(菱形)和80°C(正方形)时的活性。具体实施例方式如下文所述，本发明一方面部分涉及从极端微生物分离的酶，所述酶在温度高于约80°C和最适pH低于约2下显示最佳的酶活性。在本发明的其它方面，所述酶可为来源于酸热脂环酸芽孢杆菌的半纤维素酶和/或木聚糖酶，其中还将所述生物进一步鉴别为ATCC27009。如下文所讨论的酶似乎在pH约为1时显示酶活性。更进一步地，这种酶的分子量为至少约120kDa。在本发明中，所公开的酶可用于同时糖化和发酵过程和/或相继水解和发酵过程以将生物质糖转化为终产物。更进一步地，本文所述酶可用于预处理生物质浆料以降解存在于生物质浆料中的可溶于水的或不溶于水的低聚物和/或多糖，以产生终产物。如下文所使用的术语“极端微生物”指可在人类认为极端的条件(如沸水、冰、蓄电池酸液或海洋底部)下生存并生长的生物。此类微生物的实例包括但不限于在高达2350F(113°C)的温度下生长的延胡索酸火叶菌(Pyrolobusfumarii)、在_20°C(-40F)下存活的嗜冷杆菌(PsychrcAactercryopegella)、可在核反应堆中存活的耐辐射奇球菌(Deinococcusradiodurans)、在海平面大气压300倍的压力下生长的深海发光杆菌(Photobacteriumprofundum)以及在与蓄电池酸液相同的pH为O的条件下生存的干热嗜酸菌(Picrophilustorridus)。在其中可找到这些微生物的环境包括滚烫温泉、深海热泉、冰川、盐滩以及核反应堆。本发明所用微生物可从天然源和人造源获得或者从培养物贮藏所购买获得。在本发明中，在厌氧、需氧和/或微需氧条件下优选在温度高于40V，pH低于约5时，更优选在温度高于50°C，pH低于约4时，且最优选在温度高于55°C，pH低于约3.5时进行培养。虽然培养周期随PH、温度和所用营养培养基而不同，但12小时至数天的周期通常将产生良好的结果。如本文所使用，酸热脂环酸芽孢杆菌定义为可从弗吉尼亚马纳萨斯的美国模式培养物保藏所(ATCC)获得并鉴别为酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的微生物。如下文所使用的用语“酶活性”指由酶引起所发生的反应。酶为所有生物体产生的蛋白质，其介导、引起和/或促进将一种化学物质变为另一种化学物质的反应而不改变或破坏其本身。在本申请的上下文中，与术语“酶活性”相结合使用的词“最佳”指使酶对于给定的最终结果最好且最快地发挥作用的最有利条件。最佳酶活性可受包括温度、PH和盐浓度在内的条件的影响。如下文所使用的词“木聚糖酶”指使半纤维素分裂开的酶，方式是断开构成半纤维素分子主链的木糖之间的化学键，或断开半纤维素侧链上的木糖之间的键。如下文所使用的词“多糖”应指通过化学键连在一起的糖链(可为相同的糖或不同的糖)。多糖可由这些糖的直链组成而有或无侧链。多糖的实例包括淀粉、果胶、纤维素和半纤维素。本申请上下文中的词“水解”应指其中水与分子反应并将该分子分裂为至少两个部分的化学反应。如下文所使用的用语“生物质糖”应指来自于生物质组分分解的糖，如纤维素和半纤维素。生物质糖的实例包括但不限于糖类、葡萄糖、木糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖及其组合、低聚物和/或其修饰或取代形式。用语“同时糖化和发酵过程”在下文应指由可经化学方法预处理或未预处理的生物质制备燃料或化学品(如乙醇)的过程，并且其中纤维素酶和/或半纤维素酶用于将生物质多糖分解为糖(糖化)；且所述糖由微生物源发酵为燃料或化学品产物(发酵)。这两个过程在同一反应器里同时发生(同时的)。如本申请中使用的用语“终产物”在下文应指通过化学或酶促反应产生的化学品。本发明所涵盖的终产物实例包括简单糖类(如单体、二聚体、三聚体、低聚物等)、醇类、燃料和/或酶促反应的其它产物。本发明上下文中的词“生物质”应指植物和其它木质纤维材料，如玉米秆、麦秆和木材副产品(如锯屑等)。术语“生物质浆料的预处理”在本申请的上下文中应指生物质的制备，以用于随后将其转化为燃料，如乙醇。这种预处理包括将生物质磨成粉末或小颗粒和加水(这样形成浆料)的步骤。然后用若干方法处理该浆料，设计该若干方法以将木质素从生物质中部分或全部除去，并将半纤维素和纤维素转化为可更易于用酶(如纤维素酶和半纤维素酶)降解为其组分糖的形式。一些预处理将半纤维素降解为其组分糖，而将纤维素留下作为固体残渣的部分。因为这种处理步骤在酶促降解步骤以及将糖转化为乙醇的发酵步骤之前发生，所以称其为“预处理”。本发明上下文中的用语“可溶于水的”应指可完全溶于水而不留任何固体残渣的化学品或其它物质。本发明上下文中的词“半纤维素”指植物的一种组分(另外两种组分为纤维素和木质素)，这种组分由用化学键连接的直链糖(如木糖或甘露糖)构成。这种直链也有由沿着链的糖和其他化学物质组成的分支。本发明上下文中的词“半纤维素酶”指一类可将半纤维素分裂为其组分糖和其它化学单体的酶。半纤维素酶的实例包括但不限于木聚糖酶、甘露聚糖酶、葡糖苷酸酶和阿拉伯呋喃糖苷酶。本发明上下文中的用语“相继水解和发酵过程”应指由生物质制备燃料或化学品(如乙醇)的过程，并且其中物理处理生物质或用反应的化学品或溶剂或其混合物处理生物质以除去木质素，并将生物质中存在的纤维素和半纤维素转化为其组分糖或转化为可更易于用酶(如纤维素酶和半纤维素酶)降解为其组分糖的形式。这些的实例包括研磨、磨碎、酸、碱、有机溶剂等。这些处理可在环境温度至300°C或更高的温度，环境压力至2000psig或更高的压力下进行。然后冷却溶于水中的糖，将pH调至中性，然后接着用各种微生物将糖发酵为燃料或化学品产物(发酵)。这两个过程在单独的反应器中发生，先进行水解步骤，再进行发酵步骤(例如，相继的)。本发明上下文中的用语“培养酸热脂环酸芽孢杆菌”应指为上述微生物提供食物源(可溶或不溶木质纤维素或其它多糖或糖源)和各种溶于水的维生素和矿物质(这构成营养培养基)，为微生物提供使其生长的适当条件(温度为140T(600C)、pH为3.5和氧气)。本发明上下文中的用语“分离酸热脂环酸芽孢杆菌的细胞”应包括通过如离心从营养培养基中除去细菌细胞的方法。本发明上下文中的用语“回收并纯化半纤维素酶”应指从营养培养基中分离半纤维素酶。在本发明中，称为阳离子交换的过程用于从营养培养基中分离半纤维素酶。就这一点而言，将营养培养基(含半纤维素酶)通过阳离子交换材料泵送。当使其与阳离子交换材料接触时，半纤维素酶将其自身附于阳离子交换材料上，但营养培养基将通过。然后从阳离子交换材料上除去半纤维素酶并纯化。本申请上下文中的用语“微生物营养培养基”指微生物(酸热脂环酸芽孢杆菌)的食物源和维生素、矿物质，均溶于水并调至微生物生长所需的PH。更具体而言，微生物营养培养基包含约lg/L的木聚糖；约IOmM的NH4C1；约5.2mM的K2HPO4；约0.8mM的MgS04_7H20；约1.74mM的Na2SO4；约25mg/L的MgCl2；约6.6mg/L的CaCl2；约2.Omg/L的MnSO4；约0.5mg/L的ZnSO4；约0.5mg/L的硼酸；约5mg/L的FeCl3；约0.15mg/L的CuSO4；约0.025mg/L的NaMoO4；约0.05mg/L的CoNO3；约0.02mg/L的NiCl2；约0.08mg/L的盐酸吡哆辛，；约0.Olmg/L的叶酸；约0.lmg/L的盐酸硫胺素；约0.04mg/L的核黄素；约0.08mg/L的烟酰胺；约0.08mg/L的对氨基苯甲酸酯；约0.Olmg/L的生物素；约0.0004mg/L的氰钴胺素；约0.08mg/L的D-泛酸钙；约0.02mg/L的肌醇；约0.05mg/L的溴化胆碱；约0.02mg/L的乳清酸钠；和约0.lmg/L的亚精胺，其中所得到的营养培养基调至pH约为3.5。本申请上下文中的词“上清液”应指在从中基本上除去细菌细胞后剩余的营养培养基。发明人已分离并鉴定了温度和酸稳定性内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶，这两种酶在高温和低PH下显示活性，当在这些条件下长时间孵育时表现出稳定性。发明人认为，如下文所述的热和酸稳定性半纤维素酶和纤维素酶在过程中具有特殊价值或作为这些过程的辅助，这些过程一方面可导致降低之前所述预处理过程的严格程度和/或消除不同过程过程中的这些限制因素。就这一点而言，发明人从黄石国家公园和不同培养物保藏所筛选大量生物，以获得具有产生高温和低PH下均稳定的酶的能力的微生物。就这一点而言，从黄石国家公园的诺里斯间歇泉盆地(NorrisGeyserBasin)的6处温泉采集水和沉淀物样本。将这些样本接种至pH为3.5并且还含有0.5g/L的燕麦木聚糖或0.5g/L的碎玉米棒的液态矿物盐培养基中。在80°C下接种后来的培养物并每天用肉眼和通过显微镜观察生长情况。更进一步地，美国模式培养物保藏所(ATCC)和德国微生物菌种保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenUndZellkulturen(DSMZ))的石禾中)(寸的M适温度高于约60°C，最适pH低于约4的合适的异养生物。在由ATCC或DSMZ推荐的培养基(其中用如上所述燕麦木聚糖或碎玉米棒代替碳源)中孵育这几种生物。随后在其最适生长温度和pH为3.5下孵育这些培养物。通过混浊的出现在外观上评估随后微生物的生长情况。在此项研究中，如果在木聚糖参存在下出现生长，据推测假定半纤维素酶和/或纤维素酶活性存在。在孵育约3天后收获出现生长的培养物。通过离心从培养物中除去细胞。用具有10000MWC0膜的AMICON超滤细胞使培养物上清液浓缩约1000-2000倍。然后用小麦阿拉伯木聚糖(从Megazyme购买获得)或羧甲基纤维素(从Sigma-Aldrich获得)进行砷钼酸盐还原糖酸测定化验(先前由Somogyi描述(，1952)，J.Biol.Chem.19519-23)测试随后的上清液浓缩物中的半纤维素酶和纤维素酶活性。这些分别用作半纤维素酶和纤维素酶活性的底物。测定的标准条件设定为60°C和pH约3.5。参考附图将看出，在温度高达约90°C下测定半纤维素酶和纤维素酶活性，以确定酶活性的最适温度。通过用底物改变上清液浓缩物的孵育温度而修改上文提及的还原糖测定。同样地，在PH为1至约8下测定酶活性以确定酶活性的最适pH。对于这些研究，通过在适当pH缓冲液(pH为1-2，50mM马来酸钠或50mM甘氨酸；pH为2-6，50mM醋酸钠；pH为6-8，50mM磷酸钠；以及pH为8-9，50mM三羟甲基氨基甲烷(Tris))中制备测定组分而修改还原糖测定。除上述之外，通过在温度约70°C和pH为2.0下孵育上清液浓缩物而检验根据温度和PH的半纤维素酶和纤维素酶稳定性。在这点上，在浓缩物上置一层矿物油以限制在检验期间蒸发。定时收集样本并在先前所述标准测定条件下测定其半纤维素酶和纤维素酶活性。关于半纤维素酶和纤维素酶反应动力学，用不同量的小麦阿拉伯木聚糖或羧甲基纤维素进行还原糖测定而确定。在601和？!1为3.5时测定反应动力学。通过用可通过SynexChem获得的ENZYMEKINETICSPRO进行非线性分析计算Michaelis-Menten参数Vmax和Km。在以上提到的过程后，发明人鉴别酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)以进一步检验。随后，通过浓缩无细胞的培养物材料进行粗酶制备。后来的SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-pagegel)显示出5条主带和若干次带。后来计算的大量这些条带与报道的其它木聚糖酶和纤维素酶一致。如图19、20、21、22所见，发明人发现从酸热脂环酸芽孢杆菌(本文鉴别为ATCC27009分离的酶的酶活性(木聚糖酶和纤维素酶)最适温度约为80°C。如图19所见，将相对酶活性与从另一种类似微生物嗜热真菌(T.Ianuginosus)分离的类似酶所提供的酶活性形成对比。进一步地，人们发现分离的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶在低至1的PH下显示酶活性，最适pH为2，而纤维素酶活性的最适pH约为4，尽管纤维素酶在低至2的pH下确实显示一些活性。图22显示木聚糖酶活性为pH的函数，如上所述。就发明人所知，先前报道的最低最适半纤维素酶PH是关于Collins(2005，FEMS，Micro.Review,29(1):3-23)。可以想像已分离的该水溶性内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶可能在pH低于1时具有活性，然而目前，还原糖测定试剂在PH低于1时不稳定。另一研究显示当在70°C和PH为2孵育时，新分离的半纤维素酶和纤维素酶显示活性并未降低。上述研究引导发明人推断酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)能够在木聚糖基质上生长，并且还产生细胞外半纤维素酶和纤维素酶活性，二者均溶于水并在PH约为2时表现出显著的半纤维素酶活性，并且分子量至少约为120kDa。再次见图22。现有技术公开已从白曲霉(Aspergilluskawachii)中纯化并鉴定了酸稳定性木聚糖酶，白曲霉的最适PH为2.0，最适温度在50°C至60°C之间(PurificationandPropertiesofAcidStableXylanasesfromAspergilluskawachii,K.Ito,H.Ogasawara,T.Sugomoto禾口Τ·Ishikawa，BioscienceBiotechnologyandBiochemistry56(4)=547-550,1992年4月)。另外，已报道若干木聚糖酶的最适pH为4至5，并且已报道大量木聚糖酶的最适温度高达100°C。然而，就发明人所知，如下文所述的酶是第一种已知在本文所要求的如此低的PH和如此高的温度下有活性的酶。除上述之外，发明人意识到已从同种生物，即酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)中纯化了木聚糖酶，据报道酸热脂环酸芽孢杆菌具有与之有关的木聚糖酶活性。据报道这种酶的最适PH为4.0，且最适温度约为80°C。就这一点而言，来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的嗜热嗜酸内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶(celB)显示出与属于糖苷水解酶族51的阿拉伯呋喃糖苷酶的高度序列相似性(K.Eckert禾口E.Schneider,EuropeanJournalofBiochemistry,270(17)3593-3602，2003年9月)。通过研究如下所示的SEQIDNO307可最好地了解如现有技术参考中所述的前述纤维素酶前体。1MKRPffSAALAALIALGTGASPAffAAAHPSPKVPAGAAGRVRAADVVSTPI0081]51SMEIQVIHDALTVPELAAVQAAAQAASNLSTSQffLQffLYP0082]NATPTTSAQS0083]101QAAQAVANLFNLATYGAVSTRGSNAAQILQTLQSISPLLS0084]PRAVGLFYQS0085]151FLTEIGQSSKAILARQASSSIVGNALAQAASLSPTISAYL0086]RQNGLSPSDL0087]201ARTffSSFETQVDPQGAAQTALATRICTNALGFGAPTASAT0088]ITVNTAARLR0089]251TVPATAFGLNAAVffDSGLNSQTVISEVQALHPALIRffPGG0090]SISDVYNWET0091]301NTRNDGGYVNPNDTFDNFMQFVNAVGASPIITVNYGTGTP0092]QLAADffVKYA0093]351DVTHHDNVLYWEIGNEIYGNGYYNGNGffEADDHAVPNQPQ0094]KGNPGLSPQA0095]401YAQNALQFIQAMRAVDPNIKIGAVLTMPYNWPffGATVNGN0096]DDffNTVVLKA0097]451LGPYIDFVDVHWYPETPGQETDAGLLADTDQIPAMVAELK0098]REINAYAGSN0099]501AKNIQIFVTETNSVSYNPGQQSTNLPEALFLADDLAGFVQ0100]AGAANVDffffD0101]551LLNGAEDNYTSPSLYGQNLFGDYGLLSSGQATPKGVQEPP0102]QYTPLPPYYG0103]601FQLVSDFARPGDTLLGSASSQSDIDVHAVREPNGDIALML0104]VNRSPSTIYS0105]651ADLNVLGVGPYAITKALVYGEGSSAVSPALTLPTAHSVKL0106]MPYSGVDLVL0107]701HPLIPAPHAAASVTDTLALSSPTVTAGGSETVTASFSSDR0108]PVRDATVELE0109]751LYDSTGDLVANHEMTGVDIAPGQPVSESffTFAAPAANGTY0110]TVEAFAFDPA0111]801TGATYDADTTGATITVNQPPAAKYGDIVTKNTVITVNGTT0112]YTVPAPDASG0113]851HYPSGTNISIAPGDTVTIQTTFANVSSTDALQNGLIDMEV0114]DGQNGAIFQK0115]901YffPSTTLLPGQTETVTATffQVPSSVSAGTYPLNFQAFDTS0116]NWTGNCYFTN0117]951GGWNFWN0118]在本发明的某些实施方案中，SEQIDN0:307可被糖基化SEQIDN0:307可至少在174、193、297、393和404位被糖基化c关于本发明，从极端微生物分离的新酶具有包括如下所示SEQIDNO326的N端序列DWSTPISMEIQV。要注意该酶的N端序列与SEQIDNO307的第44_56位对齐/对应。在本发明中，本发明所涵盖的从极端微生物分离的酶包括在以下提供的SEQIDNO327中所见的酶QASSSIVGNALAQAASLSPTISAYLRQNGLSPSDLARTWSSYYCTQFDDPQGAAQTALATRICNDQALGGGAPTASATITVNTAAR。应理解该SEQIDNO327与SEQIDNO307中所见celB序列的第166-248位对齐/对应。应注意，SEQIDNO327包括分别在第207、208、212、229和231位上的变化的氨基酸和在第209、213和230位上的添加的氨基酸。在本发明中，可通过研究以下的SEQIDNO:328进一步鉴定和最好地了解本发明的所述酶GLNAAVWDSGLNSQTVISEVQALHPALIRWPGGSISDMDYNWETNTR应理解SEQIDNO328与SEQIDNO307的第258-304位对齐/对应。应注意到SEQIDNO:328在第295位有变化的氨基酸，且在第296位有附加的氨基酸。在本发明中，本发明所涵盖的酶进一步包括如下所见的SEQIDNO329EADDHAVPNQPQKGNPGLSPQAYAQNALQFMQSPWYYR。SEQIDNO329与SEQIDNO307的第379-415位对齐/对应。应理解，相对于之前的SEQIDN0:307，该SEQIDNO:329分别在第409、411和413位的氨基酸有变化。更进一步地，附加的氨基酸分别位于第412、414和415位。在上文提到的对Eckert和Schneider的现有技术参考中，可以看出为了确定具有多糖降解活性的细胞外嗜热嗜酸酶类的存在，已经对酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)进行了研究。作者提到发现生物利用多种多糖(包括木聚糖)作为唯一的碳源和能源。然而，作者未能检测到培养物上清液中的木聚糖酶活性。作者假定细胞相关酶并成功地用TritonX-100从完整细胞中提取了具有相关木聚糖降解活性的纤维素降解活性。作者观察到即使在培养物到了生长稳定期之后，纤维素降解活性及其相关的木聚糖酶活性仍保持与细胞结合。相反，从本发明的极端微生物分离的，在温度等于或高于80°C和pH低于2时显示最佳酶活性的酶被认为是水溶性的，并且还已经从细胞上清液分离。本发明还指向一种制备半纤维素酶的方法，所述方法包括以下步骤提供酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)源；在有上清液的微生物营养培养基中培养酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)；从营养培养基上清液中分离酸热脂环酸芽孢杆菌的细胞；以及从营养培养基上清液回收并纯化来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的半纤维素酶。所述方法产生水溶性半纤维素酶，此酶在PH低于约2和温度高于约80°C时显示显著的酶活性。在所述方法中，半纤维素酶包括如SEQID而5:326、327、328和/或329中描述的序列。更进一步地，在所述方法中，所用营养培养基进一步包括约lg/L的木聚糖、约IOmM的NH4Clj^5.2mM的Κ2ΗΡ04、约0.8mM的MgS04_7H20、约1.74mM的Na2S04、约25mg/L的MgCl2、约6.6mg/L的CaCl2、约2.Omg/L的MnSO4、约0.5mg/L的ZnSO4、约0.5mg/L的硼酸、约5mg/L的FeCl3、约0.15mg/L的CuS04、约0.025mg/L的NaMo04、约0.05mg/L的CoN03、约0.02mg/L的NiCl2、约0.08mg/L的盐酸吡哆辛、约0.01mg/L的叶酸、约0.lmg/L的盐酸硫胺素、约0.04mg/L的核黄素、约0.08mg/L的烟酰胺、约0.08mg/L的对氨基苯甲酸酯、约0.Olmg/L的生物素、约0.0004mg/L的氰钴胺素、约0.08mg/L的D-泛酸钙、约0.02mg/L的肌醇、约0.05mg/L的溴化胆碱、约0.02mg/L的乳清酸钠和约0.lmg/L的亚精胺，其中所得到的营养培养基调至pH约为3.5。如本申请之前所讨论的，该酶可用于各种过程。因此，如上所述方法包括以下步骤为同时糖化和发酵过程提供回收并纯化的半纤维素酶以便使生物质多糖转化为终产物。使用上文提到的酶的过程包括用回收并纯化的半纤维素酶或粗酶制剂预处理生物质浆料的步骤以降解生物质浆料中存在的低聚物和/或多糖而生成终产物，该粗酶制剂由含有大部分由半纤维素酶组成的蛋白质的生物制得。可采用使用上文所述酶的其它可能方法。例如，从极端微生物分离的酶可用于水解多糖的方法中，所述方法包括以下步骤提供来源于极端微生物的水溶性半纤维素酶；和在PH低于约2时用水溶性半纤维素酶对多糖进行水解。正如之前所讨论的，水溶性半纤维素酶在约80°C的温度下有最佳酶活性。操作本发明的所述实施方案的操作被认为是显而易见的，就此进行简单概述。正如所述，通过分别研究SEQIDNOS:327_329最好了解从极端微生物分离的在温度为约80°C和pH低于约2时显示最佳酶活性的酶。已分离的酶用于处理生物质的方法中，所述方法包括以下步骤提供具有生物质糖的生物质源；用来源于酸热脂环酸芽孢杆菌(ATCC27009)的水溶性半纤维素酶预处理生物质以产生终产物。在该方法中，生物质糖包含多糖，而半纤维素酶水解多糖。如上文所讨论的，半纤维素酶在PH低于约2和温度高于约80°C时显示酶活性。如本发明所涵盖的半纤维素酶的分子量约为120kDa。在上文所述的方法中，该方法包括附加步骤在有或无半纤维素酶存在下预处理生物质；提供相继水解和发酵过程以将生物质糖转化为终产物；以及向相继水解和发酵过程供给半纤维素酶以便使生物质糖转化为终产物。在如上文所讨论的可在有或无半纤维素酶存在下以更低的严格程度进行的预处理生物质的步骤之后，所述方法包括另一步骤提供同时糖化和发酵过程以将生物质糖转化为终产物；和向同时糖化和发酵过程供给半纤维素酶以便使生物质糖转化为终产物。因此，可见上文所述酶和方法避免了在此之前采用的现有技术酶和实践带有的许多缺点，进一步提供产生各种所需终产物而同时降低预处理步骤的严格程度的便利方法，该预处理步骤倾向于产生多种有害废物以及因需要高温、高压和大量酸而增加整个过程的成本从而达到高预处理严格程度。本发明的实施方案包括翻译后修饰蛋白质的方法。在某些实施方案中，可用分离的或部分纯化的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白、包含糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞提取物和/或在包含一种或多种糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞中进行翻译后修饰。糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白可为(不限于)以下种类UDPβ-葡萄糖磷酸转移酶、多萜醇磷酸甘露糖转移酶和糖基转移酶。在某些实施方案中，糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白可为嗜热嗜酸生物的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白。嗜热嗜酸菌的实例包括但不限于酸热脂环酸芽孢杆菌和那些属于酸菌属(Acidianus)、脂环酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus)、除硫叶菌属(Desulfurolobus)、憎叶菌属(Stygiolobus)、硫化叶菌属(Sulfolobus)、硫代谢球菌属(Sulfurisphaera)、硫磺球形菌属(Sulfurococcus)、热原体属(Thermoplasma)、嗜苦菌属(Picrophilus)的生物。糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的实例包括但不限于SEQIDNOS:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273和290所提供的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白，以及可从NCBI购买的登记号为XP_002490630.1、Q54IL5.1、ABN66322.2、XP_002493240.1、XP_002491463.1、XP_002491326.1、CAY71061.1、NP_344219.1、NP_343051.1、ACR41289.1、ACP37471.1、NP_111396.1、NP_111382.1、NP_394039.1、NP_394183.1、YP_023099.1、P_023093.1、AAT43750.1和AAT42890.1的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白。本发明的实施方案还包括根据本发明的方法糖基化的蛋白质。此类蛋白质的实例包括但不限于糖基化形式的蛋白质SEQIDNOS:307、331、333、335、337和338。本发明的实施方案包括改变来自嗜热嗜酸菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的物理和/或动力学性质的方法。在某些实施方案中，通过内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的翻译后修饰来改变来自嗜热嗜酸菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的纤维素酶活性与木聚糖酶活性比。在一些实施方案中，翻译后修饰可为糖基化。在更多的实施方案中，通过内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的翻译后修饰来改变来自嗜热嗜酸菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的溶解性。在一些实施方案中，内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶为酸热脂环酸芽孢杆菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶。在更多的实施方案中，内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶为celB(SEQIDNO307)。本发明的实施方案包括通过SEQIDNO:307的糖基化来改变SEQIDN0:307的纤维素酶活性与木聚糖酶活性之比。(作为非限制性实例)可通过在能够糖基化SEQIDNO307的生物中表达编码SEQIDNO307的序列、使SEQIDNO307与有糖基化活性的酶或产生有糖基化活性的酶的细胞接触或现有技术中已知的方法来进行SEQIDN0:307的糖基化。在本发明更多的实施方案中，内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的纤维素酶活性与木聚糖酶活性之比可根据翻译后修饰的程度和位置而改变。在一些实施方案中，(作为非限制性实例)可通过利用有糖基化活性的不同酶、能够使蛋白质糖基化的不同细胞、糖基化的不同化学方法，和/或改变糖基化活性的量或与内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶接触的时间来操纵翻译后修饰的程度和位置。在一些实施方案中，内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的翻译后修饰引起在酸性PH下木聚糖酶活性升高。在一些实施方案中，(作为非限制性实例)在PH低于约5，pH约为5、3.5和2时，与未修饰形式的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶相比，修饰形式的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的木聚糖酶活性升高。在一些实施方案中，内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶的翻译后修饰引起在酸性pH下更高的溶解性。在一些实施方案中，(作为非限制性实例)在PH低于约5，pH约为5、3.5和2时，修饰形式的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶比未修饰形式的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶更易溶。本发明的实施方案包括与嗜热嗜酸菌酸热脂环酸芽孢杆菌的蛋白质的糖基化和/或翻译后修饰有关的基因和相关蛋白质。由通过对酸热脂环酸芽孢杆菌的基因组测序产生的序列信息确定与这些过程有关的基因的编码序列。这些基因和蛋白质可代表酸热脂环酸芽孢杆菌或其它生物的代谢工程的目标。表1中列出了在酸热脂环酸芽孢杆菌的基因组中发现的核苷酸序列及由其编码的与蛋白质的糖基化和/或翻译后修饰相关的氨基酸的非限制性实例。糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白可为(不限于)以下种类UDPi3_葡萄糖磷酸转移酶、多萜醇磷酸甘露糖转移酶和糖基转移酶等等。本发明的实施方案部分涉及包括酸热脂环酸芽孢杆菌的基因和/或蛋白质在内的基因序列和/或蛋白质序列。所包括的基因和蛋白质为在蛋白质的糖基化和/或翻译后修饰中起作用的那些。事实上胞内酶活性可为嗜热的和/或嗜酸的，并且文献中描述了类似基因的一般实例。基因、序列、酶和因子的种类包括但不限于表1所列的那些。权利要求1.一种分离的和/或纯化的糖基化蛋白，其中所述糖基化蛋白包括SEQIDN0:307。2.一种改变极端酶的酶活性的方法，所述方法包括使所述极端酶与能够使所述极端酶糖基化的分离的和/或纯化的酶或化学体系进行流体接触；以及使所述极端酶糖基化。3.根据权利要求2所述的方法，其中从生物中分离和/或纯化能够使所述极端酶糖基化的所述分离的和/或纯化的酶。4.根据权利要求3、9、10、13、18和22任一项所述的方法，其中所述生物选自酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillusacidocaldarius)禾口毕赤酵母(Pichiapastoris)。5.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法，其中所述极端酶为嗜热嗜酸菌的极端酶。6.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法，其中所述极端酶选自SEQIDNOS:307、337和338。7.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法，其中与非糖基化形式的极端酶相比，所述极端酶具有改变的纤维素酶、木聚糖酶或β-木糖苷酶活性。8.根据权利要求2、9和10任一项所述的方法，其中在选自低于约5、约3.5和约2的PH下，或在选自低于约900C、约800C、约700C、约600C和约500C的温度下，与非糖基化形式的极端酶相比，所述糖基化极端酶具有改变的纤维素酶、木聚糖酶或木糖苷酶活性。9.一种改变极端酶的酶活性的方法，所述方法包括使所述极端酶与能够使所述极端酶糖基化的生物细胞提取物进行流体接触；以及使所述极端酶糖基化。10.一种改变极端酶的酶活性的方法，所述方法包括为能够表达所述极端酶并使所述极端酶糖基化的生物提供编码所述极端酶的核酸；以及由所述生物产生糖基化形式的极端酶。11.根据权利要求10和22任一项所述的方法，其中所述编码蛋白质的核酸进一步包含分泌信号。12.一种通过根据权利要求2、9和10任一项所述的方法产生的分离的和/或纯化的极端酶。13.一种翻译后修饰目标蛋白质的方法，所述方法包括使目标蛋白质与从能够使所述目标蛋白质糖基化的生物分离的糖基转移酶进行流体接触。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述糖基转移酶选自SEQIDNOS:1、18、35、52、69、86、103、120、137、154、171、188、205、222、239、256、273、290的糖基转移酶。15.根据权利要求13所述的方法，其中所述目标蛋白质为极端酶。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述极端酶选自SEQIDNOS:307、331、333、335,337和338。17.根据权利要求13、18和22任一项所述的方法，其中所述翻译后修饰包括糖基化。18.—种翻译后修饰目标蛋白质的方法，所述方法包括使目标蛋白质与嗜热嗜酸生物的细胞提取物进行流体接触。19.根据权利要求18和22任一项所述的方法，其中所述嗜热嗜酸生物为酸热脂环酸芽孢杆菌。20.根据权利要求18所述的方法，其中所述目标蛋白质为嗜热嗜酸菌的酶。21.根据权利要求18和22任一项所述的方法，其中所述目标蛋白质选自SEQIDNOS307、331、333、335、337和338。22.一种使目标蛋白质糖基化的方法，所述方法包括为嗜热嗜酸生物提供编码所述目标蛋白质的核酸；以及在所述嗜热嗜酸生物中产生所述目标蛋白质。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述目标蛋白质为嗜热嗜酸菌的内切葡聚糖酶和/或木聚糖酶。24.一种通过根据权利要求13、18和22所述的方法的任意一种产生的分离的和/或纯化的蛋白质。25.一种分离的和/或纯化的糖基化蛋白，其中所述蛋白选自SEQIDNOS:307,331,333、335、337和338。全文摘要本发明的实施方案包括通过使用分离的或部分纯化的糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白、包含糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞提取物和/或在包含一种或多种糖基转移酶和/或翻译后修饰蛋白的细胞中改变极端酶的酶活性或溶解性或翻译后修饰目标蛋白质的方法。文档编号C07K14/195GK102317309SQ201080008795公开日2012年1月11日申请日期2010年2月26日优先权日2009年2月26日发明者D·N·汤普森,D·W·瑞德,J·A·莱西,V·S·汤普森,W·A·阿佩尔申请人:巴特勒能源同盟有限公司