针对程序性死亡配体(PD-L1)的单域抗体及其衍生蛋白的制作方法

文档序号:11124323阅读:来源:国知局

技术特征:

1.程序性死亡配体1(PD-L1)结合分子,其能够特异性结合PD-L1且包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域,所述至少一个免疫球蛋白单一可变结构域包含选自以下的CDR1、CDR2和CDR3:

(1)SEQ ID NO:1所示的CDR1,SEQ ID NO:2所示的CDR2,SEQ ID NO:3所示的CDR3;

(2)SEQ ID NO:4所示的CDR1,SEQ ID NO:5所示的CDR2,SEQ ID NO:6所示的CDR3;

(3)SEQ ID NO:7所示的CDR1,SEQ ID NO:8所示的CDR2,SEQ ID NO:9所示的CDR3;

(4)SEQ ID NO:10所示的CDR1,SEQ ID NO:11所示的CDR2,SEQ ID NO:12所示的CDR3;

(5)SEQ ID NO:13所示的CDR1,SEQ ID NO:14所示的CDR2,SEQ ID NO:15所示的CDR3;

(6)SEQ ID NO:16所示的CDR1,SEQ ID NO:17所示的CDR2,SEQ ID NO:18所示的CDR3;

(7)SEQ ID NO:19所示的CDR1,SEQ ID NO:20所示的CDR2,SEQ ID NO:21所示的CDR3;和

(8)SEQ ID NO:22所示的CDR1,SEQ ID NO:23所示的CDR2,SEQ ID NO:24所示的CDR3。

2.权利要求1的PD-L1结合分子,其中所述免疫球蛋白单一可变结构域是VHH。

3.权利要求2的PD-L1结合分子,其中所述VHH是人源化的VHH。

4.权利要求2的PD-L1结合分子,其中所述VHH包含SEQ ID NO:25-32中任一氨基酸序列。

5.权利要求3的PD-L1结合分子,其中所述VHH包含与SEQ ID NO:25-32中任一序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%序列相同性的氨基酸序列。

6.权利要求3的PD-L1结合分子,其中所述人源化的VHH包含SEQ ID NO:33-37中任一氨基酸序列。

7.PD-L1结合分子,其由权利要求1-6任一项的PD-L1结合分子经过亲和力成熟获得。

8.权利要求1-7任一项的PD-L1结合分子,其还包含免疫球蛋白Fc区。

9.权利要求8的PD-L1结合分子,其中所述免疫球蛋白Fc区是人免疫球蛋白Fc区,优选是人IgG1的Fc区。

10.权利要求9的PD-L1结合分子,其中所述免疫球蛋白Fc区的氨基酸序列示于SEQ ID NO:38。

11.权利要求10的PD-L1结合分子,其包含选自SEQ ID NO:39-51的氨基酸序列。

12.权利要求1-11中任一项的PD-L1结合分子,其具有下述特征中的至少一个:

(a)与人PD-L1结合的KD值小于1×10-7M;

(b)阻断PD-L1和PD-1的相互作用;

(c)增强PBMC和/或T细胞的活化;

(d)抑制肿瘤生长。

13.权利要求1-11中任一项的PD-L1结合分子,其结合PD-L1的KD值小于1×10-7M,优选小于1×10-8M、更优选小于1×10-9M、更优选小于1×10-10M、尤其更优选小于1×10-11M。

14.核酸分子,其编码权利要求1-13中任一项的PD-L1结合分子。

15.表达载体,其包含与表达调控元件可操作地连接的权利要求14的核酸分子。

16.宿主细胞,其包含权利要求14的核酸分子或以权利要求15的表达载体转化,并能够表达所述PD-L1结合分子。

17.产生权利要求1-13中任一项的PD-L1结合分子的方法,包括:

a)在允许所述PD-L1结合分子表达的条件下培养权利要求16的宿主细胞;

b)从得自步骤a)的培养物回收由所述宿主细胞表达的PD-L1结合分子;及

c)任选进一步纯化和/或修饰得自步骤b)的PD-L1结合分子。

18.免疫缀合物,其包含与治疗性部分缀合的权利要求1-13任一项 的PD-L1结合分子。

19.权利要求18的免疫缀合物,其中所述治疗性部分包括细胞毒素、生物活性蛋白质或放射性同位素。

20.药物组合物,其包含权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子或权利要求18或19的免疫缀合物,以及药学上可接受的载体。

21.一种在对象中预防和/或治疗癌症的方法,包括给所述对象施用有效量的权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子或权利要求18或19的免疫缀合物或权利要求20的药物组合物。

22.权利要求21的方法,其还包括给所述对象施用其它抗肿瘤治疗手段。

23.权利要求22的方法,其中所述其它抗肿瘤治疗手段包括化疗、放疗或靶向其它肿瘤特异性抗原的抗体。

24.权利要求23的方法,其中所述靶向其它肿瘤特异性抗原的抗体包括抗EGFR抗体、抗EGFR变体的抗体、抗VEGFa抗体、抗HER2抗体、或抗CMET抗体。

25.权利要求24的方法,其中所述靶向其它肿瘤特异性抗原的抗体是单克隆抗体。

26.权利要求21的方法,其中所述癌症选自肺癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、黑色素瘤、肾癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、淋巴瘤、恶性血液病、头颈癌、胶质瘤、胃癌、鼻咽癌、喉癌、宫颈癌、子宫体癌、骨肉瘤。

27.一种在对象中预防和/或治疗感染性疾病的方法,包括给所述对象施用有效量的权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子或权利要求18或19的免疫缀合物或权利要求20的药物组合物。

28.权利要求27的方法,其中所述感染性疾病由选自以下的病原体引起:HIV、肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒、贾第虫、疟原虫、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌。

29.一种在对象中预防和/或治疗慢性炎性疾病的方法,包括给所述对象施用有效量的权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子或权利要求18或19的免疫缀合物或权利要求20的药物组合物。

30.权利要求29的方法,其中所述慢性炎性疾病为扁平苔藓或T细 胞介导的慢性炎性皮肤粘膜病。

31.权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子或权利要求18或19的免疫缀合物或权利要求20的药物组合物在制备药物中的用途,所述药物用于预防和/或治疗癌症、感染性疾病或慢性炎性疾病。

32.检测生物学样品中PD-L1的存在和/或PD-L1的表达水平的方法,包括:

a)在权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子与PD-L1之间能够形成复合物的条件下,使所述生物学样品和对照样品接触权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子;

b)检测复合物的形成,

其中所述生物学样品与对照样品之间复合物形成的差异指示样品中PD-L1的存在和/或PD-L1的表达水平。

33.权利要求1-13任一项的PD-L1结合分子在制备用于诊断PD-L1相关疾病的试剂盒中的用途,所述疾病为PD-L1高表达相关的肿瘤或感染性疾病。

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