一种角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程的制作方法

文档序号:12399334阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种角蛋白特征肽,其特征在于,包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。

2.一种运用权利要求1的角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一:将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理:取角样品粉末1mg,加1ml水超声10min,10000rpm离心10min收集沉淀;加1ml 50%乙醇超声10min,10000rpm离心10min收集沉淀;加入0.5ml变性缓冲液;加入25μl 1M DTT;90℃处理1h,加入60μl1M IAA,暗处反应1h,10000rpm离心10min,收集上清;取100μl上清加入10kd超滤管,10000rpm离心20min;加入0.4ml25mM NH4HCO3洗涤3次;加100μl25mM NH4HCO3溶液到超滤管中,加入2μg胰蛋白酶;37℃反应16h;10000rpm离心10min收集滤液。

步骤二:进行液质联用分析:采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.1%甲酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱:0→3min,流动相A为96%;3→8min,流动相A为96%→92%;8→10min,流动相A为92%→50%;10→12min,流动相A为50%;12→12.1min,流动相A为50%→95%;12.1→15min,流动相A为96%,流速为0.3ml/min。

步骤三:采用电喷雾正离子模式进行多反应监测,选择离子对715.33→572.28,910.52进行MRM扫描。

3.根据权利要求2所述的应用流程,其特征在于,步骤一中,所述变性缓冲液为6M盐酸胍、1.2M Tris-HCl、2.5mM EDTA、pH8.4。

4.根据权利要求2所述的应用流程,其特征在于,步骤三中,所述电喷雾正离子模式以三重四极杆质谱作为检测器。

5.根据权利要求2所述的应用流程,其特征在于,步骤三中,所述电喷雾离子源为ESI+。

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