子诱导Gab2表达，通过Gab2募集并整合多种信号，产生一个综合效应，而主导疾病的发展。
[0021] 通过124例人肝癌样本调查证明，Gab2高表达于大部分病例；Gab2基因敲除的小 鼠，可以抵抗高脂饲料诱导的肥胖和脂肪在肝中的堆积、酒精对肝脏急性或慢性损伤及脂 肪产生，以及MCD诱导的脂肪肝炎。裸鼠实验证明，在肝癌细胞系中降低Gab2蛋白水平，也 阻滞细胞在裸鼠的成瘤。因此，通过降低Gab2表达可以预防和治疗脂肪肝及相关的肝炎和 肝癌，利用检测Gab2蛋白的表达水平可以诊断这些疾病。
[0022] 由此可见，分子靶点Gab2可在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的药物中应用，分子 靶点Gab2也可在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的保健食品中应用。
【附图说明】
[0023] 图1为Gab2蛋白在非酒精性脂肪肝（NAFLD)小鼠肝组织中高表达。
[0024] 图2为Gab2蛋白在慢性酒精性脂肪肝（NAFLD)小鼠肝组织中高表达
[0025] 图3a为新鲜肝癌样本中Gab2蛋白的表达。蛋白水平用抗体检测，T标记肿瘤组 织，P为他的癌旁组织。
[0026] 图3b为新鲜肝癌样本中蛋白表达的量化统计分析。**P〈0. 01。
[0027] 图4a为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的体态。
[0028] 图4b为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的量化统计分析。~~p〈0. 01，*p〈0. 05。
[0029] 图5a为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的肝脏。
[0030] 图5b为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的肝脏与体重的比例量化统计。 一，**p〈〇. 01〇
[0031] 图6a为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的肝脏的组织切片。HE染色显示，空 泡为混合型脂滴。
[0032] 图6b为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）的肝脏的组织切片脂滴空泡面积的 量化统计。一P〈0.01，*P〈0.05。
[0033] 图7为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）血清的甘油三酯（TG)的水平。 **p〈〇. 01〇
[0034] 图8为非酒精肝模型小鼠（饲喂高脂饲料）血清的总胆固醇（T-CHO)的水平。 一，**p〈〇. 01〇
[0035] 图9为急性酒精肝模型小鼠的肝脏组织。
[0036] 图10为慢性酒精肝模型小鼠的肝脏组织。
[0037] 图11为慢性酒精肝模型小鼠血清ALT(谷草转氨酶）的浓度。~~，#p〈0. 01。
[0038] 图12为慢性酒精肝模型小鼠血清甘油三酯的浓度。**p〈0. 01。
[0039] 图13为NASH模型小鼠的肝脏组织（HE染色）。*标记脂滴空泡，箭头指向炎症细 胞浸润区域。
[0040] 图14为NASH小鼠血清的甘油三酯（TG)的水平.一，#p〈0. 01。
[0041] 图15为NASH小鼠血清的总胆固醇（T-CHO)的水平?一，林p〈0. 0。
[0042] 图16为NASH小鼠血清的TNFa的水平.一，#p〈〇. 〇。
[0043] 图17a为Gab2过表达或敲降的HepG2肝癌细胞系在裸鼠的成瘤实验中小动物活 体成像拍摄的在体肿瘤形状示例图。
[0044] 图17b为Gab2过表达或敲降的HepG2肝癌细胞系在裸鼠的成瘤实验中所有动物 的瘤快统计分析。
[0045] 图18a为Gab2过表达或敲降的H印G2细胞的增殖用MTT法检测的细胞生长曲线。 **P〈0. 01。
[0046] 图18b为Gab2过表达或敲降的IfepG2细胞的增殖中细胞的Gab2蛋白表达。
[0047] 图19a为Gab2过表达或敲降的IfepG2细胞的迀移示例图。
[0048] 图19b为Gab2过表达或敲降的H印G2细胞的迀移多次试验的量化统计分析。 **P〈0. 01。
【具体实施方式】
[0049] 实施例I:Gab2高表达于高脂饲料或酒精饲喂的小鼠肝脏，以及60%以上的人的 肝癌病例，可以作为肝癌诊断的标记。
[0050] (1).小鼠非酒精性脂肪肝模型
[0051] 筛选Gab2(全敲/半敲）小鼠进行非酒精性脂肪肝造模实验。实验选取12只8 周龄Gab2(-/_)雄性小鼠和12只8周龄Gab2(+/_)雄性小鼠，每种小鼠随机分为两组，每 组6只，分别为对照组和高脂组，对照组饲喂正常小鼠基础料，高脂组饲喂高脂饲料（基础 饲料77.9% +猪油10%，胆固醇2%，蛋黄粉10%，胆盐0. 1% )。各组分别于造模开始后 定期称量体重，以用于绘制生长曲线，并于造模6个月时小鼠体重不再有明显增长后处死， 取出完整肝脏进行westernblot实验检测Gab2蛋白的表达情况，发现Gab2蛋白在非酒精 性脂肪肝（NAFLD)小鼠模型中高表达（如图1)。
[0052] (2)为了验证Gab2与肝脏脂质代谢之间的关系，同时也用Lieber-DeCarli含有酒 精的液体饲料以及等热量等体积的对照组饲料喂食C57BL/6的小鼠6周，每天早上9时更 换新鲜配制的液体饲料。移出肝脏进行免疫印迹实验验证Gab2表达变化。结果显示酒精 喂食组小鼠肝脏中Gab2的表达明显增多（如图2)。
[0053] (3)人肝癌样本
[0054] 利用组织匀浆仪提取了 60例0.Icm3新鲜人肝组织（30例肝癌，30例癌旁对照） 的蛋白并检测了Gab2蛋白表达，结果显示其中有21个肝癌组织相对其癌旁样本Gab2存在 不同程度高表达，结果如图3a，蛋白表达的量化统计分析参见图3b。
[0055] 另外，检测94例肝癌组织和23正常组织的Gab2表达，发现大部分肝癌病例Gab2 高表达，而正常组织仅有少量的表达，蛋白芯片中肝癌样本中Gab2蛋白的表达统计分析如 表1。
[0056] 表 1
[0057]
【主权项】
1. 分子靶点Gab2,其特征在于是一种介导致病因素诱发脂肪肝及肝癌的细胞质信号 支架蛋白。
2. 如权利要求1所述分子靶点Gab2在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的药物中应用。
3. 如权利要求1所述分子靶点Gab2在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的保健食品中应 用。
【专利摘要】分子靶点Gab2及其在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌药物和保健食品中的应用，涉及分子靶点。所述分子靶点Gab2是一种介导致病因素诱发脂肪肝及肝癌的细胞质信号支架蛋白；利用多种疾病动物模型，证明在脂肪肝及相关疾病中，致病因子诱导Gab2表达，通过Gab2募集并整合多种信号，产生一个综合效应，而主导疾病的发展。分子靶点Gab2可在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的药物中应用，分子靶点Gab2也可在制备预防和治疗脂肪肝及肝癌的保健食品中应用。
【IPC分类】A23L1-29, G01N33-68, C07K14-47
【公开号】CN104558146
【申请号】CN201510026681
【发明人】吕忠显, 陈帅, 康宇佳, 李艳丽, 陶进, 程江红
【申请人】厦门大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月20日