mmol)溶于20mL甲酰胺中，在氮气气氛中回流过夜，TLC显 示反应完成。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX3CH2C12萃取，合并萃 取相，用盐水（lOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸 干，得到化合物 111-1，白色固体。ESI-MS，m/z= 235([M+H]+)。
[0025] 步骤2.化合物IV-1的合成
[0026] 化合物III-1 (1. 64g，7mmol)溶于20mL重蒸的P0C13*，而后升温回流5小时，TLC 显示反应完成。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX3CH2C12萃取，合并萃 取相，依次用饱和NaHC03溶液和用盐水（lOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥 剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物IV-1，白色固体。ESI-MS，m/z= 253([M+H]+)。
[0027] 步骤3.化合物VI-1的合成
[0028]化合物IV-1 (1.Olg，4mmol)、化合物V-1 (0. 57g，4mmol)和二异丙基乙基胺 (DIPEA，1. 29g，lOmmol)溶于15mL甲苯中，在氮气气氛下升温回流，直到反应完成（约5小 时）。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX3CH2C12萃取，合并萃取相，依 次用1 %稀盐酸和盐水（lOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸 发仪上蒸干，得到化合物VI-1，白色固体。ESI-MS，m/z= 359([M+H]+)。
[0029] 步骤4.化合物VII-1的合成
[0030] 化合物VI-1 (1. 07g, 3mmol)和丙稀酸异丙酯（1. 14g,lOmmol)溶于10mL干燥的 DMF中，搅拌，加入固体CuCl2 (0. 40g，3mmol)，而后在氮气气氛下升温回流，直到反应完成为 止（通常12小时）。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX3CH2C12萃取， 合并萃取相，依次用0. 5%稀盐酸、0. 5%EDTA溶液和盐水（lOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干 燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物VII-1，白色固体。ESI-MS，m/ z= 473 ([M+H]+) 〇
[0031] 步骤5.化合物1-1的合成
[0032]化合物VII-1 (0? 94g, 2mmol)和轻乙基哌嗪VIII-1 (1. 30g,lOmmol)溶于 10mL二 甲苯中，在氮气气氛中升温回流，直到反应完成（通常6小时）。反应混合物小心倾倒入 200mL冰水中，搅拌，用50mLX3CH2C12萃取，合并萃取相，用盐水（lOOmLX5)洗涤，无水硫酸 钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物1-1，白色固体。ESI-MS，m/z= 544 ([M+H]+)。
[0033] 实施例2-4
[0034] 参照实施例1的方法，合成了下表所列化合物。
[0035]
[0036] 实施例5化合物体外抑制EGFR和HER2分析
[0037] 使用以下实验来测定本发明所述化合物在体外对erbB家族酪氨酸激酶（EGFR和 HER2)的活性抑制作用。
[0038]体外激酶分析用CellSignalingTechnology公司的HTScanEGFReceptorKinase AssayKit和HTScanHER2/ErbB2KinaseAssayKit检测。操作步骤参照试剂盒说明书，该 方法在体外检测待测化合物对EGFR或Her2受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑制作用。 室温下激酶反应缓冲液中温育ATP和底物肽以及待测化合物，孵育一段时间后，加入终止 液终止反应并将样品转移到链霉亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP标记的抗底物磷酸 化抗体检测底物肽上的磷酸化水平，用TMB显色，2M硫酸中止反应。检测450nm吸收波长， 计算IC5。值（nM)。结果见下表。
[0039]
[0040] 从上表结果可以看出，本发明的化合物对EGFR和HER2具有很强的抑制作用，可以 作为制备抗肿瘤的药物。
[0041] 实施例6化合物对细胞增殖的抑制作用
[0042] 细胞增殖抑制试验采用人乳腺癌细胞BT474、人胃癌细胞系NCI-N87、人肺癌细胞 Calu-3和人皮肤癌细胞A431，其中BT474高表达Her2受体，N87高表达EGFR和Her2受体。 在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM) 中，在37°C、5% 0)2细胞培养箱中培养细胞，应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸（EDTA)从细胞 培养瓶中收获细胞。细胞以4000/孔（0.lmL培养基）加入96孔细胞培养板贴壁过夜，加 入0.lmL待测化合物的稀释液，DMS0的最终浓度为0. 25 %，将细胞培养板在37°C，5 %的C02 条件下温育72h。然后在显微镜下观察细胞形态的变化，然后每孔加入50% (质量/体积） 的三氯乙酸（TCA)50yL固定细胞。TCA的终浓度为10%，静置5min后在4°C冰箱中放置 lh，培养板各孔用去离子水冲洗5遍，以去除TCA，甩干，空气干燥至无湿迹。每孔加0. 4% (质量/体积）的SRB100yL，室温放置lOmin，弃去各孔内液体后用1 %乙酸冲洗5遍，空 气干燥后用pH为10. 5，10mMTris(三羟甲基氨基甲烷）150yL萃取，检测540nm的吸收波 长。结果IC5。值（nM)见下表。
[0043]
[0044] 由上表可以看出，本发明的化合物对EGFR和HER2高表达的肿瘤细胞具有很高的 抑制活性，可以作为制备抗肿瘤的药物。
【主权项】
1. 具有通式I结构的化合物，其中，X选自卤素取代基。2. 权利要求1所定义的通式I化合物，选自下列化合物，3. 合成权利要求1-2任一项所定义的属于通式I的化合物的方法：化合物II与甲酰胺在加热的条件下反应，得到化合物III;化合物III使用三氯氧磷 处理，得到化合物IV;化合物IV在碱存在下与化合物V反应，得到化合物VI;化合物VI在 CuCl2催化下与丙烯酸异丙酯加成，得到VII;化合物VII与VIII在高温下反应，得到化合 物I;X的定义如权利要求1-2任一项所述。4. 权利要求1-2任一项所定义的通式I化合物在制备治疗肿瘤疾病药物方面的应用。
【专利摘要】本发明涉及肿瘤疾病领域。具体而言，本发明涉及一类多取代的苯并喹唑啉类酪氨酸激酶抑制剂、其制备方法物以及在制备治疗肿瘤疾病中的应用。其中，X选自卤素取代基。
【IPC分类】A61P35/00, C07D239/94
【公开号】CN105130913
【申请号】CN201510532842
【发明人】蔡子洋
【申请人】佛山市赛维斯医药科技有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月25日