本发明涉及生物技术、农业领域，尤其涉及的是一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺。
背景技术：
近两百年来，工业技术革命引发了农业科技革命，化肥、农药、机械和电力进入原有的以可再生的生物质物质能量循环为基础的闭合式体系，产生了工业化的农业——“近代农业”。近代农业的发展极大促进了农村及社会经济的进步。然而，一系列不可修复的问题随之涌现：农村及城镇生态环境严重破坏，植物病虫害抗药性增强，部分生物种群濒临灭绝，食品内化肥农药残留使人类摄入过量引发疾病。科技与生产、人类与自然的关系极不和谐，资源、环境和生态问题已成为中国这样一个农业大国可持续发展的主要瓶颈，也是世界各国面临的一个严峻挑战。当以生物技术和信息技术为主导的新农业革命成为新的科技驱动时，农业科技不再只是化肥农药的事了。传统的“天、地、人合一”的农业理念重被拾起，生物防治作为减少化学药剂的一种有效方式，从“被遗忘的角落”重返“历史的舞台”。现代生物技术手段正成为人类改变非良性农业循环模式的一把利刃，极大缓解了科技与生产、人类与自然的突出矛盾。生物防治作为减少化学农药的一种有效方式越来越受到重视，开发低毒、高效、无残留的生物农药已经是一项紧迫的任务。
蜡样芽孢杆菌能促进植物生长且对多种植物病害有明显的抑制作用，能在植物活体内定植，对寄主植物不产生任何危害并与其建立和谐关系，促进植物生长，减少病害虫害，提高植物抵御不良环境的能力并减少化肥使用量。
蜡样芽孢杆菌在菌剂加工过程中存在着菌体死亡率高的问题，加工的粉剂和液体制剂在储存中存在芽孢存活率低、抑菌率低、货架期短的问题，而且单个蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率低。在发酵工业中，为了延长菌体的寿命，增加生物农药制剂抑菌效率，对菌体采用干燥和抗菌素复配措施。
技术实现要素：
本发明的目的是为了改进现有技术的不足而提供一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺。
本发明的技术方案为：一种蜡芽孢杆菌与抗生素复配制备生物农药的工艺，其具体步骤为：(1)活化培养：将蜡样芽孢杆菌bacilluscereuscmcc63305的1～2个菌落接入活化培养基中，控制培养液体积装液量为10～20％，活化培养温度为30～40℃，ph为6.5～8.5，转速为160～200r/min，活化培养10～20h得活化液；(2)发酵培养：将活化液等体积接种于发酵培养基中，控制发酵培养温度为30～40℃，ph为6.5～8.5，转速为160～200r/min，通气速率0.5～2.0vvm，发酵培养8～11h添加糖和无机盐，发酵培养20～25h添加多元醇、氨基酸和抗菌素溶液，搅拌均匀后进行喷雾干燥。
优选步骤(1)中所述的活化培养基成分为：葡萄糖5.0～20.0g/l、蛋白胨5.0～10.0g/l、酵母膏3.0～8.0g/l和nacl3.0～8.0g/l。
优选步骤(2)中发酵培养基成分为：葡萄糖5.0～20.0g/l、蛋白胨5.0～15.0g/l、酵母膏3.0～8.0g/l、nacl3.0～8.0g/l、mgso4·7h2o0.1～1.5g/l和kh2po41.0～5.0g/l。
优选步骤(2)中添加的糖为葡萄糖、蔗糖或乳糖的一种或多种；糖的添加量与发酵液的体积比为2.5～6.5g/l。
优选步骤(2)中添加的无机盐为氯化钠、磷酸二氢钾或氯化钙的一种或多种；无机盐的添加量与发酵液的体积比为0.01～0.03g/l。
优选步骤(2)中添加的多元醇为聚乙二醇1000、山梨醇或甘油的一种或多种；多元醇的添加量与发酵液的体积比为4.5～7.5g/l。
优选步骤(2)中添加的氨基酸为精氨酸或赖氨酸的一种或两种；氨基酸的添加量与发酵液的体积比为2.5～5.5g/l。
优选步骤(2)中添加的抗菌素溶液为多抗菌素溶液、安来霉素溶液或井冈霉素溶液的一种或多种；抗菌素溶液浓度为1500～1800mg/l；抗菌素溶液的添加量与发酵液的体积比为6.5～10.5g/l。
优选步骤(2)中喷雾干燥采用压力式喷嘴雾化，参数为：进风口温度为100～150℃，喷口压力为10～20mpa，容积干燥强度为3～6kg/(m3·h)，出风口温度为50～60℃，流化层高度为200～300mm，运行时间2～3min。
本发明所述的蜡样芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是bacilluscereus，参据的微生物：njyh63305，保藏日期是2010年11月15日，保藏中心登记入册编号是cgmccno.4348.
蜡样芽孢杆菌具有下述性质：
(1)形态与培养特征：
在固体平板上37℃培养，15～30h形成脱落的芽孢，到30～40h芽孢大部分脱落。菌体呈链状杆菌，菌体大小1.0um×3.0um，椭圆形芽孢，芽孢位于杆菌中心或稍微偏向一端，大小1.0um×1.8um。在肉汤培养基上生长浑浊并产生菌膜；在营养琼脂上37℃培养24h，形成圆形凸起菌落，菌落边缘整齐，呈乳白色、不透明，菌落表面呈毛玻璃状，迎光呈白蜡样。
(2)生理生化特性:
主要生理生化特征见表1：
表1菌株的生理生化特征
注：+：阳性或生长；－：阴性或不生长
有益效果:
本发明得到蜡样芽孢杆菌活菌-抗生素复配制剂，显著提高菌体存活率和对农作物的抑菌效率。本方法工艺简单，生产周期短，操作简便，解决了常规方法生产的蜡样芽孢杆菌生物农药制剂活力低的问题，更加适用于工业化生产的需求。
保藏信息
上述的蜡样芽孢杆菌，其分类命名为蜡样芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是bacilluscereus，参据的微生物：njyh63305，该菌株是由本实验室选育并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物所)，其简称为cgmcc，保藏日期是2010年11月15日，保藏中心登记入册编号是cgmccno.4348。
具体实施方式
以下结合实例来进一步解释本发明，但实施案例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1：
(1)活化培养：将蜡样芽孢杆菌bacilluscereuscmcc63305的1个菌落接入活化培养基中，控制培养液体积装液量为10％，活化培养温度为30℃，ph为6.5，转速为160r/min，活化培养10h。活化培养基成分为(g/l)：葡萄糖5.0、蛋白胨5.0、酵母膏3.0、nacl3.0。
(2)发酵培养：将活化液等体积接种于发酵培养基中，改变发酵条件，使得发酵培养温度为30℃，ph为6.5，转速为160r/min，通气速率0.5vvm，发酵培养8h添加糖和无机盐，发酵培养20h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液，搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/l)：葡萄糖5.0、蛋白胨5.0、酵母膏3.0、nacl3.0、mgso4·7h2o0.1、kh2po41.0。糖为葡萄糖，添加量与发酵液的体积比为2.5g/l。无机盐为氯化钠和磷酸二氢钾，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为0.01g/l。多元醇为聚乙二醇1000和山梨醇，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为4.5g/l。氨基酸为精氨酸，添加量与发酵液的体积比为2.5g/l；抗菌素溶液为多抗菌素溶液，浓度为1500mg/l，添加量与发酵液的体积比为6.5g/l；喷雾干燥的参数为：进风口温度为100℃，喷口压力为10mpa，容积干燥强度为3kg/(m3·h)，出风口温度为50℃，流化层高度约200mm，运行时间2min。
(3)结果：所得制剂经稀释平板计数后计算，菌体存活率达65％，与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比，存活率提高15％。在农业生产中，以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾，对农作物的抑菌作用达65％，与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高15％。
实施例2：
(1)活化培养：将蜡样芽孢杆菌bacilluscereuscmcc63305的2个菌落接入活化培养基中，控制培养液体积装液量为15％，活化培养温度为35℃，ph为7.0，转速为180r/min，活化培养15h。活化培养基成分为(g/l)：葡萄糖10.0、蛋白胨6.0、酵母膏5.0、nacl5.0。
(2)发酵培养：将活化液等体积接种于发酵培养基中，改变发酵条件，使得发酵培养温度为35℃，ph为7.0，转速为180r/min，通气速率1.5vvm，发酵培养9h添加糖和无机盐，发酵培养22h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液，搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/l)：葡萄糖15.0、蛋白胨10.0、酵母膏5.0、nacl5.0、mgso4·7h2o0.8、kh2po42.5；糖为蔗糖和乳糖，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为4.5g/l。无机盐为磷酸二氢钾和氯化钙，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为0.02g/l。多元醇为聚乙二醇1000和甘油，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为6.0g/l。氨基酸为赖氨酸，添加量与发酵液的体积比为4.5g/l。抗菌素溶液为等浓度的多抗菌素和井冈霉素混合溶液，体积比为1：1，总浓度为1650mg/l，混合溶液添加量与发酵液的体积比为8.5g/l。喷雾干燥的参数为：进风口温度为130℃，喷口压力为15mpa，容积干燥强度为4.5kg/(m3·h)，出风口温度为55℃，流化层高度约250mm，运行时间2.5min。
(3)结果：所得制剂经稀释平板计数后计算，菌体存活率达85％，与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比，存活率提高35％。在农业生产中，以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾，对农作物的抑菌作用达80％，与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高30％。
实施例3：
(1)活化培养：将蜡样芽孢杆菌bacilluscereuscmcc63305的2个菌落接入活化培养基中，控制培养液体积装液量为20％，活化培养温度为40℃，ph为8.5，转速为200r/min，活化培养20h。活化培养基成分为(g/l)：葡萄糖20.0、蛋白胨10.0、酵母膏8.0、nacl8.0。
(2)发酵培养：将活化液等体积接种于发酵培养基中，改变发酵条件，使得发酵培养温度为40℃，ph为8.5，转速为200r/min，通气速率2.0vvm，发酵培养11h添加糖和无机盐，发酵培养25h添加多元醇、氨基酸、抗菌素溶液，搅拌均匀后进行喷雾干燥。发酵培养基成分为(g/l)：葡萄糖20.0、蛋白胨15.0、酵母膏8.0、nacl8.0、mgso4·7h2o1.5、kh2po45.0；糖为乳糖，添加量与发酵液的体积比为6.5g/l。无机盐为氯化钠和氯化钙，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为0.03g/l。多元醇为山梨醇和甘油，体积比为1：1，总添加量与发酵液的体积比为7.5g/l；氨基酸为赖氨酸，添加量与发酵液的体积比为5.5g/l；抗菌素溶液为等浓度的多抗菌素溶液和安来霉素溶液的混合溶液，体积比为1：1，混合溶液浓度为1800mg/l，混合溶液的添加量与发酵液的体积比为10.5g/l；喷雾干燥的参数为：进风口温度为150℃，喷口压力为20mpa，容积干燥强度为6kg/(m3·h)，出风口温度为60℃，流化层高度约300mm，运行时间3min。
(3)结果：所得制剂经稀释平板计数后计算，菌体存活率达70％，与蜡样芽孢杆菌经常规液体发酵后直接进行喷雾干燥相比，存活率提高20％。在农业生产中，以200g/(hm2)的剂量进行叶面喷雾，对农作物的抑菌作用达70％，与单纯使用蜡样芽孢杆菌制剂抑菌效率提高20％。