专利名称：白首乌中新的化合物开德苷元3－O－β－磁麻糖苷及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体为从白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight中提取分离得到的新化合物开德苷元3-O-β-磁麻糖苷的化学结构，具有抗肿瘤的作用，以及该新化合物的制备方法及该新化合物在医药领域中的用途，尤其是在制备预防和治疗肿瘤药物方面的应用。
背景技术：
肿瘤是一大类严重威胁人民生命和健康的多发病及常见病，全世界每年新发的癌症病人有1000万，每年死亡的癌症病人630万，需要治疗的癌症病人大概在2000万。我国现有癌症病人不少于200万，而我国每年新发病人数约有160万人。每5个死亡病例中就有一个死于癌症，每200个家庭中就有1个癌症患者。世界卫生组织要求21世纪癌症在全世界减少40％，为实现这个目标，任重而道远。
白首乌为江苏地产药材，栽培历史达100年之久，在民间被当作何首乌的替代品，有时则作为独立的药材，具有补肝肾、强筋骨、益精血、健脾益气之功效，主治腰膝酸痛、阳痿遗精、头晕耳鸣、心悸失眠、食欲不振、小儿疳积、产后乳汁稀少、疮痈肿痛、毒蛇咬伤等。现代药理实验表明，白首乌中甾体酯甙类活性物质具有抗肿瘤、抗衰老、调节免疫功能、抗缺氧、降血脂等功效，近年来国内外对白首乌类药材化学成分和药理活性的研究工作相当活跃，从天然资源中寻找高效低毒的C21甾体衍生物直接用于临床或作为新药合成的半成品研究，受到世界各国的高度重视。
发明内容
本发明者致力于从天然产物中寻找更安全更有效的纯天然肿瘤抑制剂，经过不断努力，从江苏省地产药材白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight中分离得到了一种C21甾体类新化合物，并发现了它具抑制肿瘤细胞的活性，从而完成了本发明。本发明的目的是要提供具有抑制肿瘤功能的新的C21甾体类化合物，为研制开发抗肿瘤新药提供新的天然活性物质。本发明是通过如下技术方案完成的，具体内容包括C21甾体新化合物的提取分离，结构鉴定，抗肿瘤活性研究及可能的医药用途的探讨。
(1)提取分离以白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight根茎为原料，经水或有机溶剂或它们的混合溶剂提取，提取液减压浓缩后溶于水中，氯仿萃取部分经硅胶柱层析分离得到。
有机溶剂包括石油醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醇、甲醇或正丁醇，硅胶包括30-60目、60-100目、100-200目、200-300目或300目以上型号。
本发明具体利用采集于江苏省滨海县，经自然干燥的白首乌的根茎，用氯仿回流提取，提取液经减压浓缩得氯仿提取物。此提取物再溶于水制成混悬液，分别用石油醚和氯仿萃取，得到石油醚萃取部分和氯仿萃取部分，经减压浓缩、干燥后分别得到石油醚萃取物和氯仿萃取物，取氯仿萃取物利用硅胶柱层析进行粗分离，再利用ODS柱层析进行进一步分离、纯化，最终获得新化合物。
(2)结构鉴定新化合物为白色无定形粉末(甲醇)，mp166-169℃，Libermann-Burchard反应和Keller-Kiliani反应阳性，遇水振摇起泡丰富，表明为C21甾体酯苷类化合物。ESI-MS(m/z)显示677.3[M+Na]+，1331.6[2M+Na]+，分子量654。结合氢谱和碳谱推测，分子式为C37H50O10。UVλmaxMeOHnm221、。IR bands(KBr，νmax，cm-1)3478，1710，1635，1580，1490，1450，1380，1365，1350，1310，1280，1255，1170，1110，1090，1065，990，770，690。1H-NMRδ6.80(1H，d，J＝16.00Hz，2′-CH反式双键)，7.34(3H，m，6′，7′，8′-CH)，7.62(2H，d，J＝7.64Hz，5′，9′-CH)，7.99(1H，d，J＝16.01Hz，3′-CH)，13C-NMRδ165.79，119.25，144.92，135.83，128.58，129.32，130.59，129.32，128.58，提示苷元部分有肉桂酰(Cin)酯基，苷元鉴定为开德苷元(Kidjoranin)。与开德苷元相比，该化合物的C3化学位移向低场移动6ppm，C2、C4化学位移分别向高场移动2.14和4.33ppm，有明显的苷化位移，故为C-3连糖的糖苷。13C-NMR谱中1个糖的端基碳信号96.38和1H NMR谱中1个糖的端基氢信号5.17(1H，dd，J＝9,4Hz)，说明为单糖苷。苷元开德苷元分子量为510，单糖分子量则为144，是一种2，6-去氧-3-O-甲基糖。与文献对照，单糖为β-D-磁麻糖(加拿大麻糖，cymarose)。与已知化合物WilfosideK1N相比，该化合物少了3个糖信号δc100.91，99.43，99.00。所以鉴定该新化合物为开德苷元3-O-β-磁麻糖苷(Kidjoranin 3-O-β-cymaropyranoside)。结构式如下
新化合物的的1H-NMR、13C-NMR数据(300MHz，δppm from TMS in C5D5N，J＝Hz)
(3)抗肿瘤活性研究1、实验用样品新化合物开德苷元3-O-β-磁麻糖苷；2、实验方法试验方法为国际通用的MTT法取对数生长期细胞，制备细胞悬液；调整细胞浓度为1×107/L，接种于96孔培养板内，每孔加入200μl细胞悬液，预先培养24h；按实验分组办法加入不同剂量药物200μl/孔，各组设6个复孔，分别培养12、24、36、48h；每孔加入20μl浓度为5g/L的MTT，继续培养4h，使MTT还原为甲臜。吸出全部上清液后，每孔加二甲基亚砜(DMSO)150μl。用平板摇床震摇10min，使甲臜充分溶解后，运用酶联免疫检测仪测定490nm处的吸光度(OD值)。然后，按照公式计算细胞抑制率，实验结果见下表。
生长抑制率(％)＝(1-加药孔平均A值/空白对照孔平均A值)×100％3、实验数据肿瘤细胞株 Hela HCT-8 A-549 MCF-7 IA-9IC5040.25μg/ml55.84μg/ml60.25μg/ml90.16μg/ml 80.36μg/ml肿瘤细胞株 U-87-MGCAKI-1 PC-3 KBKB-VIN SK-MEL-2IC5059.05μg/ml75.39μg/ml45.15μg/ml65.38μg/ml 69.38μg/ml 50.72μg/ml4、实验讨论上述实验结果表明，开德苷元3-O-β-磁麻糖苷对11种不同的肿瘤细胞株均显示抑制作用。本发明为研制新的抗癌药物提供了新的先导化合物，对开发利用江苏省地产药材白首乌具有重要价值。
本发明的新化合物与医学上可接受的药用辅料组成的药物组合物及其制剂。
本发明的新化合物在制备预防与治疗肿瘤药物中的用途。
本发明的新化合物，作为药物活性成分，可以制备成常规的药用剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液及注射用粉针剂或水针液。
图1新化合物的ESI-MS图。
图2新化合物的IR图。
图3新化合物的1H-NMR图。
图4新化合物的13C-NMR图。
图5新化合物的提取分离流程图。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步的说明，但本发明的内容并不仅仅局限于所列举的实施例。实验用白首乌Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的根茎，2003年8月采集于江苏省滨海县。
实施例1经自然干燥的白首乌根茎10公斤，用乙醇回流提取三次，乙醇用量分别为白首乌根茎重量的12、10、8倍，提取时间分别为120、90、60分钟，提取液减压浓缩后加水溶解，再分别石油醚、氯仿萃取，萃取液减压浓缩。氯仿萃取物经柱层析分离后分别得到500毫克没新化合物。
实施例2经自然干燥的白首乌根茎10公斤，用甲醇回流提取三次，甲醇用量分别为白首乌根茎重量的12、10、8倍，提取时间分别为90、60、30分钟，提取液减压浓缩后加水溶解，再分别石油醚、氯仿萃取，萃取液减压浓缩。氯仿萃取物经柱层析分离后分别得到500毫克新化合物。
实施例3经自然干燥的白首乌根茎10公斤，用氯仿回流提取三次，乙醇用量分别为白首乌根茎重量的12、10、8倍，提取时间分别为100、80、60分钟，提取液减压浓缩后加水溶解，再分别石油醚、氯仿萃取，萃取液减压浓缩。氯仿萃取物经柱层析分离后分别得到500毫克新化合物。
实施例4胶囊剂的制备取上述新化合物，加药用辅料淀粉适量，充分混匀后装入胶囊，制成每粒含上述新化合物100mg的胶囊剂供口服使用。
权利要求
1.从白首乌中提取分离得到的具有抗肿瘤作用的新化合物开德苷元3-O-β-磁麻糖苷，其特征在于化学结构式如下
2.权力要求1所述的新化合物的制备方法，其特征在于以白首乌Cynanchum auriculatumRoyle ex Wight根茎为原料，经水或有机溶剂或它们的混合溶剂提取，提取液减压浓缩后溶于水中，氯仿萃取部分经硅胶柱层析分离得到。
3.权力要求2所述的制备方法，其特征在于有机溶剂包括石油醚、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醇、甲醇或正丁醇，硅胶包括30-60目、60-100目、100-200目、200-300目或300目以上型号。
4.权力要求1所述的化合物，其特征在于对肿瘤细胞株Hela、HCT-8、A-549、MCF-7、IA-9、U-87-MG、CAKI-1、PC-3、KB、KB-VIN、SK-MEL-2的抑制活性。
5.权利要求1所述的新化合物与医学上可接受的药用辅料组成的药物组合物及其制剂。
6.权力要求1所述的新化合物在制备预防与治疗肿瘤药物中的用途。
7.权力要求5所述的制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，具体为一种从白首乌中分离的抗肿瘤化合物开德苷元3－O－β－磁麻糖苷，分子式C
文档编号A61K31/7028GK101029069SQ20071002137
公开日2007年9月5日 申请日期2007年4月10日 优先权日2007年4月10日
发明者冯煦, 赵兴增, 王鸣, 董云发, 赵友谊, 陈雨, 印敏 申请人:江苏省中国科学院植物研究所