一种高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌hs11bd1菌株及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HS11BD1(Bacillus subtilis HS11BD1)菌株，该菌株的基因序列如SEQ ID NO.1所示。该菌株具有高分泌枯草菌素的优点，能够应用于制备抗大肠杆菌的药物中。同时，将该菌株作为助剂添加进家禽家畜饲料中，能够显著提高家禽家畜生长速度，降低腹泻率，对于蛋鸡、肉鸡以及仔猪和肥育猪的效果尤其明显。本发明提供的高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HS11BD1(Bacillus subtilis HS11BD1)菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：湖北省武汉市武昌区武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2014637。CCTCC NO：M201463720141207
【专利说明】一种高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HS11BD1菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌菌株，具体涉及一种高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌 HS11BD1菌株，以及该菌株的用途，属于微生物应用【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 现代规模化和集约化养殖方式的迅速发展，导致饲养密度过大、养殖环境质量下 降等多种问题的出现，破坏了动物胃肠道正常菌群的微生态平衡，使条件性致病菌大量增 殖，降低动物对病菌的抵抗力，易引起动物各种消化道疾病。为达到防治动物疾病、促进动 物生长的目的，目前主要采用改善饲养管理和在饲料中添加抗生素的方法，但大量抗生素 广泛应用于动物生产中，也带来了菌株的药物耐药性增强、药物残留增加、动物易感性增 力口、免疫力下降等各种不良后果，甚至会导致人畜共患的、具有超强耐药性的超级细菌出 现，这种状况引起了科研工作者和广大消费者的高度关注。
[0003] 随着益生菌微生态制剂技术的不断开发和积累，其具有的安全性、无毒性、无残留 性以及有利于生态环境的可持续发展等的特点，使其成为抗生素替代品的首选。微生态制 剂可分泌多种物质，抑制病原菌的生长，改善动物免疫力。而芽孢杆菌更是应用于微生态制 剂最为广泛的一个菌株。在恶劣环境下，芽孢杆菌以孢子的形式存活，在饲料颗粒和胃酸环 境中仍有较强的活性，可产生多种抗菌素和多种酶类，在改善动物生产性能、维持动物胃肠 道微生态平衡、提高饲料利用率等方面有很好的作用。
[0004] 自然界中，不同的芽孢杆菌菌株在益生性能上存在较大的不同，某些抗菌素的分 泌状况也存在较大的差异，特别是对枯草菌素高分泌的菌株应用尚未见报道。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HS11BD1 (Bacillus subtilis HS11BD1)菌株，该菌株的的保藏编号为：CCTCC N0:M2014637,该菌株的基因序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0006] 该菌株具有高分泌枯草菌素的优点，能够应用于制备抗大肠杆菌的药物中。
[0007] 同时，将该菌株作为助剂添加进家禽家畜饲料中，能够显著提高家禽家畜生长速 度，降低腹泻率，对于蛋鸡、肉鸡以及仔猪和肥育猪的效果尤其明显。
[0008] 本发明提供的高产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HS11BD1 (Bacillus subtilis HS11BD1)菌株于2014年12月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：湖北省武汉 市武昌区武汉大学，保藏编号为CCTCC NO :M2014637。
【具体实施方式】
[0009] 下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局 限于以下实施例。
[0010] 实施例1菌株的筛选、鉴定及检测
[0011] HSlIBDl菌株的筛选
[0012] 制备土壤稀释液：从黄石天坑采取的土壤样品称取10g，放入150ml的无菌水中， 摇床150r/min震荡50min，置于50°C的水浴锅中30min，取出静置到溶液澄清。无菌操作吸 取上清液Iml与9ml的无菌水，用无菌水稀释为ΚΓ 1、ΚΓ2、10' ΚΓ4、ΚΓ5、10' 10' ΚΓ8、KT9 共九个浓度梯度。
[0013] 培养：每个稀释浓度按5%的接种量接入到灭菌过后冷却至55°C左右的NA培养 基中（牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂粉20.0g，蒸馏水1000ml，pH7.0)，置于 30°C恒温培养箱中培养48h。
[0014] 筛选单菌落：待培养皿中长出菌落后，根据枯草芽孢杆菌的形态挑取单个菌落接 种于NA培养皿中，30°C培养36?48h。
[0015] 菌株纯化：采用平板划线分离纯化方法，至平板上检测为单一菌株，并命名为 HS11BD1。
[0016] 菌株保藏：纯化的HSlIBDl菌株保存于_20°C的低温冰箱中。
[0017] 菌株的鉴定
[0018] 1、形态观察：将HS11BD1菌株接种于NA培养基中培养适当时间后做革兰氏染色镜 检观察。
[0019] 2、染色镜检结果：HS11BD1菌株为杆状细菌，革兰氏染色为阳性G+，鞭毛侧生，有 芽孢，芽孢椭圆形，中生，芽孢囊不明显膨胀。
[0020] 表I HSlIBDl菌株形态学特征
[0021]
【权利要求】
1. 一种高产枯草菌素的枯草芽抱杆菌HS11BD1 (Bacillus subtilis HS11BD1)菌株，该 菌株的的保藏编号为：CCTCC NO :M2014637,该菌株的基因序列如SEQ ID NO. 1所示。
2. 权利要求1所述的枯草芽孢杆菌HS11BD1菌株在制备抗大肠杆菌的药物中的应用。
3. 权利要求1所述的枯草芽孢杆菌HS11BD1菌株在家禽家畜饲料中的应用。
4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的家禽饲料为蛋鸡和肉鸡饲料。
5. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的家畜饲料为仔猪和肥育猪饲料。
【文档编号】A61K35/742GK104480047SQ201410799351
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月20日 优先权日:2014年12月20日
【发明者】孙国平, 吴正荣, 刘俊, 陈义杰, 范博文 申请人:湖北博大高科生物技术有限公司