专利名称：新的金属蛋白酶抑制剂、它们的制备方法和含有它们的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的金属蛋白酶抑制剂、一种它们的制备方法和含有它们的药物组合物。
生理状态中，结缔组织的合成与细胞外基质的降解处于动态平衡。该降解作用是由于已有的基质细胞分泌锌蛋白酶(金属蛋白酶)的结果；那些蛋白酶包括(但不限于)胶原酶(MMP-1)、明胶酶或Ⅳ型胶原酶(MMP-2、MMP-9)和溶基质素(MMP-3)。
正常状态下，上述异化酶可通过其合成与分泌进行调节，也可用天然抑制剂调节其细胞外的酶活性，天然抑制剂如α2-巨球蛋白或TIMPs(金属蛋白酶的组织抑制剂)可与金属蛋白酶形成无活性配合物。
涉及那些酶的病理学中的一个共同因素是活化酶的活性与其天然抑制剂活性之间的不平衡，其结果是组织降解过度。
金属蛋白酶催化了细胞外基质的再吸收作用，从而导致了失控的和加速的膜降解作用，后者是大量病理学条件的共同参数，例如类风湿性关节炎、关节炎、肿瘤发生与生长(包括恶性扩散与转移瘤的形成)、溃疡、动脉硬化等。
BB94是一种金属蛋白酶抑制剂，近来在临床应用中表现出抗肿瘤活性，已证实有抗卵巢癌活性(Becket等《DDT》1996,1(1),16)。
因此可以预期金属蛋白酶抑制剂将恢复蛋白酶与抑制剂之间的平衡，从而令人欣慰地矫正那些病理状态的发展。
在文献中已有描述一定数量的金属蛋白酶抑制剂，尤其是如专利申请WO95/35275、WO95/35276、EP606046和WO96/00214中所述的化合物。
本发明化合物不仅是新颖的，而且已被证明是金属蛋白酶抑制剂，这使它们可潜在地用于治疗癌症、风湿性疾病，如关节炎与类风湿性关节炎、动脉硬化等。
具体来说，本发明涉及式(Ⅰ)化合物，其异构体，及其与一种药学上可接受的酸或碱所形成的加成盐
其中m代表一个1至4的整数，含1和4，n与p可以相同或不同，彼此独立地代表一个0至4的整数，含0和4，X代表一个氧原子或硫原子或一根单键，R1代表一个氢原子、一个卤原子、一个直链或支链(C1-C6)烷基、一个直链或支链(C1-C6)三卤代烷基、一个羟基、一个直链或支链(C1-C6)烷氧基或一个直链或支链(C1-C6)三卤代烷氧基，R2、R3与R4可以相同或不同，彼此独立地代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，R5代表一个氢原子、一个卤原子、一个直链或支链(C1-C6)烷氧基、一个芳氧基或一个杂芳氧基，R6、R7与R8可以相同或不同，彼此独立地代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或与连接基团R6的氮原子以及连接基团R7与R8的碳原子共同(R6与R7或R6与R8)构成一个可选被取代的杂环，其余的基团(分别为R8或R7)具有上述含义之一，R9代表任一种下列基团*-SO3H，
*-CO2R10，其中R10代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，*-CO-NR11R12，其中R11与R12可以相同或不同，每个代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或者R11和R12与连接它们的氮原子共同构成一个可选被取代的杂环，*-NR13R14，其中R13与R14可以相同或不同，每个代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或者R13和R14与连接它们的氮原子共同构成一个可选被取代的杂环。
应当认识到-芳基用来指苯基、萘基、二氢萘基或四氢萘基，这些基团的每一个均可选被一或多个相同或不同的基团取代，取代基选自卤素、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)三卤代烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、直链或支链(C1-C6)三卤代烷氧基或羟基，-杂芳基用来指一个芳基，该芳基可选被一或多个如上定义的基团取代，且含有一、二或三个相同或不同的选自氧、氮或硫的杂原子，-杂环用来指饱和或不饱和的单环或双环的4至7元基团，该基团含有一、二或三个相同或不同的选自氧、氮或硫的杂原子，所述杂环还可能可选被一或多个相同或不同的基团取代，取代基选自卤素、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、羟基、氨基(可选被一或两个相同或不同的直链或支链(C1-C6)烷基取代)，或者所述杂环还可能可选被另一个杂环取代。
药学上可接受的酸例如可包括(但不限于)氢氯酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸等。
药学上可接受的碱例如可包括(但不限于)氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔丁胺等。
本发明还延及式(Ⅰ)化合物的制备方法，其特征在于使用一种式(Ⅱ)的外消旋形式或纯对映体形式的D-色氨酸化合物作为起始物质，
其中R1、R2、R3和R4如式(Ⅰ)定义，吲哚环系的胺官能团被一种式(Ⅲ)的卤代化合物取代，Z-(CH2)m-CO2Ra(Ⅲ)其中m如式(Ⅰ)定义，Z代表一个卤原子，Ra代表一个直链或支链(C1-C6)烷基，得到一种式(Ⅳ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，式(Ⅳ)化合物侧链的胺官能团被催化氢化反应脱保护，得到一种式(Ⅴ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，该化合物在一种强酸和甲醛的存在下，环化得到一种式(Ⅵ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，该式(Ⅵ)化合物在一种碱性介质中与一种式(Ⅶ)卤化物缩合，
其中R5如式(Ⅰ)定义，Z代表一个卤原子，得到一种式(Ⅷ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、Ra和m如上定义，该化合物在一种碱性介质中且在二环己基碳二亚胺的存在下，与一种式(Ⅸ)的O-取代的羟胺缩合，H2N-O-R15(Ⅸ)其中R15代表一个烯丙基或苄基，得到一种式(Ⅹ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R15、Ra和m如上定义，该化合物的羧酸官能团在例如三氟乙酸的存在下脱保护，得到一种式(Ⅺ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R15和m如上定义，该化合物与一种式(Ⅻ)的胺缩合，
其中R6、R7、R8、R9、n和p如式(Ⅰ)定义，得到一种式(ⅩⅢ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R15、m、
n和p如上定义，式(ⅩⅢ)化合物的羟胺官能团脱保护，得到一种式(Ⅰ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、m、n和p如上定义，该式(Ⅰ)化合物必要时按照常规精制技术进行精制，适当情况下按照常规分离技术分离为异构体，需要时用一种药学上可接受的酸或碱转化为其加成盐。
式(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅶ)、(Ⅸ)和(Ⅻ)是商业产品或按照常规的有机合成法制得。
本发明还延及药物组合物，该组合物含有至少一种式(Ⅰ)化合物、其旋光异构体或其与一种药学上可接受的酸或碱形成的加成盐作为活性成分，单用或结合一或多种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋型剂或载体。按照本发明的药物组合物尤其涉及那些适用于口服、胃肠外(静脉内、肌内或皮下)、鼻腔、直肠、经皮或透皮、经舌、眼部或呼吸给药者，特别是片剂、糖衣丸、舌下片、软明胶胶囊、硬胶囊、栓剂、乳膏、软膏、皮肤凝胶、注射剂、饮用悬液、气雾剂、滴眼剂或滴鼻剂等。
按照病症的性质与严重性、给药途径、任何辅助治疗的给药方式、以及患者的年龄与体重，可对使用剂量进行调整。每天剂量从0.01g至2g不等，可一或多次给药。
下列实施例说明本发明，但无论如何不起限定作用。
所用起始原料是已知的，或按照已知方法制备。
制备步骤A至G得到的合成中间体用于制备本发明的化合物。
实施例与制剂例中所述化合物的结构已按照惯用的分光光度技术(红外、NMR、质谱……)进行了测定。
实施例1盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰基)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺步骤A:1-[(叔丁氧基羰基)甲基]-Nα-苄氧基羰基-D-色氨酸在-78℃、一种惰性气氛下，向100g Nα-苄氧基羰基-D-色氨酸的一升无水四氢呋喃溶液中滴加600ml NaHMDS(1,1,1,3,3,3-六甲基二硅氮烷的钠盐)的四氢呋喃溶液(1M)。一小时后，将温度升至0℃，滴加64g溴乙酸叔丁酯在50ml无水四氢呋喃中的溶液。然后将反应混合物温度升至室温，随后在真空中蒸去溶剂。残余物用二氯甲烷稀释，所得溶液通过加入4N氢氯酸溶液进行酸化。用二氯甲烷萃取后，有机相经硫酸钠干燥，然后在真空中浓缩。得到136g预期化合物。
步骤B:1-[(叔丁氧基羰基)甲基]-D-色氨酸将136g步骤A中得到的产物用1.5升甲醇稀释，在1.2巴H2压力下，在5g 10％Pd/C的存在下，进行氢化反应。在室温下反应12小时后，将溶液过滤，然后在真空中浓缩。以浅褐色粉末的形式得到87g预期化合物。熔点260℃步骤C:9-[(叔丁氧基羰基)甲基]-2,3,4,9-四氢-β-咔啉-(3R)-羧酸向85g步骤B中得到的产物的600ml水悬液中加入130ml 0.1N硫酸溶液，然后滴加130ml 37％甲醛溶液。在室温下反应48小时后，将反应混合物过滤，用水洗涤，然后经P2O5干燥。得到相应于预期化合物的82.6g白色固体。熔点230℃步骤D:9-[(叔丁氧基羰基)甲基]-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-羧酸向80g步骤C中得到的产物的1.5升二噁烷溶液中加入750ml水，再加入85ml三乙胺。将反应混合物冷却至0℃，滴加用100ml二噁烷稀释过的60g 4-甲氧基苯磺酰氯。然后将反应混合物温度升至室温，搅拌12小时。在真空中蒸发掉二噁烷后，残余的溶液用水稀释，然后通过加入4N氢氯酸溶液进行酸化，用二氯甲烷萃取。有机相合并，随后用水洗涤，然后用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，在真空中浓缩。残余物从戊烷重结晶，以白色粉末的形式得到115.2g所需化合物。熔点150℃步骤E:9-[(叔丁氧基羰基)甲基]-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-烯丙氧基)羧酰胺在0℃下，向100g步骤D中得到的化合物的1.5升二甲基甲酰胺溶液中加入24.1g O-烯丙基羟胺、27g羟基苯并三唑、41.2g二环己基碳二亚胺和31ml三乙胺。在室温下搅拌12小时后，反应混合物在真空中浓缩。残余物用乙酸乙酯稀释，然后连续用10％碳酸氢钠水溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤。然后，有机相经硫酸钠干燥，蒸发，以油形式得到120g预期化合物。
步骤F:2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-[(N-烯丙氧基)羧酰胺]-9-乙酸在0℃下，向50g步骤E中得到的化合物的500ml无水二氯甲烷溶液中加入70ml三氟乙酸。在室温下12小时后，反应混合物在真空中浓缩，所得残余物从乙醚结晶，以浅褐色固体的形式得到30.8g所需化合物。熔点160℃步骤G:2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰基)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-烯丙氧基)羧酰胺在0℃下，向3.5g步骤F中得到的化合物的50ml二甲基甲酰胺溶液中加入1ml N-(3-氨基丙基)吗啉、0.95g羟基苯并三唑和1.5g二环己基碳二亚胺。在室温下12小时后，反应混合物首先过滤以除去过量的二环己基碳二亚胺，然后在真空中浓缩。残余物用二氯甲烷稀释，用水洗三次、然后用饱和氯化钠溶液洗涤；随后，有机相经硫酸钠干燥，然后减压蒸发。预期化合物随后用硅胶层析法分离(洗脱剂二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵95/5/0.5)。
步骤H盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰基)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺在室温、一种惰性气氛下，向2.5g步骤G中得到的化合物的50ml二氯甲烷溶液中加入0.7ml 乙酸和0.14g Pd(PPh3)2Cl2。5分钟后，加入2.3ml氢化三正丁基锡，反应混合物在室温下保持一小时，然后蒸发至干。残余物然后用己烷稀释。生成一沉淀，滤出，用氢氯酸水溶液稀释；后者用水、然后用己烷洗涤。过滤和冷冻干燥后，得到2g预期化合物。元素微量分析CH NCl S％计算值54.06 5.83 11.26 5.70 5.15％实测值54.28 5.98 11.29 5.88 4.87实施例2乙酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(2-吗啉-4-基乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用N-(2-氨基丙基)吗啉作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CH NS％计算值55.14 5.90 11.09 5.08％实测值54.79 6.06 10.89 4.99实施例3盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(4-吗啉-4-基丁基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用N-(4-氨基丁基)吗啉作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CHN Cl S％计算值54.75 6.02 18.01 5.57 5.04％实测值54.53 6.27 10.58 5.75 5.23实施例4盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-甲基-9-[(2-吗啉-4-基乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用2-[(苄氧基羰基)氨基]-2-甲基-3-(1H-3-吲哚基)-(2R)-丙酸作为底物，在步骤G中使用例2中所用的试剂，得到预期产物。
实施例5盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-甲基-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例4步骤A中所用的化合物作为底物，得到预期产物。
实施例6盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-4,4-二甲基-9-[(2-吗啉-4-基乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用2-[(苄氧基羰基)氨基]-3-甲基-3-(1H-3-吲哚基)-(2R)-丁酸作为底物，在步骤G中使用实施例2中所用的试剂，得到预期产物。
实施例7盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-4,4-二甲基-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例6中所用的底物，得到预期产物。
实施例8:2-{[4-(4-吡啶氧基)苯基]磺酰基}-9-[(2-吗啉-4-基乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤D中使用4-(4-吡啶氧基)苯磺酰基氯作为试剂，在步骤G中使用实施例2中所用的试剂，得到预期产物。
实施例9盐酸2-{[4-(4-吡啶氧基)苯基]磺酰基}-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤D中使用实施例8的试剂，得到预期产物。
实施例10盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-(2-[1,4’]-二哌啶-1’-基-2-氧-乙基)-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用[1,4’]-二哌啶作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CHNClS
％计算值57.62 6.24 10.84 5.49 4.96％实测值57.58 6.13 10.49 5.72 4.86实施例11盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[2-(2-吗啉-4-基乙基sulphanyl)乙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用2-[(2-吗啉代乙基)sulphanyl]乙胺作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CH NCl S％计算值52.13 5.73 10.48 5.31 9.60％实测值52.80 5.80 10.33 5.20 9.34实施例12盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[3-(3-吗啉-4-基丙基sulphanyl)丙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用3-[(3-吗啉代丙基)sulphanyl]丙胺作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析C HN Cl S％计算值53.486.0810.065.099.21％实测值53.106.049.60 5.058.95实施例13盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[2-(3-吗啉-4-基丙基sulphanyl)乙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用2-[(3-吗啉代丙基)sulphanyl]乙胺作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析C HN Cl S％计算值52.815.9110.265.209.40％实测值52.885.799.98 5.259.06
实施例14盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[3-(2-吗啉-4-基乙基sulphanyl)丙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用3-[(2-吗啉代乙基)sulphanyl]丙胺作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CH NCl S％计算值52.81 5.91 10.26 5.20 9.40％实测值53.35 5.88 10.12 5.21 9.11实施例15盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[N-甲基-(2-吗啉-4-基乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用N-甲基-3-(氨基丙基)吗啉作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CH NCl S％计算值54.06 5.83 11.26 5.70 5.15％实测值54.32 5.81 10.86 5.81 4.68实施例16:2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(2-磺乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用2-氨基乙磺酸作为试剂，得到预期产物。
质谱[M-H]-=565实施例17盐酸2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(1,1-二甲基-(2-吗啉-4-基)乙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤G中使用N-[(2-氨基-2-甲基)丙基]吗啉作为试剂，得到预期产物。
元素微量分析CH NCl S％计算值54.75 6.02 11.01 5.57 5.04％实测值55.16 6.22 11.17 5.36 4.78实施例18二盐酸6-羟基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(3-羧丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用N-苄氧基羰基-5-羟基-D-色氨酸作为底物，在步骤G中使用4-氨基丁酸作为试剂，得到预期产物。
实施例19盐酸6-甲氧基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(3-氨甲酰丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用N-苄氧基羰基-5-甲氧基-D-色氨酸作为底物，在步骤G中使用4-氨基丁酰胺作为试剂，得到预期产物。
实施例20盐酸6-甲氧基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[(4-(N,N-二甲基)氨甲酰)丁基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例19步骤A所用的底物，在步骤G中使用N,N-二甲基-5-氨基戊酰胺作为试剂，得到预期产物。
实施例21盐酸6-甲氧基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[3-(N-乙基)氨甲酰)丙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例19步骤A所用的底物，在步骤G中使用N-乙基-4-氨基丁酰胺作为试剂，得到预期产物。
实施例22二盐酸6-羟基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-[(4-氨基丁基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例18步骤A所用的底物，在步骤G中使用1,4-丁二胺作为试剂，得到预期产物。
实施例23:6-甲氧基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[6-(N,N-二甲基)氨基己基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例19步骤A所用的底物，在步骤G中使用N1,N1-二甲基-1,6-己二胺作为试剂，得到预期产物。
实施例24盐酸6-甲氧基-2-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-9-{[2-(N-丙基)氨基乙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用实施例19步骤A所用的底物，在步骤G中使用N1-丙基-1,2-乙二胺作为试剂，得到预期产物。
实施例25:2-(4-氟苯磺酰基)-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰)甲基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤D中使用4-氟苯磺酰基氯作为试剂，得到预期产物。
实施例26:2-[(4-甲氧基苯)磺酰基]-9-{[3-(2-甲基哌啶子基)丙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤E中使用1-(3-氨基丙基)-2-甲基哌啶作为试剂，得到预期产物。
实施例27:2-[(4-甲氧基苯)磺酰基]-9-{[3-(羟基磺酰基)丙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤E中使用3-氨基-1-丙磺酸作为试剂，得到预期产物。
实施例28:2-[(4-甲氧基苯)磺酰基]-9-{[2-(2-氨基乙氧基)乙基氨甲酰]甲基}-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤E中使用2-(2-氨基乙氧基)-1-乙胺作为试剂，得到预期产物。
实施例29:2-[(4-甲氧基苯)磺酰基]-9-[(3-吗啉-4-基丙基氨甲酰)乙基]-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-(3R)-(N-羟基)羧酰胺按照与实施例1所述相同的方法，在步骤A中使用1-溴丙酸叔丁酯作为试剂，得到预期产物。本发明化合物的药理学研究实施例30对金属蛋白酶的酶抑制作用四种重组人体MMP-1酶(细胞间质胶原酶)、MMP-2酶(72kDa明胶酶A)、MMP-3酶(溶基质素1)和MMP-9酶(92kDa明胶酶B)用APMA(乙酸4-氨基苯基汞)激活。
用一种拟肽底物进行酶试验DnpProChaGlyCys(Me)HisAlaLys(Nma)NH2该底物在甘氨酸与半胱氨酸之间断开，生成一种荧光衍生物(《分析生物化学》Anal.Bio chem.212,58-64,1993)。
在37℃下，用100μl总体积中的20μM底物引发反应，反应在pH7.7的50mM Tris、200mM NaCl、5mM CaCl2、0.1％Brij的缓冲系中进行。六小时后，在荧光计的96孔板中测量所得荧光度，荧光计装配了用于激发和发射的340nm和440nm滤波器的组合。
试验中，本发明化合物对MMP-1酶的IC50值表现为30至400nM，对MMP-2、MMP-3和MMP-9酶的IC50值表现为0.1至42nM。具体来说，实施例2化合物对MMP-1酶的IC50值表现为32.6nM，实施例11化合物对MMP-2、MMP-3和MMP-9酶的IC50值分别表现为1.6nM、3.1nM和0.1nM。
实施例31体外血管生成按照Nicosia和Ottinetti(1990)的方法，将8至12周龄的雄性Fischer 344大鼠的部分胸主动脉浸渍在Ⅰ型胶原质凝胶中。在无血清培养基中培养五天后，用显微镜检查制剂，通过数字化与图象分析后的血管密度定量分析拟血管的生成。
作为举例，当在1μM下进行试验时，实施例2、13与15的化合物抑制了50至100％的新血管生成。
实施例32药物组合物用于制备1000片的配方(每片含有10mg活性成分)实施例1化合物………………………………………10g羟丙基纤维素…………………………………………2g
小麦淀粉………………………………………………10g乳糖……………………………………………………100g硬脂酸镁………………………………………………3g滑石……………………………………………………3g
权利要求
1．式(Ⅰ)的化合物，其异构体，及其与一种药学上可接受的酸或碱所形成的加成盐
其中m代表一个1至4的整数，含1和4，n与p可以相同或不同，彼此独立地代表一个0至4的整数，含0和4，X代表一个氧原子或硫原子或一根单键，R1代表一个氢原子、一个卤原子、一个直链或支链(C1-C6)烷基、一个直链或支链(C1-C6)三卤代烷基、一个羟基、一个直链或支链(C1-C6)烷氧基或一个直链或支链(C1-C6)三卤代烷氧基，R2、R3与R4可以相同或不同，彼此独立地代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，R5代表一个氢原子、一个卤原子、一个直链或支链(C1-C6)烷氧基、一个芳氧基或一个杂芳氧基，R6、R7与R8可以相同或不同，彼此独立地代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或与连接基团R6的氮原子以及连接基团R7与R8的碳原子共同(R6与R7或R6与R8)构成一个可选被取代的杂环，其余的基团(分别为R8或R7)具有上述含义之一，R9代表任一种下列基团*-SO3H，*-CO2R10，其中R10代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，*-CO-NR11R12，其中R11与R12可以相同或不同，每个代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或者R11和R12与连接它们的氮原子共同构成一个可选被取代的杂环，*-NR13R14，其中R13与R14可以相同或不同，每个代表一个氢原子或一个直链或支链(C1-C6)烷基，或者R13和R14与连接它们的氮原子共同构成一个可选被取代的杂环。
2．根据权利要求1的式(Ⅰ)化合物的制备方法，其特征在于使用一种式(Ⅱ)的外消旋形式或纯对映体形式的D-色氨酸化合物作为起始物质，
其中R1、R2、R3和R4如式(Ⅰ)定义，吲哚环系的胺官能团被一种式(Ⅲ)的卤代化合物取代，Z-(CH2)m-CO2Ra(Ⅲ)其中m如式(Ⅰ)定义，Z代表一个卤原子，Ra代表一个直链或支链(C1-C6)烷基，得到一种式(Ⅳ)化合物，
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，式(Ⅳ)化合物侧链的胺官能团被催化氢化反应脱保护，得到一种式(Ⅴ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，该化合物在一种强酸和甲醛的存在下，环化得到一种式(Ⅵ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、Ra和m如上定义，该式(Ⅵ)化合物在一种碱性介质中与一种式(Ⅶ)卤化物缩合，
其中R5如式(Ⅰ)定义，Z代表一个卤原子，得到一种式(Ⅷ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、Ra和m如上定义，该化合物在一种碱性介质中且在二环己基碳二亚胺的存在下，与一种式(Ⅸ)的O-取代的羟胺缩合，H2N-O-R15(Ⅸ)其中R15代表一个烯丙基或苄基，得到一种式(Ⅹ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R15、Ra和m如上定义，该化合物的羧酸官能团在例如三氟乙酸的存在下脱保护，得到一种式(Ⅺ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R15和m如上定义，该化合物与一种式(Ⅻ)的胺缩合，
其中R6、R7、R8、R9、n和p如式(Ⅰ)定义，得到一种式(ⅩⅢ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R15、m、n和p如上定义，式(ⅩⅢ)化合物的羟胺官能团脱保护，得到一种式(Ⅰ)化合物
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、m、n和p如上定义，该式(Ⅰ)化合物必要时按照常规精制技术进行精制，适当情况下按照常规分离技术分离为异构体，需要时用一种药学上可接受的酸或碱转化为其加成盐。
3．含有至少一种根据权利要求1的化合物作为活性成分的药物组合物，单用或结合一或多种药学上可接受的、惰性的、无毒的赋型剂或载体。
4．根据权利要求3的药物组合物，该药物组合物含有至少一种根据权利要求1的活性成分，用作金属蛋白酶抑制剂。
全文摘要
式(Ⅰ)的化合物、其异构体,及其与药学上可接受的酸或碱所形成的加成盐,其中,m代表1至4的整数,含1和4,n与p代表0至4的整数,含0和4,X代表O、S或单键,R
文档编号A61K31/435GK1217332SQ9812231
公开日1999年5月26日 申请日期1998年11月13日 优先权日1997年11月14日
发明者G·德, 南提乌尔, G·莱蒙德, J·帕拉迪诺, G·阿塔希, A·皮埃尔, G·塔克, J·伯奈特, M·萨巴蒂尼 申请人:阿迪尔公司