对接结果
[010引在窗口中打开4化P配体的晶体构象，按CT化+1使Discovery studio浏览器恢复通 常状态。在档浏览器中找到A链的Site 1，右键点击，选择化en With I 3D Window,4FLP配体 的晶体构象将在一个新的=维窗口中打开。
[0109]在DSS维窗口中打开所有对接产生的对接构象，在档浏览器中，打开对接作业输 出文件夹。将晶体构象定义为结构比较的参考构象，在系统视图中，点击第一个配体构象 (4FLP配体）选择它，运个构象即对应晶体构象。从菜单中选择structure I RMSD I Set Reference,将4FLP晶体构象设置为RMSD计算的参考构象。
[0110] 在菜单中选择Structure IRMSD I胎avy Atoms，逐个排查和计算对接产生的姿态与 晶体姿态的差异。
[01川 6、结果
[0112] BRDT蛋白的活性位点如图3所示，JQl与BRDT的活性口袋按照1 ibdock模块进行对 接如图4所示，得分值为118.924, W此分值作为确定阳性化合物的标准。将初筛得到的270 个化合物与BRDT的活性口袋按照1 ibdock对接方式进行虚拟对接，筛选出打分值高于阳性 对照的化合物为125个。
[0113] 实施例5 JQl与服DT的量效关系
[0114] 1、方法
[0115] 将JQl化合物进行3倍梯度稀释;将扣1样品与IOiil BRDT漠结构域館馨合物混合， 室溫下解育15min进行预平衡；加入化1的BRDT漠结构域配体/APC受体混合物引发反应;将 板子用侣锥密封在室溫解育化，检测620nm和670nm发射光的数值。
[0116] 2、结果
[0117] 实验结果如图5所示，随着JQl浓度的增大，JQl对人BRDT蛋白结合的抑制作用增 加，其 ICso 为 133nM。
[011引实施例6化合物蛋白水平筛选
[0119] 1、待测样品预处理
[0120] (1)取5mg纯品化合物溶到50化1 DMSO中；
[0121] (2)筛选的化合物样品用1 XTR-FRET Assay Buffer稀释10倍。
[0122] (3)阳性化合物JQl用1 XTR-FRET Assay Buffer溶解至四倍的终浓度10測。
[0123] 2、化合物的检测
[0124] (1)将化1样品与IOiil BRDT漠结构域館馨合物混合，室溫下解育15min进行预平 衡；
[0125] (2)加入扣1的BRDT漠结构域配体/APC受体混合物引发反应，反应体系如下面表1 所示；
[01%] 表1筛选模型检测体系
[0128] (3)将板子用侣锥密封在室溫解育化，检测620nm和670nm发射光的数值。
[0129] 3、数据分析
[0130] WTR-FRET比值(670皿发射光/620nm发射光)计算样品与抓DT蛋白的亲和力，TR-FRET比值越低，样品与BRDT蛋白的亲和力越强。
[0131] 4、结果
[0132] 定义化合物浓度为IOOiiM时抑制率大于30%的化合物为阳性化合物，经过筛选，得 到一抑制率为44.39 %的化合物T225,结构式如图6所示。
[0133] 实施例7 T225与服DT蛋白的量效关系
[0134] 1、方法
[0135] 将T225化合物进行2倍倍比的稀释;将扣1样品与IOiil BRDT漠结构域館馨合物混 合，室溫下解育15min进行预平衡;加入扣1的BRDT漠结构域配体/APC受体混合物引发反应； 将板子用侣锥密封在室溫解育化，检测620nm和670nm发射光的数值。
[0136] 2、结果
[0137] 实验结果如图7所示，随着T225浓度的增大，T225对人BRDT蛋白结合的抑制作用增 加，其 ICso 为 32.12±0.63測。
[013引实施例8 T225与服DT活性位点的分子对接
[0139] 按照实施例4所述的方法，进行T225与BRDT蛋白活性位点的分子对接;结果T225与 BRDT蛋白活性位点的虚拟对接分数为119.362。
[0140] 实施例9 T225的ADMET性质预测
[0141] 1、导入T225化合物文件
[0142] 在文件菜单中新建服DT_inhibitors.sd文件，使用DS 3.0的"构建与编辑"模块构 画2个已知结构的服0巧巧制剂，构画完成后显示在服DT_inhibitors Molecule Window中。
[0143] 2、选择计算性质，运行计算流程
[0144] 在protocols浏览器中，打开ADMET文件夹，双击ADMET Descriptors，打开参数浏 览器。在"I叩Ut Ligands"右边的栅格中，选择"BRDT_inhibitors"，选择T225化合物。在 "ADMET Descriptors"右边栅格中勾选所有性质，此操作将计算T225化合物的所有ADMET性 质。
[0145] 3、运行预测
[0146]点击ProtocoIs too化ar中的运行按钮开始预测，等待运行完成后，双击任务浏览 器中刚完成的作业，打开ItepOTt.htm，点击该档中Ou化Ut部分的View Results连结，打开计 算的结果。
[0147] 4、分析预测结果
[0148] 结果档中包含了预测的6种ADMET性质（25 °C下水溶解度、血脑屏障通透性、细胞色 素 P4502D6抑制性、肝毒性、人类肠道吸收性和血浆蛋白结合率）的数值和该数值所对应的 级别。
[0149] 5、结果
[0150] 实验结果如图8所示，纵坐标从0到3依次代表很好、适中、差和极差，从图中可W看 出化合物T225的血脑屏障通透性(BBB)相对较差，人类肠道吸收性化IA)较好，在25°C水溶 解度(S化)较差，无细胞色素 P4502D6抑制性。
[0151] 上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核屯、思想。应当指出，对于本 领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W对本发明进行若干改进 和修饰，运些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种BRDT蛋白抑制剂在制备雄性抗生育药物组合物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛋白抑制剂与BRDT的溴结构域相结 合。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述BRDT蛋白抑制剂为BRDT蛋白的小分 子抑制剂。4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述小分子抑制剂为T225。5. -种抗生育药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括T225或其药学上可接受 的盐或其异构体或其水合物或溶剂化物。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接 受的稀释剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂、表面活性剂、包衣材料等中的一种或几种。7. 根据权利5或6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的受体为人。8. -种筛选权利要求1-4任一项所述BDRT蛋白抑制剂的方法，其特征在于，筛选步骤如 下： (1) 构建人BRDT小分子抑制剂药效团模型 从P D B数据库下载人B R D T与J Q1共结晶活性构象的三维立体结构文件，输入到 Discovery Studio 3.0的药效团构建模块，利用Discovery Studio 3.0对BRDT活性构象立 体结构进行加氢和除水的处理，设置各参数，根据乙酰-赖氨酸结合口袋JQ1和BRDT的相互 作用方式识别活性位点，然后依据和受体的相互作用模式对所有的作用位点进行聚类，得 到可用于虚拟筛选的药效团模型； (2) 使用利平斯基五规则和ADMET预测对化合物库进行类药性预测； (3) 基于药效团模型对化合物库进行虚拟筛选 将构建好的药效团模型作为3D提问结构输入对大型化合物数据库进行高通量虚拟筛 选，保留匹配一半以上药效特征元素的化合物，然后再次通过利平斯基五规则进行过滤； (4) 基于分子对接对化合物库进行虚拟筛选 利用L i bdo ck进行对接研究，采用相同的BRDT的活性构象的三维结构和Charmm力场，定 义对接位点，将JQ1对接到BRDT活性位点，以对接构象是否满足催化机制为依据进行打分函 数的选择和参数优化； (5) 体外蛋白水平的筛选 使用BRDT Bromodomain TR-FRET Assay试剂盒进行化合物的体外检测； (6) 对阳性化合物与BRDT蛋白进行量效关系检测； (7) 对阳性化合物进行分子对接检测； (8) 对阳性化合物进行ADMET预测。9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（1)中的参数设置为:亲脂性位点密度 参数为15，极性位点参数为20;最小结构特征的参数为4，最大参数特征的参数为6。10. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的对接位点定义为一个以活性 位点为中心的直径9A的球形，这个球形足以覆盖81?1'与川1结合位点的关键氨基酸残基。
【专利摘要】本发明公开了一种BRDT蛋白抑制剂在雄性抗生育中的应用，具体地本发明公开了一种BRDT蛋白小分子抑制剂在雄性抗生育中的应用，同时本发明还公开了一种以BRDT为靶标，利用计算机辅助虚拟筛选的理性化筛选抗生育药物的方法。
【IPC分类】A61K45/00, A61P15/16, A61K31/4184, G06F19/00, G01N33/68
【公开号】CN105597100
【申请号】CN201610009457
【发明人】王慧萍, 高娜娜
【申请人】国家卫生计生委科学技术研究所
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月7日