1.一种新型基因克隆T-载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
将序列如SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14的两侧含XcmI酶切位点的ccdB基因分别克隆至pBluescript II(KS-),分别获得pLS3417和pLS3424,宿主菌为大肠杆菌DB3.1;XcmI酶切去除ccdB基因后获得T-载体。
2.一种新型基因克隆T-载体,其特征在于通过下述方法构建得到:将序列如SEQ ID NO.13SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14的两侧含XcmI酶切位点的ccdB基因分别克隆至pBluescript II(KS-),分别获得pLS3417和pLS3424,克隆宿主菌为大肠杆菌DB3.1;XcmI酶切去除ccdB基因后获得T-载体。
3.权利要求2所述新型基因克隆T-载体的应用,是以Taq聚合酶扩增的PCR产物和T-载体相连后,转化大肠杆菌DH10B,在含氨苄青霉素、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷和5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的筛选平板上,含有自连载体的菌株呈现篮斑,而含重组克隆的菌株为白斑,以此筛选得到重组克隆。