技术总结
本发明涉及一种新型基因克隆T‑载体及其构建方法和应用。具体为将两侧含XcmI酶切位点的ccdB基因克隆至pBluescript II(KS‑)，分别获得pLS3417和pLS3424，宿主菌为大肠杆菌DB3.1，XcmI酶切去除ccdB基因后获得T‑载体。T‑载体设计为通过保留T和A两个碱基而保持lacZα读码框结构，以提供α‑互补的功能。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物和T‑载体相连后，转化大肠杆菌DH10B，在含氨苄青霉素、异丙基硫代‑β‑D‑半乳糖苷5‑溴‑4氯‑3‑吲哚‑β‑D‑半乳糖苷的筛选平板上，含有自连载体的菌株呈现篮斑，而含重组克隆的菌株为白斑，以此筛选得到重组克隆。
技术研发人员：尚广东;陈中秋
受保护的技术使用者：南京师范大学
文档号码：201610944866
技术研发日：2016.10.26
技术公布日：2017.02.15