棕色粉末。产率：43% (311mg)。HPLC:93%。MS:315(M+1)。
[0647] 5-(3-氨基-4-甲基-苄氨基）-lH_吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅
[0648] 黄色粉末。产率：90% (240mg)。HPLC:85%。MS:311(M+1)。
[0649] 5-(3-氨基-苄氨基）-lH_吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅
[0650]灰白色粉末。产率：87% (351mg)。HPLC:99%。MS:297(M+1)。
[0651]步骤3:制备5-|5-「4-(4_甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯甲酰胺 基1-苄氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅的一般橾作方案
[0652] 将4_(4_甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酸溶解于含有DIEA(5当 量）和HATU(2当量）的无水DMF(0.06mol/L)中。15分钟后，缓慢加入胺衍生物，并于室温 搅拌混合物12小时。蒸发DMF，并加入NaHC03(7Xg?ift)。用EtOAc萃取产物，干燥，过滤并蒸 发，以获得深色混合物。通过用MeOH或EtOAc洗涤或者通过硅胶柱纯化后，获得呈淡黄色 或橙色橙色粉末的预期产物。
[0653] 表5显示根据以上所述的合成方案21合成的化合物。
[0654] 表5 _通过实施例D获得的化合物
[0655]
[0656]
[0657]
[0658] 实施例E:从由OriBasePharma公司购得的试剂开始，3阶段合成5- {2-甲 基-5-[3-酰胺基]-苯甲酰胺基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯
[0659] 方案22表不合成5_ {2-甲基_5_[3_酰胺基]-苯甲酰胺基}-1H-吡略并[2, 3_b] 吡啶-2-羧酸甲酯的一般方法。
[0660]
[0661] 方案22 _实施例E的一般合成方案
[0662] 步骤1 :制备5_(2_甲基-5-硝基-苯甲酰胺基）-lH_吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅的一般橾作方案。
[0663] 将5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（5. 74g，30mmol)、2_甲 基-5-硝苄基酸（5. 44g，30mmol)、HATU(11. 42g，30mmol)、DIEA(26mL，150mmol)溶解于无水 DMF(300L)中，于室温搅拌48小时。蒸发DMF，加入NaHC03(7Xg?ift)，产生沉淀并过滤，用水和石 油醚/Et20洗涤。获得预期的产物（9. 94g，28mmol)。产率=93%。4NMR(300MHz,DMS0-d6) 8 8. 53 (s, 2H), 8. 37 (d,J= 2. 5, 1H), 8. 26 (dd,J= 2. 5, 8. 4, 1H), 7. 63 (d,J= 8. 5, 1H), 7. 1 6(s, 1H), 3. 86(s, 3H), 3. 17(s, 1H), 2. 54(s, 3H)oESI-MS:m/z355([M+H]+)oHPLC纯度：95%。
[0664] 步骤2 :制备5-(5_氨基-2-甲基-苯甲酰胺基）-lH_吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅的一般橾作方案。
[0665] 将5-(2-甲基-5-硝基-苄氨基）-lH_吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（9. 8g， 27. 7mmol)、甲醇（300mL)以及10%钯碳（0. 95g，10%w/w)置于填充30bar氢气的高压反 应器中，并搅拌24小时。在硅藻土上过滤混合物，并用甲醇洗涤。蒸发溶剂，以获得棕色固 体（7.35g，22.7mmol)。产率=81%。4NMR(300MHz，DMS0-d6)Sl〇.29(s，lH)，8.55(s，2H ),7. 15 (s, 1H), 6. 94 (d,J= 8. 2, 1H), 6. 71 (d,J= 2. 3, 1H), 6. 60 (m, 1H), 5. 08 (s, 2H), 3. 86 ( s，3H),2.21(s，3H)。ESI-MS:m/z325([M+H]+)。HPLC纯度：95%。
[0666] 步骤3 :制备5-12-甲基-5_「3-酰胺基1-苯甲酰胺基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅的一般橾作方案
[0667] 将酸衍生物溶解于含有DIEA(5当量）和HATU(2当量）的无水DMF(0. 06mol/L) 中。15分钟后，缓慢加入5-{2-甲基-5-[3-氨基]-苯甲酰胺基}-lH-吡咯并[2,3-b]吡 啶-2-羧酸甲酯，并于室温搅拌混合物12小时。蒸发DMF，加入NaHC03(7Xg?ift)。用EtOAc萃 取产物，干燥，过滤并蒸发，以获得暗色混合物。通过用MeOH或EtOAc洗涤或者通过硅胶柱 纯化后，获得呈淡黄色或橙色粉末状的预期产物。
[0668] 表6显示根据以上所述合成方案20合成的化合物。
[0669] 表6 _通过实施例E获得的化合物
[0670]
[0671]
[0672]实施例F:合成5-12-甲基-5_「5-硫代苯甲酰胺基1-苄氨基丨-1H-吡咯并 「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲酉3
[0673] 合成5_{2_甲基-5-[5_硫代苯甲酰胺基]-苄氨基}-lH_吡咯并[2,3_b]吡 啶-2-羧酸甲酯的一般方法示于方案23中。
[0674]
[0675] 方案23 -实施例F的一般合成方案
[0676] 从酰胺衍牛物合成硫酰胺的一般稈序:
[0677] 于130°C，加热5_{2_甲基-5-[5_苯甲酰胺基]-苄氨基}-lH_吡咯并[2,3_b]吡 啶-2-羧酸甲酯（100mg)和劳氏试剂（方案23中的"LR"）（1. 8当量）在5mL氯苯中的混 悬液2小时。蒸发溶剂，通过硅胶色谱法（水+1%TFA/乙腈+1%TFA)纯化残留物。蒸发 溶剂后，将残留物溶于水中，用NaHC03碱化至pH7-8,并用AcOEt萃取。然后经Na2S04干燥 有机层，并除去溶剂，以得到黄色固体。
[0678] 表7 _通过实施例F获得的化合物
[0679]
[0680]
[0681] 实施例G:合成5-{2_甲基-5-[4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯 甲酰胺基]-苄氨基}_1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸丙酯
[0682]合成5-{2_甲基-5-[4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯甲酰胺 基]-苄氨基}-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸丙或乙酯的一般方法示于方案24的2个 步骤中。
[06831
[0684] 方案24 _实施例G的一般合成方案
[0685]步骤1:合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲 酰胺基1-苄氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸（0R0623)
[0686]于65°C，加热5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲 酰胺基]-苄氨基}_1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（580mg)和氢氧化钾（5当量） 在水（3mL)和甲醇（3mL)中的混悬液18小时。蒸发甲醇，并利用HC1 6N将pH中和至pH 7。蒸发溶剂后，用硅胶色谱法（水/乙腈）纯化粗产物残留物，得到棕色固体。
[0687]产率：54% (305mg)
[0688] 4NMR(300MHz，DMSO)S11. 24 (s，1H)，10. 39 (s，1H)，8. 22-8. 15 (m，2H)，7. 94 (d，J =2. 5, 1H), 7. 87 (d,J= 8. 0, 1H), 7. 71-7. 64 (m, 2H), 7. 18 (d,J= 8. 8, 1H), 6. 95 (d,J= 2. 3, 1H), 6. 54 (s, 1H), 5. 94 - 5. 73 (m, 1H), 4. 21 (s, 2H), 3. 65 (s, 2H), 2. 46-2. 24 (m, 11H), 2. 16(s, 3H) 〇
[0689]HPLC：100%；MS：581(M+1)
[0690]步骤2(诜烦1):合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲 基-苯甲酰胺基1-苄氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸丙醅（0R0697)
[0691] 向5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄 氨基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸（80mg)在3. 5mL丙醇中的悬浮液中，加入亚硫酰 氯（3当量）。于KKTC加热混合物过夜。蒸发溶剂，通过硅胶色谱法（乙腈+1%TFA)纯 化粗产物残留物。蒸发溶剂后，将残留物溶解于水中，用NaHCCy?化直至pH9,并用AcOEt 萃取。然后经Na2S04干燥有机层，除去溶剂，得到棕色固体。
[0692]产率：44% (32mg)
[0693]:HNMR(400MHz,DMSO)8(ppm) 11. 98 (s, 1H),10. 33 (s, 1H),8. 20 (s, 1H),8. 2 0(s, 1H), 8. 15(d,J= 8. 1, 1H), 8. 10(d,J= 2. 5, 1H), 7. 88 (d,J= 8.1,1H),7..71-7. 63(m, 2H), 7. 01 (d,J= 2. 5, 1H), 6. 90 (d,J= 2. 1, 1H), 6. 03 (t,J= 5. 4, 1H), 4. 26-4. 18 (m, 4H), 3. 66 (s, 2H), 2. 48 - 2. 38 (m, 8H), 2. 34 (s, 3H), 2. 18 (s, 3H), 0. 97 (t, 3H)
[0694]HPLC：96% ；MS:623. 3 (M+l)
[0695]步骤2(诜烦2):合成5-!2-甲基-5-「4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲 基-苯甲酰胺基1-苄氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸乙醅（0R1082)
[0696] 向5- {2-甲基-5- [4- (4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3-三氟甲基-苯甲酰胺基]-苄 氨基}-lH-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸（90mg)在4mL乙醇中的混悬液中，加入硫酸95% (0. 5当量）。在回流下加热混合物6小时。蒸发溶剂后，通过硅胶色谱法（乙腈+1%TFA) 纯化粗产物残留物。蒸发溶剂后，将残留物溶解于水中，用NaHC03碱化至pH9,并用AcOEt 萃取。然后通过Na2S04干燥有机层，除去溶剂，得到黄色固体。
[0697]产率：37%(35mg)
[0698] 4M!R(400MHz,DMSO)S(ppm) 1H匪R(400MHz,DMSO)S11. 99(s, 1H), 10. 34 (s, 1H), 8. 20-8. 14(m, 2H), 8. 09(d,J= 2. 6, 1H),7. 87 (d,J= 8. 1, 1H),7. 66 (d,J= 9. 5, 2H),7. 19 (d,J= 8. 1, 1H),6. 99 (d,J= 2. 5, 1H),6. 88 (d,J= 2. 0, 1H),6. 05 (t,J= 5. 4, 1H),4. 29 (q,J= 7. 1, 2H),4. 23 (d,J= 5. 4, 2H),3. 65 (s, 2H),2. 46 - 2. 33 (m, 3H),2. 30 (s, 3H), 2. 15 (s, 3H), 1. 30 (t,J= 7. 1, 3H).
[0699]HPLC：96%；MS：609(M+1)
[0700]实施例H:合成5-「3_(苯甲酰胺基-甲基）_苄氨基1-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅和5-「3-(硫代苯甲酰胺基-甲基）-苄氨基1-1H-吡咯并「2, 3-bl吡 啶-2-羧酸甲醅
[0701] 用于合成5-「3-(苯甲酰胺基-甲基）-苄氨基1-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲醅和5-「3-(硫代苯甲酰胺基-甲基）-苄氨基1-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧酸甲 廬的一般方法示于方案25的3或4个步骤中。
[0咖1
[0703] 方案25 -实施例H的一般合成方案
[0704]步骤1:制备3_(苯甲酰胺基-甲基）_苯甲酸甲醅的一般橾作方案
[0705] 将3-氨甲基-苯甲酸甲酯盐酸盐（1当量）、H0Bt(1.2当量）、DIEA(1.2当量）和 EDCI.HC1 (1. 2当量）溶解于干燥DMF(0. 17M)中，并于室温氩气下搅拌30分钟。加入胺衍 生物（1当量），于室温搅拌混合物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHC03溶液。用EtOAc萃 取产物，经Na2S04干燥，过滤并蒸发。在硅胶色谱法上纯化粗产物，蒸发溶剂后得到预期的 产物。
[0706]3-「（3_三氟甲基-苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸甲醅
[0707]白色粉末。产率：45% (528mg)。HPLC:93%。MS:338(M+1)。
[0708]3-!T4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酰胺基1-甲基丨-苯甲酸 甲醅
[0709]黑色粉末。产率：定量（1. 55g)。HPLC:91%。MS:450(M+1)。
[0710]步骤2:合成3-「（3_三氟甲基-硫代苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸甲醅
[0711]于110°C，加热3-[ (3-三氟甲基-苯甲酰胺基）-甲基]-苯甲酸甲酯（528mg)和 劳氏试剂（方案23中的"LR"）（1. 8当量）在26mL甲苯中的混悬液3小时。蒸发溶剂，向 粗产物中加入饱和NaHC03溶液。用EtOAc萃取产物，经Na2S04干燥，过滤并蒸发。在硅胶 色谱法上纯化粗产物油状物，蒸发溶剂后，得到预期的产物。
[0712]黄色油状物。产率：94% (518mg)。HPLC:>99%。MS:354(M+1)。
[0713]步骤3:皂化甲醅的一般橾作方案
[0714] 将甲酯（1当量）悬浮于溶剂（THF/水或MeOH/水_1/1)的混合物中。加入碱性 基（LiOH或K0H，3当量），并在回流下加热混合物直至反应完全（TLC控制）。蒸发有机溶 剂，中和混合物，并用有机溶剂萃取产物。
[0715]3-「（3_三氟甲基-硫代苯甲酰胺基）_甲基1-苯甲酸
[0716]黄色粉末。产率：88% (438mg)。HPLC:98%。MS:340(M+1)。
[0717]3-!T4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯甲酰胺基1-甲基丨-苯甲酸
[0718]产率：54% (792mg)。HPLC:93%。MS:436(M+1)。
[0719]步骤4:似肽偶联反应的一般橾作方案
[0720] 将酸衍生物和HATU(2当量）溶解于无水DMF(0? 1-0. 2mol/L)中。30分钟后，加入 5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（1当量）和DIEA(3-4当量），于室温搅拌 混合物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHC03溶液。用EtOAc萃取产物，经Na2S04干燥，过滤 并蒸发。在反相（H20l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上纯化粗产物。蒸发MeCN。将 产物悬浮于H20中，并用饱和NaHC03溶液碱化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水层三次。蒸 发有机层，得到最终化合物。
[0721] 表8-通过实施例H获得的产物
[0722]
[0723]
[0724]实施例I:从3-氰基-苯甲酸开始，3阶段合成5-!3-(苯氨甲酰基）_苄氨 基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸甲醅。
[0725] 方案26表示合成5-!3-(苯氨甲酰基）_苄氨基丨-1H-吡咯并「2,3-bl吡啶-2-羧 酸甲酯的一般方法
[0726]
[0727] 方案26 _实施例I的一般合成方案
[0728]步骤1:制备3-氰基-苯甲酰胺化合物的一般橾作方案
[0729] 在氩气下，将3-氰基-苯甲酸（1. 2当量）、胺衍生物（1当量）、H0Bt(1. 2当量）、 DIEA(1. 2当量）和EDCI.HC1 (1. 2当量）溶解于干燥DMF(0? 15M)中。于室温搅拌该混合 物过夜。蒸发DMF，并加入饱和NaHC03溶液。用EtOAc萃取产物，经Na2S04干燥，过滤并蒸 发。在反相（H20l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上纯化粗产物。蒸发MeCN。将产物 悬浮于H20中，并用饱和NaHC03溶液碱化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水层三次。蒸发有 机层，得到最终化合物。
[0730]3-氰基-N-(3-三氟甲基-苄基苄基）-苯甲酰胺
[0731]白色粉末。产率：76% (334mg)。HPLC:>99%。MS:305(M+1)。
[0732]3-氰基-N-吡啶-3-基-苯甲酰胺
[0733]棕色粉末。产率：47% (563mg)。HPLC:>99%。MS:224(M+1)。
[0734]3-氰基-N-「4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）-3_三氟甲基-苯基1-苯甲酰胺
[0735]黄色油状物。产率：22% (52mg)。HPLC:92%。MS:403(M+1)。
[0736]步骤2:制备3-甲酰基-苯甲酰胺化合物的一般橾作方案
[0737]在氩气下，将3-氰基-苯甲酰胺中间体（1当量）溶解于吡啶/水/乙酸（2/1/1; 0. 01M)的混合物中。加入水中的雷尼镍（~0. 03vol)，并在大气压力、氢气氛下，于室温搅 拌混合物过夜。然后，经硅藻土床过滤混合物，并用甲醇洗涤。蒸发溶剂。加入饱和NaHC03 溶液。用EtOAc萃取产物，经Na2S04干燥，过滤并蒸发，得到最终化合物。
[0738] 3-甲酰基-N-(3-三氟甲基-苄基）_苯甲酰胺
[0739]黄色油状物。产率：79% (40mg)。HPLC:89%。MS:308(M+1)。
[0740]3-甲酰基-N-吡啶-3-基-苯甲酰胺
[0741]黄色油状物。产率：66% (166mg)。HPLC:>99%。MS :227(M+1)。
[0742]3-甲酰基-N-「4_(4-甲基-哌嗪-1-基甲基）_3_三氟甲基-苯基1-苯甲酰胺
[0743]黄色油状物。产率：57% (30mg)。HPLC:75%。MS:406(M+1)。
[0744]步骤3:制备5-!3-(苯氨甲酰基）_苄氨基丨-1H-吡咯并「2, 3-bl吡啶-2-羧酸 甲醅的一般橾作方案
[0745] 将5-氨基-1H-吡咯并[2, 3-b]吡啶-2-羧酸甲酯（1当量）和3-甲酰基-苯 甲酰胺化合物（1. 1当量）在Me0H/Ac0H(10/l;0. 06M)的混合物中搅拌2小时。然后，缓 慢加入NaBH3CN(l. 2当量），在氩气下，于室温搅拌混合物过夜。通过加入饱和NaHC03溶液 直至中和淬灭反应。蒸发MeOH和乙酸。过滤粗产物并用水和Et20洗涤，然后在反相（H20 l%TFA/MeCN1%TFA100/0,0/100)上纯化。蒸发MeCN。使产物悬浮于H20中，并用饱和 NaHC03溶液碱化直至pH= 8-9。用AcOEt萃取水层三次。经Na2S04干燥有机层，过滤并浓 缩，得到预期的产物。
[0746] 表9-通过实施例I获得的化合物
[0747]
[0748]
[0749] CN 105008355 A IXm -f} 63/74 页
[0750] 生物试验
[0751] 材料和方法：
[0752] 1)体外激酶分析（表B1至B13)
[0753] 通过Invitrogen使用Z/-LYTE1'技术评估化合物对包括BRAF、EGFR(ErbBl)、 EGFR(ErbBl)I790ML858R、FGFR2、KDR(VEGFR2)、PDGFRA(PDGFRa)、SRC以及其它的数种激 酶的抑制活性。简言之，f-L