从95 % 变化至5%。将平衡标准设定为在1分钟内0. 01%的重量变化，其中最大平衡时间为180 分钟。使用约l_15mg的样品。
[0085] C2qH28C12FN5O4的无色叶片，近似尺寸为0· 03mm X0. 12mm X0. 50mm，被用于X射线晶 体学分析。在100 (2) K下于装配有石墨单色器和在I. 2kW的功率下操作的Cu Ka细聚焦 密封管(λ=丨.54丨78A)的Bruker Kappa APEX II系统上（40kV，30mA)测量X射线强度数 据。将该检测器放置在距离晶体5. Ocm的距离处。
[0086] 共收集7824帧，其具有在ω和Φ中0.5°的扫描宽度和90秒/帧的曝光时 间。总数据收集时间为260小时。使狭窄框架（narrow-frame)积分算法将该帧用Bruker SAINT软件包进行积分。使用三斜晶胞的数据的积分产生对于69. 57°的最大Θ角的总 共12349个反射（reflection) (0J3A分辫率)，其中的4046个是独立的（冗余3. 06)， 完整度=93. 6%，Rint= 5. 13%，Rs1r= 5. 18% )，且 3351 个（82. 8% )大于> 2σ (I) σ (F2)。最终的
α = 97.617(4)。、 β = 93.285⑷。、γ = 94.585(5)。、体叙二丨丨45.95(丨3)Α3的晶胞常数依据超过具有 6.196° <2Θ < 138. 239°的20 σ(Ι)的4790个反射的XYZ质心的细化。数据的分析显 示出在数据采集期间可忽略的衰减。针对吸附效果使用多扫描技术（SADABS)对数据进行 修正。最小表观透射率对最大表观透射率之比为0.350。所计算值最小透射系数（基于晶 体尺寸）是〇· 3206且所计算值最大透射系数（基于晶体尺寸）是0· 9168。
[0087] 使用Bruker SHELXTL(版本6. 1)软件包、使用空间群P-I解决并细化了该结构， 其中对于式单元CmH28CI2FN5O 4而言Z = 2。在具有320个变量的F2上的最终各向异性全矩 阵最小二乘细化会聚在Rl = 6. 43% (对于所观察到的数据而言）和wR2 = 19. 18% (对 于所有数据而言）。拟合优度为1.067。最终差分电子密度合成上的最大峰为l.〇84e__/A:v 且最大孔为-0.527eV人3,具有o.ioie-/人3的RMS偏差。在最终模型的基础上，所计算值密 度为 1.4278/61113且？(000)，5166。
[0088] 用于部分水占用率的两个位置被发现并被细化在该结构中。对于每心肌肌球蛋白 激动剂分子〇. 94当量的总的含水量而言，水的占用率独立地被细化至53%和41%。这与 该化合物的这种形式中的含水量的其他测量一致。溶剂化水之一（具有41 %的占用率的那 个）上的氢原子被发现在电子密度差分图中并采用固定在1.0 IA的键长细化。N3、C4和M 上的氢原子被发现并被允许各向同性地细化。将所有其他的氢原子放置在理想的位置并细 化平稳模式（riding mode) 〇
[0089] 采用装配有实时多条（RTMS)检测器的PANalytical X ' Pert PRO衍射仪 (PANalytical，Almelo，The Netherlands)获得X-射线粉末衍射数据（XRPD)。使用的辐射 是CuKa(].54A)且电压和电流分别设定在45kV和40mA。在室温下收集从5至45度2 Θ、 具有0. 0334度的步长的数据。在低的背景样品夹持器上制备样品并将其放置在样品台上， 将样品台旋转2秒的旋转时间。
[0090] 可选地，采用装配有RTMS检测器的PANalytical X ^ Pert PRO衍射仪 (PANalytical，Almelo, The Netherlands)获得 XRPD 数据。使用的福射是CliK(X(]l.54A): 且电压和电流分别设定在45kV和40mA。在室温下收集从5至40度2 Θ、具有〇. 0334度的 步长的数据。在低的背景样品夹持器上制备样品并将其放置在样品台上，将样品台旋转2 秒的旋转时间。
[0091] 可选地，采用装配有RTMS检测器的PANalytical X ' Pert PRO衍射仪 (PANalytical，Almelo, The Netherlands)获得 XRPD 数据。使用的福射是 CuK〇(1.54A) 且电压和电流分别设定在45kV和40mA。在室温下收集从5至40度2 Θ、具有〇. 0167度的 步长的数据。在低的背景样品夹持器上制备样品并将其放置在样品台上，将样品台旋转2 秒的旋转时间。
[0092] 可选地，采用装配有RTMS检测器的PANalytical X ' Pert PRO衍射仪 (PANalytical，Almelo，The Netherlands)获得 XRPD 数据。使用的福射是Cu.K.(X(i.54A). 且电压和电流分别设定在45kV和40mA。在室温下收集从3至40度2 Θ、具有〇. 〇〇8度的 步长的数据。在低的背景样品夹持器上制备样品并将其放置在样品台上，将样品台旋转2 秒的旋转时间。
[0093] 可选地，采用装配有电动xyz样品台和GADDS区域检测器的Bruker D8 Discover X射线衍射系统（Bruker，BilleriCa，MA)获得XRH)数据。使用的辐射是CuKa(l,54/\)且 电压和电流分别设定在45kV和40mA。对平坦的玻璃板上的固体样品进行绘制，且对于每个 样品而言以振荡模式从5至48度2 Θ将Imm2的区域扫描3分钟。
[0094] 使用标准 DSC 模式（DSC Q200, TA Instruments，New Castle，DE)收集差示扫描 量热法（DSC)数据。在40°C至300°C的温度范围内采用10°C /分钟的加热速率。分析在氮 气下运行并将样品装入标准的密封铝盘中。将铟用作校准标准物。
[0095] 可选地，利用温度调节的 DSC 模式（DSC Q2〇0, TA Instruments，New Castle，DE) 收集DSC数据。在20°C下样品平衡五分钟后，在20°C至200°C的温度范围内采用:TC /分 钟的加热速率以及+/-〇. 75°C /分钟的调节。分析在氮气下运行并将样品装入标准的非卷 曲的铝盘中。将铟用作校准标准物。
[0096] 心肌肌球蛋白激动剂二盐酸盐水合物的制备
[0097] 心肌肌球蛋白激动剂的合成路线
[0098]
[0101] 在装配有回流/返回冷凝器和装有5N NaOH溶液的洗涤器的60L反应器（含有 不裸露的不锈钢、或其他金属部分）中，在氮气氛围下将FN-甲苯（2. 0kg， 12.89mol，1.0当量）、N-溴代琥珀酰亚胺（3.9kg，21.92mol，1.7当量）、过氧化苯甲酰 (125. 0g，0. 03当量，0· 39mol，含有25重量％的水）和乙酸（7. 0L，3. 5体积）的机械搅拌混 合物经7小时加热至85°C。加入在单独的容器中制备的H3P03(106 . 0g，1.29mol，0. 1当量） 和乙酸（200mL，0.1体积）的溶液。将反应混合物搅拌0.5小时，且等分试样的分析证实过 氧化苯甲酰的完全分解（未检测到的，HPLC254J。将反应混合物冷却至22°C。装入去离子 水（8.0L，4体积）和甲苯（16.0L，8体积），将两相混合物搅拌（20分钟），并分离各层。以 使批料温度保持在25°C下的速率将I. 6N NaOH水溶液（14. 0L，7. 0体积）加入到有机层并 测量所得水相的pH(彡11)。将两相混合物通过5 μπι Teflon?滤芯管线过滤并分离各层。 用另外的2L甲苯洗涤过滤器管线。
[0102] 测定收率为2. 5%的FN-甲苯、62. 3%的FN-溴化物和30. 0%的二溴化物。甲苯 溶液不合过氧化苯甲酰、琥珀酰亚胺或α -溴乙酸，且通过KF滴定的含水量为1030ppm(在 该测定收率中无任何变化下，该溶液可以在氮气下于室温下保持> 12小时）。
[0103] 在室温下向该溶液加入二异丙基乙胺（880. 0g，6. 63mol，0. 53当量），然后加入甲 醇（46011^，11.28111〇1，0.88当量），并加热至40°(：。制备二乙基亚磷酸酯（820.(^，5.63111〇1， 0. 46当量）在甲醇（460mL，11. 28mol，0. 88当量）中的溶液，并在40°C下以使批料温度为 在40 ± 5 °C内的速度通过加料漏斗经1小时将该溶液加入到反应混合物中。从添加开始，在 40°C下将内容物搅拌3小时的时间并冷却至室温，并在氮气氛围下保持12小时。反应混合 物的测定收率为2. 5%的FN-甲苯、92. 0%的FN-溴化物和0. 2%的二溴化物。将该溶液直 接用于烷基化步骤。
[0104] 关于最终产物混合物的组分（针对纯化合物收集的）的表征。
[0105] 2-氟-3-硝基甲苯（FN-甲苯）：? NMR(400MHz，氯仿-d) δ ppm2· 37 (s，1H)， 7.13-7.20(m，lH)，7.45-7.51(m，lH)，7.79-7.85(m，lH)。13C NMR(100MHz，氯仿-d)Sppm14. 3 (d，J = 5Hz)，123. 3 (d，J = 3Hz)，123. 6 (d，J = 5Hz)，128. 2 (d，J = 16Hz)，136. 7 (d， J = 5Hz)，137.5(宽），153.7(d，J = 261Hz) ;l-(溴甲基）-2-氟-3-硝基苯（FN-溴化 物）,H NMR(400MHz，氯仿-d) δ ppm 4. 56(s，1H)，7· 28-7. 34(m，1H)，7· 69-7. 76(m，1H)， 7.98-8.05(m，lH)。13C NMR(100MHz，氯仿-d) δ ppm 23.6 (d，J = 5Hz)，124.5 (d，J = 5Hz)， 126. I (d，J = 3Hz)，128. 5 (d，J = 14Hz)，136. 5 (d，J = 4Hz)，137. 7 (宽），153. 3 (d，J = 265Hz)。DSC :在 53. 59°C 的单一熔体。精确质谱[C7H5BrFN02+H]+:计算值=233. 9566， 实测值=233.9561 ;1-(二溴甲基）-2-氟-3-硝基苯（二溴化物）=1H NMR(400MHz，氯 仿-d) δ ppm 6. 97 (s，1H)，7. 39-7. 45 (m，1H)，8. 03-8. 10 (m，1H)，8. 16-8. 21 (m，1H)。13C NMR(100MHz，氯仿-d) δρρπι 29.2(d，J = 7Hz)，124.9(d，J = 5Ηζ)，127· l(d，J = 2Hz)， 132. l(d，J= 11 Hz)，135. 7(d，J = 2Hz)，137. 2(宽），149. 8(d，J = 266Hz) JSC :在49. 03°C 的单一熔体。精确质谱[C7H4Br2FN02+H] +:计算值=311. 8671，实测值=311.8666。
[0106] 哌嗪硝基-HCl ：
[0107] 在氮气氛围下，在22°C下向60L反应器中的FN-溴化物（由前述步骤制备）的 机械搅拌的甲苯溶液（9体积）加入二异丙基乙胺（I. 90kg，14. 69mol，1. 14当量）。以使 批料温度保持在30. (TC下的速率（放热的，向该混合物加入哌嗪羧酸甲酯（哌嗪羧酸酯） (2. 03kg，14. 05mol，L 09当量）在甲苯（1.0L，0.5体积）中的溶液。在加入过程中，将夹套 温度调节至5°C，以保持低于30°C的批料温度。在22°C下，将混合物搅拌