。数据表明在晶型上没有变 化。
[0091] 2.化合物1的合成 将9-(氨基甲基）-米诺环素二盐酸盐（200mg，l当量）、DMF和Ξ甲基乙醒（45μl， 1当量）在40mL烧瓶中合并并揽拌。然后加入Ξ乙胺（150 3当量）。在于室溫下 揽拌几分钟后，加入NaBH(0Ac)3 (175mg, 2当量）和InClj巧mg, 0. 1当量）。在1小 时后，反应物的澄明并为红色的。液相色谱法显示反应为单一产物。用甲醇巧灭反应，除去 溶剂并采用柱层析法纯化产物。
[0092]纯化 通过经将化合物的含水低抑溶液注射到W极性有机溶剂梯度运行的HPLC，并合并产 物流分，W纯化化合物的色谱法纯化化合物1。选择合适的酸性流动相增强方法的稳定性和 选择性。有机和无机酸流动相在通过抑控制或酸的选择分离包括差向异构体杂质的副产 物和密集洗脱副产物时是有效的。酸性流动相也保护W防化合物的氧化降解。
[009引例如，低抑溶液具有约2-3的抑。被采用的溶液的实例包括甲横酸的0. 1%水溶 液和Ξ氣乙酸的0. 1%水溶液。在某些实施方案中，94%等梯度的水溶液和6%乙腊或另一种 极性有机溶剂被用于纯化化合物与差向异构和密集洗脱的副产物分开。
[0094] 所生成的含水产物流分可被合并并可采用碱（例如化0H)将抑调节至约 4. 0-4. 5。疏水性杂质和化合物的氧化降解产物可通过用非极性有机溶剂（例如CH2CI2)洗 涂水溶液除去。弃去有机层并合并和保留水层。
[0095] 应该注意有机溶剂例如二氯甲烧可用于自化合物的酸性水溶液选择性地除去后 洗脱的疏水性杂质例如4-幾基副产物及其它氧化降解产物。
[0096] 然后可将所合并水层的抑调节至中性抑，例如约7. 5-约8. 5。可通过加入碱例 如化0H调节抑。然后用非极性有机溶剂例如二氯甲烧洗涂中性溶液。应该注意选择性的 pH调节至中性抑范围也使得化合物能够被提取至有机溶剂中，同时将不合需要的β-差向 异构体和副产物保留在水相中。
[0097] 另外，也可向在此描述的化合物的水溶液中加入抗氧化剂。可提供抗氧化剂W防 止化合物的氧化降解。可采用抗氧化剂例如亚硫酸锭或亚硫酸氨锭。
[0098] 3.制备化合物1的多晶型物的方法 本发明也设及制备晶体化合物1的多晶型物的方法。
[0099] 在一个实施方案中，基于在此的讲授，通过对本领域技术人员显而易见的制备1 型的任何方法，可制备化合物1的甲苯横酸盐的1型。在某些实施方案中，自化合物1的 无定形甲苯横酸盐在异丙醇、丙酬、乙酸乙醋、甲基戊酬、甲苯或乙腊溶液中的熟化可形成1 型。也可自在异丙醇中浆化的无定形甲苯横酸盐重结晶得到1型。也可通过使游离碱溶于 合适的溶剂或溶剂组合例如两种醇或者一种醇与一种抗溶剂例如酬、酸、醋等中得到1型。 在加入酸之后，盐可W恰当的形式缓慢结晶。
[0100] 其中杂质和化合物1的游离碱为可溶的，同时化合物1的稳定晶体盐为不可溶的， 例如可通过沉淀形成晶体浆状物的溶剂系统可被选择。
[0101] 在另一个实施方案中，基于在此的讲授，通过对本领域技术人员显而易见的制备2 型的任何方法，可制备化合物1的甲苯横酸盐的2型。在某些实施方案中，自化合物1的无 定形甲苯横酸盐在二氯甲烧中的熟化可形成2型。
[0102] 在另一个实施方案中，基于在此的讲授，通过对本领域技术人员显而易见的制备3 型的任何方法，可制备化合物1的甲苯横酸盐的3型。在某些实施方案中，自化合物1的无 定形甲苯横酸盐在甲基乙基酬、乙酸乙醋或甲基戊酬中的熟化可形成3型。3型也可得自1 型在甲基戊酬中的熟化。
[0103] 在另一个实施方案中，通过包括合并化合物1与溶剂产生浆状物并加入对-甲苯 横酸的步骤的方法可产生W上描述的化合物1的甲苯横酸盐的多晶型物。
[0104] 任何合适的溶剂可用于产生浆状物。可用于实施方案的溶剂包括醇溶剂例如异丙 醇。任何合适的溶剂组合可用于产生盐从中结晶的溶液。可用于实施方案的溶剂组合包括 (但不限于）甲醇和甲基叔下基酸或者乙醇和异丙醇。
[0105] 例如，可在约0°C-约60°C，例如约15°C-约45°C或约20°C-约25°C的溫度下产 生化合物1在溶剂或溶剂组合中的浆状物。在其被产生之后，可任选地在约15°c-约60°C， 例如约20°C-约50°C或约45°C的溫度下溫热和/或保持浆状物。
[0106] 一旦浆状物被产生，可W足W产生化合物1的对-甲苯横酸盐的量加入对-甲苯 横酸。在一个实施方案中，W相对于化合物1的量的约25-约75wt%、约25-约50wt%、约 30-约40wt%或约33wt%的量提供对-甲苯横酸。对-甲苯横酸可W对-甲苯横酸一水 合物的形式加入。
[0107] 化合物1的甲苯横酸盐的多晶型物可通过溶液方法形成。例如，可在约o°c-约 60°C，例如约15°C-约45°C或约20°C-约25°C的溫度下产生化合物1的溶液。在其被产 生之后，可任选地在约15°C-约60°C，例如约20°C-约50°C或约45°C的溫度下溫热和/或 保持溶液。
[010引一旦产生溶液，可W足W产生化合物1的对-甲苯横酸盐的量加入对-甲苯横酸。 在一个实施方案中，W相对于化合物1的量的约25-约75wt%、约30-约50wt%、约35-约 45wt%或约40wt%的量提供对-甲苯横酸。对-甲苯横酸可W对-甲苯横酸一水合物的 形式加入。
[0109] 在一个实施方案中，可加入用于给溶液引晶的1型多晶型物。任何合适的溶剂可 用于形成对-甲苯横酸溶液。合适的溶剂包括醇溶剂例如异丙醇或溶剂组合例如甲醇和甲 基叔下基酸。在一个优选的实施方案中，甲醇与甲基叔下基酸的体积/体积比率为1:1.2。 合适的溶剂包括两种或更多种醇溶剂的组合，例如乙醇和异丙醇的组合。在一个优选的实 施方案中，乙醇与异丙醇的体积/体积比率为2:1。在特定的实施方案中，对-甲苯横酸溶 液包含用于产生化合物1的浆状物或溶液的相同溶剂。
[0110] 在加入于合适溶剂中的对-甲苯横酸之后，形成化合物的甲苯横酸盐的1型多晶 型物的浆状物。浆状物上清液的水含量可在加入对-甲苯横酸之后被调节至适当水平。通 常，浆状物上清液的水含量可在约0. 2-约1. 0mg/mU例如约0. 4-约0. 8mg/mL的范围内， 例如为约 0. 6mg/mL、约 0. 54mg/mL等。
[0111] 在加入对-甲苯横酸之后，可揽拌浆状物或溶液W产生晶体浆状物。可实施揽拌 多于48小时。然而，揽拌通常实施约5-约36小时，例如约10-约24小时或约18小时的 时间。
[0112] 可在适合于产生晶体浆状物的任何溫度下实施揽拌。例如，可在约0°C-约60°C， 例如约15°C-约45°C或约20°C-约25°C的溫度下揽拌浆状物。
[0113] 在晶体形成之后，可过滤晶体浆状物W除去上清液，并且可用任何合适的溶剂洗 涂晶体。在实施方案中，晶体可洗涂1-4次，并且溶剂可为适合于制备晶体浆状物的任何溶 剂。具体地讲，用于洗涂晶体的溶剂可为用于形成初始浆状物或溶液的相同一种或多种溶 剂或者对-甲苯横酸溶液。
[0114] 然后可通过任何合适的方法干燥所产生的晶体W除去过量溶剂。例如，可通过一 种或多种方法实现干燥，方法包括（但不限于）在约〇°C-约60°C，例如约15°C-约45°C 范围内的升高溫度下；向晶体吹送干燥氮气；和向晶体吹送湿润的氮气。
[0115] 实施其中化合物1的甲苯横酸盐样品在不同溶剂中浆化、过滤并经XRTO分析湿 润固体的熟化研究。观察化合物1的甲苯横酸盐的3种多晶型物。图2描绘了起始原料 (E00285)、化合物1的1型甲苯横酸盐、2型甲苯横酸盐、3型甲苯横酸盐和无定形形式的 XRTO光谱。
[0116] 表4列出了用于熟化实验的溶剂。
[0117] 表4
在多种溶剂中实施化合物1的无定形物料的重结晶。如在表5中显示的那样，仅 在2-丙醇（异丙醇，IPA)中重结晶得到1型甲苯横酸盐。图3比较了对照组化合物1 巧00285)与自IPA中重结晶的1型甲苯横酸盐的XRPD光谱。
[011 引表5
化合物1的多晶型甲苯横酸盐的概述呈现在流程1中： 流程1
在重结晶之后，将1型、2型和3型甲苯横酸盐的样品真空干燥过夜并如在图4中显示 的那样经XRTO分析。在干燥后晶型没有变化。
[0119] 对化合物1的2型和3型甲苯横酸盐实施变化溫度的XRPD。分别参见图5和图 6。
[0120] 分析化合物1的多晶型物的相对稳定性。例如，使1型甲苯横酸盐在IPA或甲基 戊酬中经受熟化实验24小时，用2或3型甲苯横酸盐引晶。在该试验期间，1型没有变为2 或3型。如在图7中显示的那样，在0°C、25°C、40°C和60°C下，于IPA中分析1型和3型的 50:50混合物的浆状物18小时。1型没有变为3型。
[0121] 重结晶实验表明通过于IPA中浆化可自无定形甲苯横酸盐重现性地得到1型甲苯 横酸盐。也可通过加入对甲基苯横酸重现性地得到化合物1的1型。1型的高分辨XRTO扫 描在图8中得到描绘并且衍射图的特征显示在表1中。
[0122] 4.包含本发明的化合物、其盐、晶形或多晶型物的药用组合物 在另一个实施方案中，本发明设及包含本发明的四环素化合物（例如经本发明方法合 成或纯化）或其药学上可接受的盐、前药或者醋的药用组合物。药用组合物可包含药学上 可接受的载体。
[0123] 如在此使用的术语"组合物"打算包括包含规定组分（并且W规定的量存在，如果 指明的话）的产物W及其直接或间接由W规定量的规定组分的组合生成的任何产物。所谓 "药学上可接受的"意指稀释剂、赋形剂或载体必须与剂型中的其它组分可适配并且对其接 受者无害。
[0124] 如W上所表示的那样，本发明的某些实施方案可包含碱型官能团例如氨基或烷基 氨基并因此能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。术语"药学上可接受的盐" 在本领域被认识到并且包括本发明的相对非毒性、无机和有机酸加成盐。运些盐可在本发 明化合物的最终分离和纯化期间就地制备，或者通过使W其游离碱形式存在的本发明的纯 化化合物与合适的有机或无机酸独立地反应并分离因此所形成的盐来制备。代表性的盐 包括氨漠酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氨盐、憐酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、栋桐酸 盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、憐酸盐、甲苯横酸盐、构祿酸盐、马来酸盐、富马 酸盐、班巧酸盐、酒石酸盐、糞二甲酸盐（napthylate)、甲横酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和 十二烷基横酸盐等（参加例如Berge等.（1977)叩harmaceutical Salts",乂估r曲. SCI.66:1-19) ο
[0125] 在其它情况中，本发明的化合物可包含一个或多个酸性官能团并因此能够与药学 上可接受的碱形成药学上可接受的盐。术语"药学上可接受的盐"在运些情况中包括本发 明化合物的相对非毒性、无机和有机的碱加成盐。运些盐同样可在化合物的最终分离和纯 化期间就地制备，或者通过使其游离酸形式的纯化化合物与合适的碱例如药学上可接受的 金属阳离子的氨氧化物、碳酸盐或碳酸氨盐、与氨或与药学上可接受的有机伯、仲或叔胺独 立地反应来制备。代表性的碱或碱±金属盐包括裡、钢、钟、巧、儀和侣盐等。用于形成碱加 成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、赃嗦等。
[0126] 术语"药学上可接受的醋"指本发明化合物的相对非毒性醋化产物。运些醋可在 化合物的最终分离和纯化期间就地制备，或者通过使其游离酸或径基形式的纯化化合物与 合适的醋化剂独立地反应来制备。簇酸可通过在催化剂存在下用醇处理转化为醋。径基可 通过用醋化剂例如链烧酷基面化物处理转化为醋。术语也包括能够在生理条件下被溶剂化 的低级控基例如烷基醋、甲基、乙基和丙基醋（参见例如Berge等，上文）。
[0127] 本发明也设及通过本发明方法合成和/或纯化的四环素化合物及其药学上可接 受的盐。
[0128] 短语"药学上可接受的载体"在本领域被认识到并且包括适合于给予哺乳动物的 本发明化合物的药学上可接受的物质、组合物或者媒介物。载体包括与将受试物质自身体 的一个器官或部分运送或输送至身体的另一个器官或部分有关的液态或固态填充剂、稀释 剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。每一种载体在与剂型的其它组分可适配和对患者无害的意 义上必须是"可接受的"。可用作药学上可接受载体的材料的一些实例包括：糖类例如乳 糖、葡萄糖和薦糖；淀粉类例如玉米淀粉和马铃馨淀粉；纤维素及其衍生物例如簇甲基纤 维素钢、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末化黄著胶、麦芽、明胶、滑石粉；赋形剂例如可可豆 脂和栓剂蜡；油类例如花生油、棉巧油、红花油、芝麻油、橄揽油、玉米油和大豆油；二醇类 例如丙二醇；多元醇类例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；醋类例如油酸乙醋和月桂酸 乙醋；琼脂；缓冲剂例如氨氧化儀和氨氧化侣；海藻酸、无热源水、等渗盐水、林格氏溶液、 乙醇、憐酸盐缓冲溶液及其它用于药用剂型的非毒性可适配物质。
[0129] 湿润剂、乳化剂和润滑剂例如十二烷基硫酸钢和硬脂酸儀W及着色剂、脱模剂、包 衣材料、甜味剂、矫味和香味剂、防腐剂及抗氧化剂也可存在于组合物中。
[0130] 药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂例如抗坏血酸、半脫氨酸 盐酸盐、硫酸氨钢、焦亚硫酸钢、亚硫酸钢等；油溶性抗氧化剂例如抗坏血酸栋桐酸醋、下径 茵酸度HA)、下径甲苯度HT)、卵憐脂、没食子酸丙醋、α-生育酪等；和金属馨合剂例如构祿 酸、乙二胺四乙酸巧DTA)、山梨醇、酒石酸、憐酸等。
[0131] 本发明剂型包括适合于口服、鼻、局部、经皮、颊、舌下、直肠、阴道和/或非肠道给 药的那些剂型。剂型可便利地W单位剂型呈现并可通过药学领域熟知的任何方法制备。可 与载体物料混合产生单一剂型的活性组分的量通常为产生治疗作用的化合物的量。通常， 除百分之一百W外，该量在活性组分的约1%-约99%范围内，优选地为约5%-约70%，最优选 地为约10%-约30%。
[0132] 制备运些剂型或组合物的方法包括使本发明的化合物与载体和任选地与一种或 多种助剂联合在一起的步骤。通常，通过使本发明化合物与液体载体或细分的固体载体或 两者均匀和紧密地联合在一起并然后如果必要的话加工成型为产物来制备制剂。
[0133] 适合于口服给药的本发明剂型可W胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片