检测芸香科植物过敏原基因的引物、探针、标准品及应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于植物分子生物学、人体变态反应学和食品安全交叉领域，更具体地，涉 及一种用于精确定量芸香科植物过敏原基因表达的引物、Taqman探针和质粒标准品，以及 它们在芸香科植物中过敏原基因表达定量检测的应用。
【背景技术】
[0002] 据不完全统计，我国对食物过敏的人群约4000~5000万人左右。食物过敏的症状 一般是局部的口腔病理症状，除此之外，还有一些其他症状，例如肠胃症状(恶心、呕吐、腹 泻、肠胃绞痛等），皮肤症状(麻疹、皮炎、湿疹、血管神经性水肿、皮肤瘙痒等），呼吸系统症 状(鼻炎、哮喘、喉咙肿等)和心血管系统症状(过敏性休克等）[1]。对于患者而言，最好的医 治方案是设法剔除饮食中的食物过敏原，或者完全避免会引起的食物过敏的种类，但在实 际操作中存在很多困难，故而鉴定和选择一些不含过敏原或低致敏的食物给过敏患者是一 种比较好的解决方案。
[0003] 柑橘是一类深受人们喜爱的水果，被国内外认为是健康食品，含有丰富的营养物 质。柑橘除了果肉具有重要的食用价值之外，果皮、叶片、花粉均具有食用价值。柑橘皮具有 较高的加工价值，其不仅富含香精油、色素、果胶、橙皮甙、膳食纤维还可以利用其进行微生 物发酵，如生产果醋、乳酸饮料、高蛋白饲料和栽培食用菌[2]。橘叶在中药中具有价高的利 用价值，具有疏肝、行气、化痰、杀虫等功效[3]。橘花辛温，顺气宽膈，和胃去胀，止咳化痰， 具有一定的药用价值，用柑橘花窨制的柑橘花茶亦具有保健功效[4]。这些柑橘加工品均具 有特殊的功能，为人们提供丰富的营养。尽管食用柑橘对人体有诸多益处，仍有许多人对柑 橘类食物过敏。有研究表明中国大连地区过敏性疾病患儿SPT阳性的食入性过敏原中，柑橘 过敏原阳性率7.4% [5]。在招募的对枯草热花粉过敏患者中，有39%的患者对柑橘类食物 表现出交叉过敏症状，并且所有的患者的IgE介导免疫反应机制都通过皮肤点刺实验(SPT) 确认呈阳性[6]。目前已有研究表明，Cit s l、Cit s 2和Cit s 3是三种主要的柑橘过敏原 [7-ll]<Xit s 1是一种24KD的被患者血清IgE识别的类萌芽素糖蛋白（GLPs)[ll]。甜橙抑 制蛋白Cit s 2是另外一种主要的普遍存在的过敏原，涉及到植株各种生理和病理的过程 [12]<Xit s 3是一种脂质转运蛋白，是泛过敏原家族的成员[9，10，13]。除此之外，(：;[1:13 和Cit r 3分别在柠檬和宽皮柑桔中作为过敏原被鉴定[14,15]。据此，检测柑橘中具有可 食用价值部分(如果实、花、嫩叶等）中这三个过敏原蛋白的表达水平，是评价其是否致敏的 指标。
[0004] 目前国际上过敏原研究较少涉及到柑橘过敏原水平，且只有针对柑橘过敏原Cit s 2开发酶联免疫吸附测定试剂盒（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)，能直接 用来检测脐橙(Navel orange)、血橙(Blood orange)、明尼桔柚(Minneola orange)、梓檬 (Lemon)、葡萄柚(Grapefruit)、温州蜜柑(Satsuma mandarin)等柑橘品种的过敏原Cit s 2含量，同时发现不同品种的柑橘水果中Cit s 2含量差异较大[16]。但是仍没有检测其余 两个过敏原Cit si和Cit s 3蛋白水平的方法，不能整体水平评价柑橘类水果的致敏能力。 有研究基于蛋白质组学平台检测过敏原蛋白，局限于质谱的灵敏度，只能检测到部分柠檬 中过敏原蛋白的存在[17]。除此之外，还有研究通过半定量反转录聚合酶链式反应和Real-time PCR检测过敏原基因表达水平，发现克里曼丁橘过敏原Cit s 1和Cit s 3代表2种通 常在果实和花粉中表达的过敏原，而Cit s 2代表的过敏原只在柑橘果肉中表达[6]。然而， 此研究所采用的相对定量的方法并不能准确的检测出柑橘过敏原基因的表达水平。因此， 目前并没有能够整体的、定量化的评价柑橘致敏性的方法。
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