专利名称：使用拉曼光谱和含磷酸酯基团的芳族化合物检测有机体和酶反应的方法
技术领域：
本申请大体涉及生物诊断装置和测试方法领域。
背景技术：
目前存在许多领域需要检测生物有机体(organism)或成分(例如蛋白质、DNA或其它遗传物质)的系统。这些领域包括食品安全、医学和兽医诊断、病原体检测、法医和国土安全。当前的检测方法包括免疫化学和分子生物学及生物技术例如聚合酶链式反应 (PCR)和连接酶链式反应(LCR)。这些方法和技术常常在准确性、特异性和灵敏性方面受到限制。此外，这些方法常常需要繁重的样品制备，例如分离和纯化核酸。检测方法的特异性可通过使用免疫技术来提高。例如，医学诊断使用基于抗体的技术来提供样品生物成分检测的特异性。已知的是，开发为特异性化合物的抗体对这些成分具有高的亲合性和特异性。然而，抗体难以被检测，因此通常用提高检测的标记或标志进行化学修饰。然而，抗体检测往往受到样品中其它物质(包括样品基质、洗涤成分和其它化学和生物试剂)的干扰。此外，目前的技术在低浓度抗体或多种抗体(即低浓度靶标生物成分或多种靶标生物成分)的情况下缺乏灵敏度。过去已经将拉曼光散射技术(拉曼光谱)用于检测特异性化学成分。拉曼散射是光与分子相互作用的基本性质。当光击中分子时，其可引起分子中的原子发生振动。然后这种振动将使由分子散射的其它光的能量发生改变。这种散射光具有可测量的特征且与振动分子的结构唯一对应。因此，拉曼光谱可用于专属地鉴定分子。拉曼光谱具有多种优于现有检测方法的优点，包括应用简单和产生可定量的数据。然而，拉曼光谱本身就检测生物有机体和成分而言缺乏特异性和灵敏性。因此，在本领域中需要使拉曼光谱能用于检测有机体和生物成分的试剂和方法。本申请涉及使用拉曼光谱和生物标记技术的组合的方法，其用于以比现有技术高的灵敏性和特异性鉴定和定量生物有机体和成分。
发明内容
本申请的一种实施方案是检测样品中至少一种酶的活性的方法，其包括a)制备包含所述样品和以下物质的混合物
i.(任选)至少一种芳族化合物； 至少一种含胺化合物；和iii.至少一种给电子化合物；b)孵育所述混合物以形成至少一种拉曼活性产物；及C)用拉曼光谱检测所述至少一种拉曼活性产物。在一种实施方案中，所述至少一种含胺化合物选自4-氨基安替比林和5-氨基水杨酸。在另一种实施方案中，所述至少一种芳族化合物选自2-羟基苯甲醇、4-氯-3， 5-二甲基苯酚、萘-2-酚、4-羟基-联苯-4-甲酸、5，7-二氯-8-羟基喹啉、4-氯-萘-1-酚、 苯酚和4，5- 二羟基-萘-2，7- 二磺酸。在另一种实施方案中，所述至少一种含胺化合物包括
权利要求
1.检测样品中至少一种酶的活性的方法，其包括a)制备包含所述样品和至少一种含有至少一个磷酸酯基团的芳族化合物的混合物；b)孵育所述混合物以形成至少一种拉曼活性产物； i)任选加入氧化剂；及 )任选加入碱；c)用拉曼光谱检测所述至少一种拉曼活性产物。
2.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括
3.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括
4.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括
5.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括其中X 选自 H、OH、Cl、Br、NO2、NH2、SO3H、PO4 和 COOH ；及Y 选自 H、0H、Cl、Br、NO2, NH2, SO3H 禾口 C00H。
6.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括其中X、Y、Z和W各自独立选自H和0Η。
7.权利要求1的方法，其中所述至少一种酶包括磷酸酶。
8.权利要求7的方法，其中所述磷酸酶是碱性磷酸酶。
9.权利要求8的方法，其中所述碱性磷酸酶是与抗体结合的。
10.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括4-氨基-1-苯基-1-磷酸
11.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括4-羟基-1-萘基-1-磷酸
12.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括4-氨基-1-萘基-1-磷酸
13.权利要求1的方法，其中所述至少一种芳族化合物包括氢醌二磷酸酯。
14.权利要求1的方法，其中所述碱是氢氧化钠。
15.权利要求1的方法，其中所述氧化剂是偏过碘酸钠。
16.权利要求1的方法，其中所述拉曼光谱是共振拉曼光谱。
17.检测样品中至少一种靶标的方法，其包括a)制备包含所述至少一种靶标的混合物；b)将所述混合物与至少一种对所述至少一种靶标具有特异性的配体一起孵育，所述至少一种配体包括磷酸酶；c)向所述混合物中提供至少一种包含磷酸酯基团的芳族化合物；d)孵育所述混合物以形成至少一种拉曼活性产物；i)任选加入氧化剂；和 )任选加入碱；及e)用拉曼光谱检测所述至少一种拉曼活性产物。
18.权利要求17的方法，其中所述至少一种芳族化合物是权利要求2中所述的芳族化合物。
19.权利要求17的方法，其中所述至少一种芳族化合物是权利要求3中所述的芳族化合物。
20.权利要求17的方法，其中所述至少一种芳族化合物是权利要求4中所述的芳族化合物。
21.权利要求17的方法，其中所述至少一种芳族化合物是权利要求5中所述的芳族化合物。
22.权利要求17的方法，其中所述至少一种芳族化合物是权利要求6中所述的芳族化合物。
23.权利要求17的方法，其中所述拉曼光谱是共振拉曼光谱。
24.权利要求17的方法，其中所述至少一种靶标是有机体。
25.权利要求对的方法，其中所述有机体选自大肠杆菌、李斯特菌、沙门菌、弧菌、弯曲菌、葡萄球菌、HIV、肝炎病毒、腺病毒、鼻病毒和人乳头瘤病毒。
26.权利要求17的方法，其中所述靶标选自蛋白质、氨基酸、核酸、核苷酸、糖类、代谢物、激素类和代谢中间体。
27.权利要求沈的方法，其中所述蛋白质选自IL-2、C-反应蛋白、肿瘤坏死因子受体 II和人心脏肌钙蛋白I。
28.权利要求17的方法，其中所述至少一种配体是抗体。
29.检测至少一种酶的活性的试剂盒，其包含a)至少一种包含磷酸酯基团的芳族化合物；b)任选的氧化剂；c)任选的碱；及d)任选的适于所述至少一种酶的缓冲液。
30.一种芳族化合物，其包括
31. 一种芳族化合物，其包括其中
32. —种芳族化合物，其包括
全文摘要
本申请提供了用于快速灵敏检测样品中的有机体和分子的系统。产生拉曼活性产物的试剂与拉曼光散射组合使用。所述化合物可包含磷酸酯基团，从而允许检测磷酸酶。本申请也可用于测量酶动力学。
文档编号C12Q1/42GK102395681SQ201080016984
公开日2012年3月28日 申请日期2010年2月2日 优先权日2009年2月17日
发明者C.L.金斯伯格, N.A.西格尔, S.K.孔杜 申请人:斯沃德诊断股份有限公司