专利名称：抗铜绿假单胞菌的i血清型脂多糖的抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗铜绿假单胞菌的I血清型脂多糖的抗体及其应用。更具体地，本发明涉及特异性地结合铜绿假单胞菌菌株的I血清型脂多糖的抗体，以及包含任何所述抗体的药物组合物、用于铜绿假单胞菌感染的诊断剂和铜绿假单胞菌检测试剂盒。
背景技术：
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种广泛且通常分布在自然环境中如土壌和水中的革兰氏阴性需氧杆菌。铜绿假单胞菌是ー种无毒性细菌，其对于健康受试者通常是不致病的，所述健康受试者对于铜绿假单胞菌具有中等抗体效价和足够的免疫功能。但是，一旦体弱患者感染了铜绿假单胞菌，铜绿假单胞菌可导致严重的症状，所述症状可导致所述患者死亡。为此，铜绿假单胞菌作为医院感染和机会感染的主要病原菌已引起关注，因此铜绿假单胞菌感染的预防和治疗在医学领域已是重要的问题。 对于铜绿假单胞菌感染的预防或治疗，主要使用抗生素或合成抗细菌剂。但是，铜绿假单胞菌对这些药物产生抗性，因此这些药物在许多情况下无法提供足够的治疗效果。特别地，使用抗生素等治疗耐多药铜绿假单胞菌(MDRP)的感染很困难，并且有限制。为此，作为其替代方法，已开始使用免疫球蛋白制剂的治疗。同吋，也检验了使用抗铜绿假单胞菌的抗体预防或治疗铜绿假单胞菌感染。例如，已开发了抗体，其各自特异性地结合具体血清型铜绿假单胞菌菌株上(专利文献I至5，非专利文献I和2)。但是，目前开发的抗铜绿假单胞菌的抗体在铜绿假单胞菌感染的预防或治疗中尚未提供足够的效果。引文列表专利文献专利文献I日本未审查专利申请公开文本No. Hei 6-178688专利文献2日本未审查专利申请公开文本No. Hei 6-178689专利文献3日本未审查专利申请公开文本No. Hei 7-327677专利文献4国际公开文本No. WO 2004/101622
专利文献5国际公开文本No. WO 2006/084758非专利文献非专利文献I The Journal of Infectious Diseases, 152，6，1985，1290-1299。非专利文献2 Journal of General Microbiology, 133，1987，3581-3590。
发明内容
技术问题考虑到上述情况而作出本发明，并且本发明的目的是提供ー种具有对铜绿假单胞菌的优良抗细菌活性的新抗体。本发明的ー个主要目的是提供ー种对铜绿假单胞菌具有优良的抗细菌活性并且可用作多克隆抗体制剂的组分的新抗体。作为这种新抗体的ー个方面，本发明的目的是提供一种特异性地结合铜绿假单胞菌菌株的I血清型脂多糖的抗体。技术方案为达到上述目的，本发明人采用了以下方法。首先，从患有慢性铜绿假单胞菌肺部感染的囊肿性纤维化患者和健康志愿者中采集血液样本。将具有高比例的对于脂多糖(下文中有时简称为“LPS”)具有特异性的成浆细胞的供体样本通过以下方法进行鉴定(I)测定在循环血液中成浆细胞和浆细胞的量的FACS分析；(2)测定在循环血液中产生对具体LPS抗原具有特异性的抗体的细胞的量的ELISP0T分析；以及(3)测定对具体LPS抗原具有特异性的免疫球蛋白存在或不存在的ELISA分析。然后，从由此鉴定的供体样本制备识别LPS的抗体。 具体地，通过染色⑶19、⑶38、A轻链和死细胞来选择活成浆细胞。在选出的成浆细胞上，来源于相同的B细胞的编码重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的DNA序列通过两步PCR——包括多重重叠延伸RT-PCR和随后的巢式PCR——而配对(图I)。随后，将扩增DNA插入到筛选载体中,然后转化到大肠杆菌(Escherichia coli)中。从所述大肠杆菌中纯化出扩增载体集合。将所得的抗体库在动物培养细胞中表达。通过ELISA筛选编码可结合纯化的LPS分子的抗体的克隆体，并选择LPS特异性克隆。然后，測定所选克隆的碱基序列。其后，检测由如此得到的克隆编码的抗体的多种活性、其血清型特异性和抗原表位。结果，发现了鉴定的抗体可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS，且在体外和体内具有优良的抗细菌活性。具体地，本发明涉及可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS的抗体，展现出优良的抗细菌活性。本发明还涉及所述抗体的用途。更具体地，本发明提供了[I] ー种抗体，其可识别铜绿假单胞菌的脂多糖的B带LPS，且其实质上可与I血清型的铜绿假单胞菌菌株的表面结合，但实质上不与A、B、E、G和M血清型铜绿假单胞菌菌株的任一表面结合。[2]根据第I条所述的抗体，其具有对I血清型的铜绿假单胞菌菌株的调理素活性。[3]根据第2条所述的抗体，其中对由ATCC 27586标识的铜绿假单胞菌菌株的调理素活性的EC50为0. 5 ii g/ml或更小。[4]根据第I至3条的任一项所述的抗体，其具有对I血清型的铜绿假单胞菌菌株的凝集活性。[5]根据第4条所述的抗体，其中对由ATCC 27586标识的铜绿假单胞菌菌株的单位量(U g) IgG的凝集效价为20或更大。[6]根据第I至5条的任一项所述的抗体，其对I血清型的铜绿假单胞菌菌株的全身性感染具有抗细菌作用。[7]根据第6条所述的抗体，其中对全身性感染由ATCC 27586标识的铜绿假单胞菌菌株的中性粒细胞减少症小鼠模型的抗细菌作用的ED50不大于青霉酮(Venilon)的抗细菌作用的ED50的1/100。[8]具有以下特征(a)至(f)的任ー项的抗体(a)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO: I至3所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ IDNO: I至3所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID N0:4至6所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、删除、加入和/或插入的SEQ IDN0:4至6所示的氨基酸序列；(b)包含轻链可变区，其包括SEQ ID N0:9至11所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ IDN0:9至11所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO: 12至14所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 12至14所示的氨基酸序列；(C)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO: 17至19所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 17至19所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:20至22所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:20至22所示的氨基酸序列；(d)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:25至27所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:25至27所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:28至30所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:28至30所示的氨基酸序列；(e)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:33至35所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:33至35所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:36至38所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:36至38所示的氨基酸序列；以及(f)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:41至43所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:41至43所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:44至46所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:44至46所示的氨基酸序列。[9]具有以下特征(a)至(f)的任ー项的抗体
(a)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；(b)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列；
(C)包含轻链可变区，其包括SEQ ID N0:23所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列；(d)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:31所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:32所示的氨基酸序列；(e)包含轻链可变区，其包括SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID N0:40所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:40所示的氨基酸序列；以及(f)包含轻链可变区，其包括SEQ ID N0:47所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:47所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID N0:48所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。[10]包含所述抗体的轻链或轻链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至⑴的任ー项(a)包括SEQ ID NO: I至3所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中ー个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: I至3所示的氨基酸序列；(b)包括SEQ ID N0:9至11所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中ー个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:9至11所示的氨基酸序列；(c)包括SEQ ID NO: 17至19所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 17至19所示的氨基酸序列；(d)包括SEQ ID NO:25至27所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:25至27所示的氨基酸序列；(e)包括SEQ ID NO:33至35所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:33至35所示的氨基酸序列；以及(f)包括SEQ ID N0:41至43所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:41至43所示的氨基酸序列。[11]包含所述抗体的轻链或轻链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任ー项(a)包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
(b)包括SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列；(c)包括SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；(d)包括SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列；(e)包括SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列；以及(f)包括SEQ ID N0:47所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。[12]包含所述抗体的重链或重链的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任一项(a)包括SEQ ID N0:4至6所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中ー个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:4至6所示的氨基酸序列；(b)包括SEQ ID NO: 12至14所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 12至14所示的氨基酸序列；(c)包括SEQ ID NO:20至22所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:20至22所示的氨基酸序列；(d)包括SEQ ID NO:28至30所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:28至30所示的氨基酸序列；(e)包括SEQ ID NO:36至38所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:36至38所示的氨基酸序列；以及(f)包括SEQ ID N0:44至46所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:44至46所示的氨基酸序列。[13]包含所述抗体的重链或重链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任ー项(a)包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；(b)包括SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列；
(c)包括SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；(d)包括SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列；(e)包括SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；以及(f)包括SEQ ID N0:48所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。[14]在下述(a)至(f)任一项所述的抗体中，可结合I血清型的铜绿假单胞菌菌株的脂多糖的B带LPS中的表位的抗体
(a)包含包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；(b)包含包括SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；(C)包含包括SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；(d)包含包括SEQ ID N0:31所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；(e)包含包括SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；以及(f)包含包括SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体。[15]编码根据第I至14条的任一条所述的抗体或肽的DNA。[16]产生根据第I至9条和14条的任一条所述的抗体的杂交瘤。[17]用干与铜绿假单胞菌相关的疾病的药物组合物，所述药物组合物包含根据第I至9条和14条的任一条所述的抗体；和任选至少ー种可药用载体和/或稀释剂。[18]根据第17条所述的药物组合物，其中与铜绿假单胞菌相关的疾病是由铜绿假单胞菌感染导致的全身性感染性疾病。[19]根据第17条所述的药物组合物，其中与铜绿假单胞菌相关的疾病是由铜绿假单胞菌感染导致的肺部感染性疾病。[20]用于检测铜绿假单胞菌的诊断剂，所述诊断剂包含根据第1、8、9和14条中任一条所述的抗体。[21]用于铜绿假单胞菌的检测的试剂盒，所述试剂盒包含根据第1、8、9和14条中任一条所述的抗体。有益效果本发明提供了可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS的抗体，其展现出优良的抗细菌活性。本发明的抗体可展现出对于铜绿假单胞菌的全身性感染的优良调理素作用和优良抗细菌作用。此外，由于本发明的抗体来源于患有慢性铜绿假单胞菌肺部感染的囊肿性纤维化患者，可以预计抗临床铜绿假单胞菌菌株的优良作用。本发明的抗体可制备为人抗体，因此是高度安全的。使用本发明的抗体使得有可能有效治疗或预防由铜绿假单胞菌(包括耐多药铜绿假单胞菌)导致的感染，如HAP / VAP、菌血症、败血症和烧伤创面感染。
[图I]图I是显示用于得到编码本发明的抗体的DNA的两步PCR的图。[图2]图2是显示用于使来自于相同B细胞的编码重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的序列进行配对的00-VP-002载体的图。
具体实施方案本发明提供了可结合铜绿假单胞菌的I血清型LPS的新抗体。在本发明中“抗体”包括所有种类和所有亚类的免疫球蛋白。所述“抗体”包括多克隆抗体和单克隆抗体，还包括抗体的功能性片段的形式。“多克隆抗体”是指包含针对不同表位的不同种类抗体的抗体制剂。同吋，“单克隆抗体”是指从基本同源的抗体群得到的抗体(包括抗体片段)。与多克隆抗体相比，单克隆抗体可识别抗原上的单个决定簇。本发明中的多克隆抗体还包括能够识别抗原上多个表位的多个单克隆抗体的结合物。本发明的抗体是分离的抗体，即，从自然环境的组分中分离和/或回收的抗体。本发明的抗体所结合的“脂多糖(LPS) ”是革兰氏阴性细菌的细胞壁外膜的组分，是由脂类和多糖形成的物质(糖脂)。其糖链由称作核心多糖(或核心寡糖)的部分和称作0抗原(0侧链多糖)的部分形成。“A-带LPS”是ー种LPS，其形成0抗原的多糖具有以下结构。具体地，在该结构中，重复出现均由“3)-a -D-鼠李糖-(1 — 2) - a -D-鼠李糖-(I — 3) - a -D-鼠李糖-(I ”组成的单元。在这些单元中，D-鼠李糖通过a -I, 2和a -I, 3键连接。其结构式显示于下文；但是，由a-1,2-键连接的D-鼠李糖和由a-1,3-键连接的D-鼠李糖的支化模式不限于下文显示的那些。[化学式I]
权利要求
1.一种抗体，所述抗体可识别铜绿假单胞菌的脂多糖的B带LPS，并且实质上可与I血清型铜绿假单胞菌菌株的表面结合，但实质上不与A、B、E、G和M血清型铜绿假单胞菌菌株的任一表面结合。
2.权利要求I的抗体，其具有对I血清型铜绿假单胞菌菌株的调理素活性。
3.权利要求2的抗体，其中对由ATCC27586标识的铜绿假单胞菌菌株的调理素活性的EC50 为 O. 5 μ g/ml 或更小。
4.权利要求I至3中任一项的抗体，其具有对I血清型铜绿假单胞菌菌株的凝集活性。
5.权利要求4的抗体，其中对由ATCC27586标识的铜绿假单胞菌菌株的单位量(μ g)IgG的凝集效价为20或更大。
6.权利要求I至5中任一项的抗体，其具有对I血清型铜绿假单胞菌菌株的全身性感染的抗细菌作用。
7.权利要求6的抗体，其中对全身性感染由ATCC27586标识的I血清型铜绿假单胞菌菌株的中性粒细胞减少症小鼠模型的抗细菌作用的EC50不大于青霉酮的EC50的1/100。
8.具有以下特征(a)至(f)的任一项的抗体 (a)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO: I至3所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ IDNO: I至3所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID N0:4至6所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ IDN0:4至6所示的氨基酸序列； (b)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID N0:9至11所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ IDN0:9至11所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO: 12至14所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 12至14所示的氨基酸序列； (c)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO: 17至19所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 17至19所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:20至22所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:20至22所示的氨基酸序列； (d)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:25至27所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 25至27所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:28至30所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:28至30所示的氨基酸序列； (e)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:33至35所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 33至35所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:36至38所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQID NO: 36至38所示的氨基酸序列；以及 (f)包含轻链可变区，其包括SEQ ID N0:41至43所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:41至43所示的氨基酸序列，和重链可变区，其包括SEQ ID NO:44至46所不的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQID NO:44至46所示的氨基酸序列。
9.具有以下特征(a)至(f)的任ー项的抗体(a)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置 换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:8所示的氨基酸序列； (b)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列； (c)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:24所示的氨基酸序列； (d)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 32所示的氨基酸序列； (e)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID N0:39所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；以及 (f)包含 轻链可变区，其包括SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列，和 重链可变区，其包括SEQ ID N0:48所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
10.包含抗体的轻链或轻链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任ー项(a)包括SEQ ID NO:l至3所示的氨基酸序列或在其至少ー个序列中一个或多个氨基酸被置換、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: I至3所示的氨基酸序列；(b)包括SEQID N0:9至11所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:9至11所示的氨基酸序列； (c)包括SEQID NO: 17至19所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 17至19所示的氨基酸序列； (d)包括SEQID NO:25至27所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:25至27所示的氨基酸序列； (e)包括SEQID NO:33至35所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 33至35所示的氨基酸序列；以及 (f)包括SEQID N0:41至43所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨 基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:41至43所示的氨基酸序列。
11.包含抗体的轻链或轻链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任一项 (a)包括SEQID NO:7所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列； (b)包括SEQID NO: 15所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列； (c)包括SEQID N0:23所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列； (d)包括SEQID NO:31所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列； (e)包括SEQID N0:39所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列；以及 (f)包括SEQID NO:47所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列。
12.包含抗体的重链或重链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任一项 (a)包括SEQID N0:4至6所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID N0:4至6所示的氨基酸序列； (b)包括SEQID NO: 12至14所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 12至14所示的氨基酸序列； (c)包括SEQID NO:20至22所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:20至22所示的氨基酸序列； (d)包括SEQID NO:28至30所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:28至30所示的氨基酸序列； (e)包括SEQID NO:36至38所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO: 36至38所示的氨基酸序列；以及 (f)包括SEQID N0:44至46所示的氨基酸序列或在其至少一个序列中一个或多个氨基酸被置换、缺失、加入和/或插入的SEQ ID NO:44至46所示的氨基酸序列。
13.包含抗体的重链或重链可变区的肽，所述肽具有以下特征(a)至(f)的任一项(a)包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置换、缺失、力口入和/或插入的SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；(b)包括SEQID NO: 16所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、カロ入和/或插入的SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列； (c)包括SEQID N0:24所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、カロ入和/或插入的SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列； (d)包括SEQID NO:32所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、カロ入和/或插入的SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列； (e)包括SEQID N0:40所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、カロ入和/或插入的SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列；以及 (f)包括SEQID N0:48所示的氨基酸序列或在其中一个或多个氨基酸被置換、缺失、カロ入和/或插入的SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列。
14.在以下(a)至(f)中的任一项所述的抗体中，可结合I血清型铜绿假单胞菌菌株的 脂多糖的B带LPS中的表位的抗体 (a)包含包括SEQID NO:7所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体； (b)包含包括SEQID NO: 15所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体； (c)包含包括SEQID NO:23所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体； (d)包含包括SEQID NO:31所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体； (e)包含包括SEQID NO:39所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID N0:40所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体；以及 (f)包含包括SEQID NO:47所示的氨基酸序列的轻链可变区和包括SEQ ID N0:48所示的氨基酸序列的重链可变区的抗体。
15.编码权利要求I至14中任ー项的抗体或肽的DNA。
16.产生权利要求I至9和14中任ー项的抗体的杂交瘤。
17.用干与铜绿假单胞菌相关的疾病的药物组合物，所述药物组合物包含 权利要求I至9和14中任ー项的抗体；和任选 至少ー种可药用载体和/或稀释剂。
18.权利要求17的药物组合物，其中与铜绿假单胞菌相关的疾病是由铜绿假单胞菌感染导致的全身性感染疾病。
19.权利要求17的药物组合物，其中与铜绿假单胞菌相关的疾病是由铜绿假单胞菌感染导致的肺部感染疾病。
20.用于检测铜绿假单胞菌的诊断剂，所述诊断剂包含权利要求1、8、9和14中任一项的抗体。
21.用于检测铜绿假单胞菌的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1、8、9和14中任一项的抗体。
全文摘要
本发明提供了一种具有对铜绿假单胞菌的优良抗细菌活性的新抗体。通过使用从患有慢性铜绿假单胞菌肺部感染的囊肿性纤维化患者中得到的成浆细胞作为起始材料，成功地得到了可与I血清型铜绿假单胞菌菌株的LPS结合并在体外和体内均具有优良抗细菌活性的抗体。
文档编号C12P21/08GK102858799SQ20118001024
公开日2013年1月2日 申请日期2011年2月18日 优先权日2010年2月18日
发明者田中二朗, P·S·安德森, 奥富隆文, 稻叶常良, 大冢圭子, 赤羽宏友, 星名由佳利, 长曽宏, 熊谷正志 申请人:明治制果药业株式会社, 西福根有限公司