芪饮品成品（规格为l〇〇ml/瓶）。检测此发酵组 合物含有纳豆芽孢杆菌菌体数量、纳豆激酶活力、黄芪甲苷含量(见表1)。
[0038] 实施例2: 一种纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪饮品的制备，具体方法如下： 1)种子培养基制备:种子液体培养基为LB培养基，其组成为蛋白胨10g、酵母提取物5g、 氯化钠 l〇g、蒸馏水1L;种子固体培养基为在酪蛋白培养基，其组成为酪素5g、葡萄糖lg、酵 母膏lg、磷酸氢二钾lg、磷酸二氢钾〇.5g、硫酸镁O.lg、琼脂1.5g、蒸馏水1L。
[0039] (2)原料处理:将干燥黄芪粉碎为黄芪粉，细度为50目。将重量g/体积ml百分比为 15%豆柏加入蒸馏水中，115 °C高压30分钟，离心取离心液，得到豆汁。
[0040] (3)发酵液制备:取10000ml豆汁，将重量g/体积ml百分比为15%的黄芪粉用豆汁浸 泡30分钟，加入重量g/体积ml百分比为1.0%的葡萄糖、重量g/体积ml百分比为1.5%的蔗糖、 重量g/体积ml百分比为0.006%的三氯蔗糖、K2HP〇4.3H20 0. lg/100ml、KH2P〇4 0. lg/100ml、 MgS〇4· 7H20 lOmg/lOOml，调节pH7 · 3。将发酵液于115°C高压50分钟，得到无菌发酵液。
[0041] (4)菌种活化:于无菌环境下挑取一接种环纳豆芽孢杆菌菌种，画线于种子固体培 养基，35 °C丨旦温培养22小时。挑取透明圈最大的单个菌落于种子液体培养基中，35 °C丨旦温摇 床培养20小时，得到第一代菌种。将第一代菌种按体积百分比为2%接种于种子液体培养基 中，于35°C恒温摇床培养20小时，得到第二代菌种。
[0042] (5)接种、发酵：当无菌发酵液温度降至39°C左右时，按体积百分比为1.5%接种第 二代菌种，于35°C恒温摇床培养96小时，pH6.5左右时结束发酵，得到纳豆枯草芽孢杆菌发 酵黄芪液。
[0043] (6)过滤、离心:将(5)中得到的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪液过管式离心机离心， 得离心液。
[0044] (7)调配、灌装、灭菌：向步骤(6)中得到的离心液中添加重量g/体积ml百分比为4% 的聚葡萄糖、重量g/体积ml百分比为0.7%的低聚果糖浆(G 55L)，搅匀溶解;于无菌条件下 灌装，辐照灭菌得纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪饮品成品（规格为l〇〇ml/瓶）。检测此发酵组 合物含有纳豆芽孢杆菌菌体数量、纳豆激酶活力、黄芪甲苷含量(见表1)。
[0045] 实施例3: 一种纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪饮品的制备，具体方法如下： 1)种子培养基制备:种子液体培养基为LB培养基，其组成为蛋白胨10g、酵母提取物5g、 氯化钠 l〇g、蒸馏水1L;种子固体培养基为在酪蛋白培养基，其组成为酪素5g、葡萄糖lg、酵 母膏lg、磷酸氢二钾lg、磷酸二氢钾〇.5g、硫酸镁O.lg、琼脂1.5g、蒸馏水1L。
[0046] (2)原料处理:将干燥黄芪粉碎为黄芪粉，细度为60目。将重量g/体积ml百分比为 20%豆柏加入蒸馏水中，115 °C高压30分钟，离心取离心液，得到豆汁。
[0047] (3)发酵液制备:取10000ml豆汁，将重量g/体积ml百分比为20%的黄芪粉用豆汁浸 泡30分钟，加入重量g/体积ml百分比为1.5%的葡萄糖、重量g/体积ml百分比为3%的蔗糖、重 量g/体积ml百分比为0.008%的三氯蔗糖、K2HP〇4.3H20 0.1g/100ml、KH2P〇4 0.1g/100ml、 MgS〇4· 7H20 10mg/100ml，调节pH7 · 2。将发酵液于115°C高压50分钟，得到无菌发酵液。
[0048] (4)菌种活化:于无菌环境下挑取一接种环纳豆芽孢杆菌菌种，画线于种子固体培 养基，40 °C丨旦温培养16小时。挑取透明圈最大的单个菌落于种子液体培养基中，40 °C丨旦温摇 床培养15小时，得到第一代菌种。将第一代菌种按体积百分比为2%接种于种子液体培养基 中，于40°C恒温摇床培养15小时，得到第二代菌种。
[0049] (5)接种、发酵：当无菌发酵液温度降至39°C左右时，按体积百分比为1%接种第二 代菌种，于40°C恒温摇床培养72小时，pH6.5左右时结束发酵，得到纳豆枯草芽孢杆菌发酵 黄芪液。
[0050] (6)过滤、离心:将(5)中得到的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪液过管式离心机离心， 得离心液。
[0051] (7)调配、灌装、灭菌：向步骤(6)中得到的离心液中添加重量g/体积ml百分比为5% 的聚葡萄糖、重量g/体积ml百分比为0.6%的低聚果糖浆(G 55L)，搅匀溶解;于无菌条件下 灌装，辐照灭菌得纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪饮品成品（规格为l〇〇ml/瓶）。检测此发酵组 合物含有纳豆芽孢杆菌菌体数量、纳豆激酶活力、黄芪甲苷含量(见表1)。
[0052]对照例1:在制备方法(3)发酵液制备中不加入黄芪粉，其他步骤同实施例1。检测 此发酵组合物含有纳豆芽孢杆菌菌体数量、纳豆激酶活力(见表1)。
[0053] 对照例2:在制备方法(3)发酵液制备中以等量的蒸馏水代替豆汁，其他步骤同实 施例1。检测此发酵组合物含有纳豆芽孢杆菌菌体数量、纳豆激酶活力、黄芪甲苷含量(见表 1)0
[0054] 对照例3:取与实施例1相同浓度的黄芪粉，以蒸馏水代替豆汁，只进行高压提取， 不发酵。检测黄芪甲苷含量(见表1)。
[0055] 上述菌体数量采用显微镜直接计数法;纳豆激酶活力测定采用《中国药典》2010年 版，第二部，380页，尿激酶活力测定方法进行；黄芪甲苷含量测定采用《中国药典》2015年 版，第一部，302页，黄芪药材中黄芪甲苷测定方法进行。
[0056] 表1实施例中各指标测定结果
结果表明（表1):由对照例1、对照例2与实施例1相比，单独以豆汁或黄芪粉为原料进行 发酵，所得的各项指标均不如将豆汁和黄芪粉共发酵效果好;对照例3与实施例1相比，黄芪 甲苷含量亦不如实施例1中黄芪粉经纳豆芽孢杆菌发酵后高。由此说明，纳豆芽孢杆菌与黄 芪共发酵后，效价比均得到明显提高。
【主权项】
1. 一种纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，所述的组合物为黄芪经粉 碎成黄芪粉，经豆汁浸泡，添加葡萄糖和甜味剂，添加无机盐，灭菌后经纳豆枯草芽孢杆菌 发酵处理，添加聚葡萄糖和低聚果糖浆，得到纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物； 所述的豆汁为豆柏高压提取液。2. 根据权利要求1所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，黄芪粉与 豆汁的重量g/体积ml百分比为5~20%。3. 根据权利要求1所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，葡萄糖加 入量为重量g/体积ml百分比为0.5~2%。4. 根据权利要求1所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，所述的甜 味剂为重量g/体积ml百分比为1~3%的蔗糖、重量g/体积ml百分比为0.004~0.008%的三氯蔗 糖。5. 根据权利要求1所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，所述的无 机盐为K2HPO4.3H2O 0.1g/100ml、KH2P〇4 0.1g/100ml、MgS〇4.7H2〇 10mg/100ml。6. 根据权利要求1所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物，其特征在于，所述聚葡 萄糖的重量g/体积ml百分比为1~5%、低聚果糖衆G 55L的重量g/体积ml百分比为0.2~0.7%。7. 权利要求1-6任一项所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物的制备方法，其特 征在于，步骤如下： (1) 种子培养基制备:种子液体培养基为LB培养基，其组成为蛋白胨10份、酵母提取物5 份、氯化钠10份、蒸馏水1000份;种子固体培养基为在酪蛋白培养基，其组成为酪素5份、葡 萄糖1份、酵母膏1份、磷酸氢二钾1份、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.1份、琼脂1.5份、蒸馏水 1000份； (2) 原料处理:将干燥黄芪粉碎为细度为40-60目的黄芪粉;将豆柏加入蒸馏水中，115 °C高压30分钟，离心取离心液，得到豆汁； (3) 发酵液制备:将黄芪粉用豆汁浸泡30分钟，添加葡萄糖和甜味剂，添加无机盐，调节 pH7.2~7.4;将发酵液于115 °C高压50分钟，得到无菌发酵液； (4) 菌种活化：于无菌环境下挑取一接种环纳豆芽孢杆菌CICC20637菌种，划线于种子 固体培养基，35 °〇40 °C恒温培养15~24小时;挑取透明圈最大的单个菌落于种子液体培养 基中，35°C-40 °C恒温摇床培养12~20小时，得到第一代菌种;将第一代菌种按体积百分比为 1%-2%接种于种子液体培养基中，于35°C_40°C恒温摇床培养12~20小时，得到第二代菌种； (5) 接种、发酵：当无菌发酵液温度降至39°C时，按体积百分比为1%~2%接种第二代菌 种，于35°C_40°C恒温摇床培养72~120小时，pH6.5时结束发酵，得到纳豆枯草芽孢杆菌发酵 黄芪液； (6) 过滤、离心:将步骤(5)得到的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪液过管式离心机离心，得 离心液； (7) 调配、灌装、灭菌：向步骤(6)得到的离心液中添加聚葡萄糖、低聚果糖浆G 55L，搅 匀溶解;于无菌条件下灌装，辐照灭菌，得到纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪饮品。8. 根据权利要求7所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物的制备方法，其特征在 于，步骤(2)中豆柏与蒸馏水的重量g/体积ml百分比为10-20%。9. 根据权利要求7或8所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物的制备方法，其特征 在于，步骤(7)中所述的辐照灭菌为6()C〇辐射剂量为lOKGy。10.权利要求1~6所述的纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物在制备预防和辅助治疗 心脑血管栓塞症、提高免疫功能、调节肠道菌群平衡、改善胃肠功能的保健品或饮品中的应 用。
【专利摘要】本发明公开一种纳豆枯草芽孢杆菌发酵黄芪的组合物及其制备方法和应用，该组合物为黄芪经粉碎成黄芪粉，经豆汁浸泡，添加葡萄糖和甜味剂，无机盐，灭菌后经纳豆枯草芽孢杆菌发酵处理，添加聚葡萄糖、低聚果糖浆，即得。该组合物可用于制备预防、辅助治疗心脑血管栓塞症，提高免疫功能，调节肠道菌群平衡，改善胃肠功能的保健品或饮品。本发明提高了黄芪的利用率，优化了工艺流程；制备的组合物口感较好，状态稳定，使黄芪的有效成分变为易于被肠道吸收的活性物质，提高了利用率，减少了人体肠道负担。
【IPC分类】A61P37/04, A23L33/10, A23L33/26, A23L2/38, A23L33/135, A61P9/10, A23L2/52, A61P7/02, A61K36/481, A61P1/00, A61K47/36, A61K35/742
【公开号】CN105725008
【申请号】CN201610092982
【发明人】吴炳新, 陆继臣, 孙筱林, 褚新红, 甄宗武
【申请人】三株福尔制药有限公司
【公开日】2016年7月6日
【申请日】2016年2月20日