专利名称：作为降低脂质剂的联苯甲酰胺化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新颖的联苯甲酰胺化合物，其具有阿朴脂蛋白B抑制活性及伴随的降低脂质的活性。本发明进一步涉及制备此类化合物的方法、包含该化合物的药物组合物、及该化合物作为治疗高脂血症、肥胖及II型糖尿病的药物的用途。
肥胖是无数严重健康问题的导因，如成人糖尿病及心脏疾病的发作。另外，减肥在增加比例人口中变得热门。
在高胆固醇血症、特别是与低密度脂蛋白(此后称为LDL)及非常低密度脂蛋白(此后称为VLDL)的增加血浆浓度相关的高胆固醇血症与早期动脉硬化和/或心血管疾病之间的因果关系，现在广泛地被认知。然而，现在有限数量的药物可被用来治疗高脂血症。主要用来治疗高脂血症的药物包括胆汁酸多价螯合剂树脂如消胆胺及考来替泊；纤维酸衍生物如苯扎贝特、氯贝特、非诺贝特、环丙贝特及吉非贝齐；烟酸；及胆固醇合成抑制剂如HMG辅酶A还原酶抑制剂。施用的不方便性(待分散于水或橙汁中的粒状形式)及胆汁酸多价螯合剂树脂的主要副作用(肠胃不适及便秘)，构成主要的缺点。纤维酸衍生物引起温和地减少(5至25％)的LDL胆固醇(除了在高三酸甘油酯血症病患中，其起初的低水平会增加)，并且虽然通常有好的耐受性，但遭受到包括增强沃法令(warfarine)、搔痒、疲劳、头痛、失眠、在大肌肉群的疼痛可逆肌病及僵硬、阳痿及受损肾功能的副作用。烟酸为有效的降低脂质剂，造成LDL胆固醇的15至40％减少(并且当与胆汁酸多价螯合剂树脂组合时，甚至是45至60％)，但是与药物伴随的血管扩张作用相关等恼人副作用如头痛、脸红、心悸、心跳过速及偶发性的晕厥和其他副作用如肠胃不适、高尿酸血症及葡萄糖耐受性的损伤的高发生率。在HMG辅酶A还原抑制剂一族中，洛伐他汀及辛伐他汀两者，为不具活性的前药，包含在肝脏中被水解成相应活性羟基酸衍生物的内酯环。引起LDL胆固醇减少35至45％，其通常被很好地耐受同时具有低发生率的次要副作用。然而，仍然需要具有改进效力和/或通过不同于上述所述药物的其他机理而作用的新降低脂质剂。
血浆脂蛋白为水溶性的、由脂质(胆固醇、三酸甘油酯、磷脂质)和阿朴脂蛋白所形成的高分子量配合物。五个主要类别的脂蛋白，它们在脂质的比例和载脂蛋白的种类方面是不同的，皆具有其在肝脏和/或肠中的源头，已根据其密度(以超离心法测量)被定义。它们包括LDL、VLDL、中密度脂蛋白(此后称为IDL)、高密度脂蛋白(此后称为HDL)和乳糜微粒。十种主要的人类血浆阿朴脂蛋白已被鉴别出来。由肝脏分泌并包含阿朴脂蛋白B(此后称为Apo-B)的VLDL，进行分解而成LDL，其运送60至70％的总血清胆固醇。Apo-B也为LDL的主要蛋白质组份。在血清中增加的LDL-胆固醇是由于过度合成或减少代谢而偶发地与动脉硬化相关。相反，高密度脂蛋白(此后称为HDL)，其包含阿朴脂蛋白A1，具有保护作用，并且与冠状动脉心脏疾病反向相关。因此，HDL/LDL的比率是评估个体血浆脂质分布的致动脉粥样硬化潜力的一个方便方法。
阿朴脂蛋白(apo)B的两种异构物、apo B-4 8及apo B-100为人类脂蛋白代谢中的重要蛋白质。被称为apo B-48是因为其在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上为apo B-100大小的约48％，其是在人类肠中合成。Apo B-48对于乳糜微粒的组配是必需的，并且因此在饮食脂肪的肠吸收上起重要作用。在人类肝脏中产生的apo B-100，为VLDL合成和分泌所必需。包含人类血浆中约2/3胆固醇的LDL为VLDL的代谢产物。事实上Apo B-100是LDL的唯一蛋白质组份。在血浆中升高浓度的apo B-100和LDL胆固醇被认为是发展动脉硬化性冠状动脉疾病的危险因素。
大量的基因性和获得性疾病会造成高脂血症。其可被分类为原发性和继发性高血脂状态。继发性高脂血症的最通常原因是糖尿病、酗酒、吸毒、甲状腺机能减退、慢性肾脏衰竭、肾脏病变症状、胆汁堵塞和食欲过盛。原发性高脂血症也已被分类成一般高胆固醇血症、遗传性组合高脂血症、遗传性高胆固醇血症、残余高脂血症、乳糜微粒血症综合征及遗传性高三酸甘油酯血症。
微粒体三酸甘油酯转移蛋白质(此后称为MTP)已知优于催化如磷脂酰胆碱之类的磷脂质而催化三酸甘油酯和胆固醇酯的运送。D.Sharp等人的Nature(1993)36565证实导致无β-脂蛋白血症的缺点是在MTP基因中。这表明MTP为含有Apo B的脂蛋白如VLDL即LDL的前体的合成所必需的。因此接着是MTP抑制剂会抑制VLDL和LDL的合成，从而降低人类的VLDL、LDL、胆固醇和三酸甘油酯的水平。MTP抑制剂已经被报道于加拿大专利申请2,091,102和WO 96/26205中。属于聚芳基甲酰胺类的MTP抑制剂也已经被报道于美国专利5,760,246和WO-96/40640和WO-98/27979中。美国专利5,968,950公开了4’-三氟甲基联苯-2-羧酸-[2-(2-乙酰基氨基乙基)-1，2，3，4-四氢-异喹啉-6-基]酰氨基盐酸盐作为Apo B分泌/MTP抑制剂。美国专利5,827,875公开了吡咯烷基取代的芴作为微粒体三酸甘油酯转移蛋白质的抑制剂。美国专利5,965,577公开了微粒体三酸甘油酯转移蛋白质的杂环抑制剂。
本发明的目的之一是提供改进的治疗患有肥胖或动脉粥样硬化、特别是冠状动脉粥样硬化和更一般地是患有与动脉粥样硬化相关的疾病，如局部缺血性心脏疾病、周边血管疾病和脑血管疾病的患者的方法。本发明的另一个目的是使动脉粥样硬化复原及抑制其临床后果，特别是发病率及死亡率。
本发明是基于这样一个意想不到的发现，即一类新颖的联苯甲酰胺化合物是选择性的MTP抑制剂，即能够在哺乳动物肠壁水平选择性地阻断MTP，并因此是一个有希望的候选药物，即用于治疗高脂血症的药物。本发明另外提供了一些用来制备此类联苯甲酰胺类化合物的方法、及包括此类化合物的药物组合物。再者，本发明提供了一定数量的新颖化合物，其为有用的中间体，用来制备具治疗活性的联苯甲酰胺化合物，及制备此类中间体的方法。最后，本发明提供了治疗选自动脉粥样硬化、胰脏炎、肥胖、高胆固醇血症、高血三酸甘油酯症、高脂血症、糖尿病和II型糖尿病的疾病的方法，包含对哺乳动物施用治疗有效的联苯甲酰胺化合物。
本发明涉及一族新颖的式(I)的联苯甲酰胺化合物
其N-氧化物、药学上可接受的酸加成盐及其立体化学异构形式，其中p1、p2和p3是整数，各自独立地为1至3；各R1独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、C1-4烷硫基或多卤代C1-6烷基、氨基、C1-4烷基氨基和二(C1-4烷基)氨基；各R2独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或三氟甲基；R3选自氢或C1-4烷基；各R4独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或三氟甲基；Z是下列各式的双价基团 其中n为2至4的整数，并且在(a-1)基团中的-(CH2)n-部分任选地被一或两个C1-4烷基取代；m和m’为1至3的整数；R5和R6各自独立地选自氢、C1-6烷基或芳基；X1和X2各自独立地选自CH、N或s p2杂化的碳原子并且在(a-1)基团中至少X1或X2之一为N；A代表一个键，任选地被一或两个选自芳基、杂芳基和C3-10环烷基的基团取代的C1-6烷二基；B代表氢；C1-10烷基；芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷氧基羰基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基；杂芳基C1-10烷基；C3-10环烷基；多卤代C1-6烷基；C3-6链烯基；C3-6炔基；NR7R8或OR9。
其中R7和R8各独立地代表氢；C1-10烷基；芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基；杂芳基C1-10烷基；C3-10环烷基；C7-10多环烷基、多卤代C1-6烯基、C3-8链烯基、C3-8炔基、稠合的苯并C5-8环烷基，并且其中R7和R8与其所连的氮原子一起可形成具有4至8个碳原子的饱和杂环基团；并且其中R9代表C1-10烷基、芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷基氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基；杂芳基C1-10烷基；C3-10环烷基；C7-10多环烷基；多卤代C1-6烷基；C3-8链烯基；C3-8炔基或稠合的苯并C5-8环烷基。
除非另有说明，在下列定义及此后中所用的-卤素是指氟、氯、溴和碘；-C1-4烷基定义为直链和支链的、具有1至4个碳原子的饱和烃基团，例如甲基、乙基、丙基、正丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基等；-C1-6烷基意为包括C1-4烷基(如上所定义)及其具有5至6个碳原子的高级同系物，例如2-甲基丁基、正戊基、二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基等；-C1-10烷基意为包括C1-6烷基(如上所定义)及其具有7至10个碳原子的高级同系物，例如庚基、乙基己基、辛基、壬基、癸基等；-C3-10环烷基通称指环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基及环癸基；-多卤代C1-6烷基被定义为多卤代的C1-6烷基，特别是被2至13个卤素原子取代的C1-6烷基(如上所定义)，如二氟甲基、三氟甲基、三氟乙基、八氟戊基等；-芳基被定义为单和多芳香族基团，如任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团所取代的苯基；-杂芳基被义定为单和多杂芳香族基团，如包含一或多个选自氮、氧、硫和磷的杂原子的那些，特别是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、三唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基等；包括其所有可能的异构形式，并任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；-C3-6链烯基被定义为直链及支链的、包含一个双键并具有3至6个碳原子的烃基团，例如2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-甲基-2-丁烯基、3-己烯基、2-己烯基等；-C3-6炔基被定义为直链及支链的、包含一个叁键并具有3至6个碳原子的烃基团，例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、3-甲基-2-丁炔基、3-己炔基、2-己炔基等；-C4-8环烯基被定义为环状烃基团，其包含一个双键并具有4至8个碳原子，例如环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等；-稠合的苯基-C5-8环烷基被定义为诸如2，3-二氢化茚基、1，2，3，4-四氢萘基、芴基之类的基团；-C7-10多环烷基被定义为具有7至10个碳原子的基团，例如降冰片基；-C1-6烷基氨基定义为具有1至6个碳原子的伯氨基，例如甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙氨基、丁氨基、异丁氨基等；-二(C1-10烷基)氨基定义为具有1至6个碳原子的仲氨基，例如二甲氨基、二乙氨基、二丙氨基、二异丙氨基、N-甲基-N’-乙基氨基、N-乙基-N’-丙基氨基等；-C1-6烷硫基定义为与硫原子相连的C1-6烷基，如甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基等；-C1-6酰基定义为与羰基团相连的C1-6烷基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基等。
其中X1或X2之一代表sp2杂化的碳原子的双价基团Z的实例为 如上所述的药学上可接受的酸加成盐是意指包括式(I)的化合物所能形成的治疗活性的无毒的酸加成盐形式。药学上可接受的酸加成盐可方便以适当的酸处理碱形式而获得。适当的酸包含例如无机酸如氢卤酸例如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及类似的酸；或有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、丁二酸、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸(pamoic acid)及类似的酸。
相反地，该盐形式可以适当的碱处理而转化成游离碱形式。
上述所用的术语加成盐也包括式(I)化合物及其盐能够形成的溶剂化物。此类溶剂化物是例如水合物、醇合物及类似物。
可以本领域已知的方式制备的式(I)化合物的N-氧化物形式意指包括其中氮原子被氧化成N-氧化物的那些式(I)化合物。
上述所用的术语“立体化学异构形式”定义为式(I)化合物可具有的所有可能异构形式。除非另外提及或指出，否则化合物的化学命名表示所有可能立体化学异构形式的混合物，该混合物包括基本分子结构的所有非对映异构体和对映异构体。更特别地，立体中心可具有R-或S-构型；在二价的环状(部分)饱和的基团上的取代基可具有顺式或反式构型。除非另外提及或指出，化合物的化学命名表示所有可能立体异构形式的混合物，该混合物包括基本分子结构的所有非对映异构体和对映异构体。这同样适用于在此所述的被用于制备式(I)的终产物的中间体。
在此所用的术语顺式和反是根据化学文摘命名，并且指在环部分上的取代基的位置。
式(I)的联苯甲酰胺化合物和用于其制备的中间体的绝对立体化学构型可容易地被本领域技术人员用已熟知的方法例如X-光衍射来测定。
此外，一些式(I)的联苯甲酰胺化合物和用于其制备的一些中间体可显示多晶型。应该理解，本发明包括任何具有对前述病况的治疗有用的性质的多晶型形式。
一组令人感兴趣的化合物是由其中使用一或多个下列限制的式(I)化合物所组成a)R1是氢或三氟甲基；b)R2是氢；c)R3是氢；
d)R4是氢；e)p1是1；f)p2是1；g)p3是1；h)Z为式(a-1)的二价基团；其中X1和X2各为氮；i)Z为式(a-2)的二价基团；其中X1为氮且m和m’为整数1；j)Z为式(a-2)的二价基团；其中X1为氮且m为整数2，并且m’为整数1；k)Z为式(a-3)的二价基团；其中X1为氮且m和m’为整数1；1)Z为式(a-3)的二价基团；其中X1为氮且m为整数2，并且m’为整数1；m)Z为式(a-4)的二价基团；其中m为整数2，并且m’为整数1；n)R5和R6各独立为氢或甲基；o)二价基团A为被一个芳基取代的C1-6烷二基，特别是A为被苯基取代的亚甲基；p)B为C1-4烷氧基或C1-10烷氨基。
更令人感兴趣的化合物是那些式(I)化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；且Z为式(a-1)的二价基团，其中X1和X2各为氮，n为整数2，并且R5和R6各独立为氢或甲基。
其他更令人感兴趣的化合物是那些式(I)化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；且Z为式(a-2)或(a-3)的二价基团，其中X1为氮，m和m’为整数1，并且R5和R6各独立为氢或甲基。
仍有其他更令人感兴趣的化合物是那些式(I)化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；且Z为式(a-2)或(a-3)的二价基团，其中X1为氮，m为整数2，m’为整数1，并且R5和R6各独立为氢或甲基。
仍有其他更令人感兴趣的化合物是那些式(I)化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；且Z为式(a-4)的二价基团，其中m为整数2，m’为整数1，并且R5和R6各独立为氢或甲基。
本发明的一个优点是式(I)化合物可以通过相当多种不同方法容易地制备。现在详细地描述一些这样的制备方法而不是提供用来制备这些等化合物的方法的穷尽表列。
根据本发明制备联苯甲酰胺化合物的第一种方法是这样一种方法，其中使具有下式的中间体亚苯基胺 其中B、A、Z和R4如式(I)中所定义，与具有式(III)的联苯基羧酸或酰卤反应， 其中R1和R2如式(I)中所定义且Y1选自羟基和卤素，该反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中并且任选地在适当的碱存在下进行，该方法进一步任选地包括转化式(I)化合物成为其加成盐，和/或制备其立体化学异构形式。在Y1是羟基的情况下，可方便地通过加入有效量的反应促进剂来活化式(III)的联苯羧酸。此类反应促进剂的非限制性实施例包括羰基二咪唑；二酰亚胺类如N，N’-二环己基碳化二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺及其官能衍生物。对于此类酰化步骤，优选使用极性非质子溶剂如二氯甲烷。进行该第一种方法的适当碱包括叔胺如三乙基胺、三异丙基胺等。进行本发明的该第一种方法的适当的温度范围一般是约20℃至约140℃，取决于所用的具体溶剂，并且最经常是所用溶剂的沸点。
制备本发明的联苯甲酰胺化合物的第二种方法是这样一种方法，其中使具有式(IV)的中间体
其中R1、R2、R3、R4、A和Z如式(I)中所定义，并且Y2选自卤素和羟基，与式B-H的中间体(V)反应，其中B为NR7R8或OR9且R7、R8和R9如式(I)中所定义，该反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中并且任选地在至少一种适当的偶合剂和/或适当的碱存在下进行，所述方法进一步任选地包括转化式(I)化合物成为其加成盐，和/或制备其立体化学异构形式。在Y2是羟基的情况下，可方便地通过加入有效量的反应促进剂来活化式(IV)的羧酸。此类反应促进剂的非限制性实例包括羰基二咪唑；二酰亚胺如N，N’-二环己基碳化二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺及其官能衍生物。在使用式(V)的手性纯反应物的情况下，式(IV)中间体与中间体(V)的快速且无对映异构化的反应可在进一步存在有效量的诸如羟基苯并三唑、六氟磷酸苯并三唑氧基三(二甲氨基)鏻，六氟磷酸四吡咯烷子基鏻、六氟磷酸溴三吡咯烷子基鏻或其官能衍生物之类的化合物下进行，如D.Hudson在J.Org.Chem.(1988)，53617中所揭示的。在Y2是羟基且B为OR9的情况下，酯化反应可方便地在有效量的诸如硫酸之类的酸存在下进行。
制备根据本发明的联苯甲酰胺化合物的第三种方法是这样一种方法，其中使具有式(VI)的中间体 其中R1、R2、R3和R4如式(I)中所定义，并且Y3是选自卤素、B(OH)2、烷基硼酸盐及其环状类似物，
与具有式(VII)的反应物反应， 其中B、A和Z如式(I)中所定义，该反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中并且任选地在至少一种过渡金属偶合剂和/或至少一种适当的配体存在下进行，所述方法进一步任选地包括转化式(I)化合物成为其加成盐，和/或制备其立体化学异构形式。此类反应在本领域已知为Buchwaldt反应，可用的金属偶合剂和/或适当的配体例如钯化合物如四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基-丙酮)二钯、2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’-联萘等，可在例如Tetrahedron Letters(1996)37(40)7181-7184和J.Am.Chem.Soc.(1996)1187216中找到。如果Y3是B(OH)2、烷基硼酸盐或其环状类似物，用应该用乙酸铜作为偶合剂，这是根据Trahedron Letters(1998)392933-6。
式(I)化合物可方便地如下流程1所描述地使用固相合成技术来制备。一般而言，固相合成涉及在合成中将中间体与聚合物支持体反应。此经聚合物支持的中间体然后可进行许多合成步骤。在每一个步骤之后，杂质以过滤该树脂和以不同溶剂洗涤数次而被除去。在每一个步骤，树脂可被分开，而在下一步与不同中间体反应，因此容许大量的化合物合成。在该过程中的最后一个步骤后，该树脂用一种试剂或方法处理以从样本上切下该树脂。用于固态化学中的该技术的更详细解释被叙述于例如“The Combinatorial Index”(B.Bunin，AcademicPress)和Novabiochem’s 1999 Catalogue & Peptide SynthesisHandbook(Novabiochem AG，Switzerland)中，两者并于本文为参考。
流程1
在流程1中所用的缩写在实验部分中解释。取代基R1、R2、R3、R4、A、B和Z如对式(I)化合物所定义，PG代表保护基例如叔-丁氧羰基、C1-6烷氧羰基、苯甲氧基羰基等。
在上述方法中制备的式(I)化合物可以对映异构体的外消旋混合物的形式合成，其可按照本领域已知的拆分方法而互相分离。式(I)的外消旋化合物可与适当的手性酸反应而转化成相应的非对映盐形式。该非对映盐形式接着被分离，例如通过选择性或分馏结晶，并且用碱从中释出对映异构体。分离式(I)化合物的对映形式的另一种方法涉及使用手性固定相的液相色谱。所述的纯的立体化学异构形式也可从适当起始物质的相应的纯立体化学异构形式衍生，前提是反应立体专一地发生。优选地，如果想要特定的立体异构体，则用立体专一的制备方法来合成该化合物。这些方法有利地使用对映异构纯的起始物质。
式(I)的联苯甲酰胺化合物、其N-氧化物、药学上可接受的盐及立体化学异构形式具有有利的阿朴脂蛋白B抑制活性和伴随的脂质降低活性。因此，本化合物被用作药物，特别是在治疗遭受高脂血症、肥胖、动脉粥样硬化或II型糖尿病的病患的方法中。特别地，本化合物可用来制造治疗由非常低密度脂蛋白(VLDL)或低密度脂蛋白(LDL)过量所引起的失调的药物，并且特别是由与该VLDL和LDL相关的胆固醇所引起的失调。
在高胆固醇血-特别是与低密度脂蛋白(LDL)和非常密度脂蛋白(VLDL)的增加血浆浓度相关的-与早期动脉粥样硬化和心血管疾病之间的因果关系已良好地建立。VLDL由肝脏分泌并且包含阿朴脂蛋白B(apo-B)；这些颗粒在循环中进行分解而成LDL，其运送总血清胆固醇的约60至70％。Apo-B也是LDL的主要蛋白质组份。由于过度合成或减少代谢，在血清中的增加LDL-胆固醇因果地与动脉粥样硬化相关。对照之下，包含阿朴脂蛋白A1的高密度脂蛋白(HDL)有保护作用，并且与冠状动脉心脏疾病的危险有反向的关联。因此HDL/LDL的比率是一个评估个体血浆脂质分布的致动脉粥样硬化潜力的一个方便方法。
式(I)化合物的作用的主要机理涉及在肝细胞及肠上皮细胞中抑制MTP(微粒体三酸甘油酯转移蛋白)的活性，分别造成减少的VLDL及乳糜微粒产生。此为对高脂血症的新颖及革新方法，并且预期通过减少肝脏产生VLDL及肠产生乳糜微粒而降低LDL-胆固醇和三酸甘油酯。
大量的基因性和获得性疾病会造成高脂血症。它们可被分类为原发性和继发性高脂血状态。继发性高脂血症的最通常导因是糖尿病、酗酒、吸毒、甲状腺机能减退、慢性肾脏衰竭、肾脏病变症状、胆汁堵塞和食欲过盛。原发性高脂血症是一般高胆固醇血症、遗传性组合高脂血症、遗传性高胆固醇血症、残余高脂血症、乳糜微粒血综合征、遗传性高三酸甘油酯血症。本化合物也可用来预防或治疗遭受肥胖或动脉粥样硬化的患者，特别是冠状动脉粥样硬化及更一般与动脉粥样硬化相关的一般性失调的患者如局部缺血性心脏疾病、周边血管疾病及脑血管疾病的患者。本化合物可导致动脉粥样硬化的复原及抑制动脉粥样硬化的临床后果，特别是发病率及死亡率。
鉴于式(I)化合物的有用性，本发明也提供了一种治疗包括人在内的温血动物(一般在此称为患者)的方法，所述患者遭受有由非常密度脂蛋白(VLDL)或低密度脂蛋白(LDL)过量所导致的失调、并且特别是由与该VLDL和LDL相关的胆固醇所导致的失调。因此，提供了一种用来舒缓遭受诸如高脂血症、肥胖、动脉粥样硬化或II型糖尿病之类的疾病的患者的治疗方法。
由肠合成的apo B-48为乳糜微粒组配所必需，并且因此在饮食性脂肪的肠吸收中具有重要作用。本发明提供了联苯甲酰胺化合物，其是作为在肠壁水平上的选择性MTP抑制剂起作用。
此外，本发明提供了包含至少一种药学上可接受的载体和治疗有效量的具有式(I)的联苯甲酰胺化合物的药物组合物。
为了制备本发明的药物组合物，将有效量的特定化合物，以碱或加成盐形式作为活性成分，与至少一种药学上可接受的载体紧密混合，所述载体可采用广泛的各种形式，取决于所要施用的制剂的形式。这些药物组合物理想的是呈单位剂量形式，优选地适于口服施用、直肠施用、经皮施用或肠胃外注射。
例如在制备口服剂量形式的组合物时，在口服液态制剂如悬浮液、糖浆、酏剂和溶液的情况下可使用任何通常的液态药物载体，如水、二醇类、油类、醇类及类似物；或在粉末、药丸、胶囊和片剂的情况下可使用固态药物载体如淀粉、糖类、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其容易施用，片剂和胶囊代表最有利的口服剂量单位形式，在该情况下显然使用的是固态药物载体。对肠胃外注射组合物而言，药物载体主要包括无菌水，虽然其他成分可被包括以改进活性成分的溶解度。注射液可例如使用包括盐水、葡萄糖溶液或两者的混合物的药物载体来制备。可注射悬浮液也可使用适当的液态载体、悬浮剂等来制备。在适于经皮施用的组合物中，药物载体可任选地包含渗透增强剂和/或适当的湿润剂，任选地与小比例的适当添加物结合使用，该活加剂对皮肤不应导致明显的有害作用。该添加物可被选择以加速活性成分对皮肤的施用和/或有助于制备理想的组合物。这些局部组合物可以各种方式施用，例如经皮贴剂、点施剂(spot-on)或软膏。式(I)化合物的加成盐，由于其与相应的碱形式相比具有增加的水溶性，因此明显地更适于水性组合物的制备。
特别有利的是，由于施用容易性和剂量均匀性，所以配制剂量单位形式的本发明药物组合物。在此所用的“剂量单位形式”意指物理上不连续的单位，适于作为单一剂量，每一个单位包含预定量的活性成分，该量是计算出来产生与所需药物载体相关的所要治疗效果的。此剂量单位形式的实施例为片剂(包括有刻痕的或经涂覆的片剂)、胶囊、药丸、粉末小包、薄片、可注射的溶液或悬浮液、茶匙量、汤匙量等，及其被分隔的多倍量。
对口服施用而言，本发明的药物组合物可采用固体剂量形式的形式，例如片剂(可吞服和可咀嚼形式两者)、胶囊或凝胶罩(gelcaps)，它们以常规的方式用药学上可接受的赋形剂和载体制备，如粘合剂(例如预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等)、填充剂(例如乳糖、微晶纤维素、磷酸钙等)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等)、崩解剂(例如土豆淀粉、淀粉乙醇酸钠等)、湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)等。这些片剂也可以以本领域中熟知的方法涂覆。
用于口服施用的液态制剂可采用的形式是例如溶液、糖浆或悬浮液，或它们可调配成干燥产物，用于在使用前与水和/或其它适当的液体载体混合。此类液体制剂可以通过常规方法制备，任选地使用其他药学上可接受的添加物例如悬浮剂(如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或经氢化的食用脂肪)、乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)、非水性载体(例如杏仁油、油性酯类或乙醇)、甜味剂、香料、遮掩剂及防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。
用于本发明的药物组合物的药学上可接受的甜味剂优选地包含至少一种强烈甜味剂，如阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾、环己基氨基磺酸钠、阿力甜、二氢基查耳酮甜味剂、莫内林、甜菊苷、三氯蔗糖(4，1’，6’-三氯-4，1’，6’-三脱氧半乳糖基蔗糖)或优选地为糖精、糖精钠或钙，和任选地至少一种大量甜味剂如山梨糖醇、甘露糖醇、果糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽糖、葡萄糖、经氢化的葡萄糖浆、木糖醇、焦糖或蜂蜜。强烈甜味剂方便地用低浓度。例如，在糖精钠的情况下，该浓度范围可为最终制剂的约0.04％至约0.1％(重量/体积)。大量甜味剂可有效地使用约10％至约35％，优选约10％至约15％(重量/体积)的较大浓度范围。
可在低剂量制剂中遮盖苦味成分的药学上可接受的香料优选地为水果香料如樱桃、覆盆子、黑醋栗或草莓香料。两种香料的组合会产生非常好的结果。在高剂量制剂中，可能需要较强的药学上可接受的香料如焦糖巧克力(Caramel Chocolate)、薄荷凉(Mint Cool)、梦幻(Fantasy)等。每一种香料可存在于最终组合物中的浓度范围是约0.05％至1％(重量/体积)。有利的是使用所述强烈香料的组合。优选地，所用的香料在制剂的环境下不发生任何味道和/或颜色的改变或损失。
本发明的联苯甲酰胺化合物可被配制成通过注射、方便地是静脉注射、肌肉内注射或皮下注射的肠胃外施用，例如浓注或连续静脉输注。用于注射的制剂可以单位剂量形式存在，例如在安瓿或多重剂量容器中，包括添加的防腐剂。它们可采用诸如在油性或水性介质中悬浮液、溶液或乳液之类的形式，并且可包含配制剂如等渗剂、悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。另外，活性成分可以粉末形式存在，用来在使用前与适当的介质混合例如无菌无热源的水。本发明的联苯甲酰胺化合物也可被配制成直肠用组合物如栓剂或灌肠剂，例如含有常用栓剂基质如椰子脂和/或其他甘油酯类。
本发明的联苯甲酰胺化合物可与其他药剂配合使用，特别是，本发明的药物组合物可进一步包含至少一种另外的脂质降低剂，因此导致所谓的组合脂质降低治疗。该另外的脂质降低剂可以是例如常用于治疗高脂血症的已知药物如胆汁酸多价螯合剂树脂、纤维酸衍生物或烟酸，如在本发明的背景中已提及的。适当的另外脂质降低剂也包括其他的胆固醇生物合成抑制剂和胆固醇吸收抑制剂，特别是HMG-CoA还原酶抑制剂和HMG-CoA合成抑制剂、HMG-CoA还原酶基因表达抑制剂、CETP抑制剂、ACAT抑制剂、鲨烯合成酶抑制剂等。
任何HMG-CoA还原酶抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面的第二种化合物。在此所用的术语“HMG-CoA还原酶抑制剂”，除非另述，否则意指抑制羟甲基戊二酰基辅酶A通过HMG-CoA还原酶催化生物转化成甲羟戊酸的化合物。此抑制可容易地由本领域技术人员根据标准方法即Methods of Enzymology(1981)71455-509测定。示范性化合物被叙述于例如美国专利4,231,938(包括洛伐他汀)、美国专利4,444,784(包括辛伐他汀)、美国专利4,739,073(包括氟伐他汀)、美国专利4,346,227(包括普伐他汀)、EP-A-491,226(rivastatin)和美国专利4,647,576(atovastatin)。
任何HMG-CoA合成酶抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面的第二种化合物。在此所用的术语“HMG-CoA合成酶抑制剂”，除非另述，否则意指抑制由HMG-CoA合成酶催化的从乙酰基辅酶A和乙酰乙酰基辅酶A生物合成羟甲基戊二酰基辅酶A的化合物。此抑制可容易地由本领域技术人员根据标准方法即Methods of Enzymology(1985)11019-26测定。示范性化合物被叙述于例如与β-内酰胺衍生物相关的美国专利5,120,729、与螺内酯衍生物相关的美国专利5,064,856和与氧杂环丁烷化合物相关的美国专利4,847,271中。
任何HMG-CoA还原酶基因表达抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面的第二种化合物。这些试剂可以是阻断DNA转录的HMG-CoA还原酶转录抑制剂或抑制编码HMG-CoA还原酶的mRNA翻译成蛋白质的翻译抑制剂。此类抑制剂会直接影响转录或翻译或可以生物转化成具有在胆固醇生物合成过程中一或多种酶的上述贡献的化合物或可以导致具有上述活性的代谢物的积蓄。此调节可容易地由本领域技术人员根据标准方法即Methods of Enzymology(1985)1109-19测定。示范性化合物被叙述于例如美国专利5,041,432和E.I.Mercer，Prog.Lip.Res.(199 )32357-416中。
任何CETP抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面中的第二种化合物。在此所用的术语“CETP抑制剂”，除非另述，否则意指抑制胆固醇酯转移蛋白质(CETP)介导的从HDL到LDL和VLDL的各种胆固醇酯类和三酸甘油酯转运的化合物。示范性化合物被叙述于例如美国专利5,512,548号、J.Antibiot.(1996)49(8)815-816和Bioorg.Med.Chem.Lett.(1996)61951-1954中。
任何ACAT抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面的第二种化合物。在此所用的术语“ACAT抑制剂”，除非另述，否则意指抑制由酰基CoA胆固醇酰基转移酶催化的饮食胆固醇的细胞内酯化的化合物。此抑制可容易地由本领域技术人员根据标准方法即Heider等人在Journal of Lipid Research(1983)241127中的方法测定。示范性化合物被叙述于例如美国专利5,510,379、WO 96/26948和WO96/10559中。
任何鲨烯合成酶抑制剂都可用作本发明的组合治疗方面的第二种化合物。在此所用的术语“鲨烯合成酶抑制剂”，除非另述，否则意指抑制由鲨烯合成酶催化的将法呢基焦磷酸盐两个分子缩合形成鲨烯的化合物。此抑制可容易地由本领域技术人员根据标准方法即Methodsof Enzymology(1985)110359-373测定。示范性化合物被叙述于例如EP-A-567,026、EP-A-645,378和EP-A-645,377中。
用于治疗高脂血症的那些技术人员可从后面给出的试验结果容易地确定本发明的联苯甲酰胺化合物的治疗有效量。一般而言，考虑治疗有效剂量是约0.001毫克/千克的被治疗患者体重至约5毫克/千克体重，更优选是约0.01毫克/千克体重至约0.5毫克/千克体重。适当的是以两或多个次剂量形式在一天中适当的间隔施用治疗有效剂量。该次剂量可调配成单位剂量形式，例如，每单位剂量形式各包含约0.1毫克至约350毫克的活性成分，更特别是约1毫克至约200毫克。
施用的精确剂量和频率取决于所用的特定的式(I)的联苯甲酰胺化合物、被治疗的特定疾病、被治疗的疾病的严重性、具体患者的年龄、体重和一般生理状况及患者可能服用的其他药物(包括上述的另外的脂质降低剂)，这些都为本领域技术人员所熟知。此外，该有效日剂量可被减少或增加，取决于被治疗患者的反应和/或取决于医师处方本发明的联苯甲酰胺化合物的评估。因此上述的有效日剂量范围只是指导性的。
实验部分在下面所述的方法步骤中，使用下列缩写“ACN”代表乙腈“THF”代表四氢呋喃；“DCM”代表二氯甲烷；“DIPE”代表二异丙基醚；“DMF”意为N，N’-二甲基甲酰胺；“NMP”意为N-甲基-2-吡咯烷酮；“TFA”意为三氟乙酸；“TIS”意为三异丙基硅烷；“DIPEA”意为二异丙基乙基胺；“MIK”意为甲基异丁基酮；“BINAP”意为2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’-联萘；及“TMSOTf”意为三甲基甲硅烷基三氟甲硫酸酯。
A.中间体的合成对于组合方法，许多中间体树脂从商业上可得的树脂开始制备
流程2 实施例A.1将Novabiochem 01-64-0261市售树脂(25.1克)、4-溴苯胺(24克)和异丙氧基钛(IV)(41毫升)在DCM(400毫升)中的混合物在室温下温和地搅拌一小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(30克)并将该反应混合物在室温下搅拌过夜。加入甲醇(50毫升)并搅拌该混合物一小时，然而过滤、以DCM洗涤一次、以甲醇洗涤一次、然后以DCM(200毫升)+DIPEA(20毫升)洗涤一次、首先以DMA洗涤三次、接着用甲醇洗涤、然后干燥，产生29.28克的树脂，被鉴定为流程2的树脂(1)，将其用于下一步反应而不进一步纯化。
实施例A.2将2-苯基苯甲酸(8.3克)溶解于DCM(100毫升)中。加入亚硫酰氯(10克)。加入DMF(10滴)并搅拌该混合物和回流一小时。蒸发溶剂。加入DCM(三次，50毫升)到残余物中并且蒸发溶剂。将残余物溶解于DCM(50毫升)中。将此溶液添加到实施例A.1的树脂(1)(14.64克)、DIPEA(24毫升)和4-二甲基氨基吡啶(此后称为DMAP)(0.5克)在DCM(150毫升)中的混合物中。将该反应混合物在室温下振摇过夜，然后过滤，并且将过滤残余物用100毫升DMF+20毫升DIPEA洗涤，然后用甲醇、水、DCM、甲醇、DCM和甲醇洗涤，并且干燥，产生15.73克的树脂，被鉴定为流程2的树脂(2-a)。
实施例A.3将4’-(三氟甲基)-2-联苯羧酸(14.64克)溶解于DCM(100毫升)。加入DMF(1毫升)。加入亚硫酰氯(10克)并且搅拌该混合物并回流一小时。蒸发溶剂。加入DCM(两次，50毫升)并且蒸发溶剂。残余物溶解于DCM(50毫升)中。此溶液加入到实施例A.1的树脂(1)(14.64克)、DIPEA(24毫升)和DMAP(0.5克)在DCM(150毫升)中的混合物中。该反应混合物在室温下振摇四小时，然后过滤，并且将过滤残余物用100毫升DMF+20毫升DIPEA洗涤，然后首先用DCM洗涤三次并接着用甲醇洗涤，最后干燥。将此反应产物再与起初份量一半的4’-(三氟甲基)-2-联苯羧酸、亚硫酰氯、DIPEA和DMAP反应一次。将该反应混合物在室温下振摇过夜，然后过滤，并将过滤残余物用DMF+20毫升DIPEA洗涤，然后用甲醇、水、甲醇、DCM、甲醇、DCM+甲醇洗涤，然后干燥，产生17.48克的树脂，被鉴定为流程2的树脂(2-b)。
实施例A.4a)将4’-(三氟甲基)-[1，1’-联苯]-2-羰基氯(0.019摩尔)在DCM(50毫升)中的溶液在5℃下缓慢地加入到在DCM(40毫升)中的1-氨基-4-碘苯(0.017摩尔)和三乙基胺(0.026摩尔)的混合物中。将该混合物在室温下搅拌1小时，然后用1当量HCl洗涤、然后用10％K2CO3洗涤。分离有机层、干燥、过滤并且蒸发溶剂。残余物从DIPE中结晶。过滤沉淀物并且干燥，产生6.1克的N-(4-碘苯基)-4’-(三氟甲基)-[1，1’-联苯]-2-甲酰胺(中间体1溶点147℃)。
b)将中间体(1)(0.012摩尔)、N-烯丙基邻苯二酰亚胺(0.012摩尔)、乙酸钯(II)(0.001摩尔)和三乙基胺(0.024摩尔)的混合物在弹式反应器中于100℃下搅拌12小时，然后溶解于DCM中，用10％K2CO3洗涤。分离有机层、干燥、过滤并且蒸发溶剂。残余物从ACN中结晶。过滤沉淀物并且干燥，产生3.2克的N-[4-[(1E)-3-(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)-1-丙烯基]苯基]-4’-(三氟甲基)-[1，1’-联苯]-2-甲酰胺(中间体2熔点190℃)。
c)将中间体(2)(0.005摩尔)和肼水溶液(0.005摩尔)在乙醇(30毫升)中的混合物搅拌回流2小时。过滤沉淀物并且用乙醇洗涤。加入水。将悬浮液用NaOH碱化，并在硅藻土(celite)上过滤。用乙酸乙酯洗涤硅藻土。滤液用乙酸乙酯萃取，并且用K2CO3、然后用NaCl洗涤。分离有机层、干燥、过滤并且蒸发溶剂。残余物从ACN中结晶。过滤沉淀物并且干燥，产生2.5克的N-[4-[(1E)-3-氨基-1-丙烯基]苯基]-4’-(三氟甲基)-[1，1’-联苯]-2-甲酰胺(中间体3熔点190℃)。
B.最终化合物的合成实施例B.1将BINAP(0.00014摩尔)在NMP(1毫升)中的悬浮液添加到树脂(2-b)(0.00014摩尔)和叔丁氧基钠(0.00252摩尔)中。加入在NMP(2毫升)中的1，2-二氨基乙烷(0.0021摩尔)并且在氩气下搅拌该反应混合物。加入在NMP(1毫升)中的Pd2(dba)3(0.000028摩尔)并将该反应混合物在105℃下振摇19小时。冷却该混合物、过滤，并将过滤残余物用DMF、水、DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和NMP(2x)洗涤。加入NMP(3毫升)。加入在NMP(1毫升)中的2-溴-2-苯基乙酸甲酯(0.0007摩尔)。加入DIPEA(0.3摩尔)并将该反应混合物在室温下振摇18小时。过滤该反应混合物、用DMF和水、然后DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(4毫升)，并将该混合物在室温下振摇一小时。过滤该混合物，并且再加入TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(1.5毫升)。将该混合物振摇15分钟、过滤，用DCM(2毫升)洗涤，然后将滤液在氮气下吹干。将残余物在Purospher Star RP-18(20克、5微米；洗脱剂((在H2O中的0.5％NH4OAc)/CH3CN 90/10)/CH30H/CH3CN(0分钟)75/25/0、(10.00分钟)0/50/50、(16.00分钟)0/0/100、(18.10-20分钟)75/25/0)上通过HPLC纯化。收集所要的部分并且蒸发有机溶剂。水性浓缩物用Na2CO3水溶液处理，然后以DCM萃取。萃取物通过Extrelut分离，并且在氮气、50℃下吹干滤液。将残余物进一步干燥(真空、50℃)，产生0.006克的化合物1。
在下表F-1中被鉴定为第2号至第29号的化合物是类似地使用相同实验步骤并且以适当的反应性二胺来取代1，2-二氨基乙烷制备的。
实施例B.2将NMP(2毫升)加到树脂(2-a)(0.00014摩尔)中。加入BINAP(0.00014摩尔)和叔丁氧基钠(0.00252摩尔)。加入在NMP(1毫升)中的1，2-二氨基乙烷(0.0021摩尔)，并将该混合物在氩气下振摇1小时。加入在NMP(1毫升)中的Pd2(dba)3(0.000028摩尔)并将该反应混合物在105℃下振摇18小时。冷却混合物、过滤，并将过滤残余物用DMF-水50-50、DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和NMP(2x)洗涤。加入NMP(3毫升)。加入在NMP(1毫升)中的2-溴-2-苯基乙酸甲酯(0.0007摩尔)。加入DIPEA(0.300摩尔)并将反应混合物在室温下振摇18小时。过滤反应混合物、以DMF和水洗涤、用DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(4毫升)，并将混合物在室温下振摇2小时、然后过滤。添加另外的TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(2毫升)，并将混合物振摇15分钟，然后过滤。将过滤残余物用DCM(2毫升)洗涤，然后滤液在氮气下吹干。将残余物在Purospher Star RP-18(20克，5微米；洗脱剂；((在H2O中的0.5％NH4OAc)/CH3CN 90/10)/CH3OH/CH3CN(0分钟)75/25/0、(10.00分钟)0/50/50、(16.00分钟)0/0/100、(18.10-20分钟)75/25/0)上通过HPLC纯化。收集所要的部分并且蒸发有机溶剂。水性浓缩物以Na2CO3水溶液处理，然后用DCM萃取。分离萃取物，并且滤液在氮气、50℃下吹干。进一步干燥残余物(真空、50℃)，产生0.007克的化合物30。在下表F-1中被鉴定为第31号至第58号的化合物是类似地使用相同实验步骤并且以适当的反应性二胺来取代1，2-二氨基乙烷制备的。
实施例B.3将NMP(2毫升)添加到树脂(2-a)(0.00014摩尔)中。分批地加入BINAP(0.00014摩尔)和叔丁氧基钠(0.00252摩尔)。加入在NMP(1毫升)中的4-氨基-1-叔丁氧羰基哌啶(0.0021摩尔)，并将混合物在氮气下振摇1小时。加入在NMP(1毫升)中的Pd2(dba)3(0.000028摩尔)，并将反应混合物在105℃下振摇18小时。冷却混合物，过滤，并将过滤残余物用DMF-水50-50、DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入在DCM(3毫升)中的TMSOTf(1M)和2，6-二甲基吡啶(1.5M)，并将反应混合物在室温下振摇2小时。过滤混合物，用DCM(3x)洗涤，并且加入甲醇(4毫升)。将反应混合物在室温下振摇一小时，过滤并将过滤残余物用DCM(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和NMP(1x)洗涤。加入NMP(3毫升)。加入在NMP(1毫升)中的2-溴-2-苯基乙酸乙酯(0.0007摩尔)。加入DIPEA(0.3毫升)并将反应混合物在室温下振摇20小时。过滤反应混合物，用DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(4毫升)，并将反应混合物在室温下振摇一小时，然后过滤。添加另外的TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(2毫升)，并将反应混合物振摇30分钟，然后过滤。并且用DCM(2毫升)洗涤。滤液在氮气、50℃下吹干。该残余物在Purospher Star RP-18(20克，5微米；洗脱剂((在H2O中的0.5％NH4OAc)/CH3CN 90/10)/CH3OH/CH3CN(0分钟)75/25/0、(10.00分钟)0/50/50、(16.00分钟)0/0/100、(18.10-20分钟)75/25/0)上通过HPLC纯化。收集所要的部分并且蒸发有机溶剂。水性浓缩物用Na2CO3水溶液处理，然后用DCM萃取。分离萃取液，并且滤液在氮气、50℃下吹干。残余物进一步被干燥(真空、50℃)，产生0.007克的化合物59。
在下表F-1中被鉴定为第60号至第96号的化合物是类似地使用相同实验步骤并且以适当的反应性胺来取代4-氨基-1-叔丁氧羰基哌啶制备的。
实施例B.4将树脂(2-b)(0.00014摩尔)用NMP(2毫升)洗涤。加入BINAP(0.00014摩尔)和叔丁氧基钠(0.00252摩尔)。加入在NMP(1毫升)中的4-氨基-1-叔丁氧羰基哌啶(0.0021摩尔)。加入NMP(3毫升)，并将混合物在氩气下振摇1小时。加入在NMP(1毫升)中的Pd2(dba)3(0.00028摩尔)，并将反应混合物在105℃下振摇18小时。冷却混合物、过滤，并将过滤残余物用DMF、DMF-水50-50、DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入在DCM(3毫升)中的TMSOTf(1M)和2，6-二甲基吡啶(1.5M)，并将反应混合物在室温下振摇2小时。过滤该混合物，用DCM(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)、然后NMP(2x)洗涤。加入NMP(3毫升)。加入在NMP(1毫升)中的2-溴-2-苯基乙酸甲酯(0.160克)。加入DIPEA(0.3毫升)。将该反应混合物在室温下振摇20小时，过滤，用DMF、然后DMF-水50-50、然后DMF(3x)、水(3x)、DMF(3x)、CH3OH(3x)、DCM(3x)、CH3OH(3x)和DCM(3x)洗涤。加入TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(4毫升)，并将反应混合物振摇一小时、然后过滤。加入另外的TFA/TIS/DCM(49∶2∶49)(2毫升)，并将反应混合物振摇30分钟，然后过滤。滤液在氮气、50℃下吹干。将残余物在Purospher StarRP-18(20克，5微米；洗脱剂((在H2O中的0.5％NH4OAc)/CH3CN90/10)/CH3OH/CH3CN(0分钟)75/25/0、(10.00分钟)0/50/50、(16.00分钟)0/0/100、(18.10-20分钟)75/25/0)上通过HPLC纯化。收集所要的部分并且蒸发有机溶剂。水性浓缩物用Na2CO3水溶液处理，然后用DCM萃取。分离萃取液，并且滤液在氮气、50℃下吹干。将残余物进一步干燥(真空，50℃)，产生0.031克的化合物97。
在下表F-1中被鉴定为第98号至第136号的化合物是类似地使用相同实验步骤并且以适当的反应性胺来取代4-氨基-1-叔丁氧羰基哌啶来制备的。
实施例B.5将中间体(3)(0.006摩尔)、2-溴-2-苯基乙酸甲酯(0.011摩尔)、三乙基胺(1.6毫升)和四丁基碘化铵(0.001摩尔)在THF(20毫升)中的混合物在室温下搅拌8小时。加入水。将该反应混合物用乙酸乙酯萃取。分离有机层，干燥，过滤并且蒸发溶剂。残余物在硅胶上(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98.5/1.5)通过柱色谱纯化，并从乙醚中结晶，产生化合物(137)，熔点142℃。
在F-1列出了根据上述实施例中的一个制备的化合物。下列缩写被用于表中C2HF3O2代表三氟乙酸盐。
表F-1
C.药理学实施例C.1 ApoB分泌的定量将HepG2细胞在24孔的板上在包含10％胎牛血清的MEM Rega 3中培养。在70％融合时，改变培养基并且加入测试化合物或载体(DMSO，0.4％最终浓度)。在培养24小时后，培养基被转移到Eppendorf管中并且离心澄清。将抗apoB的羊抗体添加到上清液中，并将该混合物保持在8℃下24小时。然后，加入兔子抗羊抗体，容许免疫配合物在8℃下沉淀24℃小时。免疫沉淀物在1320克下离心25分钟以沉降，用包含40mM的Mops、40mM的NaH2PO4、100mM的NaF、0.2mM的DTT、5mM的EDTA、5mM的EGTA、1％的Triton-X-100、0.5％脱氧胆汁酸(DOC)钠、0.1％SDS、0.2μM的leupeptin和0.2μM的PMSF的缓冲液洗涤两次。在沉降物中的放射活性以液态闪烁计数定量。
所得的IC50值列于表C.1。
表C.1pIC50值(＝-log IC50值)
C.2 MTP分析MTP活性使用类似于J.R.Wetterau和D.B.Zilversmit在Chemistry and Physics of Lipids，38，205-222(1985)中所述的分析方法来测量。为了制备供体和受者囊(vesicle)，将在氯仿中的适当脂质放到一个玻璃试管中，并在N2流中干燥。加入包含15mM的Tris-HCl pH7.5、1mM的EDTA、40mM的NaCl、0.02％NaN3(分析缓冲液)的缓冲液到干燥脂质中。将混合物简短地混旋，然后将脂质在冰上水解20分钟。然后在室温下以超音浴(Branson 2200)处理最多15分钟来制备囊。将丁基化的羟基甲苯以0.1％浓度包括在所有的囊制备物中。在1.5微离心管中，在总体积675微升的脂质转移分析混合物中，包含供体囊(40nmol的磷脂酰胆碱、7.5摩尔％的牛心脂素(cardiolipin)和0.25摩尔％三[1-14C]油酸甘油酯)、受体囊(240nmol的磷脂酰胆碱)和5毫克BSA。将测试化合物溶解在DMSO(0.13％最终浓度)中。在73℃下、预先培养5分钟后，以添加在100微升透析缓冲液中的MTP来开始反应。反应以添加预先平衡于15mM的Tris-HCl pH7.5、1mM的EDTA、0.02％NaN3(1∶1，体积/体积)中的400微升DEAE-52纤维素来停止。将混合物搅拌4分钟并且在Eppendorf离心管(4℃)中于最大速度下离心2分钟将DEAE-52-结合的供体囊沉降。将包含受体脂质体的上清液各等份计数，并且[14C]-计数被用来计算从供体转移三酸甘油酯到受体囊的百分比。
权利要求
1.式(I)的化合物 其N-氧化物、药学上可接受的酸加成盐及立体化学异构形式，其中p1、p2和p3是整数，各自独立地为1至3；各R1独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、C1-4烷硫基或多卤代C1-6烷基、氨基、C1-4烷氨基及二(C1-4烷基)氨基；各R2独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或三氟甲基；R3为氢或C1-4烷基；各R4独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或三氟甲基；Z是下列各式的二价基团 其中n为2至4的整数，并且在(a-1)基团中的-(CH2)n-部分可任选地是被一或两个C1-4烷基取代；m和m’为1至3的整数；R5和R6各自独立地选自氢、C1-6烷基或芳基；X1和X2各自独立地选自CH、N或sp2杂化的碳原子并在(a-1)基团中至少X1或X2之一为N；A代表一个键，任选地被一或两个选自芳基、杂芳基和C3-10环烷基的基团取代的C1-6烷二基；B代表氢；C1-10烷基；芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷氧羰基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基；杂芳基C1-10烷基；C3-10环烷基；多卤代C1-6烷基；C3-6链烯基；C3-6炔基；NR7R8；或OR9；其中R7和R8各自独立地代表氢，C1-10烷基，芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基，杂芳基C1-10烷基，C3-10环烷基，C3-7多环烷基，多卤代C1-6烷基，C3-8链烯基，C3-8炔基，稠合的苯并C5-8环烷基，并且其中R7和R8与其所连的氮原子一起可形成具有4至8个碳原子的饱和杂环基团；并且其中R9代表C1-10烷基，芳基或杂芳基，其各任选地被选自卤素、氰基、硝基、C1-4烷氧基、氨基、C1-10烷氨基、二(C1-10烷基)氨基、C1-10酰基、C1-10烷硫基、C1-10烷基氨基羰基和二(C1-10烷基)氨基羰基的基团取代；芳基C1-10烷基；杂芳基C1-10烷基；C3-10环烷基；C7-10多环烷基；多卤代C1-6烷基；C3-8链烯基、C3-8炔基或稠合的苯并C5-8环烷基。
2.如权利要求1的化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；Z为式(a-1)的二价基团，其中X1和X2各为氮，n为整数2，并且R5和R6各自独立地为氢或甲基。
3.如权利要求1的化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；Z为式(a-2)或(a-3)的二价基团，其中X1为氮，m和m’为整数1，并且R5和R6各自独立地为氢或甲基。
4.如权利要求1的化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；Z为式(a-2)或(a-3)的二价基团，其中X1为氮，m为整数2，m’为整数1，并且R5和R6各自独立地为氢或甲基。
5.如权利要求1的化合物，其中R1是氢或三氟甲基；R2、R3和R4是氢；Z为式(a-4)的二价基团，其中m为整数2，m’为整数1，并且R5和R6各自独立地为氢或甲基。
6.如权利要求1至5任一项的化合物，其中A为被苯基取代的C1-6烷二基；而B为C1-4烷氧基或C1-10烷氨基。
7.药物组合物，包含药学上可接受的载体和治疗有效量的如权利要求1至6任一项的化合物。
8.制备如权利要求7的药物组合物的方法，其中将治疗有效量的如权利要求1至6任一项的化合物与药学上可接受的载体紧密混合。
9.如权利要求1至6任一项的化合物，其是被用作药物。
10.制备式(I)化合物的方法，其中a)将式(II)的中间体， 其中B、A、Z、R4和p3如权利要求1中所定义，与式(III)的联苯羧酸或酰卤反应， 其中R1、R2、p1和p2如式(I)中所定义，Y1选自羟基和卤素，该反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中并任选地在适当的碱存在下进行；(b)将式(IV)的中间体 其中R1、R2、R3、R4、A、Z、p1、p2和p3如权利要求1中所定义，Y2选自卤素和羟基，与式B-H的中间体(V)反应，其中B为NR7R8或OR9且R7、R8和R9如权利要求1中所定义，所述反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中和任选地在至少一种适当的偶合剂和/或适当的碱存在下进行；c)将式(VI)的中间体， 其中R1、R2、R3、R4、p1、p2和p3如权利要求1中所定义，Y3选自卤素、B(OH)2、烷基硼酸盐及其环状类似物，与式(VII)的反应物反应， 其中B、A和Z如在权利要求1中所定义，所述反应在至少一种对反应为惰性的溶剂中和任选地在至少一种过渡金属偶合剂和/或至少一种适当的配体存在下进行；d)或将式(I)化合物按照技术上已知的转化反应互相转化；或者如果需要，将式(I)化合物转化成酸加成盐，或相反地，将式(I)化合物的酸加成盐用碱转化成游离碱形式；并且如果需要，制备其立体化学异构形式。
全文摘要
式(I)的联苯甲酰胺化合物，制备此类化合物的方法、包含该化合物的药物组合物、及该化合物作为治疗高脂血症、肥胖及II型糖尿病的药物的用途。
文档编号A61K31/445GK1568312SQ01819171
公开日2005年1月19日 申请日期2001年11月15日 优先权日2000年11月21日
发明者L·梅尔佩尔, L·J·J·巴克斯 申请人:詹森药业有限公司