作为β－分泌酶抑制剂用于治疗阿尔茨海默氏病的次磷酸衍生物的制作方法

专利名称：作为β－分泌酶抑制剂用于治疗阿尔茨海默氏病的次磷酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及次磷酸衍生物、其制备方法、含有所述次磷酸衍生物的组合物以及它们在预防和治疗疾病中的应用。
更具体地讲，本发明涉及式I化合物及其药学上可接受的盐 其中R1为芳基或杂芳基；R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基。
芳基的示例包括未取代的苯基或被选自下列的取代基所取代的苯基OH、卤素、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基、吡咯烷酮基和C(O)NR5R6，其中R5为氢或(C1-C5)-烷基，且R6为未取代的(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基。
杂芳基的示例包括吲哚基、喹啉基、异喹啉基和吡啶基。杂芳基可以是未取代的或被(C1-C5)-烷基所取代。
在此所用术语“烷基”代表含有1-6个碳原子的饱和的直链或支链烷基基团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、2-丁基、叔丁基等。烷基可以是未取代的或者被选自下列的基团所取代苯基、COOH、COOCH3和S-(C1-C5)-烷基。
术语“环烷基”代表含有3-7个碳原子的饱和的碳环基团。示例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
卤素的实例包括氟、氯、碘和溴。
药学上可接受的盐可以，例如，采用碱金属盐或铵盐，它们可以通过，例如，用无机或有机碱(如碳酸氢钠或碳酸氢钾)、氢氧化钠或钾的水溶液或者与氨或胺的水溶液(如三甲基胺或三乙基胺)滴定所述化合物来进行制备。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R1为下式(a)的式I化合物 其中R7为氢、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8为OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5为氢或C1-C5)-烷基，且R6为(C1-C5)-烷基或被苯基所取代的(C1-C5)-烷基；且R9为氢或(C1-C5)-烷基。
在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R1为式(a)基团的式I化合物，上述式(a)中R7为氢或(C1-C5)-烷基；R8为-C(O)NR5R6，其中R5为氢或(C1-C5)-烷基，且R6为(C1-C5)-烷基或-CH2苯基；且R9为氢。
在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R1为式(a)基团的式I化合物，上述式(a)中R7为氢或(C1-C5)-烷基；R8为-C(O)NR5R6，其中R5和R6为(C1-C5)-烷基；且R9为氢。
在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R1为式(a)基团的式I化合物，上述式(a)中R7为氢或O-(C1-C4)-烷基；R8为OH或吡咯烷酮基；且R9为氢或(C1-C5)-烷基。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R1为杂芳基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R1为被(C1-C5)-烷基所取代的吲哚基或喹啉基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R1为1-丁基-吲哚-6-基或喹啉-2-基的式I化合物。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R2为苯基的式I化合物，该苯基可以是未取代的或被氟所取代。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R2为(C1-C5)-烷基的式I化合物，该烷基可以是未取代的或被S-(C1-C5)-烷基所取代。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R3为氢、(C1-C5)-烷基或苯基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R3为氢、(C1-C5)-烷基(可以是未取代的或被苯基、COOH或COOCH3取代)或苯基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R3为氢、甲基、乙基、异丙基、苯基、苄基、CH2COOH或CH2COOCH3的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R3为甲基的式I化合物。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R4为未取代的(C1-C6)-烷基、被选自下列取代基取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物，上述取代基选自卤素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-环烷基、未取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的异唑基。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R4为未取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R4为异丙基、异丁基、异戊基或异己基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R4为被一个或多个选自下列的取代基取代的(C1-C6)-烷基的式I化合物，所述取代基包括卤素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-环烷基、未取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的异唑基。在本发明的另一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R4为被苯基取代的甲基或被甲基取代的异唑基取代的甲基、被环己基、苯基或二甲基氨基取代的乙基、被苯基取代的丙基或被氟取代的丁基。
在本发明的一个实施方案中，提供了其中R4为环己基的式I化合物。
在本发明的一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R4为未取代的苯基或被下列取代基所取代的的苯基，上述取代基包括OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被卤素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基。
在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R4为苯基的式I化合物。在本发明的另一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R4为被下列取代基所取代的苯基，上述取代基包括OH、二甲基氨基、甲基、异丁基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基或COO甲基。
在本发明的一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R4为未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本发明的一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R1为式(a)基团，其中R7为氢、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8为OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5为氢或(C1-C5)-烷基，R6为(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基，且R9为氢或(C1-C5)-烷基；R2为未取代的或被氟取代的苯基或者为未取代的或被S-(C1-C5)-烷基取代的(C1-C5)-烷基；R3为氢、(C1-C5)-烷基或苯基；且R4为未取代的(C1-C6)-烷基、取代的(C1-C6)-烷基(被一个或多个下列取代基所取代卤素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-环烷基、未取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的异唑基)、环己基、未取代的苯基或取代的苯基(被下列基团所取代OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被卤素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基)、未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本发明的一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R1为式(a)基团，其中R7和R9为氢；且R8为-C(O)NR5R6，其中R5为氢或(C1-C5)-烷基，R6为(C1-C5)-烷基或被苯基取代的(C1-C5)-烷基；R2为苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基或苯基；且R4为未取代的(C1-C6)-烷基、取代的(C1-C6)-烷基(被一个或多个下列取代基所取代卤素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-环烷基、未取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的苯基和被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的异唑基)、环己基、未取代的苯基或取代的苯基(被下列基团所取代OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被卤素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基)、未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
在本发明的一个实施方案中，提供了式I化合物，其中R1为被(C1-C5)-烷基取代的吲哚基或喹啉基；R2为苯基；R3为(C1-C5)-烷基；且R4为苯基。
在本发明的一个实施方案中，提供了选自下列的式I化合物{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二戊基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-5-甲基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-对-甲苯基氨基甲酰基-乙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，-((S)-2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-异丁基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，(2-环己基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[2-(2-环己基-乙基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羟基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-吡啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸和(2-苄基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸。
本发明的另一个目的为所有形式的式I化合物的光学纯对映异构体或非对映异构体的混合物。
本发明的另一个实施方案提供了式I化合物的制备方法，该方法包括将式II化合物 其中R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；且R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基；与式III化合物反应R1-COR10(III)其中R1为芳基或杂芳基；且R10为卤素或OH；如果需要，将所得化合物转化为药学上可接受的盐。
反应可以在活化剂和添加剂存在下进行。活化剂的实例包括二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐。添加剂的实例包括1-羟基-苯并三唑。也可以有碱存在，例如，三烷基胺如三乙基胺。反应也可以在溶剂存在下进行，例如醚，如四氢呋喃。温度可以在20℃-60℃的范围内，或者在20℃-40℃范围内。
式IH化合物可以购自商业，或者根据普通技术人员所已知的方法制备，例如，根据公开于Taylor和Spooner，J.of Agricultural and FoodChemistry，381422-1427(1990)的方法制备N-甲基-N-丙基-间苯二甲氨酸、N，N-二丙基-间苯二甲氨酸、5-甲基-N，N-二丙基-间苯二甲氨酸、N-戊基-N-丙基-间苯二甲氨酸和N，N-二戊基-间苯二甲氨酸，根据公开于WO03/045,913的方法制备3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲酸，根据公开于WO 03/040,096的方法制备1-丁基-吲哚-6-甲酸。
式II化合物是新化合物，也是本发明的实施方案。它们可以根据下列方法制备在溶剂如CH2Cl2中，于20℃-100℃的温度下，或于20℃，将式IV化合物 其中R11为保护基团如Boc，R2、R3和R4如上所定义，与强无机酸如HI、HCl或HBr的水溶液反应，或者与如三氟乙酸反应，制备式II化合物。
式IV化合物是新化合物，也是本发明的实施方案。它们可以根据下列方法制备将式V化合物 其中R11和R2如上所定义，与式VI化合物反应制备 其中R3和R4如上所定义。
可以在六甲基二硅胺烷存在下、于20℃-150℃的温度范围内，或者于如110℃，使次磷酸即式V化合物与式VI的丙烯酰胺(Liu等，J.Organomet.Chem.646212(2002))进行Michael加成反应。
式VI化合物为已知的或者根据本领域已知的方法制备，例如，通过用甲醛和HN(Et)2(Liu等同上)处理式VII的丙二酸 ，然后将丙烯酸转化为丙烯酰胺制备。
式V化合物可以通过下列方法制备在溶剂CH2Cl2或MeOH中、于0℃-50℃的温度范围内(如22℃)，将式VIII化合物 与式R11-O-R11化合物(其中R11为保护基团如Boc)，例如与(Boc)2O(Sampson和Bartlett，Biochemistry 302255(1991))和碱例如烷基氨(如NEt3)反应，制备式V化合物。在溶剂混合物例如酮和醇(如甲基乙基酮和甲醇)中，用手性胺(Sampson和Bartlett，Biochemistry 302255(1991))如α-(+)-甲基-苄基胺拆分式V化合物可以得到相应的盐，它也可以自如上所述相同的溶剂混合物中重结晶。脱盐得到式V化合物的光学对映异构体纯(＞95％)的(R)-对映异构体。新的式V化合物，例如下面的V-2和V-5化合物，也是本发明的具体实施方案。
式VIII化合物可以如下制备于50℃-100℃的温度范围内(如，于100℃或105℃)，将式IX化合物 其中R12为二苯基甲基，与强无机酸例如HI、HC或HBr(如HBr水溶液)反应，制备式VIII化合物。新的式VIII化合物，例如下面的VIII-2和VIII-4化合物，也是本发明的实施方案。
式IX化合物可以如下制备在溶剂例如水或二氧六环(如水)中，于50℃-100℃(如100℃)的温度范围内，将式X化合物 与保护的胺(如二苯基甲基胺盐酸盐)和次磷酸(如50％次磷酸水溶液)(Baylis等，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.12845(1984))反应，制备式IX化合物。新的式IX化合物，如下面的IX-2和IX-4化合物，也是本发明的在本发明的另一个实施方案中，提供了式I化合物的制备方法，它包括将式XI化合物 其中R1为芳基或杂芳基；R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷氧基或苯基；与式XII化合物反应H2N-R4(XII)其中R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基，并且，如果需要，将所得化合物转化为药学上可接受的盐。
本反应可以在活化剂和添加剂存在下进行。活化剂的实例包括二环己基碳二亚胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。添加剂的实例包括1-羟基-苯并三唑。也可以有碱存在，例如，三烷基胺如三乙基胺。反应也可以在溶剂存在下进行，例如醚，如四氢呋喃。温度可以在20℃-60℃的范围内，或者在20℃-40℃范围内。
式XII化合物可以购自商业，或者根据普通技术人员所已知的方法制备，例如，根据Dijols等，Biochemistry 419286-9292(2002)的方法制备H2N(CH2)3CF3，根据Jacobs等，J.Med.Chem.371282(1994)，通过苯邻二甲酰亚胺方法自相应的溴化物制备H2N(CH2)2CF2CHF2，根据Bailey等，Can.J.of Chem.493143-51(1971)的方法制备苯乙基胺衍生物，根据WO03/072,535的方法制备异唑衍生物。
式XI化合物为新化合物，也是本发明的实施方案。它们可以通过水解式XIII化合物制备 其中R13为(C1-C4)-烷基，上述反应可以在碱如KOH、NaOH或LiOH存在下、在溶剂如甲醇或水或两者的混合物中、于温度0℃-60℃的范围如20℃时进行。
式XIII化合物为新化合物，也是本发明的实施方案。它们可以通过如下方法制备在活化剂如二环己基碳二亚胺或N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐和添加剂如1-羟基-苯并三唑以及碱如三烷基胺如N(Et)3存在下，在溶剂如醚(如四氢呋喃)中，于20℃-60℃的范围内(如自20℃-40℃)，将式XIV化合物 与式III化合物反应，制备式XIII化合物。
式XIV化合物是新化合物，也是本发明的实施方案。它们可以通过如下方法制备在溶剂如CH2Cl2中，于20℃-100℃的温度范围内(如20℃)，将式XV化合物 其中R11保护基团如Boc，与强无机酸如HI、HCl或HBr水溶液，或者与如三氟乙酸反应，制备式XIV化合物。
式XV化合物为新化合物，也是本发明实施方案。它们可以通过如下方法制备在例如六甲基二硅胺烷存在下，于20℃-150℃的温度范围内，如110℃时，将式V化合物与式XVI化合物反应(Michael加成，Liu等，同上) 实施例概要在系统名称中给出立体标记R和S(根据CIP-规则)。如果没有给出立体标记，那么表明得到的是异构体的混合物。使用下列简称Boc叔丁氧基羰基；TFA三氟乙酸。
实施例SI起始式V化合物的制备(a)式IX化合物的制备向36.3g的二苯基甲基胺盐酸盐的80ml水的悬浮液中加入180ml的50％H3PO2水溶液。将混合物加热至回流温度，并用200mmol的适当的式X化合物的30ml二氧六环溶液处理10分钟以上，继续搅拌10分钟。将悬浮液冷却至65℃，过滤，用水洗涤固体一次。湿的固体于0℃用180ml丙酮搅拌10分钟，过滤悬浮液，用冷的丙酮洗涤固体一次，干燥得到目标式IX化合物，收率50-70％。
编号式IX化合物MSIX-1[1-(二苯甲基-氨基)-3-甲基-丁基]-次磷酸316.3(M-H)-IX-2[1-(二苯甲基-氨基)-3-甲基硫烷基-丁基]-次磷酸 348.3(M-H)-IX-3[1-(二苯甲基-氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸350.3(M-H)-IX-41) [1-(二苯甲基-氨基)-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸386.2(M-H)-1)起始醛如下法制备将5.3g的3，5-二氟苯基乙酸的40ml甲醇和3ml的BF3·Et2O溶液于50℃温热1小时。将上述溶液蒸发，残留物在Et2O和NaHCO3水溶液之间分配，水洗涤有机层，干燥并蒸发。将剩余的甲基酯(5.6g)溶于240ml无水甲苯中，冷却至-78℃，并用45ml的1M二异丁基氢化铝的CH2Cl2处理，于-78℃继续搅拌1小时。用30ml的MeOH和100ml的50％酒石酸钠-钾水溶液使反应混合物淬灭，并用Et2O萃取。盐水洗涤有机层，干燥并蒸发得到4.5g的(3，5-二氟-苯基)-乙醛。
(b)式VIII化合物的制备将77.4mmol的适当的式IX化合物和210ml的48％HBr水溶液的悬浮液于105℃加热1小时。用Et2O洗涤上述混合物数次，将水溶液蒸发至干。将所得固体溶于465ml的乙醇中。用29ml的氧化丙烯处理上述溶液，将所得悬浮液于20℃搅拌过夜。过滤悬浮液，用冷的乙醇洗涤固体，干燥得到目标式VIII化合物，收率70-95％。
编号 式VIII化合物 MSVIII-1(1-氨基-3-甲基-丁基)-次磷酸150.1(M-H)-VIII-2(1-氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-次磷酸 184.1(M+H)+
VIII-3(1-氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸185.9(M+H)+VIII-4[1-氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸220.1(M-H)-(c)式V化合物的制备于20℃，向2.0mmol适当的式VIII化合物的10ml甲醇溶液中加入2.2mmol的(Boc)2O的2ml甲醇溶液，持续搅拌4小时。将混合物蒸发，残留物在AcOEt和KHSO4(10％)水溶液之间分配。盐水洗涤有机层，干燥并蒸发得到粗品目标式V化合物，收率80-90％。通过2mmol的式V化合物和2.2mmol的α-(+)-甲基苄基胺的40ml甲基乙基酮溶液结晶，然后再重结晶，将外消旋物拆分。所得盐在盐酸水溶液和AcOEt之间分配得到式V化合物的(R)-对映异构体，收率为30-40％，光学纯度为95％。
编号 式V化合物 MS/α[D]*V-1(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁基)-次磷酸250.1(M-H)-V-2(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-次磷酸 282.1(M-H)-V-3(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸284.4(M-H)-V-4((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸284.1(M-H)-α[D]-29.4°V-5[1-叔-丁氧基羰基氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-次磷酸320.4(M-H)-*.α[D](1％，EtOH)实施例S2式VI化合物的制备将28mmol适当的式VII化合物和2.9ml二乙基胺的混合物用11ml福尔马林处理，于回流温度下加热1-3小时。将溶液冷却至20℃，用CH2Cl2稀释，用NaHCO3洗涤。水层用稀盐酸酸化至pH＝1，用CH2Cl2萃取。将合并的有机层干燥并蒸发得到相应的粗品丙烯酸，收率为70-80％。向4.3mmol丙烯酸的7ml四氢呋喃溶液中依次加入560mg的对-甲苯胺、1.8ml的NEt3、950mg的1-羟基苯并三唑和1.28g的N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐，将上述悬浮液于20℃搅拌1-3小时。混合物在饱和的NH4Cl水溶液和AcOEt之间分配，用0.5N的NaOH水溶液洗涤有机层，干燥并蒸发。粗品产物经硅胶色谱层析，采用正庚烷/AcOEt洗脱，得到目标式VI化合物，收率为50-70％。
编号 式VI化合物MSVI-1 N-苯基甲丙烯酰胺VI-2 2-亚甲基-N-对-甲苯基-丁酰胺 190.3(M+H)+VI-3 3-甲基-2-亚甲基-N-对-甲苯基-丁酰胺204.1(M+H)+VI-4 2-苄基-N-对-甲苯基-丙烯酰胺 252.1(M+H)+VI-5 3-苯基氨基甲酰基-丁-3-烯酸甲酯219.7(M)+VI-6 N-(3-乙氧基-苯基)-丙烯酰胺VI-7 N-(3-三氟甲基-苯基)-丙烯酰胺VI-8 N-(5-甲基-吡啶-2-基)-丙烯酰胺VI-9 N-(4-叔-丁基-苯基)-丙烯酰胺VI-10 N-(4-二甲基氨基-苯基)-丙烯酰胺VI-11 N-(4-羟基-苯基)-丙烯酰胺VI-12 4-丙烯酰基氨基-苯甲酸甲酯VI-13 N-(3，4-二甲氧基-苯基)-丙烯酰胺VI-14 N-(3，5-二甲氧基-苯基)-丙烯酰胺VI-15 N-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-丙烯酰胺VI-16 N-(α-苯基乙基)-丙烯酰胺VI-17 N-(2-二甲基氨基-乙基)-丙烯酰胺实施例S3N，N-二丙基-间苯二甲氨酸氯化物的制备将1.30g的N，N-二丙基-间苯二甲氨酸和1.9ml的SOCl2的5ml苯的溶液加热至回流直到气体释放停止(30分钟)。将溶液蒸发，残留物与甲苯共蒸馏得到1.41g的N，N-二丙基-间苯二甲氨酸氯化物。
实施例S4式XI化合物的制备，即3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基}-2-甲基-丙酸的制备(a)3-[((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羟基-膦酰基]-2-甲基-丙酸甲酯的制备将5.00g的((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-次磷酸和18.3ml的HN(TMS)2的混合物加热至110℃1小时。向溶液中加入2.5ml甲基丙烯酸甲酯，于110℃继续加热2小时。将上述溶液冷却至70℃，用10ml的EtOH缓慢稀释，并蒸发。残留物经硅胶色谱纯化，采用CH2Cl2/MeOH(9∶1)→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.3)梯度洗脱，得到4.10的目标化合物。MS386.5(M+H)+。
(b)3-[((R)-1-氨基-2-苯基-乙基)-羟基-膦酰基]-2-甲基-丙酸甲酯，三氟乙酸盐的制备将1.75g的3-[((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羟基-膦酰基]-2-甲基-丙酸甲酯和3.40ml的CF3COOH的20ml的CH2Cl2溶液于20℃搅拌16小时，蒸发得到2.23g的粗品目标化合物。
(c)3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基}-2-甲基-丙酸甲酯的制备于0℃，向2.23g粗品胺TFA盐(式XIV化合物)的15ml的二氧六环溶液中，依次加入1.9ml的NEt3和1.47g的N，N-二丙基-间苯二甲氨酸氯化物的2ml二氧六环溶液，并于20℃继续搅拌3小时。将混合物在AcOEt和盐水之间分配，用盐酸将pH调节至2。盐水洗涤有机层，干燥并蒸发。残留物经硅胶色谱纯化，采用CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.5)梯度洗脱，得到2.15目标化合物。MS515.3(M-H)-。
(d)3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基}-2-甲基-丙酸的制备将2.11g的3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基}-2-甲基-丙酸甲酯的8ml甲醇溶液用865mg的LiOH·H2O的2ml水溶液处理，所得浑浊溶液于20℃搅拌1.5小时。将混合物蒸发，残留物在HCl水溶液(pH＝2)和AcOEt之间分配。盐水洗涤有机层，干燥并蒸发，得到1.54g目标化合物。MS501.4(M-H)-。
实施例1自式II和式III化合物起始制备式I化合物(a)将0.4mmol的适当的式V化合物和0.6ml的HN(TMS)2混合物于110℃加热1小时。向上述溶液中加入0.6mmol的适当的式VI化合物，并继续于110℃加热1-4小时。将上述溶液冷却至20℃，用1ml的EtOH稀释并蒸发。残留物经硅胶色谱纯化，采用CH2Cl2/MeOH(9∶1)→CH2Cl2/MeOH/AcOH(10∶1∶0.5)梯度洗脱，得到目标式IV化合物，收率为30-70％。
编号式 IV化合物 MSIV-1(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基-丁基)-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷411.5(M-H)-酸IV-2(1-叔-丁氧基羰基氨基-3-甲基硫烷基-丁基)-(2-苯基氨基甲酰基-丙 443.4(M-H)-基)-次磷酸IV-3(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)- 459.1(M-H)-次磷酸IV-4((R)-1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙 459.1(M-H)-基)-次磷酸IV-5(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丁基)- 475.3次磷酸(M+H)+IV-6(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(3-甲基-2-对-甲苯基氨基甲酰基 489.1-丁基)-次磷酸 (M+H)+IV-71)(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-苯基-2-对-甲苯基氨基甲酰基 522.3(M)+-乙基)-次磷酸IV-8(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(3-苯基-2-对-甲苯基氨基甲酰基 537.4-丙基)-次磷酸 (M+H)+IV-93-[(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羟基-膦酰基甲基]-N-苯基-琥 505.3珀酸甲酯 (M+H)+IV-10 [1-叔-丁氧基羰基氨基-2-(3，5-二氟-苯基)-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基- 481.8(M-H)-丙基)-次磷酸1)通过相反顺序的反应制备化合物IV-7，即将相应的式V化合物与2-苯基丙烯酸反应得到3-[(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-羟基-膦酰基]-2-苯基-丙酸(MS432.4(M-H)-)，再与p-甲苯胺反应得到(1-叔-丁氧基羰基氨基-2-苯基-乙基)-(2-苯基-2-对-甲苯基氨基甲酰基-乙基)-次磷酸。
(b)将0.20mmol的适当的式IV化合物和0.23ml的CF3COOH的2.0ml CH2Cl2溶液于20℃搅拌1.5小时，并蒸发。所得粗品式II化合物(TFA盐)溶于1ml四氢呋喃，随后依次用0.22mmol适当的式III化合物、0.70mmol的NEt3、0.24mmol的1-羟基苯并三唑和0.26mmol的N-(3-二甲基-氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐处理，将上述悬浮液于20℃搅拌1.5小时。将混合物在饱和的NH4Cl水溶液和AcOEt之间分配，盐水洗涤有机层，干燥并蒸发。粗品产物经HPLC(RP-18柱)纯化，采用CH3CN∶H2O(20∶80)→CH3CN∶H2O(95∶5)梯度洗脱，得到目标式I化合物，收率为30-40％。
根据上述实施例制备下列化合物编号 式I化合物 MSI-1{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2- 550.3(M+H)+苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-2{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2- 578.3(M+H)+苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-3[(R)-1-(3-二戊基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基 634.3(M+H)+氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-4[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-5-甲基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙 592.0(M+H)+基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-5{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙 592.0(M+H)+基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-6{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基546.2(M+H)+甲酰基-丙基)-次磷酸I-7(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-{(R)-2-苯基-1-[(喹啉-2-羰基)-氨基]-乙 502.0(M+H)+基}-次磷酸I-8[(R)-1-(3-羟基-2-甲基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲481.0(M+H)+酰基-丙基)-次磷酸I-9[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-3-甲基-丁基]-(2-苯基氨基 542.5(M-H)-甲酰基-丙基)-次磷酸I-10 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-3-甲基硫烷基-丁基]-(2-苯 574.8(M-H)-基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-11 [2-(3，5-二氟-苯基)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-乙612.5(M-H)-基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-12 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯 578.4(M+H)+基氨基甲酰基-乙基)-次磷酸I-13 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯 606.1(M+H)+基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸I-14 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-对620.2(M+H)+-甲苯基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸I-15 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-对652.5(M-H)--甲苯基氨基甲酰基-乙基)-次磷酸I-16 [1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-苯基-2-对668.2(M+H)+-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-17 3-{[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦 636.1(M+H)+
酰基甲基}-N-苯基-琥珀酸甲酯实施例2自式XI和式XII化合物起始制备式I化合物将粗品3-{[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基}-2-甲基-丙酸(0.10mmol)溶于0.7ml的四氢呋喃中，随后依次用0.16mmol的适当的式XII化合物、0.40mmol的NEt3、0.16mmol的1-羟基苯并三唑和0.26mmol的N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐处理，将悬浮液于45℃搅拌3小时。上述混合物在饱和的NH4Cl水溶液和AcOEt之间分配，有机层用盐水洗涤，干燥并蒸发。粗品产物经HPLC(RP-18柱)纯化，采用CH3CN∶H2O(20∶80)→CH3CN∶H2O(95∶5)梯度洗脱，得到目标式I化合物，收率为10-60％，为异构体混合物。通过薄层色谱，采用CH2Cl2/MeOH/AcOH 9∶1∶0.25展开，进行异构体混合物的分离。较低位置的薄层点代表1(R)，2(S)-立体异构体。
根据上述实施例的方法制备下列化合物编号式I化合物MSI-18[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基576.6(M-H)-氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-19[(R)-I-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-576.6(M-H)-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-20[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对- 592.2(M-H)-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-21[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-590.8(M-H)-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-22[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-590.5(M-H)-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-23[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-乙氧 608.2(M+H)+基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-24[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-三氟 632.3(M+H)+甲基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-25[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-579.2(M+H)+吡啶-2-基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-26[2-(4-叔-丁基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯618.6(M-H)-甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸
I-27[2-(4-二甲基氨基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲酰基607.2(M+H)+-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-28[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羟基-580.2(M+H)+苯基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-294-(3-{[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-622.3(M+H)+膦酰基}-丙酰基氨基)-苯甲酸甲酯I-30[2-(3，4-二甲氧基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲酰基 624.2(M+H)+-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-31[2-(3，5-二甲氧基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲酰基 622.8(M-H)--苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-32[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，4，5-三 654.2(M+H)+甲氧基-苯基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-33[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(1(S)-苯590.4(M-H)-基-乙基氨基甲酰基)-乙基]-次磷酸I-34[2-(2-二甲基氨基-乙基氨基甲酰基)-乙基]-[1-(3-二丙基氨基甲酰基559.2(M+H)+-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-35[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-异丙542.5(M-H)-基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-36[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-异丁556.5(M-H)-基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-37[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲 570.5(M-H)-基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-38[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰 584.5(M-H)-基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-39[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙 610.4(M-H)-基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-40[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙 628.5(M-H)-基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-41[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙 682.2(M-H)-基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-42(2-环己基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰 582.5(M-H)-基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-43[2-(2-环己基-乙基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基610.4(M-H)--苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-44[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羟 592.5(M-H)-基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸
I-45[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲606.5(M-H)-氧基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-46[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡 577.6(M-H)-啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-47[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲591.5(M-H)-基-吡啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-48(2-苄基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基 590.5(M-H)-氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-49{2-[(3，5-二甲基-异唑-4-基甲基)-氨基甲酰基]-丙基}-[(R)-1-(3-609.5(M-H)-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸I-50[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯乙 604.7(M-H)-基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸I-51[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(1-甲618.6(M-H)-基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸I-52{2-[2-(2，4-二甲基-苯基)-1-甲基-乙基氨基甲酰基]-丙基}-[(R)-1-(3- 646.5(M-H)-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸给出例如，两个化合物，即化合物I-18和I-37的NMR数据[1H-NMR(300MHz，内标为TMS，J值单位为Hz，CD3OD)]化合物I-187.77(m，1H)，7.67-7.47(m，5H)，7.40-7.07(m，8H)，4.80(m，1H)，3.60-2.95(m，7H)，2.55-2.27(m，1H)，2.05-1.80(m，1H)，1.80-1.45(m，4H)，1.42和1.39(均为d，每一个J＝6，比例3∶2，共3H)，1.04(m，3H)，0.70(m，3H)。
化合物I-377.74(m，1H)，7.60(s，1H)，7.50(m，2H)，7.30-7.10(m，5H)，4.72(m，1H)，3.50-2.75(m，9H)，2.35-2.10(m 1H)，1.90-1.30(m 8H)，1.26and 1.24(均为d，每一个J＝6，比例为3∶2，共3H)，1.00(m，3H)，0.91 and0.89(均为d，每一个J＝6，比例为2∶3共6H)，0.70(m，3H)。
实施例3自另一个式I化合物起始制备式I化合物将14mg的3-{[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基甲基}-N-苯基-琥珀酸甲酯(化合物I-17)的1ml甲醇和3mg的NaOH的溶液温热至45℃3小时。将溶液蒸发，残留物在1N盐酸水溶液和CH2Cl2之间分配，有机层用水洗涤，干燥并蒸发得到11mg的3-{[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟基-膦酰基甲基}-N-苯基-琥珀酸(化合物I-53)。
编号式I化合物 MSI-533-{[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-羟620.3(M-H)-基-膦酰基甲基}-N-苯基-琥珀酸本发明化合物及其药学上适当的盐(以下称药用化合物)具有药理学活性，因而可以用作药品。更具体地讲，药用化合物具有β-分泌酶抑制活性。
A-β产生的抑制剂的细胞筛选方法、A-β产生的体内抑制实验方法、用于测定分泌酶活性的膜或细胞提取物的分析方法都是本领域中已知的，且已经公开在许多出版物中，包括WO 98/22493、US 5,703,129、US 5,593,846和GB 2,395,124，所有这些文献的全部内容都被引入本文作为参考。β-分泌酶在几种出版物中已经被描述，包括EP 855,444、WO 00/17,369、WO00/58,479、WO 00/47,618、WO 01/00,663和WO 01/00,665。
例如，药用化合物对β-分泌酶的抑制可以通过它们例如抑制荧光肽底物的裂解(例如，在如Grueninger-Leitch等所述的FRET分析中)，或者通过它们例如对β-分泌酶活性结合位点的肽β-分泌酶抑制剂的置换加以证明，如，根据下面的实验方法加以证明。
竞争性放射配体结合分析(RLBA)用纯化的BACE蛋白质(参见，如GB 2,385,124实施例1和2)将96孔微板(Optiplate Packard)包被，用pH 5.5的30mM柠檬酸钠缓冲液将浓度调节至为1μg/ml。通过于4℃时、于100μl/孔下温育1-3天进行包被。然后用pH为4.1的10mM柠檬酸盐以300μl/孔洗涤微板两次。向每一个孔中加入100μl结合缓冲液(30mM柠檬酸盐，100mM NaCl，0.1％BSA，pH 4.1)。加入5μl实验化合物的DMSO储备溶液或适当稀释的溶液。向其中以10μl/孔加入示踪物(氚标记的化合物A，参见GB 2,385,124实施例4)在结合缓冲液中的10μCi/ml储备溶液。在湿润箱中、于室温下温育1.5-2小时后，用水以300μl/孔洗涤微板2次，用干毛巾拍干。然后以50μl/孔加入MicroScint20(Packard)，密封微板并振摇5秒钟。在Topcount(Packard)上计数结合的放射活性。主要取决于BACE蛋白质的纯度和浓度，总结合一般在2000-10000cpm/孔之间。通过与＞1μM肽抑制剂(Bachem#H-4848)竞争测定的非特异性结合一般在30-300cpm/孔之间。IC50值通过Microsoft Excel FIT进行计算。
优选的化合物的IC50＜1.0μM。下面表中给出了β-分泌酶抑制的某些示例性数据。
因此，药用化合物可以用作β-分泌酶抑制剂，如，用于治疗其中β-分泌酶活性起作用或参与的疾病。此类疾病包括特别是阿尔茨海默氏病和脑淀粉样血管病。
β-分泌酶抑制剂可以进一步从活性上进行优化以抑制本领域众所周知的细胞培养体系中A-β分泌。例如，A-β产生可以通过在细胞培养物上清液中的HEK293细胞的免疫分析进行测定，该细胞能够通过转染淀粉样前体蛋白(APP)过度表达。A-β产生也可以在人类成神经细胞瘤细胞系上清液中测定，所述细胞系可以表达内源性APP。另外，β-分泌酶抑制剂可以在阿尔茨海默氏病转基因鼠模型中进行效能优化，所述模型在受影响的小鼠的CNS中产生含有阿尔茨海默氏样斑块的A-β。最终，β-分泌酶抑制剂有希望降低患有阿尔茨海默氏病的患者脑中和脑脊液中的A-β浓度，也可以降低还没有形成A-β斑块的健康人群的A-β浓度。
生物化学和免疫学研究揭示在患有阿尔茨海默氏病的个体的脑皮质中出现的淀粉样斑块的主要蛋白类成分是大约39-43个氨基酸的约为4.2千道尔顿(kD)的蛋白质。该蛋白质被称为A-β淀粉样肽，有时为β/A4，在此是指A-β。A-β除了在淀粉样斑块上沉积外，在脑膜和实质小动脉壁、小动脉、毛细血管和有时在小静脉上也发现有A-β。因为有强烈迹象表明A-β与AD是有因果关系的，所以希望通过抑制A-β在体内的形成来预防和减轻神经性变性，该目的可通过控制淀粉样斑块的形成、减轻神经中毒性和通常是调解与A-β产生有关的病理学来达到。
A-β似乎是一种源自1型膜内在蛋白(术语为β淀粉样前体蛋白(APP))的内源性多肽。APP正常是由多种细胞产生的，这些细胞可以是体内也可以是培养的细胞，源自各种动物和人类。A-β源自酶(蛋白酶)系统对APP的裂解(产生A-β的N-末端)，所述酶系统统称为分泌酶，包括β-分泌酶。
在另一个实施方案中，本发明提供了式I化合物及其药学上可接受的盐的用途，用于生产治疗与β-分泌酶抑制有关的疾病的药物。本发明的另一个实施方案提供了式I化合物及其药学上可接受的盐的用途，用于生产预防或治疗阿尔茨海默氏病的药物。
药用化合物可用作药物，例如，以药物制剂的形式。药物制剂可以口服给药，例如以下列形式给药片剂、包衣片剂、糖丸、硬和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或混悬液。然而，给药也可以通过直肠进行，例如，以栓剂形式，或者通过胃肠外进行，例如，以注射液的形式。
可以将药用化合物与药学上惰性、无机或有机载体一起加工处理来生产药物制剂。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐等可以用作例如片剂、包衣片剂、糖丸和硬明胶胶囊的载体。软明胶胶囊的适当的载体为例如植物油、石蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。根据活性物质的性质，在软明胶胶囊中，通常可以不加入载体。用于生产溶液剂和糖浆剂的适当的载体为例如水、多元醇、植物油等。用于生产栓剂的适当的载体为例如天然或硬化油、石蜡、脂肪、半固体或液体多元醇等。
此外，药物制剂也可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、香料、调整渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧剂。它们也可以含有其它有治疗价值的物质。
含有药用化合物和治疗上惰性的载体的药物也是本发明的目标，还包括它们的生产方法，上述方法包括将药用化合物和(如果需要)一种或多种其它有治疗价值的物质与一种或多种治疗上惰性的载体一起制成给药形式。
剂量可以在较宽的限度内变化，当然，对每一个具体患者而言，应根据个体需要进行调节。在口服给药的情况下，药用化合物的成人剂量范围在每天约0.01mg到约1000mg。日剂量可以以单剂量给药或分剂量给药，另外，如果确有需要，也可以突破上限。
片剂配方(湿法制粒)
将1、2、3和4项混和并用纯水制粒。于50℃干燥颗粒。将颗粒经过适当的粉碎设备。加入第5项并混和三分钟，在适当的压片机上压制成片剂。
胶囊配方
将1、2、和3项在适当的搅拌机中混和30分钟。加入4和5项并混和3分钟。填充到适当的胶囊中。
权利要求
1.式I化合物及其药学上可接受的盐 其中R1为芳基或杂芳基；R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基。
2.权利要求1的式I化合物，其中R1为式(a)基团 其中R7为氢、(C1-C5)-烷基或O-(C1-C4)-烷基；R8为OH、吡咯烷酮基或-C(O)NR5R6，其中R5为氢或(C1-C5)-烷基，R6为(C1-C5)-烷基或苯基取代的(C1-C5)-烷基，且R9为氢或(C1-C5)-烷基；或者R1为(C1-C5)-烷基取代的吲哚基或喹啉基。
3.权利要求1的式I化合物，其中R2为未取代的苯基或被氟取代的苯基。
4.权利要求1的式I化合物，其中R3为氢、(C1-C5)-烷基或苯基。
5.权利要求1的式I化合物，其中R4为未取代的(C1-C6)-烷基；被一个或多个选自下列的取代基所取代的(C1-C6)-烷基卤素、N[(C1-C6)-烷基]2、(C3-C6)-环烷基、未取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的苯基、被一个或多个(C1-C5)-烷基取代的异唑基；环己基；或未取代的苯基或被OH、N[(C1-C6)-烷基]2、未取代的(C1-C6)-烷基、被卤素取代的(C1-C6)-烷基、O-(C1-C4)-烷基或COO(C1-C5)-烷基所取代的苯基；或未取代的吡啶基或被甲基取代的吡啶基。
6.权利要求1的式I化合物，选自{(R)-1-[3-(甲基-丙基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(甲基-戊基-氨基甲酰基)-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二戊基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-5-甲基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-5-丙氧基-苯甲酰基氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，{(R)-1-[(1-丁基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-2-苯基-乙基}-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(3-甲基-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丁基)-次磷酸，[1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基-2-对-甲苯基氨基甲酰基-乙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((S)-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-((R)-2-对-甲苯基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-(2-异丁基氨基甲酰基-丙基)-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[2-(3，3-二甲基-丁基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4，4，4-三氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(3，3，4，4-四氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(2，2，3，3，4，4，4-七氟-丁基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，(2-环己基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[2-(2-环己基-乙基氨基甲酰基)-丙基]-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-羟基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(4-甲氧基-苯基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸，[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-[2-(5-甲基-吡啶-2-基氨基甲酰基)-丙基]-次磷酸和(2-苄基氨基甲酰基-丙基)-[(R)-1-(3-二丙基氨基甲酰基-苯甲酰基氨基)-2-苯基-乙基]-次磷酸。
7.制备权利要求1的式I化合物的方法，该方法包括将式II化合物 其中R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷基或苯基；且R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基；与式III化合物反应R1-COR10(III)其中R1为芳基或杂芳基；且R10为卤素或OH；并且，如果需要，将所得化合物转化为药学上可接受的盐；或者将式XI化合物 其中R1为芳基或杂芳基；R2为(C1-C5)-烷基或苯基；R3为氢、(C1-C5)-烷基、O-(C1-C5)-烷氧基或苯基；与式XII化合物反应H2N-R4(XII)其中R4为(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、吡啶基或吲哚基，并且，如果需要，将所得化合物转化为药学上可接受的盐。
8.权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐，是根据权利要求7的方法制备的。
9.权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗与β-分泌酶抑制有关的疾病的药物中的用途。
10.药用组合物，该药用组合物含有权利要求1的式I化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅形剂。
11.权利要求10的药用组合物，用于治疗阿尔茨海默氏病。
12.以上所描述的本发明。
全文摘要
本发明涉及式(I)的次磷酸衍生物或其药学上可接受的盐，在式(I)中，R
文档编号C07F9/60GK1878781SQ200480033230
公开日2006年12月13日 申请日期2004年11月2日 优先权日2003年11月11日
发明者H·海尔伯特, R·胡姆, D·克诺普, P·维斯 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司