试剂盒还包含转移增强试 剂，如表面活性剂、环糊精、多元醇、单糖、多糖、有机溶剂、聚集修饰蛋白、无序的肽序列、氨 基酸、氧化还原剂、冻干保护剂、低温保护剂或离液剂。
[0024] 通过以下说明书，不难了解其它目的、实施方式、特征和优点。
[0025] 所选实施方式的详细描述
[0026] 对于水基结合试剂（如抗体、核酸探针和许多其他类型的试剂），该多孔片材可 以是亲水性吸附材料的片材，该亲水性吸附材料是例如常规的实验室印迹纸或滤纸或任何 亲水形式的纤维素、聚酯或纤维素-聚酯掺混物。纤维素纸的一个示例是Whatman层析纸 (美国新泽西州皮斯卡特维的GE医疗保健公司（GE Healthcare))。适用于片材的聚酯的 示例是以下述商标售卖的那些：VWR SPEC-WIPE? (英国莱斯特郡的VWR国际公司（VWR International)); ANTICON?.和 ANTICON?MILLISEAL? (美国佐治亚州拉格 朗日的米尔肯公司（Milliken&Company)) ;VECTRA? ALPHA?、ALPHAWIPE?、 ALPHASORB?、ALPHA10?和MIRACLl·: WIPE? (美国新泽西州马瓦的ITW台维公 司（ITW-Texwipe Company));以及ULTRASEAL?和VALUSEAL?(美国马萨诸塞州大巴灵 顿的伯克希尔公司（Berkshire Corporation))。适用的聚醋-纤维素掺混物的示例是以下 述商标售卖的那些：DURX?和MICROFIRST? (美国马萨诸塞州大巴灵顿的伯克希尔 公司）；C1擦拭器和PROZORB? (?国南卡罗来纳州斯巴达堡市康泰克公司（Contec)); 以及TECHNI-CLOTH? (美国新泽西州马瓦的ITW台维公司）。
[0027] 用于形成蜡阻隔的蜡可以是在温度升高时可流动且在室温（20-25? )下不可流 动的任何蜡。示例是石蜡、微结晶蜡、热固性蜡、动物蜡（如蜂蜡、羊毛脂和牛油）、植物蜡 (如大豆蜡、巴西棕榈蜡、坎台里蜡和棕榈蜡）、矿物蜡（如纯地蜡和褐煤蜡）、石油蜡和合 成赌（如稀键式聚合物、氯化萘和费-托赌（Fischer-Tropsch wax))。除正链烧径和异链 烷烃外，石蜡组合物还可含有少量的环烷烃或烯烃或上述两者。可使用的蜡在约60°C至约 150°C (或一些情况下约75°C至约125°C)的温度范围内变得可流动（即具有熔点）。表现 出这种方式的蜡制剂和组合物是本领域技术人员已知的。
[0028] 用于形成疏水性阻隔的硅烷化试剂可以是与亲水性转移片材反应的任何硅烷化 试剂。例如，如果亲水性转移片材含有纤维素，可使用硅烷化纤维素骨架的羟基的硅烷化试 剂。示例性硅烷化试剂包括但不限于三甲基氯硅烷、三甲基硅烷、六甲基二硅胺烷。硅烷化 试剂还包括三乙氧基硅烷（R-Si (C2H5O) 3)，其中R是例如乙烯基、甲基丙烯基、氨基丙基、氟 烷基或硫代乙基。其它合适的硅烷化试剂对于本领域技术人员是显而易见的。
[0029] 蜡或其他限定试剂（如硅化物试剂或不可透过阻隔）可施涂于多孔片材的一侧或 两侧，但大多数情况下在一侧施涂即已足够。该限定试剂可作为液体施涂。该液体可通过 手或其他设备施涂。在一些情况下，将该液体喷涂或倒在转移片材上。喷涂可使用喷墨打 印机或类似设备实现。在一些情况下，该液体在施涂后硬化以形成不可透过和/或疏水性 阻隔。或者，该限定试剂可作为气体施涂。例如，硅烷化试剂、蜡、塑料、树脂或聚合物可作 为气体施涂，其在转移片材上浓缩或与转移片材发生反应。或者，该限定试剂可作为固体施 涂。例如，蜡可如本文所述作为固体施涂。在一些情况下，覆盖转移片材以保护各区域不暴 露于限定试剂，且该限定试剂与转移片材接触。
[0030] 蜡的施涂可通过手（使用常规的蜡笔（crayon)或蜡钢笔（wax pen))或通过蜡 印刷机（wax printer)实现。蜡钢笔是本领域已知的且通常包括具有含有热蜡的容器、喷 嘴和把手的外壳。可通过倾斜外壳使液化的蜡通过喷嘴来施涂热蜡，且该外壳配备有阀门 以在打印线的末端停止蜡的流动。蜡印刷机同样是本领域已知的且通常通过使用印刷头 的热转移印刷来运行，该印刷头包括非常小的加热元件阵列，其受软件控制独立激活以对 蜡进行局部加热至高于其熔点，从而将蜡释放至印刷介质。市售可得的蜡印刷机的示例包 括 Phaser8560DN(日本的富士施乐有限公司（Fuji Xerox，Ltd·))和 CALC0MPC0L0RMASTER PLUS热蜡转移印刷机（美国加利福尼亚州福特希尔兰奇的数控绘图有限公司（CalComp Graphics, LLC))。赌印刷机及其用途的描述可参见Kroon(泰克公司（Tektronix, Inc.))的 美国专利号5, 957, 593 (1999年9月28日）；Lin(施乐公司（Xerox Corporation))的美国 专利号 8, 206,664(2012 年6 月 26 日）；Lu,Y·,等，"Rapid prototyping of paper-based microfluidics with wax for low-cost, portable bioassay (用于低成本便携式生物试 验的使用蜡的纸基微流体快速原型制作）"Electrophoresis 2009, 30, 1497-1500 ;以及 Carrilho, E.,等，"Understanding Wax Printing:A Simple Micropatterning Process for Paper-Based Microfluidics(理解赌印刷机：用于纸基微流体的简单微成像过 程）"Anal. Chem. ,2009, 81 (16)，7091-7095。施涂的蜡线宽度（加热前）可变化并且在本 发明中不重要，前提是该线中蜡的含量足以透过多孔片材并对片材内水性流体的侧向流动 形成阻隔。
[0031] 一旦施涂，即可通过将蜡加热至其熔点以上来使蜡透过多孔片材的厚度以填充各 孔并对水性流体流动形成侧向阻隔。施涂的蜡的含量应完全透过片材的厚度，并且蜡熔化 时熔化的蜡的侧向流动（即与片材的平坦表面平行的方向）是最小的或至少限于沿所施涂 蜡线长度基本均匀的较小距离，使得形成的以蜡阻隔为边界的区域是已知且受控制的。还 可通过加热程度（包括对蜡加热的温度和加热持续的时间长度）控制该方式的阻隔形成。 通过常规反复试验可容易地确定最佳温度和持续时间，但在大多数情况下可通过加热至高 于蜡熔点至少5摄氏度（且在许多情况下高于蜡熔点约5至约50摄氏度或高于蜡熔点约 10至约30摄氏度）来获得有用的结果。最适当的加热时间取决于温度，温度越高所需时间 越短。通常，约15秒至约20分钟（或在许多情况下为约30秒至约10分钟）的加热时间 可提供有用的结果。加热可通过常规方式实现，包括辐射加热、传导加热、对流加热和微波 加热。可使用诸如加热板或常规烘箱这么简单的设备实现有效的结果。
[0032] 疏水性或不可透过阻隔的最佳宽度可根据以阻隔为边界的区域大小以及片材的 厚度变化，且可容易地通过常规测试确定。在大多数情况下，该宽度的范围是约30微米至 约3_，约100微米至约1_，或约200微米至约5_，或10_。
[0033] 该阻隔可沿片材的外周形成，此时由阻隔限定的片材的区域是除沿片材边缘的细 条外片材的整个长度和宽度（或对于圆形片材而言的直径）。例如，该类型的片材可形成为 印迹膜表面上并排排列的一系列单个细条。可通过试剂供应商制备使用不同检测试剂或不 同稀释度的检测试剂预先加载的细条，并由用户对其进行选择和组合以符合实验或分析的 特定需求。或者，可在单个片材中形成多个区域（以平行泳道或点阵列的形式），通过疏水 性阻隔使各区域彼此分离。各区域可由供应商预先加载为标准阵列或由用户在使用时加载 以对各区域进行调节以符合用户的个人需求。
[0034] 因此，可以多种方法获得和使用本文所述图案化和携带试剂的多孔片材。这些方 法包括购买具有预先形成的阻隔并使用来自供应商的检测试剂预先加载的多孔片材，以及 购买具有预先形成的阻隔并随后在使用时使用检测试剂浸渍有边界区域的多孔片材，以及 购买不具有阻隔或检测试剂而是允许用户在使用时形成阻隔并加入试剂的多孔片材。在一 些实施方式中，预先加载的片材可由用户选择并与洗脱剂接触以提供单剂量的结合试剂。
[0035] 多孔片材可以含有一片或多片（例如至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、20、25、30、40、50、60、75、100或更多片）的试剂盒的形式提供或购买。该试剂盒还可含 有一种或多种结合试剂（例如在独立的容器内或浸渍至一个或多个片材）。在一些实施方 式中，其中储存有结合试剂的片材可在室温（例如至少8、10、12、14、16、18、20、22、24、25、 27、28 或 30°C )下储存至少约 1、2、3、4、5、6、7天或1、2、3、4、5、6、7周或1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12月或更久。该片材可各自含有一个或多个本文所述侧向限定区域。
[0036] 该试剂盒可含有一个或多个片材，其宽度基本相当于电印迹中1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15或更多条泳道的宽度。或者或另外，该试剂盒可含有一个或多个具 有侧向限定区域的片材，所述侧向限定区域的宽度基本相当于电印迹中1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15或更多条泳道的宽度。在一些情况下，该试剂盒可含有一个或多个 片材，其与一个或多个点、孔或阵列位置的形状和/或大小基本相当。在其他情况下，该试 剂盒可含有一个或多个具有侧向限定区域的片材，所述侧向限定区域与一个或多个点、孔 或阵列位置的形状和/或大小基本相当。例如，该试剂盒可含有一个或多个具有6、12、24、 48、96、384或1536个侧向限定区域的片材，用于将一种或多种结合试剂递送至微量滴定板 的6、12、24、48、96、384或1536个孔中的一个或多个。
[0037] 此外，用户可将设计递交给供应商以进行片材的定制生产。定制的片材可含有特 定的阻隔模式。或者或另外，定制的片材可含有用户特定的结合试剂。该结合试剂可对用 户特定的目标（如目标蛋白或对照蛋白（例如肌动