的合成
[0035] 化合物VI-I (0. 90g, 3mmol)和丙稀酸异丙酯（I. 14g, IOmmol)溶于IOmL干燥的 DMF中，搅拌，加入固体CuCl2 (0. 40g，3mmol)，而后在氮气气氛下升温回流，直到反应完成为 止（通常12小时）。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取， 合并萃取相，依次用0. 5%稀盐酸、0. 5% EDTA溶液和盐水（IOOmLX 3)洗涤，无水硫酸钠干 燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物VII-1，白色固体。ESI-MS，m/ z = 414([M+H]+) 〇
[0036] 步骤5.化合物I-I的合成
[0037] 化合物 VII-1 (0? 83g, 2mmol)和轻乙基哌嗪 VIII-1 (I. 30g, 10mmol)溶于 10mT,二 甲苯中，在氮气气氛中升温回流，直到反应完成（通常6小时）。反应混合物小心倾倒入 200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃取相，用盐水（IOOmLX 5)洗涤，无水硫酸 钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物1-1，白色固体。ESI-MS，m/ z = 484 ([M+H]+) 〇
[0038] 实施例2化合物1-2的合成
[0040] 步骤1.化合物III-I的合成
[0041] 化合物11-1(2. llg，IOmmol)溶于20mL甲酰胺中，在氮气气氛中回流过夜，TLC显 示反应完成。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃 取相，用盐水（IOOmLX 3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸 干，得到化合物 111-1，白色固体。ESI-MS，m/z = 207([M+H]+)。
[0042] 步骤2.化合物IV-I的合成
[0043] 化合物III-I (1. 44g，7mmo 1)溶于20mL重蒸的POCl3中，而后升温回流5小时，TLC 显示反应完成。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃 取相，依次用饱和NaHCO3溶液和用盐水（IOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥 剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物IV-1，白色固体。ESI-MS，m/z = 225([M+H]+)。
[0044] 步骤3.化合物VI-2的合成
[0045] 化合物 IV-I (0. 90g，4mmol)、化合物 V-2 (0. 50g，4mmol)和二异丙基乙基胺 (DIPEA，I. 29g，IOmmol)溶于15mL甲苯中，在氮气气氛下升温回流，直到反应完成（约5小 时）。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃取相，依 次用1 %稀盐酸和盐水（IOOmLX3)洗涤，无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸 发仪上蒸干，得到化合物VI-2,黄白色固体。ESI-MS，m/z = 314([M+H]+)。
[0046] 步骤4.化合物VII-2的合成
[0047] 化合物VI-2 (0. 94g, 3mmol)和丙稀酸异丙酯（I. 14g, IOmmol)溶于IOmL干燥的 DMF中，搅拌，加入固体CuCl2 (0. 40g，3mmol)，而后在氮气气氛下升温回流，直到反应完成为 止（通常12小时）。反应混合物小心倾倒入200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取， 合并萃取相，依次用0. 5%稀盐酸、0. 5% EDTA溶液和盐水（IOOmLX 3)洗涤，无水硫酸钠干 燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物VII-2,白色固体。ESI-MS，m/ z = 428 ([M+H]+) 〇
[0048] 步骤5.化合物I-I的合成
[0049] 化合物 VII-1 (0? 85g, 2mmol)和轻乙基哌嗪 VIII-1 (I. 30g, 10mmol)溶于 10mT,二 甲苯中，在氮气气氛中升温回流，直到反应完成（通常6小时）。反应混合物小心倾倒入 200mL冰水中，搅拌，用50mLX 3CH2C12萃取，合并萃取相，用盐水（IOOmLX 5)洗涤，无水硫酸 钠干燥。抽滤除去干燥剂，滤液在旋转蒸发仪上蒸干，得到化合物1-2,白色固体。ESI-MS，m/ z = 498 ([M+H]+) 〇
[0050] 实施例3-5
[0051] 参照实施例1、2的方法，合成了下表所列化合物。
[0052]
[0053] 实施例6化合物体外抑制EGFR和HER2分析
[0054] 使用以下实验来测定本发明所述化合物在体外对erbB家族酪氨酸激酶（EGFR和 HER2)的活性抑制作用。
[0055] 体外激酶分析用 Cell Signaling Technology 公司的 HTScan EGFReceptor Kinase Assay Kit 和 HTScan HER2/ErbB2KinaseAssay Kit 检测。操作步骤参照试剂盒说 明书，该方法在体外检测待测化合物对EGFR或Her2受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑 制作用。室温下激酶反应缓冲液中温育ATP和底物肽以及待测化合物，孵育一段时间后，加 入终止液终止反应并将样品转移到链霉亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP标记的抗底 物磷酸化抗体检测底物肽上的磷酸化水平，用TMB显色，2M硫酸中止反应。检测450nm吸收 波长，计算IC 5。值（nM)。结果见下表。
[0056]
[0057] 从上表结果可以看出，本发明的化合物对EGFR和HER2具有很强的抑制作用，可以 作为制备抗肿瘤的药物。
[0058] 实施例7化合物对细朐增葙的抑制作用
[0059] 细胞增殖抑制试验采用人乳腺癌细胞BT474、人胃癌细胞系NCI-N87、人肺癌细胞 Calu-3和人皮肤癌细胞A431，其中BT474高表达Her2受体，N87高表达EGFR和Her2受体。 在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM) 中，在37°C、5% 0)2细胞培养箱中培养细胞，应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸（EDTA)从细胞 培养瓶中收获细胞。细胞以4000/孔（0.1 mL培养基）加入96孔细胞培养板贴壁过夜，加 入0.1 mL待测化合物的稀释液，DMSO的最终浓度为0. 25 %，将细胞培养板在37°C，5 %的CO2 条件下温育72h。然后在显微镜下观察细胞形态的变化，然后每孔加入50% (质量/体积） 的三氯乙酸（TCA) 50 y L固定细胞。TCA的终浓度为10%，静置5min后在4°C冰箱中放置 lh，培养板各孔用去离子水冲洗5遍，以去除TCA，甩干，空气干燥至无湿迹。每孔加0. 4% (质量/体积）的SRB 100 y L，室温放置lOmin，弃去各孔内液体后用1 %乙酸冲洗5遍，空 气干燥后用pH为10. 5, IOmM Tris (三羟甲基氨基甲烷）150 y L萃取，检测540nm的吸收波 长。结果IC5。值（nM)见下表。
[0060]
[0061] 由上表可以看出，本发明的化合物对EGFR和HER2高表达的肿瘤细胞具有很高的 抑制活性，可以作为制备抗肿瘤的药物。
【主权项】
1. 具有通式I结构的化合物，其中，R选自H，C「C6的烷基，C3-Cs的环烷基。2. 权利要求1所定义的通式I化合物， 其中，R选自的烷基，C3-C6的环烷基。3. 权利要求2所定义的通式I化合物，选自下列化合物，4. 合成权利要求1-3任一项所定义的属于通式I的化合物的方法：化合物II与甲酰胺在加热的条件下反应，得到化合物III;化合物III使用三氯氧磷 处理，得到化合物IV;化合物IV在碱存在下与化合物V反应，得到化合物VI;化合物VI在 CuCl2催化下与丙烯酸异丙酯加成，得到VII;化合物VII与VIII在高温下反应，得到化合 物I;R的定义如权利要求1-3任一项所述。5.权利要求1-3任一项所定义的通式I化合物在制备治疗肿瘤疾病药物方面的应用。
【专利摘要】本发明涉及肿瘤疾病领域。具体而言，本发明涉及一类含新型苯并喹唑啉结构的酪氨酸激酶抑制剂、其制备方法物以及在制备治疗肿瘤疾病中的应用。其中，R选自H，C1-C6的烷基，C3-C8的环烷基。
【IPC分类】C07D239/94, A61P35/00
【公开号】CN105085414
【申请号】CN201510528594
【发明人】蔡子洋
【申请人】佛山市赛维斯医药科技有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月25日