携带人AChE基因的溶瘤病毒载体ZD55及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，涉及携带人AChE基因的溶瘤病毒载体ZD55及其应用，尤其涉及溶瘤病毒载体ZD55携带并过表达人AChE (hAChE)基因在制备治疗肿瘤制剂中的用途，所述的肿瘤选自胃癌，食道癌，结肠癌，肝癌，胰腺癌或子宫颈癌。
【背景技术】
[0002]流行病学调查和实验室研究证明自然界和人为制造的空气食品污染，神经毒，各种杀虫剂,重金属，物理,化学,生物,药物,社会,精神,情绪,心理等恶性刺激，以及酗酒抽烟，营养不良，营养不平衡，不良生活习惯，衰老，等等，都是癌症和多种其他疾病的危险因素。这些危险因素同时也危害广泛大量分布于人和动物体内血，组织和细胞中的胆碱脂酶(ChE)包括乙酰胆碱脂酶(AChE)和假性胆碱脂酶(BChE)蛋白酶结构，类型，和活性及其基因功能结构的完整性。
[0003]AChE的作用是极其快速地水解神经源性和非神经源性乙酰胆碱(Ach)，研究显示，每分子AChE每秒钟可以降解约25，000分子的Ach接近于弥漫底物的程度；由于人体血和受累组织细胞中的AChE蛋白及其基因逐渐被危险因素抑制破坏，组织细胞为了存活就释放过量乙酰胆碱(Ach),功能和结构受损的AChE无法快速充分水解Ach,导致AChE和Ach平衡失调，Ach在受累组织细胞内外过剩。通常，业内认为Ach只是一种神经介质，主要存在于神经组织和神经肌肉接头处，近年来非神经性的ACh已经被证实存在，几乎分布于每个细胞，属于体内自分泌旁分泌激素，具有强大的促生长和求生存作用。研究证实烟草中的尼古丁和其他有害成分具有Ach作用并可以强烈刺激Ach分泌。过剩的Ach能异常激活广泛分布在细胞膜上的Ach受体，钙，钾通道，cAMP, cGMP等一系列第二信号系统及其因子，达到刺激癌细胞生长和转移。近年来Ach浓度和/或Ach合成酶，输送酶及其mRNA表达水平在人和/或实验室的肺，肝，结肠肿瘤细胞，组织，肿瘤动物模型中证实是显著升高的，而hAchE/hBChE基因和/或mRNA表达改变，酶活性水平明显下降，酶蛋白型，酶糖化型，等等多种改变在恶性实体瘤包括长在脑(脑膜瘤，脑胶质瘤)，呼吸道(多种肺癌)，消化道(食道，胃，肠，肝，胰腺)，生殖泌尿系统(肾，膀胱，宫颈，卵巢，乳房，前列腺)，皮肤，软组织，和血液系统肿瘤(白血病，淋巴细胞肿瘤等等)均有报道。平衡失调的AChE和Ach系统可引起受累组织细胞的代谢，信号传导，细胞周期，凋亡，染色体和其基因等的正常调控失调，导致正常细胞慢慢转化成癌细胞和癌组织并生长转移最后夺取生命。本申请的发明人于2008年在国际首次以医学假说形式提出了有关AChE和Ach上游平衡失调引起疾病以及用补充AChE/BChE来预防和治疗疾病的认知。目前主流科学人员仍然侧重对受体及其激动剂和拮抗剂对疾病治疗的研究。
[0004]有研究在2012年报道了有关2例非病毒载体携带AChE基因质粒在裸鼠皮下肝癌的动物模型。用溶瘤病毒ZD55作为携带和过表达hAChE基因质粒目前在国际上尚未见报道。
[0005]与本发明有关的现有技术有下述参考文献:
[0006]1.Shen，ZX.Rat1nale for diagnosing deficiency of ChEs and for applyingexogenous HuChEs to thetreatment of diseases.(2008)Medical Hypotheses70: (1)43-51.
[0007]2.Greenstein, J.P.B1logy of cancer，Academic Press, New YorkCity, (1947).
[0008]3.Greenstein, J.P.Enzymology of cancer, J.Nat1nal Cancer Institute，(1943)p419-447.
[0009]4.Kaufer，D，Friedman，A，Seidman，S，Soreq，H.Acute stressfacilitates long-lasting changes in cholinergic gene express1n.Nature (1998)393(6683)373-7.
[0010]5.Soreq H，Lapidot-Lifson Y,Zakut H.A role for cholinesterases intumorigenesis ? (1991)Cancer Cells 3:511-6.
[0011]6.Calaf GM，Parra E,Garrido F.Cell proliferat1n and tumor format1ninduced by eserine，an acetylcholinesterase inhibitor,in rat mammary gland.(2007)Oncol Rep.; 17⑴:25-33.
[0012]7.Lai, A，Ames, B.N.Associat1n of chromosome damage detected asmicronuclei with hematological diseases and micronutrient status.(2011)Mutagenesis.26(1):57-62.
[0013]8.http://en.wikipedia.0rg/wiki/Acetylcholinesterase
[0014]9.SchullerHM:1scancertriggeredbyalteredsignalingofnicotinicacetylcholine receptors ? (2009)NatRevCancer9:195-205.
[0015]10.Song, P.Sekhon，H.S.Fu，X.ff.et al.，Activated cholinergic signalingprovides a target in squamous cell lung carcinoma.(2008)Cancer Res68(12):4693-700
[0016]11.Lau，J.K.，Brown, K.C.，Thornhill, B.A.，et al.，Inhibit1n of cholinergicsignaling causes apoptosis in human bronch1alveolar carcinoma.(2013)CancerRes 73(4):1328-39.
[0017]12.Montenegro，M.F.，Nieto-Ceron，S.，Ruiz-Espejo，F.，et al.，Cholinesteraseactivityandenzymecomponents inhealthyandcanceroushumancolorectalsect1ns.(2005)ChemB1lInteract 157-158:429-430.
[0018]13.Xie, G.，Cheng, K.，Shant，J.，Raufman，J.P.Acetyl c ho line-1n ducedactivat1n of M3 muscarinic receptors stimulates robust matrixmetalloproteinase gene express1n in human colon cancer cells.(2009)Am JPhys1lGastrointest liver Phys1l 296 (4)G755-63.
[0019]14.Zhao, Y.，Wang, X.，Wang, T.，et al.，Acetylcholinesterase, akeyprognosticpredictorforhepatocellularcarcinoma，suppressescellgrowthandinduceschemosensitizat1n.(2011)Hepatology53:493-503.
[0020]15.Munoz-Delgado，E.，Montenegro, M.，F，，.Campoy,，，，F.J.，et al.Expressionofcholinesterasesinhuman kidneyanditsvariat1ninrenalcellcarcinomatypes.(2010)FEBSJ 277:4519-4529.
[0021]16.Battisti，V.，Bagatini，M.D.，Maders, L.D.，et al.，Chol inesteraseactivities and b1chemical determinat1ns in patients with prostatecancer:1nfluence of Gleason Score, treatment and bone metastasis.(2012)B1medPharmacother.66(4):249-55.
[0022]17.Mitsunaga, S., Kinoshita, T., Hasebe, T., et al., Low serum level ofcholinesterase at recurrence of pancreatic cancer is a poor prognostic factorand relates to systemic disorder and nerve plexus invas1n.(2008)Pancreas36(3):241-8.
[0023]18.http://china, guidechem.com/trade/pdetai11760708.html
[0024]19.Hrabovska, A，Duysen, E.G.，Sanders, J.D.，Murrin, L.C.，Lockridge, 0.Delivery of human acetylcholinesterase by adeno—associated vir