明涵盖这样的方 法，其包括选择显示升高的IgE水平的受试者，所述升高的IgE水平是高于约100kU/L，高 于约150kU/L,高于约500kU/L,高于约1000kU/L，高于约1500kU/L,高于约2000kU/L,高 于约 2500kU/L,高于约 3000kU/L,高于约 3500kU/L,高于约 4000kU/L,高于约 4500kU/L, 或高于约5000kU/L的血清IgE水平，并对该受试者施用包含治疗有效量的IL-4R拮抗剂的 药物组合物。
[0165] 健康受试者中的TARC水平的范围为106ng/L至431ng/L，均值为约239ng/L。（测 量TARC水平的一个示例性测定系统是R&D Systems, Minneapolis, MN以批号DDN00提供的 TARC定量ELISA试剂盒）。因此，本发明涵盖这样的方法，其包括选择显示升高的TARC水 平的受试者，所述升高的TARC水平为高于约431ng/L,高于约500ng/L,高于约1000ng/L， 高于约1500ng/L,高于约2000ng/L,高于约2500ng/L,高于约3000ng/L,高于约3500ng/ L,高于约4000ng/L,高于约4500ng/L,或高于约5000ng/L的血清TARC水平，并对该受试 者施用包含治疗有效量的IL-4R拮抗剂的药物组合物。
[0166] 嗜酸细胞活化趋化因子-3属于由气道上皮细胞释放的趋化因子类群，其被Th2趋 化因子 IL-4 和 IL-13 上调（Lilly et al 1999, J. Allergy Clin. Immunol. 104:786-790)。 本发明包括这样的方法，其包括施用IL-4R拮抗剂来治疗具有升高的嗜酸细胞活化趋化因 子-3水平（例如高于约100pg/ml，高于约150pg/ml,高于约200pg/ml,高于约300pg/ml, 或高于约350pg/ml)的受试者。血清嗜酸细胞活化趋化因子-3水平可以例如通过ELISA 测量。
[0167] 骨膜素是Th2介导的炎症过程中涉及的一种胞外基质蛋白。骨膜素水平在哮 喘患者中被发现上调（Jia et al 2012J Allergy Clin Immunol. 130:647-654. elO. doi:10. 1016/j. jaci.2012. 06. 025. Epub 2012Aug 1)。本发明包括这样的方法，所述方法 包括施用IL-4R拮抗剂来治疗具有升高的骨膜素水平的受试者。
[0168] 呼出气一氧化氮分数（fractional exhaled NO, FeNO)是支气管或气道炎症的 生物标志物。FeNO是气道上皮细胞相应于包括IL-4和IL-13在内的炎症趋化因子而 产生的（Alwing et al 1993，Eur.Respir.J.6:1368-1370)。健康成人中的 FeNO 水平在 2-30个十亿分率（ppb)的范围。一种示例性的用于测量FeNO的测定法是使用Aerocrine AB, Solna, Sweden的NI0X仪。评估可以在肺活量测定之前，并在禁食至少一小时后进行。本 发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的呼出NO(FeNO)(例如高于约30ppb， 高于约31ppb,高于约32ppb,高于约33ppb,高于约34ppb,或高于约35ppb)的患者施用 IL-4R拮抗剂。
[0169] 癌胚抗原（CEA)是一种肿瘤标志物，其被发现与肺的非新生性疾病相关 (Marechal et al 1988, Anticancer Res. 8:677-680)。血清中的 CEA 水平可以通过 ELISA 来测定。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的CEA (例如高于约1. Ong/ ml,高于约1.5ng/ml,高于约2.0ng/ml,高于约2.5ng/ml,高于约3.0ng/ml,高于约 4.0ng/ml,或高于约5.0ng/ml)的患者施用IL-4R诘抗剂。
[0170] YKL-40 [因其N-末端氨基酸酪氨酸（Y)、赖氨酸（K)和亮氨酸（L)，及其分子质量 40kD而得名]是一种壳多糖酶样蛋白质，其被发现上调并与哮喘加重、IgE和嗜酸性粒细 胞相关（Tang et al 2010Eur.Respir.J. 35: 757-760)。血清 YKL-40 水平通过例如 ELISA 来测定。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的YKL-40 (例如高于约 40ng/ml,高于约50ng/ml,高于约100ng/ml，高于约150ng/ml,高于约200ng/ml,或高于 约250ng/ml)的患者施用IL-4R拮抗剂。
[0171] 诱导的痰嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞是良好确立的气道炎症直接标志物 (Djukanovic et al 2002, Eur. Respire. J. 37: 1S-2S)。吸入高渗盐水溶液诱发产痰，根据 本领域已知的方法，例如欧洲呼吸学会（European Respiratory Society)的指南处理进行 细胞计数。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的痰嗜酸性粒细胞（例 如高于约2. 5%或高于约3% )的患者施用IL-4R拮抗剂。
[0172] 评估药效学哮喘相关参数的方法
[0173] 本发明还包括用于在有此需要的受试者中评估施用包含白介素-4受体（IL-4R) 拮抗剂的药物组合物导致的一种或多种药效学哮喘相关参数的方法。在哮喘加重的发生率 的减少（如上所述）或一种或多种哮喘相关参数的改善（如上所述）可以与一种或多种药 效学哮喘相关参数的改善相关联；然而，这样的相关性不一定在所有情况下观察到。
[0174]"药效学哮喘相关参数"的实例包括，例如，下述：(a)生物标志物表达水平；(b)血 清蛋白和RNA分析；（c)诱导的痰嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的水平；（d)呼出气一氧化 氮分数（FeNO);和（e)血液嗜酸性粒细胞计数。"药效学哮喘相关参数的改善"是指，例如， 一种或多种生物标志物，如TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3或IgE，自基线的降低；痰嗜酸 性粒细胞或嗜中性粒细胞、FeNO、或血液嗜酸性粒细胞计数减少。如本文所使用的，术语"基 线"，就药效学哮喘相关参数而言，意指患者在施用本发明特征的药物组合物之前或之时的 药动学哮喘相关参数的数值。
[0175] 为了评估药效学哮喘相关参数，在基线和本发明的药物组合物施用后的时间点定 量该参数。例如，药效学哮喘相关参数可以在用本发明的药物组合物初始治疗后第1天，第 2天，第3天，第4天，第5天，第6天，第7天，第8天，第9天，第10天，第11天，第12天， 第14天，或第3周，第4周，第5周，第6周，第7周，第8周，第9周，第10周，第11周，第 12周，第13周，第14周，第15周，第16周，第17周，第18周，第19周，第20周，第21周， 第22周，第23周，第24周，或更长的时间时测量。用参数在开始治疗后的特定时间点的值 与该参数在基线的值的差异来证明药动学哮喘相关参数是否已经有变化，如"改善"（例如， 视情况为增加或减少，取决于测量的具体参数）。
[0176] 在某些实施方案中，向患者施用IL-4R拮抗剂引起特定的生物标志物的表达变 化，如增加或减少。哮喘相关的生物标志物包括下述：血清中的（a)总IgE;(b)胸腺和活 化调节趋化因子（TARC) ;(c)YKL-40 ;及（d)癌胚抗原（CEA，也称为癌胚抗原细胞粘附分子 5[CEACAM5])，和血浆中的（e)嗜酸细胞活化趋化因子-3。例如，对哮喘患者施用IL-4R拮 抗剂可以导致下述中的一者或多者：TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3的水平的降低，或血 清总IgE水平的降低。该降低可以在IL-4R拮抗剂施用之后第1周，第2周，第3周，第4 周，第5周或更长的时间时检测到。生物标志物表达可通过本领域中已知的方法来测定。例 如，蛋白质水平可通过ELISA (酶联免疫吸附测定法）进行测定，或RNA水平可以通过逆转 录耦合聚合酶链式反应（RT-PCR)来测定。
[0177] 生物标志物的表达，如上面所讨论的，可通过检测血清中的蛋白质或RNA来测定。 血清样品也可用于监测与对IL-4R拮抗剂治疗的反应、IL-4/IL-13的信号传导、哮喘、特 应性或嗜酸性粒细胞疾病相关的其他蛋白质或RNA生物标志物（例如，通过测量可溶性 IL-4Ra、IL-4、IL-13、骨膜素）。在一些实施方案中，RNA样品用于确定RNA水平（非遗 传分析），例如，生物标志物的RNA水平；并且在其他实施方案中，RNA样品用于转录组测序 (例如，遗传分析）。 实施例
[0178] 给出以下实施例以便为本领域的技术人员提供如何制造和使用本发明描述的方 法和组合物的完整公开和描述，并且不意在限制发明人视为其发明的范围。已尽量确保所 使用的数字的准确性（例如量、温度等），但一些实验误差和偏差应予以容许。除非另外指 出，否则，份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，压力为大气压或接近大气 压。
[0179] 实施例1针对人IL-4R的人抗体的产生
[0180] 如美国专利号7608693所述生成抗人IL-4R人抗体。表1列出了选定的抗IL-4R 抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列对及CDR的氨基酸序列的序列标识符，及其相应的抗 体名称
[0181]表 1
[0182]
【主权项】
1. 一种在有此需要的受试者中减少一种或多种哮喘加重的发生率的方法，其包括对受 试者施用治疗有效量的包含白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂的药物组合物。
2. 权利要求1的方法，其中所述的哮喘加重选自下组： (a) 连续两天早间峰值呼气流速（PEF)自基线减少30%更多； (b) 连续两天在24小时期间内6次或更多次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾 (与基线相比）；和 (c) 哮喘恶化，需要： (i) 全身（口服和/或胃肠外）类固醇治疗，或 (ii) 增加吸入皮质类固醇至中止前接受的最后一次剂量的至少4倍，或者 (ii)住院治疗。
3. 权利要求1或2的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗 原结合片段。
4. 权利要求3的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述特异性结合 IL-4R的抗体或抗原结合片段。
5. 权利要求4的方法，其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合IL-4R的抗 体或抗原结合片段。
6. 权利要求3的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自 重链可变区（HCVR)/轻链可变区（LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区（CDR)序列，所述 重链可变区（HCVR)/轻链可变区（LCVR)序列对选自下组：SEQ ID N0:2/10, 18/20, 22/24， 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120， 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/2 02, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260,和 262/264。
7. 权利要求6的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自 包含SEQ ID NO: 162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR序列。
8. 权利要求7的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个 重链互补决定区（HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID从)：148、150、152，和三个轻链互补决定 区（LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO: 156,158和160。
9. 权利要求8的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含 SEQ ID NO: 162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO: 164的氨基酸序列的LCVR。
10. 权利要求1-9中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻 内施用给受试者。
11. 权利要求1-10中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受试 者施用第二治疗剂。
12. 权利要求11的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-I抑制剂， IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈 多罗米钠，色甘酸钠，长效e 2_激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
13. 权利要求12的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效0 2_激动剂 的组合。
14. 权利要求13的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
15. 权利要求13的方法，其中所述长效e 2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
16. 权利要求13的方法，其中所述吸入皮质类固醇是氟替卡松，且所述长效e 2-激动 剂是沙美特罗。
17. 权利要求13的方法，其中所述吸入皮质类固醇是布地奈德，且所述长效e 2-激动 剂是福莫特罗。
18. -种用于在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其包括给 受试者施用治疗有效量的包含白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂的药物组合物，其中哮喘相关 参数的改善选自下组： (a) 以升计的1秒用力呼气容积（FEVl)自基线增加； (b) 以升/分钟计的早间峰值呼气流速（AM PEF)自基线增加； (c) 以升/分钟计的晚间峰值呼气流速（PM PEF)自基线增加； (d) 以吸入数/日计的每日沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用自基线减少； (e) 五项目哮喘控制问卷（ACQ5)评分自基线减少； (f) 每日测量的夜间苏醒（每夜次数）自基线减少；和 (g) 22项目鼻窦-鼻腔结果测试（SN0T-22)评分自基线减少。
19. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是FEVl自基线增加至少0. 10L。
20. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是AM PEF自基线增加至少10.0 L/ min〇
21. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是PM PEF自基线增加至少1.0 L/ min〇
22. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用自基 线减少至少1次喷雾每日。
23. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是ACQ5评分自基线减少至少0. 5 分。
24. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是夜间苏醒自基线减少至少0. 2次 每夜。
25. 权利要求18的方法，其中哮喘相关参数的改善是SNOT-22评分自基线减少至少5 分。
26. 权利要求18-25中任一项的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗 体或其抗原结合片段。
27. 权利要求18-26中任一项的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述 特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
28. 权利要求27的方法，其中其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合 IL-4R的抗体或抗原结合片段。
29. 权利要求26的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来 自重链可变区（HCVR)/轻链可变区（LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区（CDR)序列，所 述重链可变区（HCVR)/轻链可变区（LCVR)序列对选自SEQ ID N0:2/10, 18/20, 22/24, 26/ 34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90/92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122 /130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202， 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 242/250, 258/260,和 262/264。
30. 权利要求29的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来 自包含SEQIDNO: 162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR序列。
31. 权利要求30的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三 个重链互补决定区（HCDR)序列，它们分别包含SEQID勵：148、150、152，和三个轻链互补决 定区（LCDR)序列，它们分别包含SEQIDNO: 156,158和160。
32. 权利要求31的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包 含SEQIDNO: 162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQIDNO: 164的氨基酸序列的LCVR。
33. 权利要求18-32中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或 鼻内施用给受试者。
34. 权利要求18-33中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受 试者施用第二治疗剂。
35. 权利要求34的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-I抑制剂， IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈 多罗米钠，色甘酸钠，长效e2_激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
36. 权利要求35的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效0 2_激动剂 的组合。
37. 权利要求36的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
38. 权利要求36的方法，其中所述长效0 2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
39. 权利要求36的方法，其中所述吸入皮质类固醇是氟替卡松，且所述长效0 2-激动 剂是沙美特罗。
40. 权利要求36的方法，其中所述皮质类固醇是布地奈德，且所述长效e2-激动剂是 福莫特罗。
41. 一种用于在有此需要的受试者中治疗中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘的方法，其 包括对受试者施用有治疗有效量的包含白介素4受体（IL-4R)拮抗剂的药物组合物，其中 所述受试者被鉴定为具有每微升至少300个细胞的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少为 3%的痰嗜酸性粒细胞水平。
42. 权利要求41的方法，其中IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合 片段。
43. 权利要求41或42的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述特异性 结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
44. 权利要求43的方法，其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合IL-4R的 抗体或抗原结合片段。
45. 权利要求42的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来 自选自SEQIDN0:2/10, 18/20, 22/24, 26/34, 42/44, 46/48, 50/58, 66/68, 70/72, 74/82, 90 /92, 94/96, 98/106, 114/116, 118/120, 122/130, 138/140, 142/144, 146/154, 162/164, 166/ 168, 170/178, 186/188, 190/192, 194/202, 210/212, 214/216, 218/226, 234/236, 238/240, 2 42/250,258/260,和262/264的重链可变区（HCVR)/轻链可变区（LCVR)序列对的互补决定 区（CDR)序列。
46. 权利要求44的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来 自包含SEQIDNO: 162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR序列。
47. 权利要求46所述的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包 含三个重链互补决定区（HCDR)序列，它们分别包含SEQID勵：148、150、152，和三个轻链互 补决定区（LCDR)序列，它们分别包含SEQIDNO: 156,158和160。
48. 权利要求47所述的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含： 包含SEQIDNO: 16