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[0343] 表1 :在CMV多表位13、14、15&20π^中包含的HLA-I类限制性表位的列表
[0344]
[0347] *CTL表位序列以粗体表示，TAP序列以斜体表示，以及蛋白酶体处理序列以下画 线表示。SEQ ID NO指粗体表位序列。
[0348] 表3在EBV多表位20mer中包含的HLA-I类限制性表位的列表
[0349]
[0350] 整个说明书的目的是描述本发明的优选实施方案，而不限制本发明到任何一个实 施方案或特征的特定集合。因此，鉴于本公开内容，本领域技术人员将理解在示例的具体实 施方案中可以进行各种修改和改变而不脱离本发明的范围。
[0351] 本文提及的所有计算机程序、算法、专利和科学文献以全文引用的方式并入本文。
【主权项】
1. 一种分离的蛋白，其包括来自两个或更多不同疱瘆病毒抗原的多个CTL表位的每个 的各自氨基酸序列，还包括在至少两个所述CTL表位之间的干扰氨基酸或氨基酸序列，所 述干扰氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶体释放氨基酸或氨基酸序列，以及任选地，与抗原 处理相关的转运子（TAP)识别基序，其中所述分离的蛋白作为外源蛋白施用给动物时能够 引发细胞毒性T淋巴细胞免疫应答。2. 根据权利要求1所述的分离的蛋白，其中所述表位限制到HLA-I类特异性HLA-A1、 -A2、-A3、-AlI、-A23、-A24、-A26、-A29、-A30、-B7、-B8、-B27、-B35、-B38、-B40、-B41、-B44、-B51、 -B57 和 / 或-B58。3. 根据权利要求1所述的分离的蛋白，其中所述疱瘆病毒是巨细胞病毒（CMV)或爱泼 斯坦-巴尔病毒（EBV)。4. 根据权利要求3所述的分离的蛋白，其中CMVCTL表位来自pp50、pp65、ppl50和/ 或IE-I。5. 根据权利要求4所述的分离的蛋白，其中CTL表位具有选自SEQIDN0:l-21所示的 氨基酸序列的氨基酸序列。6. 根据权利要求5所述的分离的蛋白，其包括SEQIDNO: 1-13所示的CTL表位氨基酸 序列的每一个。7. 根据权利要求5或权利要求6所述的分离的蛋白，其包括SEQIDNO: 11所示的CTL 表位的氨基酸序列。8. 根据任意前述权利要求所述的分离的蛋白，其包括选自以下的氨基酸序列：SEQID N0:42、SEQIDN0:43、SEQIDN0:44、SEQIDN0:45、SEQIDN0:46、SEQIDN0:47 和SEQ IDN0:48〇9. 根据权利要求3所述的分离的蛋白，其中EBVCTL表位源自选自以下的一个或多个 抗原：BMLFl、LMP2a、BRLFl、LMP2、EBNA3A、BZLFl、EBNA3C、EBNAl和EBNA3B。10. 根据权利要求8所述的分离的蛋白，其中CTL表位具有选自SEQIDN0:22-41所示 的氨基酸序列的氨基酸序列。11. 根据权利要求1-3、权利要求9或权利要求10中任一项所述的分离的蛋白，其中所 述分离的蛋白包括SEQIDN0:49所示的氨基酸序列。12. 根据任意前述权利要求所述的分离的蛋白，其包括二十（20)个以下的CTL表位。13. 根据权利要求10所述的分离的蛋白，其包括十（10)个、十一（11)个、十二（12)个、 十三（13)个、十四（14)个、十五（15)个、十六（16)个、十七（10)个、十八（18)个或十九 (19)个CTL表位。14. 根据任意前述权利要求所述的分离的蛋白，其包括来自相同或不同疱瘆病毒的表 位。15. 根据任意前述权利要求所述的分离的蛋白，其中所述蛋白酶体释放氨基酸或氨基 酸序列包括AD、K和/或R。16. -种分离的核酸，其编码根据任意前述权利要求所述的分离的蛋白。17. 根据权利要求16所述的分离的核酸，其包括选自以下的核苷酸序列：SEQID N0:50,SEQIDN0:5USEQIDN0:52,SEQIDN0:53,SEQIDN0:54,SEQIDN0:55,SEQID NO:56 和SEQIDNO:57。18. -种遗传构建体，其包括根据权利要求16或权利要求17所述的分离的核酸，所述 分离的核酸可操作地连接至表达载体中的一个或多个调控序列。19. 一种包含根据权利要求18所述的遗传构建体的宿主细胞。20. -种产生根据权利要求1-15中任一项所述的分离的蛋白的方法，所述方法包括在 保持分离的蛋白基本上非聚集形式的条件下至少部分纯化所述分离的蛋白的步骤。21. -种药物组合物，其包含（i)根据权利要求1-15中任一项所述的一种或多种分离 的蛋白；（ii)根据权利要求20所述的方法所产生的一种或多种分离的蛋白；和/或（iii) 根据权利要求18所述的遗传构建体；以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。22. 根据权利要求21所述的药物组合物还包含免疫刺激分子或佐剂。23. 根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述免疫刺激分子或佐剂是TLR激动剂， 其包括TLR4激动剂和/或TLR9激动剂。24. 根据权利要求21、权利要求22或权利要求23所述的药物组合物，其是用于在人中 引发针对疱瘆病毒的保护性免疫应答的疫苗。25. 根据权利要求22-24中任一项所述的药物组合物，其是用于在人中引发针对CMV和 /或EBV保护性免疫应答的疫苗。26. -种预防或治疗性处理动物中疱瘆病毒感染的方法，包括向动物施用根据权利要 求1-15中任一项所述的分离的蛋白，或根据权利要求21-25中任一项所述的药物组合物的 步骤，从而预防性或治疗性处理动物中疱瘆病毒感染。27. -种在动物中诱导或引发细胞毒性T淋巴细胞（CTL)免疫应答的方法，包括向动物 施用根据权利要求1-15中任一项所述的分离的蛋白，或根据权利要求21-25中任一项所述 的药物组合物的步骤，从而在所述动物中诱导或引发细胞毒性T淋巴细胞（CTL)免疫应答。28. -种扩大用于过继免疫治疗的疱瘆病毒特异性CTL的方法，包括以下步骤： (i)使分离自动物的一种或多种细胞与根据权利要求1-15中任一项所述的分离的蛋 白相接触；以及 (ii)培养所述一种或多种细胞从而从所述一种或多种细胞扩大疱瘆病毒特异性CTL。29. -种过继免疫治疗的方法，包括施用根据权利要求28的步骤（b)所产生的所述 CMV特异性的CTL给动物的步骤，从而预防性或治疗性处理所述动物的CMV感染。30. 根据权利要求26-29中任一项所述的方法，其中所述疱瘆病毒是CMV或EBV。31. 根据权利要求26-30中任一项所述的方法，其中所述动物是人。
【专利摘要】一种分离的蛋白，其包括来自两个或更多不同疱疹病毒抗原的多个CTL表位的每个的各自氨基酸序列，还包括在至少两个所述CTL表位之间的干扰氨基酸或氨基酸序列，所述干扰氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶体释放氨基酸或氨基酸序列，以及任选地，与抗原处理相关的转运子(TAP)识别基序。所述分离的蛋白能够在体外快速扩大人类细胞毒性T淋巴细胞(CTL)并且作为外源蛋白施用给动物时在体内引发CTL免疫应答。通常，所述分离的蛋白包括不多于二十(20)个源自巨细胞病毒和/或爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr)抗原的CTL表位。
【IPC分类】A61P31/22, C07K19/00, A61K39/12
【公开号】CN104918960
【申请号】CN201380065495
【发明人】R·康纳, D·维贾延德拉
【申请人】昆士兰医学研究所理事会
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2013年10月21日
【公告号】CA2889064A1, EP2909238A1, US20150273051, WO2014059489A1