）状态储存，以使得仅需要紧接在使用之前 加入无菌载液，例如用于注射目的的水。根据该配方制备的注射液和混悬液可由无菌粉末、 颗粒剂和片剂制备。
[0091] 不用说，关于特定制剂类型，除了以上特定提到的成分之外，所述制剂还可包含本 领域中常用的其他试剂；因此，例如，适合口服给予的制剂可包含矫味剂。
[0092] 式I化合物的治疗有效量取决于许多因素，例如包括动物的年龄和体重、需要治 疗的精确病况及其严重性、制剂的性质和给药方法，且其最终由治疗医师或兽医确定。然 而，根据本发明的化合物的有效量通常在〇. 1-100 mg/kg接受者（哺乳动物）体重/日的 范围内且特别典型地在1-10 mg/kg体重/日的范围内。因此，对于体重为70 kg的成年哺 乳动物每日的实际量通常为70-700 mg，其中该量可以每日单一剂量或通常以每日一系列 多份剂量（例如2、3、4、5或6份）给予，以使得日总剂量相同。盐或溶剂合物或其生理学 功能衍生物的有效量可确定为本发明的化合物的有效量本身的部分。可假设类似的剂量适 合用于治疗上述其他病况。
[0093] 该类型的组合治疗可借助于同时、连续或单独分配该治疗的单独组分来实现。该 类型的组合产物采用根据本发明的化合物。
[0094] 本发明另外涉及药物，其包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互 变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物，及至少一种另外的药物活性成分。
[0095] 本发明还涉及由以下单独包装组成的套装（set)(药盒）： (a) 有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体，包括 其所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的其它药物活性成分。
[0096] 所述套装包含合适的容器，例如盒（box)、单个瓶、袋或安瓿。所述套装例如可包括 单独的安瓿，其各自含有有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立 体异构体，包括其所有比例的混合物， 和有效量的以溶解或冻干形式的其它药物活性成分。
[0097] 本文使用的"治疗"是指完全或部分地减轻与病症或疾病相关的症状，或减慢或中 止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或预防处于发展该疾病或病症的风险之中的个体 的疾病或病症。
[0098] 关于式⑴化合物的术语"有效量"可以指能够完全或部分地减轻与病症或疾病 相关的症状，或减慢或中止那些症状的进一步进展或恶化，或防止或提供预防具有本文公 开的疾病或处于发展本文公开的疾病的风险之中的个体的疾病或病症的量，所述疾病例如 为炎性病况、免疫病况、癌症或代谢病况。
[0099] 在一个实施方案中，式（I)化合物的有效量为例如在体外或体内抑制细胞中的端 锚聚合酶的量。在一些实施方案中，与在未治疗的细胞中的端锚聚合酶的活性相比较，有效 量的式⑴化合物抑制细胞中的端锚聚合酶达1〇%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或 99%。例如在药物组合物中的式（I)化合物的有效量可处于产生所需效果的水平；例如对于 口服给药和肠胃外给药两者，在单位剂量中约0.005 mg/kg个体体重-约10 mg/kg个体体 重。
[0100] 用途 本发明化合物适合作为药物活性成分用于哺乳动物，特别是人，以治疗癌症、多发性硬 化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。
[0101] 本发明包括式I化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体在 制备用于治疗或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症 的药物中的用途。
[0102] 炎性疾病的实例包括类风湿性关节炎、银肩病、接触性皮炎、迟发型超敏反应等。
[0103] 还包括式I的化合物和/或其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构体在制 备用于在哺乳动物中治疗或预防端锚聚合酶诱导的疾病或端锚聚合酶诱导的病况的药物 中的用途，其中对于该方法，将治疗有效量的本发明化合物给予需要所述治疗的患病哺乳 动物。治疗量根据特定疾病而改变，可通过本领域技术人员确定，而无需过度努力。
[0104] 表述"端锚聚合酶诱导的疾病或病况"是指病理学病况，其依赖于一种或多种端 锚聚合酶的活性。与端锚聚合酶活性相关的疾病包括癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢 神经系统损伤和不同形式的炎症。
[0105] 本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构 体，包括其所有比例的混合物，用于治疗其中端锚聚合酶的抑制、调节和/或调节抑制起作 用的疾病。
[0106] 本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构 体，包括其所有比例的混合物，用于抑制端锚聚合酶。
[0107] 本发明特别涉及式I的化合物和其药学上可接受的盐、互变异构体和立体异构 体，包括其所有比例的混合物，用于治疗癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损伤 和不同形式的炎症。
[0108] 本发明特别涉及用于治疗或预防癌症、多发性硬化、心血管疾病、中枢神经系统损 伤和不同形式的炎症的方法，包括给予需要其的个体有效量的式I的化合物或其药学上可 接受的盐、互变异构体、立体异构体或溶剂合物。
[0109] 式I化合物可用于治疗或预防的代表性癌症包括但不限于，头、颈、眼、口、咽喉、 食管、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、宫颈、乳腺、卵巢、睾丸 或其它生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾、肝、胰腺、脑、中枢神经系统、实体瘤和血 载肿瘤（blood-borne tumor)的癌症。
[0110] 式I化合物可用于治疗或预防的代表性心血管疾病包括但不限于，再狭窄、动脉 粥样硬化和其后果例如中风、心肌梗死、对心脏、肺、肠、肾、肝、胰腺、脾或脑的缺血性损伤。 [0111] 本发明涉及治疗增殖性、自体免疫、抗炎性或感染疾病病症的方法，其包括向需要 其的个体给予治疗有效量的式I化合物。
[0112] 优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法。
[0113] 特别优选本发明涉及其中所述疾病为癌症的方法，其中给药与至少一种其它活性 药剂的给予同时、序贯或交替进行。
[0114] 所公开的式I化合物可与包括抗癌剂的其它已知治疗剂组合给予。如在此使用， 术语"抗癌剂"涉及为治疗癌症的目的而给予癌症患者的任何药剂。
[0115] 以上定义的抗癌治疗可作为单一疗法应用，或除了本文公开的式I化合物外可包 括常规手术或放射疗法或药物治疗。此类药物治疗例如化疗或靶向治疗可包括一种或多 种，但优选为以下抗肿瘤药物中的一种： 烷化剂 诸如六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮芥、环磷酰胺、达卡巴 嗪、异环磷酰胺、英丙舒凡、甲苯磺酸盐、洛莫司汀、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫 司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、苏消安、mechloretamine、卡波醌、阿帕齐醌、福莫司汀、 葡磷酰胺、帕利伐米、哌血生、曲磷胺、尿嘧啶氮芥、TH-302 4、VAL-0834; 铂化合物 诸如卡铂、顺铂、依铂、米铂水合物、奥沙利铂、洛铂、奈达铂、皮卡铂、沙铂；洛铂、奈达 铂、皮卡铂、沙铂； DNA改夺剂 诸如氨柔比星、比生群、地西他滨、米托蒽醌、甲苄肼、曲贝替定、氯法拉滨；安吖啶、溴 他里辛（brostallicin)、匹克生琼、laromustine1'3; 柘朴异构酶抑制剂 诸如依托泊苷、依立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊苷、托泊替康；氨萘非特、贝洛替 康、依利醋铵、voreloxin ; 微管调节剂 诸如卡巴他赛、多西他赛、艾日布林、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、 长春地辛、长春氟宁、康布斯汀（fosbretabulin)、替司他赛； 抗代谢药 诸如天门冬酰胺酶3、阿扎胞苷、左亚叶酸钙、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、依诺他 滨、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、巯嘌呤、甲氨蝶呤、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲 沙、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、卡莫氟；去氧氟尿苷、艾西拉滨、雷替曲塞、沙帕他滨、替加氟 2>3、曲 美沙特； 抗癌抗牛素 诸如博来霉素、更生霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、左旋咪挫、米替福新、丝裂霉 素 C、罗米地辛、链佐星、戊柔比星、净司他丁、佐柔比星、道诺霉素、光神霉素；阿柔比星、培 来霉素、吡喃阿霉素； 激素/桔抗剂 诸如阿巴瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡鲁睾酮、三对甲氧苯氯乙稀、地加瑞 克、地塞米松、雌二醇、氟可龙、氟羚甲基睾丸素、氟他胺、氟维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮 丙瑞林、甲地孕酮、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肽、泼尼松龙、雷洛昔芬、他莫昔 芬、促甲状腺激素 α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己烯雌酚；阿考比芬、达那唑、德舍瑞 林、环硫雄醇、orteronel、恩杂鲁胺1' 3; 芳香酶抑制剂 诸如氨鲁米特、阿那曲挫、依西美坦、法倔挫、来曲挫、睾内脂；福美坦； 小分子激酶抑制剂 诸如克唑替尼、达沙替尼、厄洛替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、瑞 格非尼、鲁索利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、维罗非尼、博舒替尼、吉非替尼、 阿西替尼；阿法替尼、alisertib、达拉菲尼、达可替尼、dinaciclib、多韦替尼、恩扎妥 林、尼达尼布、乐伐替尼、利尼伐尼、Iinsitinib、马赛替尼、米哚妥林、莫特塞尼、来那 替尼（neratinib)、orantinib、哌立福辛、普纳替尼、拉多替尼、rigosertib、替吡法尼、 tivantinib、tivozanib、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼4、卡 波替尼S-苹果酸盐 1A依鲁替尼i3、埃克替尼^buparlisib'cipatinilAcobimetinib 1'3、 idelalisib1'3、fedratinib1、XL-647 4; 光敏剂 诸如甲氧沙林3、卟吩姆钠、他拉泊芬、替莫泊芬； 抗体 诸如阿仑单抗、贝西索单抗、贝伦妥单抗-维多汀、西妥昔单抗、迪诺塞麦、易普利单 抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、群司珠单抗、贝伐单抗、帕妥珠单抗 2'3、卡妥索单抗、elotuzumab、依帕珠单抗、farletuzumab、mogamulizumab、necitumumab、尼 妥珠单抗、奥奴珠单抗、ocaratuzumab、奥戈伏单抗、雷莫芦单抗、利妥木单抗、司妥昔单抗、 托珠单抗、扎鲁木单抗、扎木单抗、马妥珠单抗、达妥珠单抗u 3、onartuzumatA3、雷妥莫单 抗 \ tabalumab1'3、EMD-5257974、nivolumab 1'3; 会田胞因子 诸如阿地白介素、干扰素 α2、干扰素 a 2a3、干扰素 a 2b2'3、西莫白介素、他索纳明、替 西白介素、奥普瑞白介素1>3、重组干扰素 β-Ia4; 药物轭合物 诸如地尼白介素-毒素连接物、替伊莫单抗、碘苄胍1123、松龙苯芥、曲妥珠单 抗-emtansine、雌莫司汀、吉妥珠单抗、奥唑米星、阿柏西普；cintredekin besudotox、依多 曲肽、奥英妥珠单抗、那莫单抗、莫奥珠单抗、锝（99mTc)、阿西莫单抗u、vintafolide 1'3; 痔苗 诸如 sipuleucel3、维特斯朋 3、emepepimut-S3、oncoVAX4、rindopepimut 3、troVax4、 MGN-16014、MGN-17034; 其他药物 阿利维A酸、贝沙罗汀、硼替佐米、依维莫司、伊班膦酸、咪喹莫特、来那度胺、蘑菇多 糖、甲酪氨酸、米伐木肽、帕米磷酸、培加帕酶、喷司他丁、sipuleucel3、西佐糖、他米巴罗 汀、替西莫司、沙利度胺、维甲酸、维莫德吉、唑来膦酸、伏立诺他；塞来考昔、西仑吉肽、恩 替诺特、依他硝唑、ganetespib、idronoxil、iniparib、ixazomib、氯尼达明、尼莫唑、帕 比司他、培瑞维A酸、plitidepsin、泊马度胺、procodazol、ridaforolimus、他喹莫德、 telotristat、胸腺法新、替拉扎明、托多司他、trabedersen、乌苯美司、伐司朴达、今又生 (gendicine)4、溶链菌4、reolysin4、盐酸瑞他霉素 1>3、trebananib2'3、维鲁利秦4、卡非佐米 1,3、内皮抑素 4、iifflnucothel4、belinostat3、MGN-1703 4; 1Prop. INN (提议的国际非专属名称） 2Rec. INN (推荐的国际非专属名称） 3USAN (美国采用的名称） 4 无 INN。
[0116] 下列缩写分别指以下定义： aq (水性），h (小时），g (克），L (升），mg (毫克），MHz (兆赫），min.(分钟）， mm (毫米），mm〇l (毫摩尔），mM(毫摩尔当量），m.p.(恪点），eq (当量），mL (毫升）， L(微升），ACN (乙腈），AcOH (乙酸），CDCl3 (氘化氯仿），CD3OD (氘化甲醇），CH3CN (乙腈），c-hex (环己烷），DCC (二环己基碳二亚胺），DCM (二氯甲烷），DIC (二异丙 基碳二亚胺），DIEA (二异丙基乙胺），DMF (二甲基甲酰胺），DMSO (二甲亚砜），DMS0-d6 (氖化二甲亚讽），EDC (1-(3-二甲基-氨基-丙基）_3_乙基碳二亚胺），ESI (电喷雾 电离），EtOAc (乙酸乙酯），Et2O (乙醚），EtOH (乙醇），HATU (二甲基氨基-([I，2,3] 三唑并[4, 5-b]吡啶-3-基氧基）-亚甲基]-二甲基-铵六氟磷酸盐），HPLC (高效液相 色谱），i-Pr0H (2-丙醇），K2CO3 (碳酸钾），LC(液相色谱），MeOH (甲醇），MgSO4 (硫酸 镁），MS (质谱），MTBE (甲基叔丁基醚），NaHC03 (碳酸氢钠），NaBH4 (硼氢化钠 ），NMM (N-甲基吗啉），NMR (核磁共振），PyBOP (苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷子基-磷 鑰六氟磷酸盐），RT (室温），Rt (保留时间），SPE (固相提取），TBTU (2- (1-H-苯并三 唑-1-基）-1，1，3,3_四甲基脲鑰四氟硼酸盐），TEA (三乙胺），TFA (三氟乙酸），THF (四 氢呋喃），TLC (薄层色谱），UV (紫外线）。
[0117] 体外测宙法的描沐 缩写： GST =谷胱甘肽-S-转移酶 FRET=荧光共振能量转移 HTRF? =(均相时间分辨荧光） HEPES = 4-(2-羟基乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸缓冲液 DTT =二硫苏糖醇 BSA =牛血清白蛋白 CHAPS =去垢剂； CHAPS = 3-[(3_胆酰胺基（cholamido)丙基）二甲基铵基（ammonio)]-1-丙烷磺酸 盐。
[0118] 链霉抗生物素-XLent?是高等级链霉抗生物素-XL665缀合物，对此偶合条件已被 优化以产生具有用于一些测定，特别是需要高灵敏性的测定的增强性能的缀合物。
[0119] 端锚聚合酶1和2的生物化学活性测试：自动聚ADP核糖化（Autoparsylation) 测定 自动聚ADP核糖化测定以两个步骤进行：酶促反应（其中GST-标记的端锚聚合酶-1、 resp端锚聚合酶-2将生物素化ADP-核糖由作为共同底物的生物素化NAD转移至其自身） 和检测反应（其中分析了结合于酶的GST标签的穴状化合物标记的抗-GST和结合生物 素-聚ADP核糖化残基的Hent?标记的-链霉抗生物素之间的时间分辨FRET)。自动聚 ADP核糖化活性可经由HTRF信号的增加直接检测。
[0120] 自动聚ADP核糖化测定作为格雷纳低量（Greiner low volume) nb 384-孔微量 滴定板中的384-孔HTRF? (Cisbio, Codolet, France)测定形式进行并用于高通量筛 选。在试验化合物（10倍稀释浓度）不存在或存在下，将250 nM GST-标记的端锚聚合 酶-1 (1023-1327 aa)，分别约 250 nM GST-标记的端锚聚合酶-2 (873-1166 aa)和 5 μΜ bio-NAD (Biolog, Life science Inst·, Bremen, Germany)作为共同底物以总体积 5 μL (50 mM HEPES、4 mM 氯化镁、0.05 % 普流罗尼克 F-68、1.4 mM DTT、0.5 % DMS0, pH 7.7) 于30°C孵育90 min。通过加入1 μL 50 mM EDTA溶液停止反应。加入2 μL检测溶液（1.6 μΜ SA-Xlent? (Cisbio, Codolet, France), 7.4 nM 抗-GST-K? (Eu-标记的抗-GST, Cisbio, Codolet, France)在下列中：50 mM HEPES，800 mM KF、0. 1 % BSA、20 mM EDTA、 0· I % CHAPS, pH 7· 0)。于室温下孵育1小时后，用Envision多模阅读器（Perkin Elmer LAS Germany GmbH)以激发波长340 nm (激光模式）和发射波长615 nm和665 nm测量 HTRF。测定发射信号的比率。所用的全值为无抑制剂的反应。所用的药理学零值为在5 μΜ 的最终浓度中的XAV-939 (Tocris)。抑制值（IC50)使用程序Symyx Assay Explorer?或 者来自 GeneData 的 Condosseo? 测定。
[0121] 端锚聚合酶的细胞抑制作用的测定 因为端锚聚合酶已被描述为调节Axin2的细胞水平（Huang等人，2009 !Nature)， Axin2水平的增加被用作在基于Luminex的测定法中测定端锚聚合酶的细胞抑制作用的读 数。
[0122] 将结肠癌细胞系DLDl的细胞以每孔I. 5xl04个细胞接种于96孔板。第二天，用系 列稀释的试验化合物以7个步骤，按0. 3%的最终DMSO浓度一式三份处理细胞。24小时后， 在裂解缓冲液（20mM Tris/HCl pH 8. 0、150mM NaCl、l% NP40、10%甘油）中裂解细胞并通 过96孔滤出板（0. 65Mm)离心清除裂解产物。通过与结合于焚光羧基珠粒（carboxybeads) 的单克隆抗_Axin2抗体（R&D Systems #MAB6078) -起孵育从细胞裂解产物分离Axin2蛋 白。然后，用多克隆抗-Axin2抗体（Cell Signaling #2151)和适宜的PE-荧光第二抗体 特异性检测结合的Axin2。根据制造商说明书，在Luminexa