专利名称：邻氨基苯甲酰胺和其作为vegf受体酪氨酸激酶抑制剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的邻氨基苯甲酰胺衍生物、其制备方法、其在治疗人或动物体的方法中的应用、其单独或与一种或多种其它药学活性化合物组合用于治疗特别是肿瘤性疾病如肿瘤疾病、视网膜病和年龄相关性黄斑变性中的用途；治疗动物、特别是人的上述疾病的方法以及单独或与一种或多种其它药学活性化合物组合的上述化合物在制备用于治疗肿瘤性疾病、视网膜病或年龄相关性黄斑变性的药物制品(药物)中的用途。
已知某些疾病与血管生成失控有关，例如由眼部新血管化导致的疾病如视网膜病(包括糖尿病性视网膜病)、年龄相关性黄斑变性、银屑病、成血管细胞瘤、血管瘤、动脉硬化、炎性疾病如类风湿性或风湿性炎性疾病，尤其是关节炎如类风湿性关节炎，或其它慢性炎性病症如慢性哮喘、动脉或移植后动脉粥样硬化、子宫内膜异位和尤其是肿瘤性疾病，例如所谓的实体瘤和液体瘤(如白血病)。
在胚胎发育、正常生长过程中和多种病理异常和疾病中，在调控血管系统及其组分的生长和分化的网络中心存在称为“血管内皮生长因子”(VEGF)的血管生成因子及其细胞受体，血管生长因子是分子量为46千道尔顿的通过二硫键结合的二聚体糖蛋白(参见Breier，G.等人，Trends inCell Biology6，454-6)。
VEGF受体是跨膜受体酪氨酸激酶。已知有各种类型的VEGF受体，例如VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。
很多人肿瘤、特别是神经胶质瘤和癌，可表达高水平的VEGF及其受体。这已导致了如下假设肿瘤细胞释放的VEGF可以以旁分泌方式刺激毛细血管的生长和肿瘤内皮的增殖，从而通过改善血液供应加速肿瘤的生长。从VEGF活性被抗体抑制的研究中已经获得了VEGF在体内作为肿瘤血管生成因子的直接证据。
血管生成被视为那些生长超过约1-2毫米的最大直径的肿瘤的绝对必要条件；达到此限，氧和营养物质可通过扩散供应至肿瘤细胞。
三种主要机制在抗肿瘤血管生成抑制剂的活性中发挥重要作用1)抑制血管、特别是毛细血管生长进入血管静息(vascular-resting)肿瘤中，结果是由于凋亡和增殖之间达到平衡而没有肿瘤净生长；2)由于缺少出入肿瘤的血流而防止肿瘤细胞转移；和3)抑制内皮细胞增殖，因此避免了由通常覆盖血管内层的内皮细胞对周围组织施加的旁分泌生长刺激作用。
在WO00/27820中述及了属于邻氨基苯甲酰胺类的化合物，据报道这些化合物可抑制VEGF受体酪氨酸激酶的活性、肿瘤的生长和VEGF-依赖性细胞增殖。
令人惊讶的是，现已发现下述式I的邻氨基苯甲酰胺衍生物具有有利的药理学特性并可抑制例如VEGF受体酪氨酸激酶的活性、肿瘤的生长和VEGF-依赖性细胞增殖。
式I的邻氨基苯甲酰胺衍生物适合例如用于治疗疾病，特别适用于在其治疗和预防中对血管生成和/或VEGF受体酪氨酸激酶进行抑制表现出有益作用的疾病。
本发明涉及式I的邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物和互变异构体， 其中R1代表H或低级烷基，R2代表H或低级烷基，R3代表全氟代低级烷基，且
X是O或S，以及上述邻氨基苯甲酰胺、它们的N-氧化物和它们的互变异构体的盐。
除非另外说明，上下文中所使用的一般术语在本公开内容中优选具有以下含义前缀“低级”表示具有最多7个且包括7个碳原子、尤其是最多4个且包括4个碳原子的基团，所述基团是直链或具有一个或多个分支的支链。
当复数形式用于化合物、盐等时，也表示单个化合物、盐等。
任何不对称碳原子(例如在其中R9是低级烷基的式I化合物中的不对称碳原子)可以以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在，优选以(R)-或(S)-构型存在。因此，化合物可以以异构体混合物或纯异构体形式、优选以对映异构体纯的非对映异构体形式存在。
本发明还涉及式I化合物的可能的互变异构体。在此所用的术语“互变异构体”特别涉及其中R1代表H且X是O或S的式I化合物，这些化合物若非全部也在一定程度上以如下所示的互变异构形式(I-互变异构体)存在，其中其它基团和符号具有本文所定义的含义。
(I-互变异构体)在优选实施方案中，烷基具有最多12个碳原子且特别地为低级烷基。
低级烷基优选为具有1且包括1至7且包括7个碳原子、优选1且包括1至4且包括4个碳原子的烷基，其为直链或支链；优选地，低级烷基是丁基如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、丙基如正丙基或异丙基、乙基或优选甲基。
在此所用的术语“全氟代低级烷基”意指其中所有的氢原子均被氟原子取代的低级烷基。
卤素特别地是氟、氯、溴或碘，特别是氟、氯或溴。
所述盐是由具有碱性氮原子的式I化合物优选与有机或无机酸以例如酸加成盐、特别是可药用盐的形式生成。适宜的无机酸是例如氢卤酸如盐酸、硫酸或磷酸。适宜的有机酸是例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸如谷氨酸或天冬氨酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水扬酸、4-氨基水扬酸、苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲-或乙-磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-，3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基氨基磺酸或其它有机质子酸如抗坏血酸。
对于分离或纯化目的，也可能使用不可药用的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途，只能使用可药用的盐或游离化合物(适合时以药物制剂的形式使用)，因此优选这些化合物。
鉴于游离形式的新化合物和其盐形式、包括那些例如在新化合物纯化或鉴别中可用作中间体的盐之间的密切关系，上下文中任何对游离化合物的提及应理解为也同时提及相应的盐为宜。
如上下文中所述，式I化合物和其N-氧化物具有重要的药理学特性。
本发明的化合物作为VEGF-受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效可证实如下抗VEGF-受体酪氨酸激酶活性试验。使用Flt-1 VEGF-受体酪氨酸激酶进行该试验。详细过程如下室温下，将30μl激酶(10ng Flt-1激酶结构域，Shibuya等人，Oncogene 5，519-24)的20mM Tris·HClpH 7.5溶液、3mM二氯化锰(MnCl2)、3mM氯化镁(MgCl2)、10μM钒酸钠、0.25mg/ml聚乙二醇(PEG)20000、1mM二硫苏糖醇和3μg/μl聚(谷氨酸，酪氨酸)4∶1(Sigma，Buchs，瑞士)、8μM[33P]-ATP(0.2μCi)、1％二甲亚砜和0至100μM供试化合物一起温育10分钟。然后通过加入10μl 0.25M乙二胺四乙酸盐(EDTA)pH 7终止反应。用多道分液器(LAB SYSTEMS，美国)将20μl等分试样通过Millipore微滴过滤器歧管加至PVDF(＝聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，美国)上，并与真空连接。完全除去液体后，将膜在含有0.5％磷酸(H3PO4)的浴中连续洗涤4次并用乙醇洗涤一次，振摇下每次温育10分钟，然后置于Hewlett Packard TopCount Manifold中，加入10μl Microscint(β-闪烁计数液)后测定放射活性。通过对每种化合物在三个浓度(通常是0.01、0.1和1μmol)下的抑制百分比进行线性回归分析确定IC50值。发现式I化合物的IC50值为0.001至1μM、优选0.001至0.1μM。
本发明化合物的抗肿瘤功效可在体内证实如下裸鼠异种移植模型中的体内活性将雌性BALB/c裸鼠(8-12周龄，Novartis Animal Farm，Sisseln，瑞士)置于无菌条件下，自由饮水和进食。通过给小鼠皮下注射肿瘤细胞(例如Du 145前列腺癌细胞系(ATCCNo.HTB 81，参见Cancer Research37，4049-58(1978))或通过在异氟烷(Forene，Abbott，瑞士)麻醉下用13号套针在小鼠的左肋皮下植入肿瘤碎片(约25mg)以诱发肿瘤。一旦肿瘤的平均体积达到100mm3就立即开始供试化合物治疗。每周2至3次并在末次治疗后24小时通过测定两个垂直轴的长度测量肿瘤的生长。按照已公开的方法计算肿瘤体积(参见Evans等人，Brit.J.Cancer45，466-8)。将抗肿瘤功效确定为治疗动物肿瘤体积的平均增加除以未治疗动物(对照)肿瘤体积的平均增加再乘以100，表示为T/C％。将最小平均肿瘤体积与治疗开始时的平均肿瘤体积相比报道肿瘤消退(以％给出)。供试化合物每日管饲施用。
或者，也可以以相同方式使用其它细胞系，例如-MCF-7乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 22；参见J.Natl.Cancer Inst.(Bethesda)51，1409-16)；-MDA-MB 468乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 132；参见In Vitro14，911-15)；-MDA-MB 231乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 26；参见J.Natl.CancerInst.(Bethesda)53，661-74)；-Colo 205结肠癌细胞系(ATCC No.CCL 222；参见Cancer Res.38，1345-55)；-HCT 116结肠癌细胞系(ATCC No.CCL 247；参见Cancer Res.41，1751-6)；-DU 145前列腺癌细胞系DU 145(ATCC No.HTB 81；参见Cancer Res.37，4049-58)；和-PC-3前列腺癌细胞系PC-3(ATCC No.CRL 1435；参见Cancer Res.40，524-34)。
用另一种体外细胞实验可确证VEGF-诱发的KDR-受体自磷酸化抑制作用在6-孔细胞培养板上，将固定表达人VEGF受体(KDR)的转染CHO细胞接种于完全培养基(含有10％胎牛血清＝FCS)中，并于37℃、5％CO2下培养直至呈约80％的融合。然后将供试化合物用培养基(无FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)稀释并加至细胞中。(对照包含无供试化合物的培养基)。于37℃下培养2小时后，加入重组VEGF；VEGF的终浓度是20ng/ml。再于37℃下培养5分钟后，将细胞用冰冷的PBS(磷酸盐缓冲的盐水)洗涤两次并立即在每孔100μl的溶胞缓冲液中进行细胞溶解。然后将溶胞产物离心以除去细胞核，使用市售蛋白分析仪(BIORAD)测定上清液的蛋白浓度。之后，立即使用溶胞产物或必要时贮存于-20℃下。
用夹心ELISA法测定KDR-受体的磷酸化将针对KDR的单克隆抗体(例如Mab 1495.12.14；由H.Towbin制备)固定于黑色ELISA板(Packard的OptiPlateTMHTRF-96)上。然后洗板并用1％BSA的PBS溶液饱和剩余的游离蛋白结合位点。然后，将细胞溶解物(每孔20μg蛋白)在这些板中于4℃下与和碱性磷酸酯酶偶联的抗磷酸酪氨酸抗体(得自TransductionLaboratories的PY20AP)一起培养过夜。然后(再次洗板并且)用发光AP底物(CDP-Star，即用，Emerald II，TROPIX)证明抗磷酸酪氨酸抗体与捕获的磷酸化受体的结合。在Packard Top Count Microplate闪烁计数仪(Top Count)上测定发光。阳性对照(用VEGF激发)信号和阴性对照(不用VEGF激发)信号之差相当于VEGF-诱发的KDR受体磷酸化(＝100％)。计算供试物质的活性，以VEGF-诱发的KDR受体磷酸化的百分抑制率表示，其中诱发半数最大抑制作用的物质浓度定义为ED50(50％抑制的有效剂量)。
式I化合物或其N-氧化物也在不同程度上抑制其它由营养因子介导的参与信号转导的酪氨酸激酶，例如Src家族的激酶，特别是c-Src激酶、Lck和Fyn；还有EGF家族的激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰岛素样生长因子受体激酶(IGF-1激酶)，特别是PDGF受体酪氨酸激酶家族的成员如PDGF受体激酶、CSF-1受体激酶、Kit受体激酶和VEGF-受体激酶；还有丝氨酸/苏氨酸激酶，所有这些均在哺乳动物细胞、包括人细胞的生长调控和转化中发挥作用。
基于这些研究，本发明的式I化合物特别地对依赖于蛋白激酶的病症、特别是增殖性疾病表现出治疗功效。
式I化合物在治疗炎性风湿性或类风湿性疾病例如关节炎中的有用性可证实如下用熟知的大鼠佐剂性关节炎模型(Pearson，Proc.Soc.Exp.Biol.91，95-101(1956))试验式I化合物或其盐的抗关节炎活性。可以用两种不同的给药方案治疗佐剂性关节炎佐剂免疫化时开始给药(预防给药)；或自关节炎反应已经建立时的第15天给药(治疗给药)。优选使用治疗给药方案。作为对比，在单独的一组中施用环加氧酶-2抑制剂，如5-溴-2-(4-氟苯基)-3-[4-(甲基磺酰基)苯基]噻吩或双氯芬酸。
具体而言，在雄性Wistar大鼠(每组5只动物，重约200g，供自IffaCredo，法国)的尾根部i.d.(皮内)注射0.1ml含有0.6mg冻干的热灭活结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的矿物油。从第15天至第22天用供试化合物(口服3、10或30mg/kg，每天一次)或赋形剂(水)治疗大鼠(治疗给药方案)。实验结束时，用千分尺测量跗关节肿胀。以用赋形剂治疗的关节炎动物(0％抑制)和用赋形剂治疗的正常动物(100％抑制)为参照，计算足肿胀抑制百分数。
基于这些研究，式I化合物惊人地适合用于治疗炎性(尤其是风湿性或类风湿性)疾病。
基于其作为VEGF-受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效，式I化合物主要抑制血管的生长，因此例如对许多与血管生成失控相关的疾病有效，尤其是眼部新血管化导致的疾病，尤其是视网膜病如糖尿病性视网膜病或年龄相关性黄斑变性、银屑病、成血管细胞瘤如血管瘤、肾小球膜细胞增殖疾病如慢性或急性肾病，例如糖尿病性肾病、恶性肾硬化、血栓性微血管病综合征(thrombotic micro-angiopathy syndrome)或移植排斥，或尤其是炎性肾病如肾小球肾炎，尤其是肾小球膜增殖性肾小球肾炎、溶血性尿毒症综合征、糖尿病性肾病、高血压性肾硬化(hypertensive nephrosclerosis)、动脉粥样化、动脉再狭窄、自身免疫疾病、急性炎症、纤维化疾病(例如肝硬变)、糖尿病、子宫内膜异位、慢性哮喘、动脉或移植后动脉粥样硬化、神经变性疾病以及尤其是肿瘤性疾病如白血病，尤其是急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病和慢性髓性白血病，和其它“液体肿瘤”，尤其是那些表达c-kit、KDR或flt-1的液体瘤，以及实体肿瘤，尤其是乳腺癌、结肠癌、肺癌(尤其是小细胞肺癌)、前列腺癌或卡波西氏肉瘤。式I化合物(或其N-氧化物)可抑制肿瘤生长，且尤其适于预防肿瘤的转移性扩散和微小转移灶的生长。
式I化合物可单独施用或与一种或多种其它治疗剂组合施用，可能的组合治疗采取固定组合的形式，或者本发明化合物和一种或多种其它治疗剂交错施用或彼此独立地施用，或者固定组合与一种或多种其它治疗剂组合施用。此外，式I化合物还可以与化学治疗、放射治疗、免疫治疗、外科手术或它们的组合联合施用尤其对于肿瘤的治疗。如上所述，在其它治疗方案中，长期治疗与辅助治疗同样是可能的。其它可能的治疗是在肿瘤消退后维持病人的状态，或甚至例如在具有罹患肿瘤危险的患者中进行化学预防治疗。
用于可能的组合的治疗剂尤其为一种或多种细胞抑制或细胞毒性化合物，例如选自下组的一种或几种化疗剂，其包括但不限于多胺生物合成抑制剂、蛋白激酶抑制剂—尤其是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶如蛋白激酶C抑制剂或酪氨酸蛋白激酶如表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂—、细胞因子、负生长调节剂如TGF-β或IFN-β、芳香酶抑制剂、SH2结构域与磷酸化蛋白相互作用抑制剂、抗雌激素剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷基化剂、抗肿瘤抗代谢剂、铂化合物、其它抗血管生成化合物、促黄体生成素释放素激动剂、抗雄激素剂、双膦酸类化合物和曲妥单抗(trastuzumab)。
对于下文提及的优选的式I化合物及其N-氧化物，可以合理地使用上文提及的通用定义的取代基定义，例如以便用更具体的定义或尤其是用具有优选特征的定义代替更通用的定义。
此外，本发明涉及其中的基团和符号具有如上定义的含义的式I化合物或其N-氧化物或可药用的盐在制备用于治疗视网膜病或年龄相关性黄斑变性的药物产品中的用途。
此外，本发明涉及治疗对抑制VEGF-受体酪氨酸激酶活性应答的肿瘤性疾病的方法，其包括向需要这种治疗的温血动物施用对所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可药用的盐，其中的基团和符号具有如上定义的含义。
此外，本发明涉及治疗视网膜病或年龄相关性黄斑变性的方法，其包括向需要这种治疗的温血动物施用对所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可药用的盐，其中的基团和符号具有如上定义的含义。
本发明特别涉及式I化合物，其中R1代表H或低级烷基，R2代表H或低级烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，其N-氧化物或互变异构体，以及上述化合物、其N-氧化物或其互变异构体的盐。
优选地，本发明特别涉及式I化合物，其中
R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，其互变异构体，以及上述化合物或其互变异构体的盐。
更具体而言，优选以下式I化合物及其互变异构体2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，2-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，和2-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺，或上述化合物或其互变异构体的盐。
本发明的化合物可通过本身已知的方法制备，尽管所述方法至今尚未应用于本发明的新化合物，尤其使用特征如下的方法为了合成其中R1代表低级烷基，其余的符号R2和R3如式I化合物中所定义的式I化合物，在还原剂存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定义，与式III的羰基化合物反应， 其中X代表O或S且R1是低级烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能团被保护的形式存在，必要时和/或以盐形式存在，条件是存在成盐基团且盐形式的反应是可能的；
其中式I化合物的被保护衍生物中的任何保护基团均被除去；并且如果需要，将可获得的式I化合物转化为另一种式I化合物或其N-氧化物，将游离的式I化合物转化为盐，将可获得的式I化合物的盐转化为游离化合物或另一种盐，和/或将式I化合物的异构体混合物拆分为单独的异构体。
还原性烷基化详述在以下更详细的方法描述中，除非另外说明，R1、R2、R3和X如式I化合物中所定义。
式III的羰基化合物也可以以活性衍生物的形式存在；但是，优选游离的醛或酮。
式III化合物的活性衍生物为例如相应的亚硫酸氢盐加合物或尤其是式III化合物与醇例如低级烷醇形成的半缩醛、缩醛、半缩酮或缩酮；或式III化合物与硫醇例如低级链烷硫化物形成的硫缩醛或硫缩酮。
还原性烷基化优选如下进行于常压或0.1至10兆帕(Mpa)的压力下、在催化剂存在下进行氢化，所述催化剂尤其是贵金属催化剂如铂或尤其是钯，其优选键合于载体材料如碳上，或重金属催化剂如阮内镍，或者在适宜的酸、优选较弱的酸如低级链烷羧酸、尤其是乙酸或磺酸如对甲苯磺酸存在下，借助复合氢化物进行还原，如硼氢化物，尤其是碱金属氰硼氢化物，例如氰基硼氢钠；所述反应在有水或无水存在下、在常规溶剂中进行，例如醇如甲醇或乙醇，或醚例如环醚如四氢呋喃。
保护基如果式II或III化合物中有一个或多个其它官能团例如羧基、羟基、氨基或巯基由于不应参与反应而被保护或需要被保护，那么这些保护基是肽化合物合成和头孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的合成中通常使用的基团。
保护基团可以已经存在于前体中，应保护有关官能团不发生不必要的副反应如酰化、醚化、酯化、氧化、溶剂分解以及类似反应。保护基团的特征在于它们例如在类似于生理条件的条件下易于除去，即没有不期望的副反应，通常是通过溶剂分解、还原、光解或者还通过酶活性除去，且不出现于终产物中。专业人员知道或可容易地确定哪些保护基团适用于上下文中所提及的反应。
用所述保护基团对上述官能团进行保护、保护基团本身以及它们的除去反应在以下文献中述及例如标准参考书如J.F.W.McOmie，“有机化学中的保护基”，Plenum出版社，伦敦和纽约1973；T.W.Greene，“有机合成中的保护基”，Wiley，纽约1981；“肽”，第3卷(编辑E.Gross和J.Meienhofer)，Academic出版社，伦敦和纽约1981；“Methoden derorganischen Chemie”(有机化学方法)，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，斯图加特1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit，“Aminosuren、Peptide、Proteine”(氨基酸、肽、蛋白质)，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982；以及Jochen Lehmann，“Chemieder KohlenhydrateMonosaccharide und Derivate”(碳水化合物化学单糖及其衍生物)，Georg Thieme Verlag，斯图加特1974。
其它方法步骤具有成盐基团的式I化合物的盐可以以本身已知的方法制备。因此，通过用酸或用适宜的阴离子交换试剂进行处理可获得式I化合物的酸加成盐。具有两个酸分子的盐(例如式I化合物的二卤化物)也可转化为每个化合物具有一个酸分子的盐(例如单卤化物)；这可以通过以下方法完成加热至熔融，或例如在高真空、升高的温度例如130至170℃下以固态形式进行加热，从每分子式I化合物中消除1分子的酸。
盐通常可转化为游离化合物，例如通过用适宜的碱性试剂处理，例如碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物，通常是碳酸钾或氢氧化钠。
由式II与式III化合物反应得到的式I的邻氨基苯甲酰胺，其中R1代表低级烷基且其余的符号R2和R3如式I化合物中所定义，可按照以下方法进一步反应，得到其中R1代表H的式I的邻氨基苯甲酰胺。在45℃至70℃的温度下、在适宜的溶剂例如卤代烷烃如氯仿中，用碘化三甲基硅烷将其中R1代表低级烷基的式I的邻氨基苯甲酰胺处理约20至35小时，任选随后用甲醇处理。
一般方法条件在此所述的所有方法步骤均可在已知的反应条件下进行，优选在那些特别提及的条件下进行；不存在或通常存在优选对所用试剂呈惰性且能溶解它们的溶剂或稀释剂；不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂，例如离子交换剂，通常是例如H+形式的阳离子交换剂，这取决于反应和/或反应物的类型；温度为降低、正常或升高的温度，例如-100℃至约190℃、优选约-80℃至约150℃，例如-80至-60℃下、室温、-20至40℃或所用溶剂的沸点；压力为大气压力下或在密闭容器中，其中有压力为宜；和/或在惰性气氛、例如在氩气或氮气下。
如果含有成盐基团，所有起始化合物和过渡物均可以以盐存在。在上述化合物的反应过程中也可以以盐存在，只要反应不会因此受到干扰即可。
除非在方法描述中另外指明，可从中选择的适于所述反应的溶剂包括例如水；酯，通常是低级烷基-低级链烷酸酯，例如二乙基乙酸酯；醚，通常为脂肪族醚，例如二乙醚，或环醚，例如四氢呋喃；液体芳香族烃，通常是苯或甲苯；醇，通常是甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，通常是乙腈；卤代烃，通常是二氯甲烷；酰胺，通常是二甲基甲酰胺；碱，通常是杂环氮碱，例如吡啶；羧酸，通常是低级链烷羧酸，例如乙酸；羧酸酐，通常是低级链烷酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链烃，通常是环己烷、己烷或异戊烷，或这些溶剂的混合物，例如水溶液。上述溶剂混合物也可以用于例如色谱法或分配处理中。
式I化合物、包括它们的盐也可以以水合物的形式获得，或者它们的晶体可以包括例如结晶所用的溶剂(以溶剂合物存在)。
在优选实施方案中，根据实施例中定义的方法和方法步骤或其类似方法和方法步骤制备了式I化合物。
活性成分的剂量取决于多种因素，包括患者的类型、种属、年龄、体重、性别和医学状况；待治疗病症的严重性；施用途径；患者的肾功能和肝功能以及所用的具体化合物。一般的内科医生、临床医生或兽医可容易地确定并开具预防、抵抗或抑制病症发展所需的有效量的药物。为了在使药物浓度处于可产生功效但无毒性的范围内的过程中获得最佳精度，需要掌握药物在靶部位的动力学。这包括药物的分布、平衡和消除因素。
本发明还涉及药物组合物，其包含有效量的、尤其是治疗以上提及的疾病之一有效量的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，以及适于局部、经肠例如口服或直肠或经胃肠外施用的、可为有机或无机、固体或液体的可药用载体。
口服施用特别地使用片剂或明胶胶囊剂，其包含活性成分以及稀释剂，例如乳糖、右旋糖、甘露醇和/或甘油，和/或润滑剂和/或聚乙二醇。片剂还可以包含粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉如玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，并且如果需要还包含崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其盐如海藻酸钠，和/或泡腾混合物，或吸收剂、染料、矫味剂和甜味剂。也可能以胃肠外可施用的组合物形式或以输液形式使用本发明的药理学活性化合物。药物组合物可以是无菌的和/或可包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。本发明的药物组合物，如果需要可包含其它药理学活性物质，所述组合物可通过本身已知的方法制备，例如通过常规的混合、制粒、成型、溶解或冻干方法制备，且可包含约1％至95％、尤其是约1％至约20％的活性成分。
此外，本发明涉及用于治疗温血动物、包括人的肿瘤的药物组合物，其包含抗肿瘤有效剂量的上述式I化合物或所述化合物的可药用盐以及药用载体。
另外，本发明提供了在治疗人或动物体的方法中使用的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述化合物的可药用盐。
本发明还涉及式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述化合物的可药用盐的用途，用于制备用来治疗肿瘤性疾病、视网膜病或年龄相关性黄斑变性的药物产品。
除此之外，本发明还教导了治疗对抑制VEGF-受体酪氨酸激酶活性应答的肿瘤性疾病的方法，其包括向需要这种治疗的温血动物施用抗所述疾病有效量的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或互变异构体的可药用盐。
起始原料新的起始原料和/或中间体及其制备方法也是本发明的主题。在优选实施方案中，使用了所述起始原料，并选择了能够获得优选化合物的反应条件。
式III、IV和V的起始原料是已知的，其市售可得或可根据本领域已知的方法或类似方法合成。
例如，式II化合物可通过还原式IV的硝基化合物而制备， 其中R2和R3具有式I下所给出的含义。
还原优选在适宜的还原剂如氯化亚锡(II)或氢存在下、在适合的催化剂如阮内镍(那么优选在压力如2至20巴下使用氢)或PtO2存在下，于适合的溶剂例如醇如甲醇中进行。反应温度优选为0至80℃、尤其是15至30℃。
式IV的硝基化合物可通过使式VI的活化的酸衍生物，
其中Y是卤素或另一种适宜的离去基团，与式V的胺反应而获得， 其中R2和R3如式I下所定义，例如在偶联剂如二环己基碳二亚胺存在下、在0℃至50℃、优选室温下进行。
所有其余的起始原料均是已知的、能够根据已知方法制备或市售可得；具体而言，它们可用实施例中所述的方法进行制备。
在起始原料的制备中，必要时应对不参与反应的现有官能团进行保护。优选的保护基、它们的引入和除去在“保护基”项下或实施例中述及。
所有其余的起始原料均是已知的、能够根据已知方法制备或市售可得；具体而言，它们可用实施例中所述的方法进行制备。
以下实施例用于阐述本发明，但不限制本发明的范围。
温度以摄氏度(℃)计。除非另外说明，反应均在室温下进行。
实施例参比实施例12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(未作权利要求)在25℃下、30分钟内，向搅拌着的乙酸(3.8mL)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士；7.80g，57mmol)和2-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(步骤1.2；13.65g，38mmol)于甲醇(380mL)中的混合物中逐份加入氰基硼氢钠(95％，8.80g，133mmol)。将混合物搅拌16小时。减压下蒸除溶剂，得到的残余物用饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)处理并用二氯甲烷(3×150mL)萃取。将合并的萃取液干燥(Na2SO4)、过滤，减压下蒸除溶剂，得到的粗产物经硅胶柱色谱纯化，用5％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，并用乙醚-己烷重结晶，得到标题化合物，为米黄色结晶状固体，m.p.101-103℃。
步骤1.12-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在室温下，将3-氨基-6-溴三氟甲苯(Fluka，Buchs，瑞士；24.0g，100mmol)的乙酸乙酯(240mL)溶液加入搅拌着的氢氧化钠水溶液(1M，110mL)中。然后在30分钟内向搅拌的溶液中滴加2-硝基苯甲酰氯(Fluka，Buchs，瑞士；14.5mL，110mmol)的乙酸乙酯(150mL)溶液进行处理。然后在环境温度下将所得混合物搅拌30分钟。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物，随后将合并的萃取液依次用盐酸(2M，2×100mL)、水(2×100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×100mL)和饱和氯化钠水溶液(1×100mL)洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并于减压下蒸除溶剂，得到的粗产物经乙酸乙酯-己烷重结晶纯化，得到标题化合物，为米黄色结晶状固体，m.p.157-158℃。
步骤1.22-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在21℃、大气压下，将2-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(中间体1a；32g，82mmol)的甲醇(1000mL)溶液用阮内镍(6g)氢化。7小时后吸收了计算量的氢。过滤混合物并在减压下蒸除溶剂，得到的粗产物经乙醚-己烷重结晶纯化，得到标题化合物，为无色结晶状固体，m.p.142-144℃。
实施例22-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐通过类似于实施例1所述的方法、使用步骤2.2的中间体和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士)制得标题化合物；m.p.133-135℃。
步骤2.12-硝基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺类似于步骤1.1、使用3-(三氟甲基)苯胺(Aldrich，Buchs，瑞士)制得标题化合物；m.p.134-135℃。
步骤2.22-氨基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺类似于步骤1.2、使用2-硝基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步骤2.1)制得标题化合物；m.p.132-133℃。
实施例32-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺通过类似于实施例1所述的方法、使用步骤3.2的中间体和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Aldrich，Buchs，瑞士)制得标题化合物；m.p.134-135℃。
步骤3.12-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺类似于步骤1.1、使用2-甲基-3-(三氟甲基)苯胺(Fluorochem，Derbyshire，英格兰)制得标题化合物；m.p.188-189℃。
步骤3.22-氨基-N-[2-甲基-(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺类似于步骤1.2、使用2-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步骤3.1)制得标题化合物；m.p.128-129℃。
参比实施例42-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[4-丙炔基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(未作权利要求)在60℃、氩气氛下，将2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步骤4.1；1.10g，2.5mmol)和碘化三甲基硅烷(Fluka，Buchs，瑞士；1.0mL，7.5mmol)在氯仿(30mL)中的混合物搅拌16小时。冷却混合物，然后用甲醇(2mL)处理并在室温下搅拌10分钟。减压下蒸除溶剂，残余物用氨水溶液(5％，100mL)处理，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的萃取液用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并在减压下蒸除溶剂，得到的粗产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯洗脱，用热乙酸乙酯-己烷重结晶，得到标题化合物，为无色结晶状固体；m.p.208-212℃。
步骤4.12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)-苯基]苯甲酰胺在25℃下，向搅拌着的2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(参比实施例1；3.98g，8.3mmol)的干燥甲苯(200mL)溶液中通氩气20分钟。然后加入三丁基-1-丙炔基锡烷(80％，4.1g，9.96mmol)和四(三苯基膦)钯(O)(260mg)，所得混合物在氩气氛下于100℃加热17小时。然后将混合物冷却、用氢氧化钠水溶液(0.1M，85mL)处理并通空气2小时。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物。将有机相依次用水(2×40mL)和饱和氯化钠水溶液(1×40mL)洗涤、干燥(Na2SO4)、过滤并在减压下蒸除溶剂，得到的粗产物经硅胶柱色谱纯化，用33％乙酸乙酯/己烷洗脱，用乙醚-己烷重结晶，得到标题化合物，为浅黄色结晶状固体；m.p.123-124℃。
实施例52-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺通过类似于实施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(实施例2)制得标题化合物；m.p.171-172℃。
实施例62-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺通过类似于实施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(实施例3)制得标题化合物；m.p.191-192℃。
实施例7软胶囊剂如下制备5000粒软明胶胶囊，每粒包含0.05g以上实施例提及的式I化合物之一作为活性成分组成活性成分 250gLauroglycol2升制备方法将粉状活性成分混悬于Lauroglycol(月桂酸丙二醇酯，GattefosséS.A.，里昂，法国)中并于湿法粉碎机中研磨，获得约1至3μm的粒径。然后用胶囊填充机将每份0.419g的混合物灌入软明胶胶囊中。
权利要求
1.式I的邻氨基苯甲酰胺， 其中R1代表H或低级烷基，R2代表H或低级烷基，R3代表全氟代低级烷基，且X是O或S，或其N-氧化物或互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互变异构体的盐。
2.权利要求1的式I的邻氨基苯甲酰胺，其中R1代表H或低级烷基，R2代表H或低级烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其N-氧化物或互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互变异构体的盐。
3.权利要求1的式I的邻氨基苯甲酰胺，其中R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺或其互变异构体的盐。
4.权利要求1的式I的邻氨基苯甲酰胺，其选自2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺盐酸盐，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，2-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，和2-[[(1，6-二氢-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺，或其N-氧化物或互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互变异构体的盐。
5.权利要求1至4的任一项的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述化合物的可药用盐，其用于治疗人或动物体的方法中。
6.式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体或所述化合物的可药用盐的用途，其中的基团和符号具有权利要求1中所定义的含义，用于制备用来治疗肿瘤性疾病的药物产品。
7.式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体或所述化合物的可药用盐的用途，其中的基团和符号具有权利要求1中所定义的含义，用于制备用来治疗视网膜病或年龄相关性黄斑变性的药物产品。
8.治疗对抑制VEGF-受体酪氨酸激酶活性应答的肿瘤性疾病的方法，其包括向需要这种治疗的温血动物施用有效对抗所述疾病量的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述邻氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互变异构体的可药用盐，其中的基团和符号具有权利要求1中所定义的含义。
9.药物制剂，其包含权利要求1至4的任一项的式I的邻氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互变异构体，或所述化合物的可药用盐或其水合物或溶剂合物，以及至少一种可药用载体。
10.制备式I的邻氨基苯甲酰胺的方法， 其中R1代表低级烷基且其余的符号R2和R3如权利要求1所定义，其中在还原剂存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定义，与式III的羰基化合物反应， 其中X代表O或S且R1是低级烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能团被保护的形式存在，必要时和/或为盐的形式，条件是存在成盐基团且盐形式的反应是可能的；其中式I化合物的被保护衍生物中的任何保护基均被除去；并且如果需要，将可获得的式I化合物转化为另一种式I化合物或其N-氧化物，将游离的式I化合物转化为盐，将可获得的式I化合物的盐转化为游离化合物或另一种盐，和/或将式I化合物的异构体混合物拆分成单独的异构体。
全文摘要
本发明涉及式(I)的邻氨基苯甲酰胺衍生物，其中R
文档编号A61P15/00GK1585750SQ02822209
公开日2005年2月23日 申请日期2002年11月7日 优先权日2001年11月8日
发明者G·博尔德, P·菲雷, P·W·曼利 申请人:诺瓦提斯公司