大环激酶抑制剂的制作方法

专利名称：：大环激酶抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用作激酶抑制剂的化合物和它们的制备方法和用途。
背景技术：
：蛋白激酶("激酶")构成了一大类酶，此类酶使用三磷酸腺苦("ATP")作为磷酸酯的来源将其它蛋白质磷酸化。它们包括丝氨酸激酶和酪氨酸激酶，这两类酶可以分别将其靶蛋白上的丝氨酸和酪氨酸残基上的羟基磷酸化。激酶也可以有双重功能，即它们能将丝氨酸和酪氨酸残基两者都磷酸化。靶蛋白可以是酶、膜通道或是其它蛋白质。细胞活动通常受外部信号分子(例如，激素或促分裂原(mitogen))控制，这些外部信号分子与细胞表面同源受体的结合激发或抑制各种细胞内事件。起始的信号分子-受体相互作用引发细胞内其它蛋白质相互作用的信号纟及耳关方文大(signalingcascade)或纟田月包"[言号4专导途径(cell-signalingpathway),这通常涉及到激酶介导的蛋白质磷酸化作用(信号传导)。因此，在分子水平上，细胞活动受相关激酶和其它蛋白质如转录因子的磷酸化作用(和去磷酸化作用)调节。像这样受调节的细胞活动包括细胞生长、细胞分裂和细胞凋亡。许多有害的细胞增殖疾病(例如癌症、牛皮癣(psoriasis)、再狭窄(restenosis))的特征在于信号级联放大中断，导致细胞增殖变得不受抑制。通常中断是由位于信号级联放大上游蛋白质的单突变引起的，这影响到下游多种激酶的调节。因此，抑制受影响的一种或多种激酶已经发展为治疗癌症的基石出(Sausville"a/.,iev.尸/zarmaco/.7bx/co/.2003,43,199-231,"SignalTransduction-DirectedCancerTreatments，，)。二羟基苯曱酸内酯("RALs")是天然产物的一个家族，其具有含有二羟基苯曱酸残基的14元内酯环，一个实例为寄端霉素(hypothemycin):寄端霉素存在一些公开内容，其显示RALs以及其半合成或者合成的类似物或衍生物是激酶抑制剂，并因此用于治疗特征为异常激酶活性的疾病。参见例如，Giese"a/.,US5,795,910(1998);Chiba"a/.，US2004/0224493Al(2004);和Santi"a/.,US2006/0079494Al(2006)。本发明提供了可视为RAL类似物的新颖的化合物，这些化合物是有效的激酶抑制剂，并且用于治疗可通过抑制激酶来治疗的疾病或病症。
发明内容在一个实施方案中，本发明提供了具有所示式i的化合物及其药用酯、盐、溶剂化物及其水合物，其中R'为H、C广C4烷基、C2-C4烯基或(32-(:4炔基；R2为H、卤素、羟基、保护的羟基、-OR'2、-SRU、-NRUr'3、-X'(CH2)pX2-R:或者是任选被羟基、保护的羟基、卣素、氨基、保护的氨基或-X'(CH2)pX、R取代的烷基；R"和R^在其每次出现时独立为H或任选取代的脂肪族部分、任选Jf又代的环状脂肪族部分、任选取代的杂环脂肪族部分、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基或者N或S保护基，或者1112和1113—起形成含有1至4个碳原子和1至3个氮原子或者氧原子的饱和或不饱和的环；1112和1113中的每个任选被以下一个或多个取代基取代羟基、保护的羟基、烷氧基、氨基、保护的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卣素；Xi和X'不存在，或各自独立为氧、-NH或者-N(烷基)，或者其中X2-R14一起为N3或杂环脂肪族部分；p是l至10的整数，条件是只有当X'和X"中的至少一个不存在时，p其中可以是l;以及R"为H、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基，或者为-(OO)NHR15、-(CO)OR"或-(00)R15，其中R"每次出现时独立地为H或脂肪族部分、环状脂肪族部分、杂环脂肪族部分、芳基部分或者杂芳基；或者R14为-S02(R,，其中R"为脂肪族部分；其中R14、R"和R"中的一个或者多个任选被以下一个或多个取代基取代羟基、保护的羟基、烷氧基、氨基、保护的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卣素；R3为H、羟基保护基、C广Q烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、-COCd-C^烷基)、-CO(C2-C4烯基)、或者-CO(C2-C4炔基)；W为H或者卣素；以及R5为H、d-Q烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基，或者R'和R5—起形成(CH2)n，其中n为1、2、3或4。在另一实施方案中，本发明提供了用于治疗患有特征为细胞增殖的疾病的受试者的方法，其中所述增殖细胞具有活性异常升高的至少一种激酶，所述方法包括对受试者给予治疗有效量的本发明化合物。优选地，如此治疗的疾病为黑素瘤(melanoma)、结肠癌(coloncancer)或乳&，癌(breastcancer),尤其是结肠癌或乳腺癌。在另一实施方案中，本发明提供了用于抑制细胞增殖的方法，其中所述增殖细胞具有活性异常升高的至少一种激酶，所述方法包括使细胞与本发明的化合物接触。在另一实施方案中，本发明提供了用于抑制具有活性位点半胱氨酸残基的激酶的方法，所述方法包括使激酶与本发明的化合物接触。在另一实施方案中，本发明提供了本发明的化合物在制备用于治疗特征为细胞增殖的疾病的药物中的用途，其中所述增殖细胞具有活性异常升高的至少一种激酶。附图1、2、3a和3b表示制备用于合成本发明化合物的中间体的方案。附图4表示制备本发明中化合物的方案，利用了每个附图1至附图3中制备的中间体。附图5和附图6分别表示本发明的一种化合物的&NMR和l3CNMR光语。附图7和附图8分别表示本发明另一化合物的^NMR和"CNMR光谱。具体实施方式定义"脂肪族'，表示含有特定数目的碳原子(例如，如在"C3脂肪族,""C,-C5脂肪族,"或"d至Cs脂肪族,"中，后两个词是同义的，表示含有1至5个碳原子的脂肪族部分)的直链或支链、饱和或不饱和的非芳香烃部分，或者碳原子的数目未指定时，指1至4个碳原子(在不饱和脂肪族部分情况中为2至4个碳原子)。"烷基"表示饱和的脂肪族部分，这与指定适用的碳原子数目的惯例相同。举例来说，d-C4烷基部分包括但不限于曱基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、叔丁基、l-丁基、2-丁基等等。"烯基"表示含有至少一个碳-碳双键的脂肪族部分，这与指定适用的碳原子数目的惯例相同。举例来说，C2-C4烯基部分包括但不限于乙烯基(乙烯基(vinyl))、2-丙烯基(烯丙基或丙-2-烯基)、顺式-1-丙烯基、反式-l-丙烯基、￡-(或Z-)-2-丁烯基、3-丁烯基、1,3-丁二烯基(丁-1，3-二烯基)等等。"炔基"表示含有至少一个碳-碳叁键的脂肪族部分，这与指定适用的碳原子数目的惯例相同。举例来说，C2-C4炔基包括乙炔基(乙炔基(acetylenyl))、炔丙基(丙-2-炔基)、l-丙炔基、丁-2-炔基等等。"环状脂肪基"表示饱和或不饱和、非芳香烃部分，其含有1至3个环并且每个环含有3至8个(优选3至6个)碳原子。"环烷基"表示其中每个环都是饱和的环状脂肪族部分。"环烯基"表示其中至少有一个环含有至少一个碳-碳双键的环状脂肪族部分。"环炔基"表示其中至少有一个环含有至少一个碳-碳叁^fe的环状脂肪族部分。举例来说，环脂肪族部分包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基和金刚烷基。优选的环状脂肪族部分是环烷基类的，特别是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。"杂环脂肪基"表示环状脂肪族部分，其中其至少一个环中有至多三个(优选1至2个)碳原子被独立选自N、O或S的杂原子取代，其中N和S8可任选被氧化，并且N可任选被季铵化。类似地，"杂环烷基"、"杂环烯基"、和"杂环炔基，，分别表示其中其至少一个环被如此修饰的环烷基、环烯基或环炔基部分。示例性的杂环脂肪基部分包括氮丙啶基(aziridinyl)、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、1,3-二噁烷基(l,3-dioxanyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、四氢呋喃基、吡咯烷基、哌咬基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢瘗喃基(tetrahydro-thiopyranyl)、1,l-二氧4匕四氪遂p南基(tetrahydrothiopyranylsulfone)、吗啉基、石危吗啉基(thiomorpholinyl)、l陽氧化碌b吗啉基(thio腦rpholinylsulfoxide)、1,1-二氧化石克吗淋基(thiomorphol.inylsulfone)、1,3-二氧戊环基、四氬-l,l-二氧代嗜吩基(tetrahydro-1,1-dioxo-thienyl)、1，4-二口恶烷基、硫杂环丁烷基(thietanyl)等等。"烷氧基"、"芳氧基"、"烷硫基"和"芳硫基"分别表示-o(烷基)、-o(芳基)、-S(烷基)和-S(芳基)。实例分别为曱氧基、苯氧基、曱硫基和苯硫基。"卤素"或"卤"表示氟、氯、溴或碘。"芳基"表示含有单环、二环或三环环系的烃基，其中每个环含有3至7个碳原子，并且至少一个环是芳香性的。环系中的环可以相互稠合(如基中)或相互结合(如联苯)，并且可以与非芳香性环稠合或结合(如茚满基或环己基苯基)。进一步举例来说，芳基包括但不限于苯基、萘基、四氩萘基、茚满基、联苯基、菲基、蒽基、苊基(acenaphthyl)。"杂芳基"表示含有单环、二环或三环环系的部分，其中每个环有3至7个碳原子，并且至少一个环是含有1至4个独立选自N、O或S的杂原子的芳香族环，其中N和S可任选被氧化，并且N可任选被季铵化。像这样含有至少一个杂原子的芳香族环可以与其它类型的环稠和(例如苯并呋喃基或四氬异喹啉基)或直接与其它类型的环结合(例如苯基吡啶基或2-环戊基吡啶基)。进一步举例来说，杂芳基包括吡咯基、呋喃基、噻吩基(thienyl),咪唑基、p比口坐基、碌哇基、异碌唑基、p塞唑基、异p塞唑基、三唑基、四。坐基、吡啶基、N-氧代吡啶基、哒。秦基、嘧啶基、吡口秦基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌淋基(dnnolinyl)、查喔啉基(quinozalinyl)、二氮杂萘基(naphthyridinyl)、苯并吹喃基、口引咮基、苯并蓬吩基、。恶二峻基、蓉二唑基、吩逸哇基(phenothiazolyl)、苯并咪唑基、苯并三氮哇基、二苯并吹喃基、。卡唑基、二苯并噻吩基、吖啶基等等。当指明基团可以被取代时，如在"取代或未取代的C,-C5烷基"或"任选取代的杂芳基"中使用"取代或未取代"或"任选取代的"表达时，所述部分可含有一个或多个独立选择的取代基，优选数目为1至5个，更优选的数目为1或2个。考虑到与取代基连接的部分，取代基和取代形式可由本领域普通技术人员来选择，以提供化学稳定的，并且可以通过本领域已知技术以及本申请所列的方法来合成的化合物。"芳基烷基"、"(杂环脂肪基)烷基"、"芳基烯基"、"芳基炔基"、"联芳基烷基"等表示视情况可被芳基、杂环脂肪基和联芳基等取代的烷基、烯基或炔基，视情况所述烷基、烯基或炔基可具有开放的(未饱和的)化合价，例如苯甲基、苯乙基、N-咪唑基乙基、N-吗啉代乙基等等。相反，"烷基芳基"、"烯基环烷基"等表示视情况可用烷基、烯基等取代的芳基、环烷基等，视情况所述烷基芳基、烯基环烷基例如为曱基苯基(曱苯基)或烯丙基环己基。"羟基烷基"、"囟代烷基"、"烷基芳基"、"氰基芳基"等表示视情况可以被一个或多个经鉴定的取代基(视情况为羟基、卣素等等)取代的烷基、芳基等。举例来说，可行的取代基包括但不限于烷基(尤其是曱基或乙基)、烯基(尤其是烯丙基)、炔基、芳基、杂芳基、环脂肪基、杂环脂肪基、卣素(尤其是氟)、闺代烷基(尤其是三氟甲基)、羟基、羟基烷基(尤其是羟基乙基)、氰基、硝基、烷氧基、-O(羟基烷基)、-O(卣代烷基)(尤其是-OCF3)、-O(环烷基)、-O(杂环烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=0、=NH、二N(烷基)、=NOH、二NO(烷基)、-C(K))(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(=0)NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羟基烷基)、-C(=0)NH2、-0;=0)腿(烷基)、-C(0)N(烷基)2、-OC(K))(烷基)、-OC(=0)(羟基烷基)、-0(3(=0)0(烷基)、-OCfO)O(羟基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(K))NH(烷基)、-OC(K))N(烷基:b、叠氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基;b、-NH(芳基)、-NH(羟基烷基)、-NHC(O)(烷基)、-NHC(=0)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(O)NH(烷基)、-NHC(K))N(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(环烷基)、-S(二O)烷基、-S02(烷基)、-S02NH2、-S02NH(烷基)、-SO2N0^基)2等等。当所取代部分是脂肪基时，优选取代基为芳基、杂芳基、环脂肪基、杂环脂肪基、卣素、羟基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羟基烷基)、-o(囟代烷基)、-O(环烷基)、-O(杂环烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=0、=NH、10二N(烷基)、=NOH、二NO(烷基)、-C02H、-C(-O)NHOH、-(3(=0)0(烷基)、-C(二O)O(羟基烷基)、-C(=0)NH2、-CtO)NH(烷基)、《(=0)^烷基)2、-OC(K))(烷基)、-OC(O)(羟基烷基)、-OC(K))O(烷基)、-OCtO)O(羟基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(二O)NH(烷基)、-0<:(=0)^烷基)2、叠氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NH(羟基烷基)、-NHC一O)(烷基)、-NHC(=0)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(-O)NH(烷基)、-,€(=0^(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(环烷基)、-S(=0)烷基、-S02(烷基)、-S02NH2、-S02NH(烷基)和-S02N(烷基)2。更优选的取代基是卤素、羟基、氰基、硝基、烷氧基、-O(芳基)、=0、=NOH、二NO(烷基)、-00(=0)(烷基)、-OC(O)O(烷基)、-OC(=0)NH2，-OC(-O)丽(烷基)、-OC(-0)N(烷基)2、叠氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NHC(O)(烷基)、-NHC(O)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(=0)NH(烷基)、->^(^(=0)风烷基)2和-NHC^NH)NH2。当所取代部分是环脂肪基、杂环脂肪基、芳基或杂芳基时，优选的取代基为烷基、烯基、炔基、囟素、卣代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羟基烷基)、-O(囟代烷基)、-O(环烷基)、-O(杂环烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、-(:(=0)(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(=0)NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羟基烷基)、-C(=0)NH2、-C(K))NH(烷基)、-C(-0)N(烷基)2、-OC(K))(烷基)、-0(3(=0)(羟基烷基)、-OCfO)O(烷基)、-OC(O)O(羟基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(K))NH(烷基)、-0C(O)N(烷基)2、叠氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基》、-NH(芳基)、-NH(羟基烷基)、-NHC(K))(烷基)、-NHC(K))H、-NHC(=0)NH2、-NHC(=0)NH(烷基)、-NHC(K))N(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(环烷基)、-S(K))烷基、-802(烷基)、-S02NH2、-802^"1(烷基)和-802>1(烷基)2。更优选的取代基为烷基、烯基、囟素、卣代烷基、羟基、羟基烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羟基烷基)、-0;=0)(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(K))NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羟基烷基)、-C(=0)NH2、-C(-O)NH(烷基)、-C^O)N(烷基)2、-0(^(=0)(烷基)、-OC(K))(羟基烷基)、-OC(K))O(烷基)、-OC(K))O(羟基烷基)、-OC(=0)NH2、-OCfO)NH(烷基)、-OC(-0)N(烷基)2、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NHC(-O)(烷基)、-NHC(O)H、-NHC(=0)NH2、-丽C(K))NH(烷基)、->^(3(=0)讨(烷基)2和-NHC(=NH)NH2。如在"保护的羟基"或"羟基保护基"中所述的保护基是如下所述的基团，即所述基团可以选择性与化合物上的羟基相连，从而使得羟基对化合物所暴露的某种化学反应条件呈惰性，并且经所述暴露后可以选择性地去除该基团。许多羟基保护基的实例是已知的。参见例如GreeneandWuts,尸rafec"veGVow戸z>(9/^v3"/c(S戸f/7es^，3rdedition,pp.17-245(JohnWiley&Sons,NewYork,1999)，将其内容引入本申请作为参考。示例性的合适羟基保护基包括与本发明的化合物一起使用的保护基，其包括叔丁基二曱基硅烷基("TBDMS，，或"TBS")、三乙基硅烷基("TES")和三苯基硅烷基("TPS")。在描述范围时，如在"d至Cs烷基"或"5至10%"中所述，所述范围包括范围的终点或边界。除非对具体的立体异构体进行特别说明(例如，通过在结构式相关立体中心上的粗线或虚线连接、通过在结构式中描述具有反式或顺式构型的双键，或通过使用立体化学命名法来说明)，所有的立体异构体，如纯的化合物以及其混合物都包括在本发明的范围内。除非另有指明，单独的对映异构体、非对映异构体、几何异构体，及其组合物和混合物都包括在本发明范围内。"药用盐"表示适于药物制剂的化合物的盐。当化合物含有一个或多个44性官能团时，该盐可以为酸加成盐，例如^L酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、曱磺酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、双轻萘酸盐(embonate)、氢碘酸盐、硝酸盐、盐酸盐、乳酸盐、曱基^5克酸盐、延胡索酸盐(fumarate)、苯曱酸盐、琥珀酸盐、曱磺酸盐、乳糖醛酸盐(lactobionate)、辛二酸盐、曱苯磺酸盐等等。当化合物含有一个或多个酸性部分时，该盐可以是盐如4丐盐、钾盐、镁盐、葡甲胺盐、铵盐、锌盐、哌噪盐、氨基丁三醇盐、锂盐、胆碱盐、二乙胺盐、4-苯基环己胺盐、N,N-二千基乙二胺盐(benzathinesalt)、钠盐、四曱基季铵盐等等。多晶型的结晶形式和溶剂化物也包括在本发明范围内。"治疗有效量，，表示在研究人员、兽医、医生或其他临床医师所探寻的在组织系统、动物或人中引起生物学或医学应答的活性化合物或药用试剂的量，所述应答包括所治疗的疾病或紊乱症状的减轻。引起生物或医学应答所需的活性化合物或药用试剂的特定的量取决于多种因素，包括但不12限于所治疗的疾病或紊乱、进行给药的活性化合物或药用试剂、给药方法和患者的情况。4匕合物和方法在具有式I所示结构的化合物的优选实施方案中，W为H或C,-C4烷基(最优选H或Me);R2为OH、保护的羟基、-O(C广C4烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(C2-C4炔基)、-OCtOXd-Q烷基)、-OC(=0)(C2-C4烯基)或-0C(O)(C2-C4炔基)；R为H、羟基保护基、C广C4烷基、02-0;烯基、C2-C4炔基、-CO(C广C4烷基)、-CO(C2-C4烯基)，或-CO(C2-C4炔基)；R4为H;以及R5为Me(曱基)。在另一个优选的实施方案中，R和I^均为H,RS为Me，其与具有式(II)所示结构的化合物一致其中R1和R"具有在上文中
发明内容部分所指定的含义。更优选地，R1为H或d-C4烷基，并且R2为OH、保护的羟基、-0(01-01烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0((32-(:4炔基)、-oc(=o)(crc4烷基)、-oc(=o)(c2-c4烯基)或-OC(=0)(C2-C4炔基)。甚至更优选地，R1为H或Me,并且R2为OH、-O(d-d烷基)或-OQ^O)(CrC4烷基)。特定的本发明化合物具有式III和IV所示的结构(在附图4中还分别描述为化合物29和30)。本发明范围包括本发明化合物的前药。一般而言，这些前药是化合物官能性衍生物，其易于在体内转化为所需的化合物。因此，在本发明的治疗方法中，术语"给药"(administering)应包括用式I参数范围内的化合物,或不在此参数范围内，但给药于需要治疗的受试者后在体内转化为特定化合物的化合物来治疗本申请中所描述的各种疾病。选择和制备合适的前药书T生物的常头见才喿4乍描述在，例长口AVermuth,"DesigningProdrugsandBioprecursors，"inWermuth,ed.,T7ze尸n3cdceo/Afed/c/wa/CTzem^^y,2ndEd.，pp.561-586(AcademicPress2003)中，将其内容引入本申请作为参考。前药合适的酯基包括但不限于那些由药用脂肪羧酸，特别是链烷酸(alkanoic)、《连》希酉史(alkenoic)、环M^克酉吏(cycloalkanoic)牙口4连》克二元酉吏(alkanedioicacids)所衍生的基团，其中每个烷基或烯基优选具有6个以内的碳原子。示例性的酯包括但不限于曱酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯、碎宁檬酸酯、琥珀酸酯和乙基琥珀酸酯，所述酯基团与酚氧原子中的一个或多个或者脂肪族OH中的任一个或多个相连。本发明化合物可针对的异常升高的激酶活性可以多种方式产生。激酶可能以正常的数量存在，但信号传导途径上游的中断已经使得它的活性不受调节。或者，激酶可能以异常升高的量存在。或者激酶可能突变，因此其虽然有活性但对于调节信号无应答。Santi美国专利2006/0079494Al(2006)已经提出，具有顺式-烯酮部分的寄端霉素以及其它的RAL类似物是激酶的共价抑制剂，其中激酶的活性位点含有半胱氨酸残基，该半胱氨酸残基位于激酶ATP结合位点的两个天冬氨酸残基之间并且紧邻其中一个残基(所述天冬氨酸残基与ATP上的磷酸酯基相互作用，也与同ATP上的磷酸基络合的Mg+2离子相互作用，并且表示激酶中高度保守的基序)。他们假设半胱氨酸的巯基在Michael反应中加成到烯酮的双键上，形成了不可逆或仅非常緩慢可逆的共价加成物(下文用寄端霉素作为代表性的RAL来说明)MeO''OHOMeO一OH激酶HOO，'''6h6,H力OH他们筛选了寄端霉素对一组124种激酶的作用，其中的19种含有所述活性位点半胱氨酸，其余的则没有。寄端霉素抑制20种激酶，其中的18种含有活性位点半胱氨酸。换言之，寄端霉素抑制19种活性位点半胱氨酸激酶中的18种，但只抑制不含有所述活性位点半胱氨酸的105种激酶中的142种，为Michael反应的假设提供了实验支持。不受理论限制，相信本发明的化合物可通过类似的机理作用于激酶。因此，在一个优选的实施方案中，由本发明的化合物抑制的激酶含有一个半胱氨酸残基，该半胱氨酸残基位于激酶ATP结合位点的两个天冬氨酸残基之间并且紧邻其中一个残基。在另一优选的实施方案中，由本发明的化合物抑制的活性位点半胱氨酸激酶选自AAK1、带有激酶结构域的APEG1剪切变体(splicevariantwithkinasedomain,SPEG)、BMP2K(BIKE)、CDKL1、CDKL2、CDKL3、CDKL4、CDKL5(STK9)、ERK1(MAPK3)、ERK2(MAPK1)、FLT3、GAK、GSK3A、GSK3B、KIT(cKIT)、MAP3K14(NIK)、MAP3K7(TAK1)、MAPK15(ERK8)、MAPKAPK5(PRAK)、廳K1(MKK1,MAP2K1)、MEK2(MKK2,MAP2K2)、MEK3(MKK3,MAP2K3)、MEK4(MKK4,MAP2K4)、MEK5(MKK5,MAP2K5)、MEK6(MKK6,MAP2K6)、MEK7(MKK7,MAP2K7)、MKNK1(MNK1)、MKNK2(MNK2,GPRK7)、NLK、PDGFRcx、PDGFRP、PRKD1(PRKCM)、PRKD2、PRKD3(PRKCN)、PRPF4B(PRP4K)、RPS6KA1(RSK1，MAPKAPK1A)、RPS6KA2(RSK3,MAPKAP1B)、RPS6KA3(RSK2，MAPKAP1C)、RPS6KA6(RSK4)、STK36(FUSED—STK)、STYK1、TGFBR2、TOPK、VEGFR1(FLT1)、VEGFR2(KDR)、VEGFR3(FLT4)和ZAK。相信这些激酶含有上文中所讨论的两个天冬氨酸/半胱氨酸活性基序。B-Raf是Ras-Raf-MEKl/2-ERKl/2-MAP细胞信号传导途径上的激酶。在大约70%恶性黑色素瘤和20%结肠癌细胞中发现突变的B-Raf,在乳腺癌细胞中也发现了突变的B-Raf。通常B-Raf的突变是被命名为V600E(在较老的文献中为V599E)的单一代替反应，其中在氨基酸600位(在较老的文献中为599位)上缬氨酸(valine)被谷氨酸代替(Daviesefa/.,A^w2002,417,949-954,"MutationsoftheBRAFGeneinHumanCancer.，，)。这种单突变是致癌的它组成性地激活信号传导途径，从而使下游激酶MEK1/2和ERK1/2的活性及细胞增殖不再受控制。然而，因为激酶ERK1、ERK2、MEK1和MEK2激酶含有必需的活性位点半胱氨酸，它们对于本发明的化合物的抑制作用是敏感的。因此，在一个优选的实施方案中，本发明的化合物用于抑制特征为具有B-RafV600E突变的细胞增殖。以这种方式，单一的化合物可以抑制与病症有关的多种靶分子。在另一实施方案中，本发明的化合物用于治疗特征为具有B-Raf突变的细胞的增殖的疾病。优选地，在治疗前筛选受试者增殖细胞中B-Raf突变(尤其是V600E突变)的存在以及由此筛选受试者对治疗产生正性应答的可能性。典型来说，本发明的化合物可为药用组合物或制剂的部分，其可呈任何合适的形式例如固态、半固态或液态形式。通常，药用制剂含有作为活性成分的一种或多种本发明的化合物和药用载体或赋形剂。典型来说，将活性成分与适于外部、肠内或肠胃外应用的有机或无机载体或赋形剂共混。活性成分可以例如与通常无毒的、药用载体混合在一起，用于片剂、小丸剂、胶嚢、栓剂、阴道栓剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或任何其它适用的形式。可使用的赋形剂包括载体、表面活性剂、增稠剂或乳化剂、固体粘合剂、分散或悬浮助剂、增溶剂、着色剂、调味剂、包衣剂、崩解剂、润滑剂、增甜剂、防腐剂、等渗剂及其组合。Gennaro,ed.,i^m&gto":77ze5We"ce朋c/尸rac/ceo/尸/za削acy,20thEd.(LippincottWilliams&Wilkins2003沐导了合适的赋形剂的选择和使用，将其内容引入本申请作为参考。与载体物质组合而产生单一剂型(dosageform)的活性成分的量取决于所治疗的宿主(host)及具体的给药方式。例如，用于口服给药于人的制剂可含有载体物质，其含量可为总组合物的约5%至约95%。剂量单位形式通常含有约5mg至约500mg的活性成分。可以单次或分次剂量形式将治疗有效量的本发明化合物给药于受试者。给药频率可以是每日给药，或根据一些其它规则的时间表(例如每曰3次)给药，或甚至根据不规则的时间表给药。剂量可以是，例如每千克体重约0.01至约10mg，或者更通常每千克体重约0.1至约2mg的量。然而，应该理解对于任何具体的病人而言，特定剂量水平可能取决于多种因素。这些因素包括所使用的特定化合物的活性；受试者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；给药时间和给药途径以及药物的排泄率；在治疗中是否使用了药物联用；和治疗所探寻的具体疾病或病症的严重程度。典型来说，受试者为人，然而本发明的方法可用于兽医目的，针对其它目标哺乳动物(包括猫、牛、狗、马等等)进行适当的单位剂量调整。可参考以下实施例来进一步理解本发明的实践，提供所述实施例用于16举例，而不是限制性的。实施例l-苄基溴5该实施例描述了千基溴5的合成，所述化合物是合成本发明化合物如化合物29和30的中间体。合成方案概述于附图1中。每个实例中所得产物的'HNMR光谱与所指定的结构一致。M(9M2在0。C向2,4-二羟基-6-曱基苯甲酸乙酯1(15g,76.45mmol)于无水二氯甲烷("DCM"，75mL)的溶液中加入1,8-二氮杂二环[5.4,0]十一-7-烯("DBU",45.7mL，305.8mmol)。溶液变成棕色。在0°C滴加氯甲基曱醚("M0MC1",14.5mL,191.1mmol)。将反应混合物在室温("RT")搅拌12小时。加入DBU(22.3mL，153mmol)和MOMC1(7.25mL，95.6mmol)，然后将反应混合物在35°C搅拌2小时。加入乙醚(200mL)和水(lOOmL)，然后分离各层。水层用乙醚(3x100mL)萃取。合并的有机层用水(IOOmL)，5%NaHSO4(50mL)，水(50mL),饱和NaHCO3(50mL)和盐水(50mL)洗涤，并用Na2S04干燥，经硅胶垫和MgS04过滤，然后蒸发至干。在高真空度下干燥后得到MOM保护的酯2(19.5g)。MOM/^^的^J向MOM保护的酯2(5.12g,18mmol)于水(20mL)和MeOH(20mL)的溶液中加入NaOH(2.88g)。将反应混合物在83。C加热18小时。除去MeOH后加入乙酸乙酯("EtOAc",50mL)。用NaHS04(约9g20mL的水溶液)调节水相pH值至2i-3。水层用乙酸乙酯萃取(3x50mL)，合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2S04干燥，经硅胶垫和MgS04过滤，然后蒸发至干。粗制的MOM保护的酸3与甲苯(2x)共沸，并不经进一步纯化就用于下一步反应。7MS五游4在0。C向MOM保护的酸3(约18mmol)，三苯基膦("Ph3P",6.14g，23.4mmol)及三曱基硅基乙醇("TMSE-OH"，3.08mL,21.6mmol)于乙醚(40mL)和甲苯(12mL)的溶液中滴加偶氮二羧酸二乙酯("DEAD，，，10.2g，40%的曱苯溶液)。反应混合物在室温搅拌12小时。然后加入己烷并滤除固体。浓缩母液并且再次过滤，并用更多的己烷洗涤。除去溶剂，经硅胶柱色语(IO-20%EtOAc/己烷)纯化得到TMSE酯4(5.06g)。f差il5向TMSE面旨4(10.16g，28.03mmol)于CC14(300mL)的溶液中加入氮杂异丁腈(azaisobutyronitirle,"AIBN，，，0.46g，2.8mmol)和N-溴代琥珀17酰亚胺("NBS，，，5.49g,30.83mmol)。将所得的混悬液除气4次(用氮气吹洗)并用强光照射(3个日光灯管，总共lOOOw)。将搅拌的混悬液快速加热至回流，然后搅拌1小时后得到浅黄色溶液(由NMR监测反应进程)。冷却至室温后，用饱和NaHC03溶液(3x30mL)、H20(30mL)和盐水(30mL)洗涤反应混合物。有机溶液用无水NaS04干燥，经硅胶垫过滤，然后浓缩。残留物用柱色谱(EtOAc/己烷，0%至24%的梯度液)纯化，得到为无色油状物的苄基溴5(8.5g,纯度65-70%;混杂有约20%原料和约10%的苯基溴化产物)。实施例2-四氢呋喃-2-醇8该实施例描述了四氢呋喃-2-醇8的合成，该化合物也是合成本发明的化合物如化合物29和30的中间体。合成方案概述于附图2中。每个实例中所得产物的'HNMR光谱与所指定的结构一致。裙^片游7将2,2-二曱氧基丙烷(126mL)和对曱苯磺酸("TSA",633mg)加入到L-赤糖酸-l,4-内酯6(15g)于N,N-二曱基曱酰胺("DMF",158mL)中的溶液中。将混合物在氮气下回流2小时，然后保持在室温过夜。加入DCM(500mL),有机相用饱和NaHC03溶液(5x300mL)洗涤，然后用Na2S04干燥，过滤，然后蒸发至干。经硅胶柱色语(10%-50%乙酸乙酯于己烷中)纯化后，得到缩酮内酯7(9.8g)。四蟲^喊-2-《#S在-78。C将二异丁基氢化铝("DIBAL-H",1当量，纯净的)滴加到缩酮内酯7(9.8g)于DCM(100mL)的溶液中。反应混合物在-78。C搅拌l小时，然后用饱和NH4Cl溶液淬灭。加入EtOAc(500mL),有机相用饱和NH4C1溶液(2x300mL)和盐水(2x300mL)洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(DCM至5。/。MeOH于DCM中)纯化后得到四氢呋喃-2-醇8(7.5g)实施例3-炔TBS醚13和14此实施例描述了炔TBS醚13和14的合成，它们分别是合成本发明化合物如化合物29和30的的中间体。每个实例中所得产物的NMR光谱与所指定的结构一致。TBS醚13的合成方案概述于附图3a中。炎莽H在4°C向(S)-环氧丙烷9(17.3mL,0.246mol)中滴加乙炔锂-乙二胺复合物(24.92g,0.271mol)于二甲基亚砜(DMSO，250mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌24小时，倒入冰水中并用乙醚(4x360mL)萃取。合并的有机层用饱和NH4Cl溶液洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。得到粗制的炔醇11(39g)，并且未经纯化就用于下一步反应。炎mS1继U在室温将咪唑(16.7g,0.246mol)和三丁基氯硅烷("TBSC1",25g,0.166mol)分10批加到粗制的炔醇11(39g，0.123mol)于DCM(250mL)的溶液中。将反应混合物在室温搅拌3小时。加入己烷(600mL)和饱和NaHC03溶液(300mL)，并且分离各层。有机层用水(3x400mL)洗涤，Na2S04干燥，过滤，然后蒸发至干。经硅胶柱色语(100%己烷)纯化后得到粗制的炔TBS醚13(19g)。TBS醚14的合成方案概述于附图3b中。通常遵照Chiba等人的美国专利2004/0224936Al(2004)中描述的操作。得到两种对映异构体并用于下一步反应。炎寧在-60。C向TMS-乙炔(38.8mL)于1LTHF中的溶液中加入n-BuLi(110mL,2.5M)。将反应快速升温至0°C,然后再冷却至-60。C。然后缓慢加入BF3*Et20(33.8mL)，接着通过注射器泵历时2小时加入环氧化物10(15mL)。在-60。C搅拌1.5小时后将反应混合物升至室温，用饱和NH(C1溶液(500mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x2L)萃取。合并有机层，干燥，然后浓缩。粗产物经硅胶柱色谱(己烷/EtOAc-4:l)纯化，得13.9g期望的炔醇12,其为油4大物。J^7^S赵/4在室温向醇12于280mL二氯曱烷中的溶液中加入咪唑(19.2g)。分5批加入TBSC1(32g)。在室温将反应混合物搅拌3小时。加入己烷(700mL),然后用盐水(350mL)洗涤有机层，再用水(3x450mL)洗涤，用Na2S04干燥，过滤，然后蒸发至干。产物经硅胶柱色语(己烷)纯化，得到8.7g中间体TBS保护的TMS乙炔。将TBS保护的TMS乙炔(8.7g)和K2C03(8g)于曱醇(120mL)中的混合物在室温搅拌5小时。混合物用乙酸乙酯(2x200mL)萃取。干燥合并的有机层并浓缩。粗产物在硅胶柱(用己烷洗脱)上纯化，得到为无色油状物的醚14(6.17g)。得到两种对映异构体并用于下一步反应。实施例29此实施例描述了称为29的一种本发明化合物的合成。合成方案表示于附图4中。在每个实例中所得产物的]HNMR光镨与所指定的结构一致。另外，对于化合物29得到更多的分析数据。在0。C将异丙基氯化镁(3.13mL,6.25mmol,2.0M的四氢呋喃("THF")溶液)力。到炔TBS醚13(1.24g,6.25mmol)于THF(3.1mL)的溶液中。将反应混合物加热至50°C并且在此温度搅拌1小时，冷却至0。C。加入四氢吹喃-2-醇8于5mLTHF中的溶液。反应混合物在室温搅拌4小时，通过加入饱和NaH2P04溶液(20mL)淬灭。水层用EtOAc(4x30mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色语(10%-40%EtOAc/己烷)纯化后得到单一非对映异构体炔-二醇15(2.33g)。舉二寧27向炔-二醇l5(789mg)于己烷(40mL)中的溶液中加入林德拉催化剂(Lindlarcatalyst,210mg)和全啉(l0jaL)。将反应混合物除气，通AH23次并且在H2下搅拌1小时。反应混合物经硅胶垫过滤并浓缩。经硅胶柱色语(10%-40%EtOAc/己烷)纯化后，得到烯-二醇17(701mg)。寧"在—30。C向NaH(343mg，8.56mmol,60%于矿物油中的分散体，用己烷洗涤)于THF(15mL)的混悬液中缓慢加入烯-二醇17(2.47g，6.85mmol)于无水THF(10mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌2小时。冷却至-30。C后，滴加节基溴5于THF(6mL)中的溶液，然后所得反应混合物在室温搅拌2小时。通过加入磷酸盐缓冲液(pH7，1.OM,30mL)停止反应。加入乙醚(100mL)，并分离各层。水层用乙醚(2x30mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色语(5%-20%EtOAc/己烷)纯化后得到醇19(824mg，纯度80%)。皋f凌游2/向醇19(460mg,0.636mmol)于无水DCM(5mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.544mL，3.18mmo1)、苯曱酸酐(288mg,1.27mmo1)和4-二曱基氨基吡啶("DMAP",71.3mg,0.636mmol)。反应混合物在室温搅拌6小时。通过加入饱和NaHC03溶液(30mL)和乙醚(50mL)停止反应。分离各层，水层用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(己烷至15%EtOAc/己垸)纯化后得到苯甲酸酯21(520mg)。二-MWZ在室温将氟化四丁基铵("TBAF，，5mL，1.0M于THF中)加到苯曱酸酯21(520mg,0.628mmol)中。反应混合物在室温搅拌2小时，然后在40。C搅拌15小时。通过加入NaHS04(300mg于30mL水中)和乙醚(50mL)停止反应。分离隔层，水层用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，经硅胶垫过滤，浓缩，与曱苯共沸(2x20mL)然后溶于DCM(20mL)中，并用4A分子筛干燥2小时。粗产物未经纯化就用于下一步反应。将上述的粗产物于DCM中的溶液历时8小时加到正在回流中的碘化2-氯-1-曱基吡啶错(460mg,1.8mmol)和二异丙基乙胺于无水DCM(60mL)中的溶液中。反应混合物回流18小时。经硅胶柱色谱纯化后得到36mg去除2-MOM基的环状产物("2-脱MOM产物")和114mg2-脱MOM产物和二MOM环状产物23的混合物。2-脱MOM产物转化为产物23的步骤如下将2-脱MOM溶于DCM中，然后加入DBU(20叫)和MOMC1(10eq)，然后在35。C搅拌5小时。通过加入乙醚(IOmL)和饱和NH4C1溶液(IOmL)淬灭反应。分离各层，水层用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。产物经硅胶垫过滤，然后用旋转蒸发仪将溶剂除去。可以类似地将114mg混合物转化为产物23。粗产物未经进一步纯化就用于下一步反应。應苯f魔差,務25向产物23于EtOH(1mL)和THF(1mL)中的溶液中加入NaOH溶液(lmL,1N)。反应混合物在37。C下搅拌16小时，然后用乙醚(20mL)和水(10mL)稀释。分离各层，水层用乙醚(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(10-65%EtOAc/己烷)纯化后得到脱苯曱酰基产物23(18.2mg)。27向脱苯曱酰基产物25于无水DCM(1mL)中的溶液中加入4A分子筛和氯铬酸吡啶("PCC")。反应混合物在室温搅拌1小时，用己烷(lmL)稀释，经硅胶垫和硅藻土过滤，并用乙醚洗涤。除去溶剂，产物酮内酯27未经进一步纯化就用于下一步反应。化合*M向酮内酯27于乙腈(lmL)中的溶液中加入氢氟酸(0.33mL)。反应混合物在室温搅拌1小时，然后通过加入NaHCO3(0.9g)于THF(10mL)中的混悬液淬灭反应。混合物在室温搅拌10分钟，经硅胶垫过滤，然后用THF洗涤。除去溶剂，经硅胶柱色谱(20%-70%THF于己烷中)纯化得到产物(3-4mg)。通过C18填料过滤(用MeOH洗涤)来除去一些非极性杂质。RAL类似物29的'HNMR光语和l3CNMR光语分别表示于附图5和附图6中。质谱(M+Na+)-375.1054;(M-H^二351,1438。实施例5-化合物30此实施例描述了称为化合物30的另一种本发明化合物的合成。合成方案也显示于附图4中。在每个实例中所得产物的〗HNMR光谱与所指定的结构一致。另外，对于化合物30得到更多的分析数据。炎-二辱J6在0。C将异丙基氯化镁(4.48mL，8.96mmol,2.0M的四氢呋喃("THF，)溶液)加到炔TBS醚14(1.9g,8.96mmol)于THF(5mL)中的溶液中。将反应混合物加热至50°C并且在此温度搅拌1小时，然后冷却至0°C。加入四氬吹喃-2-醇8(730mg，4.56mmol)于6mLTHF中的溶液。反应混合物在室温搅拌2小时，通过加入饱和NaH2P04溶液(35mL)淬灭反应。水层用EtOAc(4x50mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。得到2种非对映异构体并且直接用于下一步反应。雄一二寧7S向炔-二醇16(1.138g)于己烷((56mL)中的溶液中加入林德拉催化剂(292mg)和p奎啉(15iaL)。将反应混合物除气，通入H23次并且在H2下搅拌2.5小时。反应混合物经硅胶垫过滤并浓缩。经硅胶柱色谱(5%EtOAc/己烷至35%EtOAc/己烷的梯度液)分离两种非对映异构体后得到烯-二醇18(686mg)。攀2。在室温向烯-二醇18(90mg,0.251mmol,l叫)于二曱氧基乙烷(0.5mL)中的溶液中滴加叔丁醇钾(l.OM的THF溶液，0.251mL)。在室温将混合物搅拌10分钟。滴加千基溴5的THF溶液(0.6mL)。在室温搅拌30分钟后加入乙酸乙酯(40mL)。有片几相用水(2x20mL)洗，经Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(己烷至20%EtOAc/己烷)纯化后得到醇20(100mg)。多f凌游22向醇20(700mg，0.963mmol)于无水DCM(10mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(0.84mL,4.815mmol)、苯曱酸酐(435mg，1.926mmol)和4-二曱基氨基吡啶("DMAP，，，118mg,0.963mmol)。反应混合物在室温搅拌6小时。通过加入饱和NaHC03溶液(30mL)和乙醚(50mL)停止反应。分离各层，水层用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色语(己烷至15%EtOAc/己烷)纯化后得到苯曱酸酯22(705mg)。二-M9Af豕炎'/^》％在室温将苯曱酸酯22(约0.360mmol)溶于THF(5mL)中。加入TBAF(3mL,1.0M的THF溶液)。反应混合物在50。C搅拌5小时。加入EtOAc(180mL)。有机层用饱和NH4C1溶液(90mL)洗涤。水层用EtOAc(2x90mL)萃取。将三乙胺(1.5mL)加入到合并的有机相中，然后经Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。在三乙胺的存在下将粗产物与甲苯共沸3次，未经纯化就用于下一步。历时2h将粗产物于DCM(60mL)中的溶液加入到正在回流中的碘化2-氯-1-曱基吡啶絲(275mg)和三乙胺(250|aL)于DCM(60mL)中的溶液中。反应混合物回流42小时。除去溶剂，经硅胶柱色i普(5至45。/。EtOAc/己烷的梯度液)纯化得到产物(60mg)。應苯，差产*26向产物24于EtOH(3mL)和THF(3mL)中的溶液中加入NaOH溶液(3mL,1N)。将反应混合物在37。C搅拌16小肘，然后用乙醚(20mL)和水(10mL)稀释。分离各层，水层用乙醚(3x10mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(10-65%EtOAc/己烷)纯化后得到脱苯曱酰基产物24(37mg)。酮内酯向脱苯甲酰基产物26于无水DCM(lmL)中的溶液中加入4A分子筛和氯铬酸吡啶("PCC，，)。反应混合物在室温搅拌4小时，然后用DCM(100mL)稀释。有机层用饱和NaHC03溶液(3x100mL)洗涤，用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。经硅胶柱色谱(5-45。/。EtOAc/己烷)纯化后得到产物酮内酯28(25mg)。化合務J。向酮内酯28于乙腈(17mL)中的溶液中加入氢氟酸(4mL，48%)。反应混合物在室温搅拌3小时。加入氢氟酸(lmL,48%)，然后在室温将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物倒入DCM(300mL)和饱和NaHCO3溶液(100mL)中，将混合物搅拌直到观察不到起泡为止。分离各层，水层用DCM(3x200mL)萃取。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并蒸发至干。然后将残留物在高真空度下干燥过夜。得到终产物化合物30(19mg)。其1HNMR光谱和13CNMR光谱分别显示于附图7和附图8中。质谱(M+lT)=367.0。本领域的技术人员应该理解，可对以上所提供的实施例进行必要的调整以适用于制备本发明的其它化合物。例如，通过应用熟知的酚羟基官能化技术，其中W或r为h的式i化合物可用作合成其中R"或rS不是H的式I化合物的前体。具体涉及的技术^Hf于Giese等人的美国专利5，795，910(1998);Chiba等人的美国专利2004/0224493A1(2004)和Santi等人的美国专利2006/0079494A1(2006)中，将其内容引入本申请作为参考，可对所述技术进行调整以适于制备本发明中化合物。实施例6-生物活性将化合物III和IV的生物活性与天然产物寄端霉素的生物活性在表A中做对比。提供了针对3种癌细胞系的抑制浓度。COL0829B是具有B-RafV600E突变的人黑素瘤细胞系。HT29是也具有B-RafV600E突变的人结肠癌细胞系。SKOV3是具有野生型(wild-type)B-Raf的人乳腺癌细胞系。另外提供了ERK2的K,和Kjnact。表A-本发明化合物的生物活性<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>ICso数据显示本发明化合物III和IV是具有BRafV600E突变的癌细胞的尤其有效的抑制剂。前面对本发明的详细描述包括主要或专门涉及本发明具体部分或方面的段落。应当理解，这是为了清晰和方便，而具体特征可能不只是涉及将其公开的段落，并且本申请的内容包括不同段落中存在的信息的所有适当组合。类似地，尽管本申请中各种附图和描述涉及本发明特定的实施方案，但是应当理解，当特定的特征公开于具体附图或实施方案的内容中时，所述特征也可以适当扩展，用于另一附图或实施方案的内容中，与另一特征组合应用，或通用于整个发明中。权利要求1.具有式I所示结构的化合物以及其药用酯、盐、溶剂化物及其水合物，其中R1为H、C1-C4烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基；R2为H、卤素、羟基、保护的羟基、-OR12、-SR12、-NR12R13、-X1(CH2)pX2-R14或者是任选被羟基、保护的羟基、卤素、氨基、保护的氨基或-X1(CH2)pX2-R14取代的烷基；其中R12和R13在其每次出现时独立为H、任选取代的脂肪族部分、任选取代的环状脂肪族部分、任选取代的杂环脂肪族部分、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或者N或S保护基，或者R12和R13一起形成含有1至4个碳原子和1至3个氮原子或者氧原子的饱和或不饱和的环；R12和R13中每个任选被以下一个或多个取代基取代羟基、保护的羟基、烷氧基、氨基、保护的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卤素；X1和X2不存在，或各自独立为氧、-NH或者-N(烷基)，或者其中X2-R14一起为N3或杂环脂肪族部分；p是1至10的整数，条件是只有当X1和X2中的至少一个不存在时，p任选是1；以及R14为H、芳基、杂芳基、烷基芳基、烷基杂芳基，或者为-(C＝O)NHR15、-(C＝O)OR15或-(C＝O)R15，其中R15每次出现时独立为H或脂肪族部分、环脂肪族部分、杂环脂肪族部分、芳基或者杂芳基；或者R14为-SO2(R16)，其中R16为脂肪族部分；其中R14、R15和R16中的一个或多个任选被以下一个或多个取代基取代羟基、保护的羟基、烷氧基、氨基、保护的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卤素；R3为H、羟基保护基、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、-CO(C1-C4烷基)、-CO(C2-C4烯基)或者-CO(C2-C4炔基)；R4为H或者卤素；以及R5为H、C1-C4烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基，或者R1和R5一起形成(CH2)n，其中n为1、2、3，或4。2.权利要求1的化合物，其中R1为H或Q-C4烷基；112为OH、保护的羟基、-O(CrQ烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(CrC4炔基)、-OC(K))(C'-C4烷基)、-0(:(=0)((:2-(:4烯基)或-0(:(=0)((:2-(:4炔基)；R为H、羟基保护基、d-C4烷基、cvc4烯基、C2-d炔基、-00((:1-(:4烷基)、-co(c2-c4烯基)或者-CO(C2-C4炔基)；R4为H;以及R5为Me。3.权利要求1的具有式(II)所示结构的化合物4.权利要求3的化合物，其中R1为H或d-C4烷基，112为OH、保护的羟基、0(c广C4烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(<:2匿(:4炔基)、-0(:(=0)(&-(:4烷基)、-OC(=0)(C2-C4烯基)或-00:=0)(02《4炔基)。5.权利要求4的化合物，其中R'为H或Me,以及R2为H、-0(d-C4烷基)或-OC(^0)(Q-C4烷基)。6.权利要求i的具有式m所示结构的化合物7.权利要求1的具有式IV所示结构的化合物8.用于治疗患有特征为细胞增殖的疾病的受试者的方法，其中所述细胞具有活性异常升高的至少一种激酶，所述方法包括将治疗有效量的权利要求1的化合物给予受试者。9.权利要求8的方法，其中所述疾病为黑素瘤、结肠癌或乳腺癌。10.权利要求9的方法，其中所述疾病为黑素瘤或结肠癌。11.权利要求8的方法，其中所述增殖细胞特征为具有突变的B-Raf。12.权利要求8的方法，其中突变的B-Raf具有V600E突变。13.权利要求8的方法，其进一步包括在给药步骤前对受试者进行筛选的步骤，以确定是否增殖细胞具有突变的B-Raf。14.用于抑制细胞增殖的方法，其中所述细胞具有活性异常升高的至少一种激酶，所述方法包括使细胞与权利要求1的化合物接触。15.权利要求14的方法，其中所述细胞具有突变的B-Raf。16.权利要求15的方法，其中突变的B-Raf具有V600E突变。17.用于抑制具有活性位点半胱氨酸残基的激酶的方法，所述方法包括使激酶与权利要求1的化合物接触。18.权利要求17的方法，其中所述活性位点半胱氨酸残基位于激酶ATP结合位点的两个天冬氨酸残基之间并且紧邻其中一个残基。19.权利要求17的方法，其中所述激酶是由突变的B-Raf激活的细胞信号传导途径上的激酶。20.权利要求17的方法，其中所述激酶选自AAK1、带有激酶结构域的APEG剪切变体(SPEG)、BMP2K(BIKE)、CDKL1、CDKL2、CDKL3、CDKL4、CDKL5(STK9)、ERK1(MAPK3)、ERK2(MAPK1)、FLT3、GAK、GSK3A、GSK3B、KIT(cKIT)、MAP3K14(NIK)、MAP3K7(TAK1)、MAPK15(ERK8)、MAPKAPK5(PRAK)、MEKl(MKK1,MAP2K1)、MEK2(MKK2、MAP2K2)、MEK3(MKK3、MAP2K3)、MEK4(MKK4,MAP2K4)、MEK5(MKK5、MAP2K5)、MEK6(MKK6、MAP2K6)、MEK7(MKK7、MAP2K7)、MKNK1(MNK1)、MKNK2(MNK2,GPRK7)、NLK、PDGFRa、PDGFRP、PRKD1(PRKCM)、PRKD2、PRKD3(PRKCN)、PRPF4B(PRP4K)、RPS6KA1(RSK1、MAPKAPK1A)、RPS6KA2(RSK3，MAPKAP1B)、RPS6KA3(RSK2、MAPKAP1C)、RPS6KA6(RSK4)、STK36(FUSED一STK)、STYK1、TGFBR2、TOPK、VEGFR1(FLT1)、VEGFR2(KDR)、VEGFR3(FLT4)和ZAK。21.权利要求17的方法，其中所述激酶为ERK1、ERK2、MEK1或MEK2。22.权利要求17的方法，其中所述激酶为ERK2。全文摘要本发明涉及具有式I结构的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如本申请中所定义，其用作激酶抑制剂。文档编号A61K31/343GK101489547SQ200780026278公开日2009年7月22日申请日期2007年4月5日优先权日2006年5月11日发明者丹尼尔·V·桑蒂,红傅,悦陈申请人:科森生物科学公司