专利名称：作为akt蛋白激酶抑制剂的羟基化嘧啶基环戊烷的制作方法
作为AKT蛋白激酶抑制剂的羟基化嘧啶基环戊烷发明背景 发明领域本发明涉及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(如AKT及相关激酶)的新型抑制剂、含有 所述抑制剂的药物组合物以及制备这种抑制剂的方法。所述抑制剂可用于治疗例如哺乳动 物的过度增生性疾病，例如癌症和炎症。
背景技术：
的说明蛋白质激酶(PK)是通过从ATP上传送末端(Y)磷酸来催化蛋白质的酪氨酸、 丝氨酸和苏氨酸残基上的羟基发生磷酸化作用的酶。通过信号转导途径，这些酶调节细 胞生长、分化和增殖，即事实上细胞生命的所有方面无论如何都取决于PK活性(Hardie， G. ^P Hanks, S. (1995) The Protein KinaseFacts Book. I and II 蛋白激酶档案I 和 II)， Academic Press, San Diego, CA) 0此外，在多种疾病中都涉及异常的PK活性，从相对不危 及生命的疾病比如银屑病到极端恶性的疾病比如恶性胶质瘤(脑癌)。蛋白激酶是治疗性 调节的一类重要靴(Cohen, P. (2002)Nature Rev. Drug Discovery 1 :309)。值得注意的是，非典型蛋白磷酸化和/或表达常常被报道是癌症中细胞异常增 殖、转移和细胞存活的成因之一。其中包括Akt、VEGF, ILK、ROCK、p70S6K、Bel、PKA, PKC, Raf、Src, PDK1、ErbB2、MEK, IKK、Cdk, EGFR、BAD、CHK1、CHK2 禾口 GSK3 在内的各种激酶的异 常调节和/或表达也已与癌症特异性地相关联。蛋白质激酶包括两种类型蛋白质酪氨酸激酶(PTK)和丝氨酸-苏氨酸激酶 (STK) 0蛋白激酶B/Akt酶是一组丝氨酸/苏氨酸激酶，在多种人类肿瘤中过表达。表征 最为充分的PI3K脂质产物靶之一是信号转导途径中PI3K下游的57KD的丝氨酸/苏氨 酸蛋白激酶 Akt (Hemmings，B. A. (1997) Science275 628 ；Hay N. (2005) Cancer Cell 8 179-183)。Akt是急性转化性反转录病毒AKT8的原癌基因v_akt的人类同源物。由于其 与蛋白激酶A和C有高度序列同源性，Akt也被称为蛋白激酶B (PKB)以及A和C相关物 (Related to Aand C，RAC)。已知存在Akt的三种同种型，S卩Aktl、Akt2和Akt3，它们有80% 的总体同源性(Staal，S. P. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. 84 5034 ；Nakatani，K. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 257 906 ；Li 等人(2002) Current Topics in Med. Chem. 2 939-971 ；WO 2005/113762)。Akt同种型有共同的结构域组织，由在N末端的普列克底物 蛋白同源性结构域、激酶催化结构域、和在C末端的短调节区组成。另外，Akt2和Akt3 二 者都表现出有剪接变体。Akt被PtdInd (3，4，5) P3募集到细胞膜时，同种型Aktl (PKBa)、 Akt2 (PKB β )和 Akt3 (ΡΚΒ γ )被 PDKl 分别于 Τ308、Τ309 和 Τ305 以及分别于 S473、S474 和 S472磷酸化(活化)。这种磷酸化由一种尚未知晓的激酶(推定名为PDK2)进行，虽然已 表明 PDKl(Balendran，Α.，(1999) Curr. Biol. 9 :393)、自磷酸化(Toker, A. (2000) J. Biol. Chem. 275:8271)和整联蛋白相关激酶(ILK) (Delcommenne, M. (1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA,95 11211)牵涉在该过程中。Akt活化要求在C末端疏水基序中残基Ser 473 上磷酸化(Brodbeck 等人(1999) J. Biol. Chem. 274 :9133_9136 ;Coffer 等人(1991)Eur.
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化活化了该激酶，但其最大激酶活性则需要二磷酸化。认为AKT通过抑制细胞凋亡并增强血管生成和增殖而发挥其对癌症的作用 (Toker等人(2006) Cancer Res. 66(8) 3963-3966)。AKT在许多形式的人类癌症中过 表达，这些癌症包括但不限于结肠癌(Zinda等人(2001)Clin. Cancer Res. 7 :2475)、 卵巢癌(Cheng 等人(1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA89 :9267)、脑癌(Haas Kogan 等人 (1998)Curr. Biol. 8 :1195)、肺癌(Brognard 等人(2001)Cancer Res. 61 :3986)、胰腺癌 (Bellacosa 等人(1995) Int. J. Cancer64 :280_285 ；Cheng 等人(1996)Proc. Natl. Acad. Sci. 93 3636-3641)、前列腺癌(Graff 等人(2000) J. Biol. Chem. 275 24500)和胃癌 (Staal 等人(1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :5034_5037)。为了靶向的小分子抑制剂治疗，已经研究了 PI3K/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mammalian target of rapamycin,mT0R)途径(Georgakis, G.禾口 Younes，A. (2006) Expert Rev. Anticancer Ther.6(1) 131-140 ；Granville φ 人(2006)Cl in. Cancer Res. 12(3) 679-689)。PI3K/Akt信号转导的抑制引起凋亡并抑制具有升高的Akt水平的肿瘤细胞的 生长(Kim 等人(2005) CurrentOpinion in Investig. Drugs 6 (12) 1250-1258 ;Luo 等人 (2005)Molecular CancerTher. 4 (6) :977_986)。靶向异常调节并最终导致疾病的途径的激酶抑制剂的开发，对于医药界具有巨大 的伦理和商业上的利益。作为独立疗法或与其它已接受方法联合，抑制以下的化合物将成 为有价值的抗癌药=(I)Akt募集到细胞膜，(2)由PDKl或PDK2活化，(3)底物磷酸化，或 (4) Akt下游靶之一。美国专利申请公开第2005/0130954除了其它以外，公开了作为AKT抑制剂的多种 化合物。据说这些化合物可用于治疗过度增生性疾病如癌症。发明概述本发明提供了抑制AKT蛋白激酶的新化合物。本发明化合物具有作为可通过抑制 AKT蛋白激酶来治疗的疾病和疾患的治疗剂的功用。更具体地，本发明包括具有式I的化合物
和其药学上可接受的盐。本发明还提供了包含式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。在又一个方面，本发明提供治疗哺乳动物的AKT蛋白激酶介导的疾病或医学状况 的方法，包括向所述哺乳动物施用有效治疗或预防所述疾病的量的式I化合物或其药学上 可接受的盐。可按照本发明方法治疗的AKT蛋白激酶介导的疾病包括但不限于炎性、过度 增生性、心血管、神经变性、妇科或皮肤疾病和病症。在进一步的方面，本发明提供抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，该方法 包括向所述哺乳动物施用有效抑制AKT蛋白激酶产生的量的式I化合物或其药学上可接受 的盐。在进一步的方面，本发明提供抑制AKT蛋白激酶活性的方法，包括使所述激酶与 式I化合物接触。本发明化合物可以有利地与其它已知的治疗剂联合使用。因此，本发明还提供了 包含式I化合物或其药学上可接受的盐联合第二治疗剂的药物组合物。本发明还提供了用作治疗AKT蛋白激酶介导的疾患的药物的式I化合物和其药学 上可接受的盐。本发明的另一方面是式I化合物或其药学上可接受的盐用于治疗的用途。在一个 实施方案中，所述治疗包括治疗AKT蛋白激酶介导的疾患。本发明进一步提供了用于治疗AKT蛋白激酶介导的疾病或病症的药盒，所述药盒 包含式I化合物或其药学上可接受的盐、容器、和任选地指示治疗的包装说明书或者标签。 药盒还可包含可用于治疗所述疾病或病症的第二化合物或包含第二药剂的制剂。本发明的另一方面提供式I化合物在治疗过度增生性疾病中的用途。在本发明的 进一步方面，该过度增生性疾病是癌症。本发明还包括此发明化合物的制备方法、分离方法和纯化方法。本发明的其它优点和新特征部分地将在下文的描述中叙述，部分在本领域技术人 员检查下文描述时是明显的，或者可以通过实施本发明而获悉。本发明的优点可以利用所 附权利要求书中具体指出的手段、组合、组合物和方法来实现和达到。发明详述现在将参考本发明的某些实施方案进行详述，其实施例图解说明于随后的结构和 结构式中。虽然本发明将结合例证实施方案进行描述，但是应当理解，并不意图将本发明 限于那些实施方案。与此相反，本发明意图涵盖可以包括在如所附权利要求书所限定的本 发明范围内的所有替换方案、变型和等价物。本领域熟练技术人员应当认识到，可以将与在 此所述类似或者等价的多种方法和材料用于本发明实践中。本发明并不仅仅限于所述的方 法和材料。在包含的一篇或者多篇文献和类似材料不同于本申请或者与本申请冲突的情形 中，包括但不限于定义的术语、术语应用、描述的方法等等，以本申请为准。^X本文所用的术语“一”是指一种或多种。本文所用的术语“此发明化合物”、“本发明化合物”和“式I化合物”包括式I化
合物和其药学上可接受的盐。短语“有效量”是指当施用于需要所述治疗的哺乳动物时，足以实现以下的化合物的量⑴治疗或者预防由一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激 酶、和/或双特异性激酶的活性介导的具体疾病、疾患或者病症，(ii)减轻、改善或者消除 所述具体疾病、疾患或者病症的一种或者多种症状，或者(iii)预防或者延迟在此所述的 具体疾病、疾患或者病症的一种或者多种症状的发作。在癌症的情形中，有效量的药物可以 降低癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地终止)癌细胞浸 润到外周器官中；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地终止)肿瘤转移；在一定程度上抑 制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或者多种症状。在药物可以阻止 生长和/或杀死已有癌细胞的程度上，它可以是抑制细胞的和/或细胞毒性的。对于癌症 治疗，效力可以通过，例如评价疾病发展的时间(time to disease progression,TTP)和/ 或确定响应速率(response rate, RR)来测量。“治疗”意欲至少指哺乳动物如人类的疾病状况的减轻，所述疾病状况至少部分 由于一种或多种AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激 酶的活性而造成的。术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment) ”涉及治疗性治疗和防患 性或者预防性措施，其中目的是预防或者延缓(减小)不期望的生理变化或者紊乱。对于 本发明的目的，有益或者期望的临床结果包括但不限于症状的减轻、疾病程度的降低、稳定 (即，未恶化)的疾病状态、疾病发展的延迟或者减缓、疾病状态的改善或者减轻和可检测 或不可检测的症状缓解(无论部分还是总体)。“治疗(treatment)”还可以表示同如果不 接受治疗的预期存活相比，延长的存活期。需要治疗的那些患者包括已经患有疾患或者病 症的那些，以及被发现倾向于患有疾病状况但还未诊断为患有该疾病状况的那些；调节和 /或抑制所述疾病状况。术语“治疗(treating)”、“治疗(treat)”或“治疗(treatment)” 包涵预防性即防患性治疗和缓和性(palliative)治疗二者。本文所用的术语“哺乳动物”是指患有本文所述疾病或处于发展本文所述疾病的 风险中的温血动物，包括但不限于豚鼠、犬、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和包括人类的灵长类。“化疗剂”是可用于治疗癌症而不论其作用机制的化学化合物。化疗剂包括用于 “靶向治疗”和常规化疗的化合物。化疗剂的实例包括埃罗替尼(TARCEVA ，GenenteCh/OSI Pharm.)、硼替佐 米(VELCADE , Millennium Pharm.)、氟维司群(FASLODEX , AstraZeneca)、 索坦(SUl 1248，Pfizer)、来曲唑(FEMARA ，Novartis)、伊马替尼甲磺酸盐 (GLEEVEC ，Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、奥沙禾Ij 钼(Eloxatin , Sanofi)、5-FU (5_氟尿嘧啶)、亚叶酸、雷帕霉素(西罗莫司，RAPAMUNE , Wyeth)、 拉帕替尼(TYKERB ，GSK572016，Glaxo SmithKline)、洛那法尼(SCH 66336)、索 拉非尼(BAY43_9006，Bayer Labs)、伊立替康(CAMPTOSAR , Pfizer)和吉非 替尼(IRESSA ，AstraZeneca)、AG1478、AG1571 (SU 5271 ；Sugen)、比如硫替派和 CYTOXAN 环磷酰胺的烷基化剂；烷基磺酸酯类，比如白消安、英丙舒凡和派泊舒凡； 氮丙啶类(aziridines)，比如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派(meturedopa)和乌 瑞替派(uredopa)；乙基蜜胺类类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)， 包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；多聚 乙酰类(特别是布拉他辛和布拉他辛酮)；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；苔藓抑 素；callystatin ；CC-1065 (包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；隐藻素类(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类 似物，KW-2189 和 CB1-TM1)；软珊瑚醇(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍 枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑制素(spongistatin)；氮芥类，比如苯丁酸氮芥、萘氮 芥、chlorophosphamide、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物盐酸盐(mechlorethamine oxide hydrochloride)、米尔法兰(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、胆留醇对苯乙 酸氮芥(phenesterine)、松龙苯芥、氯乙环磷酰胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲类(nitrosureas)， 比如亚硝脲氮芥(carmustine)、吡葡亚硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、 环己亚硝脲(Iomustine)、嘧啶亚硝脲(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素， 比如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，特别是卡奇霉素Y II和卡奇霉素 ω Il (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994)33 183-186)；达内霉素(dynemicin)，包括达内 霉素A ；二碳磷酸盐化合物(bisphosphonate)，比如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉 素(esperamicin)；以及新制癌菌素生色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素生色团)、阿克拉 霉素类(aclacinomysins)、方文线菌素、氨茴霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、 博来霉素、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌霉素(carzinophilin)、 色霉素(chromomycini s)、放线菌素D、道诺红菌素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正 亮氨酸、ADRIAMYCIN (阿霉素)、吗啉代-阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯 烷基-阿霉素和去氧阿霉素)、表柔比星、依索比星、依达比星、麻西罗霉素、比如丝裂霉 素C的丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉 素、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、新制癌菌素、佐柔比星；抗代谢 物，比如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，比如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤 (pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，比如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪 嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，比如环胞苷、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧 尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，比如二甲睾酮、屈他雄酮 丙酸盐、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类(anti-adrenals)，比如氨鲁米特、米托坦、 曲洛司坦；叶酸补充剂，比如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺苷；氨基乙 酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil ；比生群；依达曲沙(edatraxate) ；defofamine ； 地美可辛；地吖醌；依氟鸟氨酸(elfornithine)；依利醋铵；埃博霉素(印othilone)；乙环 氧啶；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖；氯尼达明(Ionidainine)；美登素类，比如美登素和美登 木素；丙脒腙；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol) ；nitraerine ；喷司他丁 ；蛋氨氮芥；卩比柔 比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙胼；丙卡巴胼；PSK 多糖络合物(JHS NaturalProducts, Eugene, OR)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚乙基亚胺苯醌；2， 2’，2”_三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(特别是T-2毒素、黏液霉素AGerracurin Α)、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；去乙酰长春酰胺；氮烯唑胺；甘露醇氮芥；二溴甘露 醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ；阿糖胞苷(“Ara-C")；环磷酰胺；硫替派；紫杉 烷类，例如，TAXOL (紫杉醇；Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J·)、 ABRAXANE (Cremophor-free)、白蛋白-设计的纳米颗粒紫杉醇制剂(albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel, AmericanPharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)和 TAXOTERE (紫杉萜(doxetaxel) ； Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil) ；GEMZAR (吉西他滨)；6_ 硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；钼类似物，比如顺氯氨钼和卡钼；长春花碱；依托泊苷 (VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；NAVELBINE (长春瑞滨)；诺安托潜尼 泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨(XELODA );伊班膦酸盐；CPT-Ii ；拓扑 异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇(retinoids)，比如视黄酸；和 任何上述物质的药学上可接受的盐、酸和衍生物。还包括在“化疗剂”定义中的有(i)用于调节或者抑制激素对肿瘤的作用的 抗激素剂，比如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(selectiveestrogen receptor modulator, SERM)，包括，例如他莫昔芬、(包括NOLVADEX ;枸橼酸他莫昔芬)、 雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、盐酸雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮 和FARESTON (枸橼酸托瑞米芬)；(ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制剂，芳香酶调 节肾上腺中雌激素的形成，比如，例如，4(5)-咪唑类、氨鲁米特(aminoglutethimide), MEGASE (乙酸甲地孕酮)、AROMASIN (依西美坦；Pfizer)、福美司坦 (formestanie)、法倔唑、RIVISOR (伏氯唑)、FEMARA (来曲唑；Novartis) 和 ARIMIDEX (阿那曲唑(anastrozole) ；AstraZeneca) ； (iii)抗雄激素类，比 如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙立得(leuprolide)和戈舍瑞林；以及曲沙他 滨(1，3_ 二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂；(ν)脂类激酶抑制剂； (vi)反义寡核苷酸，特别是抑制与异常细胞增殖相关的信号途径中的基因的表达的那 些，所述基因比如，例如PKC-α、Ralf和H-Ras ； (vii)核酶，比如VEGF表达抑制剂(例 如，ANGIOZYME )和HER2表达抑制剂；(viii)疫苗，比如基因疗法疫苗，例如 ALLOVECTIN 、LEUVECTIN 和VAXID ； PROLEUKIN rlL-2 ；拓扑异 构酶1抑制剂，比如:LURTOTECAN ; ABARELIX rmRH ； (ix)抗血管生成剂，比如 贝伐珠单抗(bevacizumab，AVASTIN ，Genentech)；和(χ)任何上述化疗剂的药学上可 接受的盐、酸和衍生物。还包括在“化疗剂”定义中的有治疗性抗体，比如阿仑珠单抗(alemtuzumab， Campath)、贝伐珠单抗(AVASTIN ，Genentech)；西妥昔单抗(ERBITUX , Imclone)；帕木单抗(panitumumab，VECTIBIX , Amgen)、利妥昔单抗(RITUXAN , Genentech/Biogen Idee)、培妥珠单抗(pertuzumab, OMNITARG ,2C4,Genentech)、曲 妥单抗(HERCEPTIN ，Genentech)、托西莫单抗单抗(Bexxar，Corixia)和抗体药物轭 合物奥吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin, MYLOTARG , ffyeth) 具有作为联合本发明的PI3K抑制剂的化疗剂的治疗潜力的人源化单克隆抗体 包括阿仑珠单抗、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿塞珠单抗(aselizumab)、atIizumab、 bapineuzumab、贝(bevacizumab)、貞比(bivatuzumab mertansine) > 莫坎妥珠单抗(cantuzumabmertansine)、西利珠单抗(cedelizumab)、赛妥珠单抗 (certolizumab pegol)、cidfusituzumab> cidtuzumab、达克_单 (daclizumab)、依库 珠单抗(eculizumab)、依法珠单抗(efalizumab)、依帕珠单抗(印ratuzumab)、厄利珠单 抗(erlizumab)、泛维珠单抗(felvizumab)、芳妥珠单抗(fontolizumab)、奥吉妥珠单 抗、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、ipilimumab、拉贝珠单抗(Iabetuzumab)、 林妥珠单抗(Iintuzumab)、马妥珠单抗(matuzumab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、 莫维珠单抗(motavizumab)、motovizumab、那他珠单抗(natalizumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马珠单抗(omalizumab)、中白 禾1J珠单抗(palivizumab) > 中白考珠单抗(pascolizumab) > pecfusituzumab、pectuzumab、 ) > in1 ) (pexelizumab) > ralivizumab> W ) (ranibizumab) > Jfnf
禾1J珠单抗(reslivizumab)、 卷禾[I珠单抗、resyvizumab、罗维珠单抗(roveIizumab)、卢 利珠单抗(ruplizumab)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、西利珠单抗(siplizumab)、索 i _ Ui (sontuzumab) > ftk(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab> ftk ^1J ^
单抗(talizumab)、特非珠单抗(tefiazumab)、托珠单抗(tocilizumab)、托利珠单抗 (toralizumab) > 曲司(trastuzumab) > tucotuzumab Hf 貞白 、tucusituzumab>
umavizumab>-Sj3^-^-Jji (urtoxazumab)禾口(visilizumab)。AKT抑制剂本发明的式I化合物可用于抑制AKT蛋白激酶。这类化合物具有用作可通过抑制 AKT蛋白激酶信号转导途径以及酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶受体途径而得以治疗的疾病 的治疗剂的功用。尤其是，发现在环戊二烯并[d]嘧啶上具有7-羟基的式I化合物对AKT相对于蛋 白激酶A (PKA)的选择性是至少50倍。例如，对AKT相对于PKA的选择性是至少100倍，作 为进一步的实例，是至少150倍。超出PKA的选择性是期望的，因为PKA牵涉在对于许多细 胞类型的正常功能和生理学重要的许多细胞过程中。另外，不认为PKA的抑制有助于AKT 抑制的抗增殖和促凋亡作用。因此，PKA的抑制可导致与AKT抑制无关的不良事件而无助 于AKT抑制的疾病修正益处。式I化合物还可用作除了 AKT以外的酪氨酸激酶以及丝氨酸和苏氨酸激酶的抑制 剂。总之，本发明的一方面包括式I化合物和药学上可接受的盐。 式I化合物包括该化合物的药学上可接受的盐。短语“药学上可接受的”表示物质或者组合物与构成制剂的其它成分和/或其所 治疗的哺乳动物化学性质和/或毒理学上相容。
另外，本发明化合物可以形成盐。盐的实例包括通过使本发明化合物与无机酸或 有机酸或无机碱反应而制得的盐，此类盐包括但不限于硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫 酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、 碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙 炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1， 4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、 羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基 丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、y -羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙 磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。因为本发明的单个化合物可能包括多于 一个酸部分或碱部分，本发明化合物可包括单个化合物的单盐、二盐或三盐。在某些实施方案中，该盐是“药学上可接受的盐”，除非另外指明，否则其包括保留 所指化合物的相应游离酸或碱的生物效力，并且不是生物学或其它方面不期望的盐。式I化合物还包括不必是药学上可接受的盐的其它盐，其可用作用于制备和/或 纯化式I化合物和/或用于分离式I化合物的中间产物。本发明还包括同位素标记的本发明化合物，除了一个或多个原子被具有与自然界 中通常发现的原子量或者质量数不同的原子量或者质量数的原子替换的事实以外，其等同 于在此所述的那些化合物。在本发明化合物和它们的用途的范围内，预期所述的任何具 体原子或者元素的所有同位素。可以包含在本发明化合物中的例证性同位素包括氢、碳、 氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，比如 2η、3Η、"(:、13(:、14(:、13Ν、15Ν、15Ο、17Ο、18Ο、32Ρ、33Ρ、355、18Ρ、 36Cl、123I和125I。某些同位素标记的本发明化合物(例如，用3H和14C标记的那些)可以用 于化合物和/或底物组织分布测定中。由于易于制备和检测，氚(3H)和碳_14(即14C)同 位素是有用的同位素。此外，由于具有更强的新陈代谢稳定性(例如，延长的体内半衰期或 者降低的剂量需要)，用重同位素(比如氘，即2H)取代可能会提供某些治疗学优点，并且因 此可能在一些情形下是优选的。正电子发射同位素比如150、13N、"C和18F可以用于正电子 发射断层成像(positron emission tomography, PET)研究中，从而检测底物受体的占用 率。同位素标记的本发明化合物通常可以通过与下文方案和/或实施例中公开的那些方法 类似的方法，通过用同位素标记的试剂替换非同位素标记的试剂进行制备。式I化合物的合成本发明化合物可以通过包括类似于化学领域熟知的那些方法的合成路线进行 合成，特别是根据在此包含的描述进行合成。原料通常由商业来源获得，比如Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI)，或者利用本领域熟练技术人员熟知的方法轻易地制备(例 如，通过 Louis F. Fieser 禾口 Mary Fieser, Reagentsfor Organic Synthesis (有机合成 的试剂)，第 1-19 卷，Wiley，N. Y. (1967-1999 编辑))或者 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4, Aufl 编辑· Springer-Verlag, Berlin，包括其增刊，中普遍描述的 方法制备)。各个反应步骤的更详细说明参见以下实施例部分。本领域熟练技术人员应当理 解，其它合成路线也可以用于合成本发明化合物。虽然在以下实施例表明了具体原料和试 剂并对其进行了讨论，但是可以轻易替换成其它原料和试剂，从而提供多种衍生物和/或 反应条件。此外，通过如下所述的方法制备的多种化合物可以进一步根据本公开文本利用
10本领域熟练技术人员熟知的常规化学进行改性。在制备式I化合物时，可能需要保护中间体的间接官能团(例如，伯胺或者仲胺 等等)。对所述保护的需要将取决于间接官能团的本性和制备方法的条件的变化而变化。 适宜的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBz) 和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。本领域熟练技术人员可以轻易确定是否需要所述保 护。保护基的一般说明和它们的应用参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis (有机合成中的保护基团)，John Wiley & Sons，New York，1991。分离方法在用于制备式I化合物的任何合成方法中，可以有利地将反应产物彼此分离和/ 或与原料分离。通过本领域通用的工艺，将各个步骤或者系列步骤的期望产品分离和/或 纯化(在下文中称为分离)成期望的均勻度。所述分离一般涉及多相萃取、从溶剂或者溶剂 混合物中结晶、蒸馏、升华或者色谱法。色谱法可以涉及多种方法，包括，例如反相和正相； 尺寸排阻；离子交换；高、中和低压液相色谱法和装置；小规模分析；模拟移动床(“SMB”) 和制备薄层或者厚层色谱法，以及小规模薄层和快速色谱法工艺。另一类分离方法涉及用选择的试剂处理反应混合物，从而结合期望的产品、未反 应原料、反应副产品等等或者使得期望的产品、未反应原料、反应副产品等等可分离。所述 试剂包括吸附剂或吸附剂，比如活性碳、分子筛、离子交换介质等等。另外地，所述试剂可以 是在碱性材料的情形中，酸；在酸性材料的情形中，碱；结合试剂比如抗体；结合蛋白质； 选择性螯合剂比如冠醚；液体/液体离子提取试剂(“LIX”)等等。适当的分离方法的选择取决于所涉及物质的性质。例如，在蒸馏和升华中的沸点 和分子量，在色谱法中极性官能团的存在与否，在多相萃取中酸性和碱性介质中的材料稳 定性，等等。为了实现期望的分离，本领域熟练技术人员将应用最可能的工艺。非对映异构体混合物可以基于它们的物理化学差异，通过本领域熟练技术人员熟 知的方法分离成它们的单个非对映异构体，比如通过色谱法和/或分级结晶。对映异构体 可以通过以下方式得到分离，通过与适当的光学活性化合物(例如，手性辅助剂，比如手性 醇或者Mosher’ s酰基氯)反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对 映异构体和将单个非对映异构体转化(例如，水解)为相应的纯对映异构体。同时，一些本 发明化合物可以是阻转异构体(例如，取代的联芳基化合物)，这同样认为是本发明的一部 分。对映异构体还可以通过利用手性HPLC柱进行分离。基本上不含它的立体异构体的单一立体异构体，例如对映异构体可以通过利用比 如使用光学活性拆分试剂形成非对映异构体的方法拆分外消旋混合物获得(Eliel，Ε.和 ffilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds ( Wl/l^ ^iItl) "John Wiley & Sons，Inc.，New York, 1994 ；Lochmuller, C. H.，J. Chromatogr.，(1975) 113(3) 283-302)。本发明手性化合物的外消旋混合物可以通过任何适宜的方法进行分离和隔离， 包括(1)与手性化合物形成离子、非对映盐和通过分级结晶或者其它方法进行分离，(2)与 手性衍生化试剂形成非对映化合物，分离非对映异构体和将其转化成纯立体异构体，和(3) 直接在手性条件下分离基本上纯或者富集的立体异构体。参见^DrugStereochemistry， Analytical Methods and Pharmacology (药物立体化学，分析方法禾口药理学)，，Irving W. Wainer 编辑，Marcel Dekker, Inc.，New York (1993)。
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在方法(1)下，非对映的盐通过使光学异构纯的手性碱比如番木鳖碱、奎宁、麻黄 素、士的宁、α-甲基-β-苯乙胺(安非他明)及类似手性碱与带有酸性官能团比如羧酸 和磺酸的不对称化合物反应而形成。通过分级结晶或者离子色谱法，非对映的盐可以得到 诱导分离。为了分离氨基化合物的旋光异构体，加入手性羧酸或者磺酸比如樟脑磺酸、酒石 酸、扁桃酸或者乳酸可以导致非对映的盐的形成。另外地，通过方法(2)，意欲进行拆分的底物与手性化合物的一种对映异构 体反应，从而形成非对映异构体对(Ε.和Wilen，S. "Stereochemistry ofOrganic Compounds (有机化合物的立体化学)”，John Wiley & Sons, Inc.，1994，第 322 页)。非 对映化合物可以通过以下方法形成使不对称化合物与光学异构纯的手性衍生化试剂比 如薄荷基衍生物反应，随后分离非对映异构体和进行水解，从而得到纯的或者富集的对映 异构体。确定光学纯度的方法包括在碱存在下制备外消旋混合物的手性酯，比如薄荷酯， 例如(_)氯甲酸薄荷酯，或者Mosher酯，乙酸α -甲氧基-α -(三氟甲基)苯酯(Jacob III. J. Org. Chem.，(1982)47 :4165)，和分析1H NMR谱以确定两种阻转对映异构体或者非 对映异构体的存在。阻转异构化合物的稳定非对映异构体可以通过正相和反相色谱法，按 照分离阻转异构萘基-异喹啉的方法进行分离和隔离(W096/15111)。通过方法(3)，两种 对映异构体的外消旋混合物可以使用手性固定相通过色谱法进行分离(“Chiral Liquid Chromatography (手相液体色谱法)，，(1989)W. J. Lough编辑，Chapman and Hall,New York ； Okamoto, J. ofChromatogr. , (1990)513:375-378)。富集或者纯化的对映异构体可以通过 用于区分其它具有不对称碳原子的手性分子的方法进行区分，比如旋光性和圆二色性。式I化合物的治疗方法本发明化合物可用作用于治疗由AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸 激酶、和/或双特异性激酶的调节或调整而介导的疾病或病症的预防剂或治疗剂。可按照 本发明方法治疗的AKT蛋白激酶介导的疾病包括但不限于炎性、过度增生性、心血管、神经 变性、妇科和皮肤疾病和病症。在一个实施方案中，所述药物组合物是为了治疗过度增殖性病症，包括以下类别 的癌症(1)心脏肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、 纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；(2)肺支气管癌(鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细 胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤(chondromatous hamartoma)、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌；(3)肠胃食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑 肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素 瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤(vipoma))、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤 (Karposi' s sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管 状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；(4)泌尿生殖道肾(腺癌、威尔姆斯瘤(Wilm' s tumor)[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、 前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间 质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；(5)肝脏肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝 母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；(6)骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤 维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨 细胞瘤、脊索瘤、骨软骨瘤(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨肌瘤样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；(7)神经系统头骨(骨瘤、血管瘤、肉 芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜(脑脊膜瘤、脑脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶 质过多)、脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体 瘤]、多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiform)、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网 膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊索神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)；(8)妇科子宫(子 宫内膜癌)、宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈非典型增生)、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液 性囊腺癌、未分类癌]、粒层泡膜细胞瘤(granulosa-thecal cell tumor)、塞-莱细胞瘤 (Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、 腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉 瘤)、输卵管(癌)；(9)血液血液(髓细胞性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性 白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓组织增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合 征)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；(10)皮肤晚期黑素瘤、恶性黑素瘤、基底 细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、胎块发育不良性痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、 血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、银屑病；(11)肾上腺成神经细胞瘤；(12)乳房转移性乳 癌；乳腺癌；(13)结肠；(14) 口腔；(15)毛细胞性白血病；(16)头和颈；(17)和包括难治的 转移性疾病；卡波西肉瘤；Bannayan带状疮疹综合征(Bannayan-Zonana syndrome)和考登 病或Lhermitte-Duclos病、以及其它类型的过度增殖性病症的其它疾病。本发明化合物和方法可用来治疗疾病和病症，如类风湿性关节炎、骨关节炎、 克罗恩病(Chron’ s disease)、血管纤维瘤、眼病(如，视网膜血管形成、糖尿病性视网 膜病、与年龄相关的黄斑退行性改变(age-related macular degeneration)、黄斑变性 (macular degeneration)等等)、多发性硬化、肥胖症、阿尔茨海默病、再狭窄、自身免疫疾 病、过敏症、哮喘、子宫内膜异位症、动脉粥样硬化、静脉移植物狭窄、吻合周假体移植物狭 窄(peri-anastomaticprothetic graft stenosis)、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、银屑 病、组织修复所致神经损伤的抑制、瘢痕组织形成(且可有助于伤口愈合)、多发性硬化、炎 性肠病、感染尤其是细菌感染、病毒感染、反转录病毒感染或寄生物感染(通过增加细胞凋 亡)、肺病、肿瘤、帕金森病、移植排斥(作为免疫抑制药)、脓毒性休克等等。因此，本发明的另一方面提供了治疗哺乳动物中AKT蛋白激酶介导的疾病或医学 状况的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有效治疗或预防所述疾病的量的式I化合物 或其药学上可接受的盐。将与这样的量符合的式I化合物的量将取决于多个因素而变化，比如具体化合 物、疾病状况和其严重度、需要治疗的哺乳动物的特性(如体重)，但仍然可由本领域技术 人员常规地确定。本发明还提供了用于治疗AKT蛋白激酶介导的疾患的式I化合物。本发明的另一方面是式I化合物在制备用于治疗，如用于治疗或预防AKT蛋白激 酶介导的疾患的药物中的用途。联合治疗本发明化合物可以与例如下文所述的一种或多种另外的药物联合应用。第二药物 的剂量可以根据临床应用的剂量适当地选择。本发明化合物和第二药物的比率可以根据施 用主体、施用途径、目标疾病、临床病况、联合用药及其它因素来适当地确定。在施用主体是
13人类的情况下，例如，以每本发明化合物重量份计，第二药物可以以0. 01至100重量份的量使用。优选药物联合制剂或者剂量给药方案的第二化合物对本发明化合物具有补充活 性，从而使得它们不会不利地彼此影响。所述药物适宜地以对预定目标有效的量组合存在。 相应地，本发明另一方面提供一种组合物，其包含本发明化合物并联合第二药物，例如本文 描述的。本发明化合物和另外的药物活性剂可以在单一的药物组合物中一起施用，或者分 别地施用，当分别施用时可以同时或以任何顺序来顺序施用。顺序施用可以在时间上靠近 或者在时间上远离。本发明化合物和第二药物的量以及施用的相对时间将被选择以便达到 希望的联合治疗效果。联合治疗可以提供“协同作用”和证实具有“协同性”，即当活性成分一起使用时 实现的作用大于分开使用所述化合物获得的作用的和。当活性成分(1)被共同配制和在 联合的、单位剂量制剂中同时施用或者递送时；(2)作为分开的制剂交替或者平行递送时； 或者(3)通过一些其它方案应用时，可以获得协同作用。当在交替疗法中递送时，可以在化 合物顺序施用或者递送时，例如通过在分开的注射器中进行分别注射时，获得协同作用。通 常，在交替治疗期间，各种活性成分的有效剂量被顺序施用，即系列施用，而在联合治疗中， 两种或者更多种活性成分的有效剂量被一起施用。施用涂径本发明化合物可以通过任何适于待治疗的疾患的途径进行施用。适宜的途径包括 口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、鼻、局 部(包括口腔和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内途径。应当理解，优选的途径可以随着例 如受者的状况的变化而变化。在化合物被口服施用时，可以与药学上可接受的载体或者赋 形剂一起将其配制成丸剂、胶囊、片剂等等。当化合物被肠胃外施用时，其可以与药学上可 接受的肠胃外媒介物(vehicle) —起配制和可以配制成可注射的单位剂量形式，如以下所 详述。药物制剂为了使用本发明化合物来治疗性治疗(包括预防性治疗)包括人类在内的哺乳动 物，通常按照标准制药实践将其配制为药物组合物。按照本发明这一方面，提供包含本发明 化合物的药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物包含式I化合物以及药学上可接受 的稀释剂或载体。本发明的药物组合物将以与良好的医疗实践相一致的方式进行配制、给药和施 用，即施用的量、浓度、日程、过程、媒介物和途径。在该上下文中考虑的因素包括治疗的具 体病症、进行治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、病症病因、药剂的递送部位、施用 方法、施用日程和医师已知的其它因素。意欲施用的化合物的治疗有效量将受所述考虑的 支配，该量是预防、改善或者治疗病症所需的最低量。一般将本发明化合物配制成药物剂 型，从而提供易于控制的药物剂量和使得患者顺从处方方案。在本文使用的组合物优选是无菌的。特别是，用于体内施用的制剂必须是无菌的。 通过例如滤过无菌过滤膜，所述灭菌可以得到轻易实现。通常可以将化合物贮存为固体组 合物、冻干制剂或者水溶液。
本发明化合物的药物制剂可以制备用于多种施用途径和类型。例如，具有期望纯 度的本发明化合物可以以冻干制剂、磨碎粉末或者水溶液的形式任选地与药学上可接受的 稀释剂、载体、赋形剂或者稳定剂混合(Remington，s Pharmaceutical Sciences(雷氏药 学)(1980)第16版，0sol，A.编辑)。配制可以在环境温度下，在适当的pH和期望的纯度 下，通过与生理学可接受的载体即在使用的剂量和浓度下对受者无毒的载体混合来进行。 制剂的PH主要取决于具体应用和化合物的浓度，但是可以为约3至约8。在pH5的乙酸盐 缓冲液中配制是适宜的实施方案。所述制剂可以利用常规的溶解和混合方法制备。例如， 在一种或者多种赋形剂存在下，将大量药物(即，本发明化合物或者化合物的稳定形式(例 如，与环糊精衍生物或者其它已知的络合剂的络合物)溶于适宜的溶剂中。使用的具体载体、稀释剂或者赋形剂将取决于本发明化合物意欲应用的方式和目 的。溶剂通常基于本领域技术人员认可的对施用哺乳动物安全(GRAS)的溶剂进行选择。 通常，安全溶剂是无毒含水溶剂，比如水和其它可溶于水中或者与水混溶的无毒溶剂。适宜 的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等等及其混合物。 可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在使用的剂量和浓度下对受者无毒，并且包括缓冲 剂，比如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(比如 十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯化铵；苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵；苯酚、丁醇或者苄醇； 对羟苯甲酸烷基酯，比如对羟苯甲酸甲酯或者对羟苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己 醇；3-戊醇；和间甲酚；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，比如血清白蛋白、明胶 或者免疫球蛋白；亲水聚合物，比如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，比如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬 酰胺、组氨酸、精氨酸或者赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或者 糊精；螯合剂，比如EDTA ；糖类，比如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇；形成盐的抗衡离子， 比如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，比如TWEEN 、 PLUR0NICS 或者聚乙二醇(PEG)。所述制剂还可以包含一种或者多种稳定剂、表面活性剂、 润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工辅剂、着色剂、甜 味剂、香料、芳香剂和其它已知提供药物(即，本发明化合物或者其药物组合物)优雅外观 或者有助于药物产品(即，药物)制造的添加剂。还可以将活性药物成分截留在通过例如 凝聚工艺或者界面聚合制备的微胶囊分别例如羟甲基纤维素或者明胶-微胶囊和聚_(甲 基丙烯酸甲酯)微胶囊中、在胶质药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳 米颗粒和纳米胶囊)或者在大乳剂中。所述工艺公开在Remington，s Pharmaceutical Sciences (雷氏药学)第16版，0sol，A.编辑(1980)。“脂质体”是可以用于向哺乳动物递 送药物(比如式I化合物和，任选地其它治疗剂)的由多种脂类、磷脂和/或表面活性剂组 成的小囊泡。脂质体的组分通常构造成双层形式，与生物膜的脂构造类似。可以制备本发明化合物的缓释制品。缓释制品的适宜实例包括含有式I化合物的 固体疏水聚合物的半渗透性基体，所述基体为成形制品例如薄膜或者微胶囊的形式。缓释 基体的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或者聚(乙烯醇))、 聚交酯(美国专利第3，773，919号)、L-谷氨酸和Y -乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降 解的亚乙基-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-羟乙酸共聚物比如LUPRON DEPOT (由乳酸-羟 乙酸共聚物和乙酸亮丙立得组成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。本发明化合物的药物组合物可以为无菌可注射制品的形式，比如无菌的可注射含水或者含油混悬剂。所述混悬剂可以利用上述的适宜分散剂或者润湿剂和助悬剂根据本领 域已知的方法进行配制。无菌可注射制品也可以是无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的 无菌可注射溶液剂或混悬剂，如1，3_ 丁二醇中的溶液剂，或制备为冻干粉末。在可接受的 溶媒和溶剂中，可以使用的为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，通常可以将无菌不 挥发油类用作溶剂或者悬浮介质。基于上述目的，任何温和的不挥发油都可以使用，包括合 成单甘油酯或者二甘油酯。此外，比如油酸的脂肪酸同样可以用于制备可注射剂。适于肠胃外施用的制剂包括含水和无水无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓 冲液、杀菌剂和使得制剂与预期受者的血液等渗的溶质；和含水和无水无菌混悬剂，其可以 包括助悬剂和增稠剂。本发明的组合物可采用适于口服应用(如片剂、糖锭剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、水 性或油性混悬剂、乳剂、可分散粉剂或颗粒剂、糖浆剂或酏剂)、局部应用(如乳膏剂、软膏 剂、凝胶剂、或水性或油性溶液剂或混悬剂)、吸入施用(如作为细微粉剂或液体气雾剂)、 吹入施用(如作为细微粉剂)。片剂制剂用的适宜的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂，如乳糖、碳 酸钠、磷酸钙或碳酸钙；制粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或藻酸(algenic acid)；粘合剂，如 淀粉；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石；防腐剂，如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯；和抗氧化 剂，如抗坏血酸。片剂制剂可以是未包衣的，或包衣以改变其崩解作用和随后活性成分在胃 肠道的吸收、或者改进其稳定性和/或外观，在任何情况下，采用本领域熟知的常规包衣材 料和方法进行包衣。口服用组合物可采用硬明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸 钙、磷酸钙或高岭土混合，或者可作为软明胶胶囊，其中活性成分与水或诸如花生油、液体 石蜡或橄榄油等的油混合。水性混悬剂一般含有细粉形式的活性成分与一种或多种下述物质助悬 剂，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄 蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，如卵磷脂或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(如聚 氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物如十七碳乙烯氧基十六醇 (h印tadecaethyleneoxycetanol)、或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产 物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯、或环氧乙烷与由脂肪酸和脱水己糖醇衍生的偏酯的缩合产 物(如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯)。水性混悬剂也可含有一种或多种防腐剂(如对羟基 苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化剂(如抗坏血酸)、着色剂、芳香剂和/或甜味剂(如蔗糖、糖 精或阿司帕坦)。通过将活性成分悬浮于植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油 (如液体石蜡)中，可配制油性混悬剂。油性混悬剂也可含有增稠剂，如蜂蜡、固体石蜡或鲸 蜡醇。也可加入甜味剂如上述甜味剂和芳香剂，以提供适口的口服制品。这些组合物可通 过加入抗氧化剂如抗坏血酸来防腐。适用于通过加入水而制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂一般含有活性成分 和分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂的实例 为上文已经提及的分散剂、润湿剂和助悬剂。其它赋形剂如甜味剂、芳香剂和着色剂也可存在。
本发明的药物组合物也可采用水包油型乳剂。油相可以是植物油如橄榄油或花生 油或矿物油如液体石蜡或这些油中任何油的混合物。适宜的乳化剂可以是例如天然树胶如 阿拉伯胶或黄蓍胶、天然磷脂如大豆卵磷脂、由脂肪酸和脱水己糖醇衍生的酯或偏酯(如 脱水山梨醇单油酸酯)以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨醇单油 酸酯。乳剂还可含有甜味剂、芳香剂和防腐剂。糖浆剂和酏剂可用甜味剂如甘油、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖来配制，也可 含有缓和剂(demulcent agent)、防腐剂、芳香剂和/或着色剂。栓剂制剂可通过将活性成分与合适的无刺激赋形剂混合来配制，该赋形剂在常温 下为固体，但在直肠温度下为液体，因而在直肠中融化而释放药物。适宜的赋形剂包括例如 可可脂和聚乙二醇。适于阴道施用的制剂可以以阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡 沫或者喷雾剂制剂的形式存在，所述制剂中除了活性成分之外，还含有本领域已知的适当 载体。诸如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂和水性或油性溶液剂或混悬剂的局部制剂一般可通 过采用本领域熟知的常规方法，将活性成分与常规局部可接受的溶媒或稀释剂配制在一起 而制得。经皮施用的组合物可以是本领域技术人员公知的那些经皮贴片的形式。适于肺内或者经鼻施用的制剂的粒径例如在0. 1至500微米的范围内(包括以微 米递增的在0. 1至500微米之间的粒径，比如0. 5、1、30微米、35微米等等)，其通过迅速吸 入鼻通道或者通过吸入口腔从而达到肺泡小囊进行施用。适宜的制剂包括活性成分的水性 或油性溶液。适于气雾剂或者干粉施用的制剂可以根据常规方法制备，并且可以与其它治 疗剂一起递送，比如如下所述的迄今用于病症治疗或者预防中的化合物。取决于用于施用药物的方法，可以以多种方式对应用的药物组合物(或者制剂) 进行包装。例如，用于分配的制品可包括其中已经沉积有适当形式的药物制剂的容器。适宜 的容器是本领域熟练技术人员熟知的，包括比如瓶(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金 属圆筒等等材料。所述容器还可以含有防干扰组件，从而防止轻易接触包装中的物质。此 外，容器在其表面上放置有描述容器中内含物的标签。该标签还可以包括适当的警告。所 述制剂可以被包装在单位剂量或者多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以贮 存在冻干(冷冻干燥)条件下，使得在即时使用之前仅仅需要加入无菌液体载体例如，水以 用于注射。即时注射溶液和混悬剂可以由先前所述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优 选的单位剂量制剂是含有以上所述的每日剂量或者每日亚剂量单位的活性成分或者其适 当部分的制剂。本发明进一步提供了兽医学组合物，其包含至少一种如上所定义的活性成分与由 此的兽医学载体。兽医学载体是可以用于施用组合物目的的材料，并且可以是惰性或者在 兽医学领域可接受的并且与活性成分相容的固体、液体或者气体材料。这些兽医学组合物 可以肠胃外、口服或者通过任何其它期望的途径施用。与一种或多种赋形剂组合产生单一剂型的本发明化合物的量，将根据所治疗的受 治疗者、病症或疾患的严重程度、施用速率、化合物的分布和处方医师的判断而必要地变 化。在一个实施方案中，向需要其的哺乳动物施用适当量的本发明化合物。在一个实施方案 中，施用以每天约0. OOlmg/kg体重至约60mg/kg体重的量发生。在另一个实施方案中，施
17用以每天约0. 5mg/kg体重至约40mg/kg体重的量发生。在一些情况中，低于前述范围的下 限的剂量水平可能是足够的，而在其它情况中，可能采用更大剂量而不造成任何有害的副 作用，只要这样的更大剂量首先分成整天施用的若干小剂量。有关施用途径和剂量方案的 进一步的信息，参见ComprehensiveMediciinal Chemistry (综合药物化学)第5卷第25. 3 章(Corwin Hansch ；编委会主席)，Pergamon Press 1990，其通过引用具体地并入本文。Mrn在本发明的另一实施方案中，提供了含有可以用于治疗如上所述的病症的物质的 制品或者“药盒”。在一种实施方案中，所述药盒包括含有本发明化合物的容器。适宜的容 器包括，例如瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等等。所述容器可以由多种材料形成，比如玻璃或 者塑料。所述容器可以装有有效治疗疾患的本发明化合物或者其制剂，并且可以具有无菌 入口(例如，容器可以为带有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或者小瓶)。所述药盒还可以包括在容器上的或者容器附随的标签或者包装说明书。术语“包 装说明书”用于指通常包含在治疗产品的商业包装中的说明书，其包含关于适应症、应用、 剂量、施用、禁忌症和/或关于所述治疗产品的应用警告的信息。在一个实施方案中，标签 或者包装说明书说明包含本发明化合物的组合物可用于治疗例如由AKT激酶介导的病症。 标签或者包装说明书还可说明该组合物可用于治疗其它病症。在某些实施方案中，药盒适宜递送本发明化合物的固体口服形式，比如片剂或者 胶囊。优选所述药盒包括多个单位剂量。所述药盒可以包括按它们预期的应用顺序定向的 剂量的卡片。所述药盒的实例为“泡罩包装”。泡罩包装在包装工业中是公知的，并且广泛 用于包装药物单位剂型。如果期望，可以提供记忆辅助工具，例如号码、字母或者其它标记 的形式，或者可以提供有表明在治疗时间表中可以施用剂量的日期的日历插页。根据另一种实施方案，药盒可以包括(a)具有包含在其中的本发明化合物的第一 容器；和(b)具有包含在其中的第二药物制剂的第二容器，其中所述第二药物制剂包括可 用于治疗AKT激酶介导的病症的第二化合物。替代或者另外地，药盒还可以包括含有药学 上可接受的缓冲液比如注射用抑菌水(bacteriostatic water for injection, BWFI)、磷 酸缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液的第三容器。还可以包括从销售和用户立场而言需 要的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。药盒还可以包括施用本发明化合物和如果存在的第二药物制剂的指导。例如，如 果药盒包括含有本发明化合物的第一组合物和第二药物制剂，药盒还可以包括将第一药物 组合物和第二药物组合物同时、顺序或者分别地施用于需要其的患者的说明。在其中药盒包含本发明组合物和第二治疗剂的某些其它实施方案中，药盒可以包 括含有分别的组合物的容器比如分开的瓶或者分开的箔片包裹，然而，分别的组合物还可 以包含在单独的、未分开的容器中。在某些实施方案中，药盒包括施用分别的组分的说明。 当分别的组分优选以不同的剂型(例如，口服或者肠胃外)施用时，在不同的剂量时间间隔 施用时，或者当处方医师期望组合的单一组分滴定时，药盒形式是特别有利的。因此，本发明的进一步方面提供治疗由Akt激酶介导的病症或疾病的药盒，其中 所述药盒包含a)包含本发明化合物或其药学上可接受的盐的第一药物组合物；和b)使用 说明书。在某些实施方案中，药盒还包含(C)第二药物组合物，其中所述第二药物组合物包含适于治疗由Akt激酶介导的病症或疾病的第二化合物。在包含第二药物组合物的某些 实施方案中，药盒还包含向需要其的患者同时、顺序或分别施用所述第一药物组合物和第 二药物组合物的说明。在某些实施方案中，所述第一药物组合物和第二药物组合物容纳在 不同容器中。在其它实施方案中，所述第一药物组合物和第二药物组合物容纳在同一容器 中。虽然式I化合物主要作为用于哺乳动物的治疗剂是有价值的，但它也可用于需要 控制AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的任何情 况。因此，它可用作供开发新的生物测试和寻找新的药理学药剂用的药理学标准物。可以在体外、体内或在细胞系内测试本发明化合物对AKT蛋白激酶、酪氨酸激酶、 其它丝氨酸/苏氨酸激酶、和/或双特异性激酶的活性。体外测定包括确定对激酶活性抑 制作用的测定。可选的体外测定定量确定抑制剂与激酶结合的能力，并且可以通过放射性 标记该抑制剂、然后结合、分离抑制剂/激酶复合物并确定结合的放射性标记的量来测量， 或者通过进行竞争实验来测量，其中将新抑制剂与已知的放射性配体一起温育。这些和其 它有用的体外和细胞培养物测定是本领域技术人员众所周知的。虽然已描述了本发明，并且在某种程度上作出了具体阐述，但应理解，本发明所公 开的内容仅仅作为示例，本领域技术人员在不背离本发明的精神和不偏离本发明要求保护 的范围的情况下，可以对各部分的组合和排列作出多种变化。生物学实施例AKT-I激酶测定本发明所述化合物的活性可采用下述激酶测定确定该测定采用市售IMAP试剂 盒，通过荧光极化测量全长人类重组活性AKT-I对荧光标记肽的磷酸化。测定材料从IMAP AKT测定散装试剂盒(IMAP AKT Assay Bulk Kit)获得，产品号 为R8059，得自Molecular Devices，Sunnyvale，CA。该试剂盒的材料包括IMAP反应缓冲液 (5X)。经稀释的 IXIMAP 反应缓冲液含有 IOmMTris-HCl (pH7. 2) UOmM MgCl2、0· 1% BSA、 0. 05% NaN3。临用前常规加入DDT至ImM的终浓度。也包括IMAP结合缓冲液(5Χ)和IMAP 结合试剂。结合溶液以IMAP结合试剂在IX IMAP结合缓冲液中的1 400稀释液来制备。荧光素标记的AKT 底物(Crosstide)具有(Fl)-GRPRTSSFAEG 的序列。在 1 X IMAP 反应缓冲液中制备20 μ M的贮液。 所用的板包括Costar 3657 (382孔，由聚丙烯制成，具有白色ν形底)，该板用于化 合物稀释和制备化合物-ATP混合物。测定板为PaCkardPrOXyPlateTM-384F。所用的AKT-I由用PDKl和MAP激酶2活化的全长人类重组AKT-I制备。为了进行测定，制备二甲亚砜(“DMS0”)中IOmM的化合物贮液。在DMSO中以 1 2连续稀释贮液和对照化合物(10 μ L化合物+10 μ L DMS0) 9次，得到所需剂量范围内 的50 X稀释液系列。然后，将2. 1 μ L等份的化合物的DMSO溶液转移至Costar 3657板 上，该板含有50 μ L含ImM DTT的1 X IMAP反应缓冲液中的10. 4 μ M ATP。在充分混合后， 将2. 5- μ L等份液体转移至ProxyPlate -384F板上。通过加入含200nM荧光标记肽底物和4nM AKT-I的2. 5_μ L等份溶液起动该测定。 将板以IOOOg离心1分钟，并于环境温度下保温60分钟。然后加入15 μ L结合溶液猝灭反 应，再次离心，于环境温度下再保温30分钟，然后在配置的Victor 1420 Multilabel HTS计数器上读数，以测量荧光极化。在以上测定中检验实施例1的化合物，发现其具有小于500nM的IC5(I。制备实施例为了说明本发明而包括下述实施例。然而，应当理解，这一实施例并不限制本发 明，仅仅用来提出实施本发明的方法。本领域技术人员会认识到，可容易地改变所述的化学 反应为制备本发明化合物的替代方法，用于制备本发明化合物的替代方法视为落入本发明 范围内。例如，本发明化合物的合成可采用对于本领域技术人员明显的改进方法成功地进 行，例如通过适当保护干扰基团，利用本领域已知的除本申请所述试剂之外的其它合适试 剂，和/或对反应条件进行常规改进。或者，本领域已知的其它反应也视为能用于制备本发 明化合物。以下实施例中，除非另有说明，否则所有温度均以摄氏度记载。试剂购自商业供应 商，如 Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI 或 Maybridge，并且无需进一步纯化而 使用，除非另有说明。四氢呋喃(“THF”)、二氯甲烷(“DCM”)、甲苯和二噁烷以安全密封 瓶购自Aldrich，按照收到时的状态使用。以下叙述的反应一般在氮气或氩气正压下、或者在无水溶剂中用干燥管(除非另 有说明)进行，反应烧瓶通常配有橡胶隔片以供通过注射引入底物和试剂。玻璃器皿经烘 箱干燥和/或加热干燥。1H NMR谱在以400MHz操作的Varian仪器上记录。用四甲基硅烷(0. OOppm)或残 余溶剂(CDCl3 7. 25ppm ；CD3OD 3. 3Ippm ；D2O 4. 79ppm ；d6_DMS0 2. 50ppm)作为参比标准， 以CDC13、CD3OD, D2O或d6-DMS0溶液(以ppm报告)得到1H NMR谱。当报告峰多重性时， 使用以下缩写s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双双峰)、 dt (双三重峰)。当提供偶合常数时，以赫兹(Hz)报告。实施例1 (S)-2-(4-氯-3-氟苯基)-1-(4_((51710-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢 _5H_ 环 戊,二烯并「dl P密啶-4-某)哌嗪-1-某)-3-((lr，4S)-4-甲氧,某环己某氨某)丙-1-酮 步骤1 使用干冰-异丙醇浴将乙酸乙酷(“Et0Ac”;900mL)中的普累根酸乙酯 (Ethyl pulegenate) (130g, 662mmol)冷却到_78°C。对该混合物进行臭氧分解直到反应的 颜色变成紫色。此时，臭氧的产生终止，将反应从干冰浴移出。向反应混合物通氧，直到变 成黄色。真空下浓缩反应混合物，将所得的残余物溶解到冰乙酸(400mL)中。将溶液冷却 到0°C，经30分钟分批地加入Zn粉(65g，993mmol)。然后允许反应搅拌2小时，此时将反 应混合物滤过硅藻土垫以除去锌粉。用NaOH和NaHCO3水溶液将乙酸中和到pH7，用乙醚 萃取(3X800mL)。用盐水、MgSO4干燥合并的有机物并浓缩以获得作为液体的(2R)_2_甲 基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯(107g，95%)。 步骤 2 将水(60mL)中的 KOH (8. 3g，147. 9mmol)力口到(2R) -2-甲基-5-氧代环戊 烷羧酸乙酯(20g，117. 5mmol)与硫脲(9. 2g，120. 9mmol)混合物的乙醇(IOOmL)溶液。将 混合物回流10小时。冷却后，除去溶剂。用浓HCl(12mL)在0°C中和所得的残余物，然后 用DCM萃取(3X150mL)。除去溶剂，通过硅胶色谱纯化所得的残余物，以己烷/乙酸乙酯 (2 1)洗脱获得(R)-2-巯基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_醇(12g， 56% )。MS(APCI+) [M+H]+183o 步骤3 将阮内镍(15g)和NH4OH (20mL)加到(R) -2-巯基-5-甲基_6，7- 二 氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g，65.8mm0l)在蒸馏水(IOOmL)中的悬液。将混 合物回流3小时然后过滤。浓缩滤液获得(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧 啶-4-醇(9. 89g,99% )。MS(APCI+) [M+H]+151。步骤4和5描述从(R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯开始，合成(R)-5-甲 基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇的替代方案。
步骤4:将乙酸键(240g，3114mmol)加到(R) _2_甲基_5_氧代环戊烷羧酸乙酯 (106. Og, 622. 8mmol)的MeOH(1. 2L)溶液中。在室温在氮气下搅拌反应混合物20小时，由 TLC和HPLC确定反应完全。浓缩反应混合物以除去MeOH。将所得的残余物溶解在DCM中，用 H20(2X)、盐水(IX)洗涤，干燥(Na2SO4),过滤并浓缩以获得作为油的(R)_2_氨基-5-甲 步骤5 将甲酰胺(303. 5mL,7640mmol)中的含有(R)_2_氨基-5-甲基环戊烯 羧酸乙酯(161.6g,955mmol)和甲酸铵(90. 3g, 1433mmol)的溶液加热到内部温度为150°C 并搅拌17小时。冷却反应混合物，转移到2L单萃取烧瓶(single nextracted flask)。然后 通过高真空蒸馏除去过量甲脒。在甲脒停止馏出后，将蒸馏釜中剩余的油溶解在DCM中并 用盐水洗涤(3X200mL)。用DCM萃取合并的水相洗液。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)， 过滤并浓缩。将所得的油溶解在少量DCM中，使用分液漏斗将该溶液加到乙醚的搅拌溶液 (相对于DCM溶液约5倍体积的乙醚)，导致形成一些沉淀。通过滤过中等砂心漏斗(medium frit funnel)除去这些沉淀，用乙醚冲洗并丢弃。浓缩滤液，从乙醚研磨重复两次。然后 在高真空管道中干燥产物，获得作为浆状固体的(R)-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并 [d]嘧啶-4-醇(93. 23g，65. 0%产率)。LC/MS (APCI_)m/z 149. 2。 步骤6 通过滴液漏斗将纯POCl3 (463. 9mL，5067謹ol)缓慢地加到(R) _5_甲基_6， 7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(152. 2g,1013mmol)在 DCE(1.2L)中的 0°C溶液。 完成加入后，将反应混合物升温到室温，然后在搅拌下加热到回流70分钟。通过HPLC确定 反应完成。将反应混合物冷却到室温，如下以4部分猝灭过量POCl3:将反应混合物转移到 分液漏斗并滴到含有冰和在冰浴中冷却的饱和NaHCO3溶液的烧杯中。完成加入每一部分 的反应混合物后，搅拌猝灭的混合物30分钟以确保在转移到分液漏斗之前完全破坏P0C13。 将混合物转移到分液漏斗并用DCM萃取(2X)。将合并的萃取液干燥(Na2SO4)，过滤并浓 缩。在硅胶上如下纯化粗产物将硅胶(Ikg)在9 1己烧乙酸乙酯中浆化在3L砂心漏 斗上，真空下沉积硅土，盖上沙。将粗产物用DCM/己烷混合物上样，使用IL侧臂烧瓶在真 空下洗脱化合物。首先洗脱高Rf的副产物，然后是作为油的(R)-4-氯-5-甲基-6，7-二 氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(104. 4g，61.09%产率)。将三乙胺(93. 0mL,534mmol)和哌 嗪-I-羧酸叔丁酯(34. 8g，187mmol)加到(R) -4-氯-5-甲基-6，7- 二氢-5H-环戊二烯并 [d]嘧啶(30. 0g，178mmol)的n-Bu0H(250mL)溶液。在氮气下将反应混合物加热到回流并 搅拌过夜(17小时)，之后在旋转蒸发器(rotavap)上浓缩。将所得的油溶解在DCM中，用 H2O洗涤，干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。在硅胶上纯化所得的油，首先以2 1己烷乙酸乙 酯洗脱，直到清澈地洗脱产物，然后以1 1至1 5 DCM 乙酸乙酯的梯度洗脱获得作为 粉末的(R)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸叔丁 酯(42. 0g，74. 产率)。LC/MS(APCI+)m/z 319. 1[M+H]+。
C 、 步骤7 将固杰77% max.间氯过苯甲酸(“m-CPBA” ；23· 9g，107mmol)分批加 到(R)-4-(5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸叔丁酯 (20. Og,62. 8mmol)在CHCl3(310mL)中的0°C溶液中。搅拌反应混合物5分钟，然后升温到 室温并搅拌另外90分钟。7. 5小时后HPLC看起来相似。将反应混合物冷却到0°C，然后加 Λ NaHCO3(13. 2g，157mmol)和另外0. 5当量的m-CPBA0搅拌反应混合物过夜(14小时)。 将反应混合物冷却到0°C，通过滴液漏斗逐滴加入Na2S2O3 (29. 8g，188mmol)的H20(50mL) 溶液。随后通过滴液漏斗加入Na2C03(24. 6g，232mmOl) &H20(70mL)溶液(混合物变得同 质)。搅拌反应混合物30分钟，然后用CHCl3萃取混合物(3 X 150mL)。将合并的萃取液干 燥(Na2SO4),过滤并浓缩以获得(R)-4-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪基)_5_甲基-6，7-二 氧-5H-环戊二烯并[d]嘧啶 1-氧化物(21. Og, 100% ) ο LC/MS (APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。 步骤8 将 Ac20(77.0mL，816mmol)力卩到(R) ~4~(4~(叔丁氧基羰基)哌 嗪-1-基)-5_甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶1-氧化物(21.0g，62. 8mmol) 中。在氮气下在90°C沙浴中加热反应混合物并搅拌100分钟。将反应混合物冷却到室 温，通过旋转蒸发除去过量乙酸酐。将所得的油溶解在DCM中，然后小心地将其倒入冰饱 ^P Na2CO30用DCM萃取混合物，将合并的萃取液干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩获得作为泡沫的 (5R)-4-(7-乙酰氧基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(23. 6g, 100% ) ο LC/MS(APCI+)m/z 377·1[Μ+Η]+。 步骤 9 将 LiOH-H2O (6. 58g, 157mmol)加到(5R) -4- (7-乙酰氧基-5-甲基-6，7- 二 氧-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23. 6g，62. 69mmol)在2 1THF H20(320mL)中的0°C溶液。搅拌反应混合物10分钟，然后升温到室温。LC/MS在3 小时和4. 5小时时看起来相同。将反应混合物冷却到0°C，然后将饱和NH4C1加到混合物。 搅拌混合物5分钟，通过旋转蒸发除去大部分THF。用EtOAc萃取混合物(3X250mL)，将 合并的萃取液干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。将粗产物在Biotage 65M 4 1 DCM 乙酸乙 酯、然后梯度至1 1到1 4 DCM 乙酸乙酯上进行快速色谱。洗脱产物后，然后将乙 酸乙酯冲洗过柱。然后用30 1 DCM MeOH洗脱剩余的产物(8. 83g)。将混合的级分用 Biotage 40M使用相同条件进行再次快速色谱以获得另一部分(2. 99g)，这获得作为泡沫 的(5R)-4-(7-羟基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌嗪羧酸 叔丁酯(11.82g，56. 38%产率)的组合产生。LC/MS(APCI+)m/z 335. 1[M+H]+。
Boc步骤10 将DMS0(5. 45mL, 76. 8mmol)的DCM(50mL)溶液通过滴液漏斗逐滴加到 草酰氯(3. 35mL，38.4mmol)在DCM(150mL)中的_78°C溶液。搅拌反应混合物35分钟，然 后通过滴液漏斗缓慢加入(5R)-4-(7-羟基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]啼 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 17g,27. 4mmol)的DCM(80mL)溶液。在_78°C将反应混 合物搅拌另外1小时，然后将纯三乙胺(18. OmL, 129mmol)加到混合物。然后允许反应混合 物升温到室温，然后搅拌30分钟。加入H20。用DCM萃取混合物(3X200mL)，将合并的萃取 液干燥(Na2SO4),过滤并在真空浓缩。在硅胶(Biotage 65M)上纯化粗产物用大约SOOmL 的4 1 DCM EtOAc、然后梯度至1 1 DCM 乙酸乙酯冲洗柱直到产物洗脱，然后用 1 4 DCM EtOAc洗脱产物获得作为泡沫的(R)-4-(5-甲基-7-氧代-6，7-二氢-5H-环 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.58，82.3%产率)。从DCM/己烷浓缩 (3X)泡沫，这也获得泡沫。HPLC >95%面积。LC/MS(APCI+)m/z 333[M+H]+。
步骤11 将三乙胺(4. 33mL，31. Immol ；使用前用氮气脱气30分钟)和甲酸
(1.36mL，36. Immol ；使用前用氮气脱气30分钟)加到(R) _4_(5-甲基-7-氧代-6，7-二 氧-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9. 75g，29. 3mmol)的DCM(210mL ； 使用前用氮气脱气30分钟)溶液中。搅拌混合物5分钟，然后加入Ru催化剂(0. 0933g, 0. 147mmol)。在正氮压下搅拌反应过夜(18小时)。将反应混合物浓缩至干燥并在高真空干
BN N
Γν
Oc
BN N
24燥。将不纯的材料在上样有1 1 DCM 乙酸乙酯500mL冲洗、然后1 4 DCM 乙酸乙酯 直到产物出现(第2个点)、然后梯度至纯乙酸乙酯的Biotage 65M上进行快速色谱，然后 用25 1 DCM MeOH洗脱剩余产物。合并各级分并在旋转蒸发器上浓缩。再次从DCM/己 烧浓缩剩余物，获得作为泡沫的4- ((5R，7R) -7-羟基-5-甲基-6，7- 二氢-5H-环戊二烯并 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(大量)和4-((5R，7S)-7-羟基-5-甲基-6，7- 二 氧-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(少量)(9. 35g，95. 3%产率) 的混合物。LC/MS(APCI+)m/z 335[M+H]+。1H NMR(CDCl3)显示并入次甲基甲醇(carbinol methine)的88%的非对映立体选择性。
步骤12 将 4-硝基苯甲酰氯(4. 27g,23. Ommol)加到 4_ ((5R，7R)-7-羟基 _5_ 甲 基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7. Og, 20. 9mmol)和 三乙胺(4. 38mL，31.4mm0l)在DCM(IlOmL)中的0°C溶液。在室温搅拌反应混合物过夜，然 后加入饱和NaHC03。搅拌混合物10分钟，然后用DCM萃取。将合并的萃取液干燥(Na2SO4), 过滤并浓缩。将粗产物在Biotage 65M上进行快速色谱(用3 1己烷乙酸乙酯上样粗 产物，然后2 1己烷乙酸乙酯洗脱4-((5R，7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6， 7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和一些混合的级分)。然 后使用1 2己烷乙酸乙酯洗脱4-((5R，7S)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二 氧-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。通过旋转蒸发浓缩带有产物 的级分，获得作为泡沫的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氢-5H-环 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8. 55g，84. 5%产率)。LC/MS (APCI+)m/z 484[M+H]+。1H NMR(⑶Cl3)显示单种非对映体)。通过旋转蒸发浓缩带有其它非对映体的 级分，获得作为泡沫的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氢-5H-环戊 二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 356g，3. 52%产率)。LC/MS (APCI+)m/z 484[M+H]+。步骤13描述从(5R)-4_(7-羟基-5-甲基-6，7_ 二氢-5H-环戊二烯并[d]啼 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(步骤9)制备4-((5R，7S)-5-甲基_7_ (4-硝基苯甲酰氧 基)-6，7_ 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和4-((5R，7R)-5-甲 基-7-(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪羧酸
叔丁酯的替代方案。 步骤13 将4-硝基苯甲酰氯(15. 78g,85. 03mmol)加到(R)-4-(7-羟基-5-甲 基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25. 85g，77. 30mmol) 和NEt3(ll. 73g, 16. 16mL, 115. 9mmol)在DCM(400mL)中的0°C溶液。搅拌反应混合物5分钟。 然后将混合物升温到室温并搅拌过夜(17小时)，然后加入饱和NaHC03。搅拌反应混合物10 分钟并转移到分液漏斗。收集有机层，用DCM洗涤水相萃取物(2X)。将合并的有机萃取物 干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。将粗产物在上样有7 1己烷乙酸乙酯的硅土上进行快速色 谱(梯度5 1己烷乙酸乙酯至2 1己烧乙酸乙酯至1 1己烧乙酸乙酯)。分 离了 一些透明的4- ((5R，7R) -5-甲基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氢-5H-环戊二烯并 [d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯级分、一些透明的4- ((5R，7S) -5-甲基-7- (4-硝基 苯甲酰氧基)-6，7_ 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯级分和一 些混合的级分。将混合的级分再次过柱，并与此前分离的材料合并，获得4-((5R，7R)-5-甲 基-7- (4-硝基苯甲酰氧基)_6，7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(14. 27g,38% )和 4-((5R，7S)-5-甲基 _7_(4-硝基苯甲酰氧基)-6，7-二氢-5H-环 戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12.58g，34%)。已显示，使用4-溴苯甲
酰氯提供略微更好的异构体分离。 步骤 14 将 LiOH-H2O (0. 499g, 11. 9mmol)力口至Ij 4-((5R，7R)-5-甲基-7_(4_ 硝基 苯甲酰氧基)-6，7_ 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2. 30g, 4. 76mmol)在2 1 THF H20(40mL)中的0°C溶液。将反应混合物升温到室温并搅拌1小 时。通过旋转蒸发除去THF。然后加入饱和NaHCO3，用乙酸乙酯萃取混合物。用饱和NaHCO3 洗涤(IX)合并的萃取液，干燥(Na2SO4),过滤并浓缩，获得作为泡沫的4-((5R，7R)-7-轻 基-5-甲基-6，7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1. 59g， 100. 0%产率)。流程正产物(workup just product)的HPLC获得大于98%面积的纯。LC/MS (APCI+)m/z 335[M+H]+。
步骤15 将 4M HCl/二噁烷(11. 2mL，44. 9mmol)加到 4-((5R，7R)-7-羟基-5-甲 基-6，7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0. 600g, 1. 79mmol) 的二噁烷(15mL)溶液中。在室温在氮气下搅拌反应混合物过夜(20小时)。将混合物浓缩 至干燥并在高真空管道中干燥。将粗产物悬浮在乙醚中，超声处理，并搅拌5分钟。通过在 氮压力下滤过中等砂心漏斗而分离固体，用乙醚冲洗，在氮气压下干燥，并进一步在高真空 管道干燥，获得作为粉末的(5R，7R) -5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6，7- 二氢-5H-环戊二烯 并[d]嘧啶-7-醇二盐酸化物(0. 440g，79. 8%产率)。LC/MS(APCI+)m/z 235。 步骤16 在0°C将三甲基乙酰氯(1. 68g，13. 9mmol)加到2_(4_氯_3_氟苯基) 乙酸(2. 50g, 13. 3mmol)和 TEA (d. 0. 726 ；2. OOmL, 14. 3mmol)的无水 THF(IOOmL)溶液并在 室温搅拌。在另一烧瓶中，在_78°C将n-BuLi (6. 424mL, 14. 58mmol)加到无水THF(IOOmL) 中的(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮(2. 47g，13. 9mmol)。在-78 °C搅拌反应20分钟，然后 向0°C混合的酸酐溶液逐滴加入该(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮溶液。允许反应在室温搅 拌过夜。用水(IOOmL)猝灭反应，用乙酸乙酯(IOOmL)稀释。分离各层，用盐水洗涤有 机物，干燥(MgSO4)并浓缩为残余物。通过快速色谱纯化所得的残余物，获得(R)_4-节 基-3-(2-(4-氯-3-氟苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(2.798，8.02讓01，60.5%产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3) 7. 37 (t, J = 8. 2Hz, 1H)，7· 33-7. 26 (m，3Η)，7· 18-7. 12(m，3H)，7· 07 (d, J =8. 2Hz, 1H)，4. 73-4. 65 (m, 1H)，4. 33-4. 18(m，4H)，3. 27 (dd, Jl = 3. 5Hz, J2 = 13. 3Hz,， 1H)，2. 77 (dd, Jl = 9. 4Hz, J2 = 13. 7Hz, 1H)。
步骤17 将(Ir，4r)-4-氨基环己醇盐酸化物(6. 67g,44mmol)悬浮在DCM(IOOmL) 中。然后加入Himing氏碱(15mL)，随后加入催化性4-二甲基氨基吡啶(“DMAP”)。搅拌 反应5分钟，然后经10分钟分批加入Boc2O(10. 2g,47mmol)。然后允许反应在室温搅拌过夜。通过加入IN HCl猝灭反应并允许搅拌10分钟。分离有机层，用DCM洗涤水层(2X)。 然后用盐水和MgSO4干燥合并的有机物并浓缩。将所得的残余物悬浮在己烷(除去任何过 量的Boc2O)中并过滤。作为固体获得期望的产物(lr，4r)-4-羟基环己基氨基甲酸叔丁酯 (5. lg，54%产率)。1H NMR(400MHz, CDCl3) 4. 35 (br s，1H)，3. 65-3. 52 (m，1H)，3. 43 (br s, 1H)，1. 99 (明显的三重峰，Jl = 17. 2Hz, J2 = 12. 1Ηζ，4Η)，1. 49-1. 30 (m, 12H)，1. 4-1. 08 (m, 2H)。
步骤18 在室温将 NEt3 (d. 0. 726 ；4. 95mL, 35. 5mmol)加到(Ir，4r)-4-羟基环己 基氨基甲酸叔丁酯(5. Ig, 23. 7mmol)的DCM(IOOmL)溶液并搅拌为悬液。搅拌反应10分 钟，随后加入二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸叔丁酯(6. 52mL，26. lmmol)，此时反应变成同 质溶液并搅拌2小时。用水(50mL)稀释反应，分离各层。用IN HCl(2X50mL)洗涤有机 物，干燥(MgSO4),浓缩为固体。通过快速色谱(5%乙酸乙酯/己烷)纯化固体，获得(Ir， 4r)-4-(叔丁基二甲基甲硅氧基)环己基氨基甲酸叔丁酯(6. 54g，19.8mmol，83.8%产 率)。1H NMR(400MHz,CDCl3) 4. 34 (br s, 1H)，3. 61-3. 50 (m, 1H) ,3. 4(br s, 1H)，1. 97(d, J = 12. 9Hz，2H)，1. 82 (d, J = 13. 7Hz，2H)，1. 44(s，9H)，1. 43-1. 30 (m, 2H)，1. 21-1. 05 (m, 2H)， 0. 87(s，9H)，0. 04(s，6H)。 步骤19:将(lr，4r)-4_(叔丁基二甲基甲硅氧基)环己基氨基甲酸叔丁酯 (1. OOg, 3. 03mmol)的无水 THF (50mL)溶液冷却到-78 °C。然后加入 n-BuLi (1. 27mL, 3.19mmol)。搅拌反应20分钟，伴随加热至_40°C。随后快速逐滴加入氯甲基甲醚(d = 1. 060 ；0. 254mL, 3. 34mmol)。除去冷浴，在氮气下伴随加热搅拌反应。用水猝灭反应，萃取 流程(work-up)并通过快速色谱(5%乙酸乙酯/己烷)纯化，提供(lr，4r)-4-(叔丁基二 甲基甲硅氧基)环己基(甲氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(0. 957g，2. 36mmol，84%产率)。1H NMR (400MHz, CDCl3) 4. 69 (br s，1H)，3· 85-3. 47 (m，1H)，3· 27 (s，3H)，1· 90 (d，J = 10. 5Hz, 2H)，1. 79 (d, J = 12. 9Hz，2H)，1. 67-1. 50 (m, 2H)，1. 47(s，9H)，1. 46-1. 30(m，4H)，0· 88 (s, 9Η)，0· 04(s，6H)。
步骤20 将四丁基氟化铵(8. 94mL，8. 94mmol)加到(Ir，4r)-4-(叔丁基二甲基甲 硅氧基)环己基氨基甲酸叔丁酯(1. 97g，5. 96mmol)的THF(50mL)溶液并加热到40°C过夜。 用水(IOOmL)和乙酸乙酯(IOOmL)稀释反应。然后分离各层，干燥(MgSO4)有机物并浓缩 为油。通过快速色谱(25%乙酸乙酯/己烷)纯化油，获得(Ir，4r)-4-羟基环己基(甲氧 基甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.32g，5. 09讓01，85%产率)。步骤 21 将 NaH(油中 60%:0. 563g, 14. 07mmol)加到(Ir，4r) _4_ 羟基环己基(甲 氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(3. 65g, 14. 07mmol)的THF(50mL)溶液并加热到40°C。将甲基 碘(0. 878mL, 14. 07mmol)加到热的搅拌溶液并加热到60°C过夜。用水(IOOmL)猝灭反应 并用乙酸乙酯(IOOmL)稀释。然后分离各层。将有机物干燥(MgSO4)和浓缩。通过快速色 谱(10%乙酸乙酯/己烷)纯化所得的残余物，获得(lr，4r)-4-甲氧基环己基(甲氧基甲 基)氨基甲酸叔丁酯(3. 51g，12. 8讓01，91%产率)。步骤 22 将 TiCl4(0.207g，1.09mmol)力卩到冷却至-78 V 的(R)_4_ 苄 基-3- (2- (4-氯-3-氟苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(0. 362g，1. 04mmol)和(Ir，4r) -4-甲 氧基环己基(甲氧基甲基)氨基甲酸酯(0. 55g，2.01mmol)的无水DCM(20mL)溶液。将二 异丙基乙胺(“DIEA” ；d 0. 742 ；0. 199mL, 1. 15mmol)加到这一冷的搅拌溶液。在_78°C搅 拌反应15分钟，然后升温到-10°C并搅拌3小时。用NH4Cl猝灭反应。用DCM(50mL)和水 (50mL)稀释反应。然后分离各层。用DCM(25mL)萃取水层，干燥(MgSO4)并浓缩为油。通 过柱色谱(10 % Et2O/己烷至30 % Et2O/己烷)纯化该油，获得(S) -3- ((R) -4-苄基-2-氧 代噁唑烷-3-基)-2-(4_氯-3-氟苯基)-3_氧代丙基((lr，4S)-4-甲氧基环己基)氨 基甲酸叔丁酯(0. 610g，1. 04mmol，99. 5 % 产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3) 7. 38-7. 28 (m， 4H)，7. 25-7. 15 (m, 3H)，7. 10 (d, J = 8. 6Hz, 1H)，4. 65-4. 56 (m, 1H)，4. 15-4. 03 (m, 2H)，
3. 60-3. 36 (m, 2H)，3. 31 (s，3H)，3. 15-2. 95 (m, 1H)，2. 12-1. 97 (m, 3H)，1. 69-1. 57 (m, 2H)， 1. 47 (s，9H)，1. 46-1. 37 (m, 3H)，1. 37-1. 07 (m, 4H)。
步骤 23 将 H2O2 (0. 294mL，3. 06mmol)加到 LiOH-H2O (0. 0855g，2. 04mmol)的 THF/ 水(2 l，83mL)溶液。在室温搅拌该溶液10分钟。将溶液冷却到0°C并用(S)-3-((R)-4-苄 基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2- (4-氯-3-氟苯基)-3-氧代丙基((Ir，4S) -4-甲氧基环己 基)氨基甲酸叔丁酯(0.600g，1.019mmOl)的THF(IOmL)溶液处理。在0°C搅拌反应2小 时，然后允许升温到室温并搅拌过夜。将反应冷却到0°C并用IM Na2SO3(IOmL)处理，搅拌 10分钟。然后将反应升温到室温并搅拌10分钟。浓缩反应并用乙酸乙酯(2X20mL)萃取。 用HSO4(s)酸化水相部分至pH为约1至约2，然后用DCM(2X20mL)萃取。合并有机物，干 燥(MgSO4)并浓缩。所得的残余物提供(S)-3-(叔丁氧基羰基((lr，4S)-4-甲氧基环己基) 氨基)-2-(4-氯-3-氟苯基)丙酸(0. 312g，0. 726mmol，71%产率)。LC/MS > 95%纯度， r. t. = 3. 25 分钟，(APCI+)m/z = 430 [M+H]+。 步骤24 将(5R，7R)-5-甲基_4-(哌嗪-1-基)-6，7_ 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧 啶-7-醇二盐酸化物(0. 236g，0. 768讓01)、0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-队队^，^-四甲 基六氟磷酸脲(“HATU”;0. 265g，0. 698mmol)和可力丁(0. 369mL, 2. 79mmol)加到(S)_3_(叔 丁氧基羰基((lr，4S)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-(4_氯-3-氟苯基)丙酸(0. 300g, 0. 698mmol)的DCM/DMF (15mL，2 1)溶液，在室温搅拌反应过夜。将反应在水(20mL)和 DCM(50mL)之间分层，分离各层。用水(2X10mL)洗涤有机层。用DCM(25mL)回萃水层，干 燥(MgSO4)并浓缩为油。通过柱色谱(5%Me0H/DCM)纯化油，获得(S)-2-(4-氯-3-氟苯 基)-3-(4-((5札710-7-羟基-5-甲基-6，7-二氢-5!1-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-I-基)-3-氧代丙基((Ir，4S)-4-甲氧基环己基)氨基甲酸叔丁酯(0. 394g，0. 610mmol,
87. 4%产率)。LC/MS > 95% 纯度，r. t. = 3. 83 分钟，(APCI+)m/z = 646。 步骤25 将 二 噁烷(4mL，16mmol)中的 4N HCl 加到(S)-2-(4-氯 _3_ 氟苯 基)-3-(4-((5R，7R)-7-羟基-5-甲基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-1-基)-3-氧代丙基((lr，4S)-4-甲氧基环己基)氨基甲酸叔丁酯(0. 370g，0. 573mmol) 的DCM(IOmL)溶液中，在室温搅拌反应3小时。将反应内含物逐滴加入剧烈搅拌的Et2O/己 烷混合物(75mL，3 1)，获得为细颗粒的固体。过滤颗粒并干燥，获得(S)-2-(4-氯-3-氟 苯基)-1-(4-((5札710-7-羟基-5-甲基-6，7-二氢-5!1-环戊二烯并[d]嘧啶_4_基)哌 嗪-1-基)-3-((Ir，4S)-4-甲氧基环己基氨基)丙酮二盐酸化物(0. 325g，0. 525mmol, 91. 7%产率)。LC/MS > 95%纯度，r. t. = 2. 52 分钟，(APCI+)m/z = 546。上述说明被认为仅仅是本发明原理的例证说明。此外，多种变型和变体对于本领 域熟练技术人员都是明显的，因此并不希望将本发明限于如上所述的确切结构和方法。据 此，应当认为所有的适宜变型和等价体都落入以下权利要求书所限定的本发明范围内。词语“包含”(comprise)、“包含”(comprising)、“包括”(include)、“包 括”(including)和“包括”(includes)当用于本说明书和所附权利要求书中时，旨在具体 限定存在所述的特征、整数、组分或步骤，但不排除存在或加入一个或多个其它特征、整数、 组分、步骤或组别。
权利要求
一种式I的化合物FPA00001182113700011.tif
2.(S) -2- (4-氯-3-氟苯基)-1-(4- ((5R，7R) -7-羟基-5-甲基-6，7- 二氢-5H-环戊 二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-((11~，4幻-4-甲氧基环己基氨基)丙-1-酮。
3.一种药物组合物，包含权利要求1或2所述的化合物。
4.一种治疗哺乳动物中AKT介导的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物 施用治疗有效量的权利要求1或2所述的化合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述疾病或病症是炎性、过度增生性、心血管、神 经变性、妇科或皮肤疾病或病症。
6.一种抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用有 效量的权利要求1或2所述的化合物。
7.一种抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶活性的方法，该方法包括使所述激酶与权利要求 1或2所述的化合物接触。
8.权利要求1或2所述的化合物，其用作治疗AKT蛋白激酶介导的疾患的药物。
9.权利要求1或2所述的化合物在制备用于治疗的药物中的用途。
10.权利要求1或2所述的化合物在治疗过度增生性疾病中的用途。
11.权利要求1或2所述的化合物在治疗癌症中的用途。
12.一种用于治疗AKT蛋白激酶介导的疾患的药盒，其中所述药盒包含a)包含权利要求1或2所述的化合物的第一药物组合物；和b)任选地，使用说明书。
全文摘要
本发明提供了包括式I的化合物和其药学上可接受的盐，还提供了使用本发明化合物作为AKT蛋白激酶抑制剂的方法和治疗过度增生性疾病如癌症的方法。
文档编号A61K31/517GK101932565SQ200980101902
公开日2010年12月29日 申请日期2009年1月9日 优先权日2008年1月9日
发明者伊恩·S·米切尔, 克里斯廷·沙博, 史蒂文·多, 基思·L·斯潘塞, 尼古拉斯·C·卡兰, 布赖恩·萨菲纳, 张碧荣, 徐睿, 校登明, 梁军, 约瑟夫·本西克, 詹姆斯·F·布拉克 申请人:阵列生物制药公司;健泰科生物技术公司