药物组合物及相关方法

专利名称：药物组合物及相关方法
药物组合物及相关方法相关串请本申请是2010年I月29日提交的申请号为200880101239. O、发明名称为“药物组合物及相关方法”的中国专利申请的分案申请。优先权本申请要求2007年7月30日提交的标题为“药物组合物”的美国临时专利申请60/962，706号的优先权，在此将其全文引入本文作为参考。 发明领域本公开涉及用于加速创伤愈合、增加皮肤创伤闭合以及减少皮肤创伤部位感染的组合物和方法。
背景技术：
皮肤是复杂的组织，其构成为不同的层，即表皮、真皮和皮下组织，每一个都拥有不同的细胞特征和生理重要性(Fuchs和Byrnel994 ；Goldsmith 1991)。表皮是分层的鳞状上皮组织，其中严格区分了进行生长和分化的细胞(Fuchs和Byrne 1994)。在正常的生理阶段，增殖被限制到与基底膜相粘附的基底细胞。分化是一个空间过程，其中基底细胞丧失了其与基底膜的粘附，停止DNA合成并进行一系列形态和生物化学改变。最终的成熟步骤是角质层的产生，其形成了皮肤的保护屏障(Tennenbaum等，1991 ；ffysocki 1999)。真皮主要由基质纤维构成并含有各种细胞类型。此外,所有的皮肤附属部分，即微脉管系统、汗腺和皮脂腺、感觉神经和毛囊均位于真皮中。真皮起到了支持皮肤营养、维持真皮和下述途径的作用，其中通过该途径信号从身体的其它部分到达外部层(Green 1977；Wysocki 1999)。皮下组织是皮肤的最深层，其主要由脂肪细胞组成，也被称为皮下脂肪层。直到最近，还认为这一层具有隔离外部温度变化的作用并且给皮肤的上层提供机械支持(Nash 等 2004 ；Querleux 等 2002)。在皮肤中，分层表皮的持续更新是由导致产生没有活力的、角质化的鳞的顺序的且高度特化的过程维持的，所述鳞与衍生自分泌的片层体的脂质一起构成了身体的保护性水屏障。正在增殖的基底细胞与表皮特异性的基底膜粘附。角质化细胞的分化过程与和基底膜接触的细胞的丧失紧密相关；当基底细胞迁移至更外表的棘层时，它们丧失了增殖能力。进一步成熟为颗粒细胞区域，随后形成硬的角质化的包层，这与细胞内细胞器的自溶以及程序性细胞死亡相关联，产生成熟的鳞(Adams和Watt 1990 ；Eckert 1989 ;Yuspa等1980)。开放的皮肤创伤通常通过包括6个主要要素的过程愈合(i)发炎；(ii)成纤维细胞增殖；(iii)血管增生；(iv)结缔组织合成；(V)上皮形成；以及(Vi)创伤收缩。当这些要素个别地或作为整体不恰当地发挥作用时，创伤愈合即会受损。许多因素可影响创伤愈合，包括营养不良、感染、药剂(例如，放线菌素和类固醇)、高龄和糖尿病(Keast和Orstedl998 ；Kirsner 和 Eaglstein 1993 ；ffilliams和 Armstrong 1998)。糖尿病(Diabetes mellitus)是糖尿病(Diabetes)的常见形式,其特征在于受损的胰岛素信号传导、升高的血浆葡萄糖和在若干个特定组织上发生慢性并发症的易感性。在所有糖尿病的慢性并发症中，导致足部溃烂的受损的创伤愈合是研究最少的(Goodson和Hunt 1979 ；Grunfeld 1992)。然而糖尿病患者的皮肤溃疡花费了大量人力和财力。而且，足部溃烂以及尔后的下肢截断是最常见的糖尿病患者住院的原因。在糖尿病中，创伤愈合过程受到损坏，以及愈合的创伤的特征在于创伤强度减小(Shaw和Boulton 1997)。组织修复中的缺陷与几种因素有关，这些因素包括神经病、血管病和感染(Mousley 2003；Silhil998)。但是，尚不明了其它机制，通过该机制，与反常的胰岛素信号传导相关的糖尿病状态损坏创伤的愈合并改变皮肤生理。还有一个普遍存在的问题是在身体各个部分中的外科手术之后的创伤愈合受到年龄和诸如糖尿病和肥胖病等的慢性病发展的影响。在外科手术设置中，三分之一的患者由于它们的生理状态以及在创伤部位的相关感染的发展而延迟创伤愈合(Diegelmann 和 Evans 2004)。皮肤创伤通常在包括马、狗、猫和家畜的动物中被发现。在动物创伤中，有各种常 见的疾病提示需要创伤管理。因此，兽医皮肤病学是兽医医学中增长最快的学科之一。一般而言，许多这些创伤通过第二期愈合而治愈。这一过程花费很长的时间，尤其是涉及四肢时尤其如此。在动物中，以及在人类中，创伤愈合过程可能因诸如污染、感染或骨间裂隙的因素而被复杂化，这些因素通常是延长愈合时间或不恰当的创伤闭合的原因(Grunfeldl992 ；Knol 和 Wisselink 1996 ；Yeruham 等，1992 ；Yim 等，2007)。典型地，创伤愈合需要诱导(活化)新表皮和肉芽组织的形成以及减少感染。这些过程在动物中对于各种急性和慢性创伤，诸如手术后创伤、肢端舔的溃疡和糖尿病溃疡等的愈合也是必要的。马遭受由肉芽组织过剩引起的慢性创伤(例如，“赘肉”)，其中成纤维细胞增殖和血管发生均病理学地升高。这一反常的肉芽组织过度生长在上皮组织水平之上，并且物理地阻断邻近皮肤的接近，否则该邻近皮肤可能生长在这一区域之上。成纤维细胞的这一不受控制的生长的机制还是未知的。仅有的可利用的治疗涉及手术移除过度无约束的组织、压力包扎和皮质类固醇。该治疗花费延长的时间(5-8个月)并且病损常常复发(De、我和 Theoret 2004 ；Stone 1986)。动物中其它特定的病理包括狗中的肢端舔的皮肤炎和咬的溃疡。肢端舔的皮肤炎是狗中常见的问题，其是指与狗病损相关的增加的变红、粗糙、有弹力的组织，其产生自相同区域的反复舔。尽管在肢端舔的皮肤炎的治疗中有许多策略，但是治愈率和效果都还不足并且在许多情况下会发生溃瘍的复发(White 1990 ;Yeruham等1992)。蛋白激酶C (PKC)是磷脂依赖性酶家族，其催化磷酸从ATP共价转移至蛋白质的丝氨酸和苏氨酸残基上，并且其在调节皮肤生理中起着重要的作用。底物蛋白质的磷酸化诱导构象改变，其导致它们功能性质的修饰。到目前为止，发现了 11种同种型参与各种细胞功能和调节增殖、分化、细胞存活和死亡的信号转导路径(Nishizuka 1995)。特异性辅因子的需求、组织定位和细胞区室化提示对于每一同种型的不同功能和特定信号传导级联的精确调谐。因此，通过由它们在特定生物设定中的表达、定位和磷酸化状态调节的同种型特异性的PKC信号，特异性的刺激可以导致不同的反应。PKC同种型被各种细胞外信号活化，并且依次修饰细胞蛋白质的活性，所述蛋白质包括受体、酶、细胞骨架蛋白和转录因子。因此，PKC家族在细胞信号处理中起着中心作用。丝氨酸/苏氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族的原型首先被Nishizuka及其同事(Kikkawa等，1989)描述，它们首先发现了被作为磷脂酰肌醇的降解产物的二酰基甘油(DAG)活化的PKC (Castagna等，1982)。其它研究揭示了 PKC是促进肿瘤的佛波酯的细胞内受体。所有的PKC家族成员共有一个结构骨架，其可被划分为两个主要的结构域处于N端的调节结构域和处于C端的催化结构域。将这些区域分类为保守区(C1-C4)和在同种型之间变化的区(V1-V5) (Nishizuka 1988)，同上。此外，PKC在调节区还展示出与底物识别基序密切相似的假底物结构域，其封闭识别位点并阻止活化(Blumbergl991 ；House和Kemp1987)。基于它们的结构特征和辅因子需求，可将PKC同种型家族划分为3个大组。它们包括典型的cPKC(a、β I、β II和￥)、新的1^1(((6、ε、η、Θ )和非典型的aPKCU和ι /λ )同种型(Azzi 等 1992 ；Kikkawa 等 1989 ；Svetek 等 1995)。
对于它们的活化，所有同种型均需要磷脂双层的成分。典型的cPKC是钙(Ca2+)依赖性的，并且对于活化还需要DAG或DAG类似物诸如佛波酯。新的nPKC不依赖于Ca2+，但对于最大化活化仍需要DAG或佛波酯(Kazanietz等1993)。非典型的aPKC不依赖于Ca2+，也不需要DAG或佛波酯，但对于活化需要磷脂酰丝氨酸(Chauhan等1990)。此外，底物识别的主要部件是在调控结构域内的假底物区，其控制与细胞信号中PKC同种型的特异性活性有牵连的调控机制，并且与不同祀底物的磷酸化相关联(Eichholtz等1993 ；Hofmann 1997)。已经在体内在皮肤表皮中和在培养的角质化细胞中鉴定了五种PKC同种型(α、S、ε、η和ζ )。然而，在皮肤的真皮层中检测到了诸如β和Y的其它PKC同种型。此外，PKC同种型的类型和PKC分布模式在不同的组织中不同，并且可能还作为表现型的函数而变化。重要的是，在体内和体外中，PKC同种型均分布在基底和分化的皮肤角质化细胞中，并且可能在创伤愈合中起着重要的作用。因此，需要调控PKC活性以帮助治疗皮肤创伤和其它慢性创伤的改进的组合物和方法。公开概述本公开大体上涉及含有不含钙及镁离子的生物活性的皮肤创伤愈合剂和或抗炎剂的药物组合物，并且还涉及使用该药物组合物治疗皮肤创伤和/或炎症的方法。该药物组合物优选地适用于局部或本地给药，尤其是皮下给药。本公开的一个方面是包含δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物。本公开的另一方面是包含胰岛素、由SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列组成的并且在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基的肽以及不含Ca2+和Mg2+阳离子的水性的药学上可接受的载体的组合物，其中所述的药学上可接受的载体包含O. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2PO4、8g/L NaCl 和 I. 15g/L 无水 Na2HPO4。所述药学上可接受的载体优选地包括适于缓冲该组合物的磷酸盐或含有磷酸盐的化合物。特别优选的实施方案包括O. 2L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L无水Na2HP04。此类药学上可接受的载体也是本发明的一个方面，并且可以通过混合所需要的组分以提供不含有钙或镁离子的药学上可接受的载体而制备该载体。
本公开的另一方面是包含δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂、不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体以及药物流出支架的药物组合物。本公开的另一方面是由包括以下步骤的方法制得的药物组合物提供δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂以及不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体；以及混合所述δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂以及不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体；由此制得药物组合物。本公开的另一方面是用于增加动物皮肤创伤闭合的方法，其包括以下步骤提供包含δ-PKC活化剂、a-PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物；以及向动物上的皮肤创伤给药有效量的该药物组合物；由此增加皮肤创伤的闭
口 ο本公开的另一方面是减少动物皮肤创伤部位上的炎症的方法，其包括以下步骤提供包含S-PKC活化剂、a-PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体 的药物组合物；以及向动物上的皮肤创伤给药有效量的该药物组合物；由此减少皮肤创伤部位的炎症。本公开的另一方面是包含胰岛素或胰岛素类似物和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的组合物。本发明的另一方面是包含约O. 0001单位/L至O. I单位/L的胰岛素和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的组合物。本发明的另一方面是用于增加动物创伤闭合的方法，其包括以下步骤提供包含δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物；以及向动物上的创伤给药有效量的该药物组合物，其中所述的创伤是选自由糖尿病溃疡、肢端舔的创伤、赘肉创伤、外科手术创伤、慢性日光性脓肿创伤和骨髓炎创伤组成的组中的至少一种；由此增加皮肤创伤的闭合。本发明的另一方面是包含δ -PKC活化剂、a -PKC抑制剂和含有K+阳离子而不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的另一方面是包含δ -PKC活化剂和含有K+阳离子而不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的另一方面是包含a -PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物。本发明的另一方面是减少动物上的皮肤创伤部位的炎症的方法，其包括以下步骤提供包含a -PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的药物组合物；以及向动物上的皮肤创伤给药有效量的该药物组合物；由此减少皮肤创伤部位的炎症。本发明的其它方面包括应用本发明的诸如本文描述的组合物促进肉芽组织的形成、表皮增殖和皮肤生长。最后，本文公开的组合物可以完全不含Ca2+和Mg2+阳离子，或含有不含这些阳离子的药学上可接受的载体。附图简述图IA提供了细胞培养皿的照片，其显示了应用所指示的在不同的制剂中配制的药物组合物的体外创伤愈合效力。(在Axiovert 25Zeiss显微镜下放大50倍)。图IB以处理24小时后的闭合百分比显示了创伤闭合。图2A是显示了在制剂A中的药物组合物促进显著的创伤闭合的图。图2B是采用各种制剂处理后的代表性创伤的照片。图3是显示了在各种制剂中处理后的创伤部位的炎症负担的图。图4是显示了采用各种制剂处理后的肉芽组织形成的图。图5是显示了在各种制剂中Myr-假底物PKC α肽抑制PKC α活性的能力的图。图6Α是细胞培养皿的放大图(在Axiovert 25 Zeiss显微镜下放大200倍)，其 显示了在各种制剂中胰岛素对创伤闭合及细胞增殖的影响。图6Β是显示了以采用各种制剂在胰岛素存在或不存在的情况下处理24小时后占对照的百分比形式表示的体外创伤闭合的图。图6C是显示了根据通过胸腺嘧啶掺入测量的细胞增殖的图。图7是显示了在更换细胞培养基之前或之后胰岛素和胰岛素+PKCa抑制剂对来自7个月大至2年大的小鼠的角质化细胞增殖的影响的图。图8Α提供了显示采用在各种制剂中的药物组合物治疗慢性足溃疡及其增加的闭合的照片和图。图8Β是显示了在各种制剂中在第O天和第60天时患者的慢性糖尿病创伤的治疗和增加的闭合的照片。图9提供了显示在第O天、3个月和6个月时采用药物组合物治疗马慢性赘肉创伤的照片。

图10提供了显示在第0、30和60天时用药物组合物治疗伴随骨髓炎的慢性日光性脓肿的照片。图11提供了显示在第O天、2个月和3. 5个月时采用药物组合物治疗由自损伤引起的未愈合肢端舔的创伤的进展的照片。图12是表示以商标HUMALOG 而为人所知的人类胰岛素类似物赖脯胰岛素(rDNA起源)的一级结构的示意图。图13是表示以商标NOVOLOG 而为人所知的人类胰岛素类似物天冬胰岛素(rDNA起源)的一级结构的示意图。图14是表示商标；LANTUS 而为人所知的人类胰岛素类似物甘精胰岛素(rDNA起源)的一级结构的示意图。图15是表示也以商标NO VOLIN R而为人所知的人类胰岛素类似物HUMULIN R的一级结构的示意图。图16是显示了在用胰岛素类似物(单独在制剂A中提供的)治疗后通过表皮和肉芽组织的形成而测量的创伤愈合的百分比并与未治疗的对照创伤比较的图。所研究的胰岛素类似物是赖脯胰岛素(HumL)、天冬胰岛素(Novo)、甘精胰岛素(LANTUS )和优泌林㊣ R (HumR)。图17是显示了单独用优泌林 R(HumR)、USP胰岛素(Ins USP)和PKC α假底物抑制肽(Pep)或与胰岛素类似物以及抑制肽组合治疗的、通过肉芽组织的形成测量的促进创伤愈合的图。
图18是显示了单独用优泌林 R(HumR)、赖脯胰岛素(HumL)和PKC α假底物抑制肽(pep)治疗或与胰岛素类似物以及抑制肽协同组合治疗的严重炎症的百分比的图。图19A和图19B显示了在培养基A和培养基B中培养的原代皮肤角质化蛋白中，在用内脏脂肪素(visfatin)或L-α-磷脂酰肌醇-3，4，5_三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐处理后，在7个月大至2年大的小鼠角质化细胞中角蛋白I的表达。发明详沭本公开的药物组合物包含药学上可接受的载体和PKC α抑制剂和/或胰岛素，其中所述的药学上可接受的载体包含在各种溶剂中的不同的无机盐和有机盐。示范性的药学上可接受的载体的制剂组合物可以含有水、钾、氯化钠和生理上可耐受的磷酸盐，并且可如下制备Α)氯化钾 O. 2g/L(KCl) B)磷酸二氢钾(无水)O. 2g/L (KH2PO4)C)氯化钠 8. O (g/L) (NaCl)D)磷酸氢二钠(无水)I. 15 (g/L) (Na2HPO4)该制剂必须不含有钙或镁离子。尽管可以使用任何PKCa抑制剂，但优选地该PKC α抑制剂为豆蘧酰化的相应于 PKC α 的假底物区的妝(Myr*-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln_OH(SEQ ID NO:ICAS[147217-25-2])。该PKCa假底物区对这一特定同种型的底物区具有特别高的亲和力。可使用的其它PKC抑制剂的实例包括下列表I中所示的肽表I. PKC抑制剂肽
权利要求
1.组合物，其包含S-PKC活化剂、a-PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
2.如权利要求I的组合物，其中所述的S-PKC活化剂是选自由胰岛素和胰岛素类似物组成的组中的至少一种。
3.如权利要求2的组合物，其中所述的 胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
4.如权利要求2的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
5.如权利要求4的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
6.如权利要求2的组合物，其中所述的α-PKC抑制剂是选自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二盐酸盐水合物；4’-N-苯甲酰基星形孢菌素；双吲哚基马来酰亚胺IX，甲磺酸盐；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氢-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[1-(3_ 二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)马来酰亚胺和阿普卡生组成的组中的至少一种。
7.如权利要求2的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂选自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽组成的组中的至少一种SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO 6, SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO : 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQID NO 30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO36,SEQ ID NO37,SEQ ID NO 38,SEQ ID NO39,SEQ ID NO40,SEQ ID NO:41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ IDNO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
8.如权利要求2的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQ IDNO 25中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基，并且在其羧基末端处被酰胺化。
9.如权利要求2的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQ IDNO 1中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基。
10.如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9的组合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体是包含O. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4的水性载体。
11.组合物，其包含胰岛素、由SEQID NO :1中所示的氨基酸序列组成的并且在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基的肽以及包含O. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/LNaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4的不含Ca2+和Mg2+阳离子的水性药学上可接受的载体。
12.如权利要求11的组合物，其包含O.0001单位/L至O. I单位/L的胰岛素和I μ M至IOOiiM的所述肽。
13.如权利要求12的组合物，其包含0.0001单位/L的胰岛素和I y M的所述肽。
14.如组合物，其包含S-PKC活化剂、a-PKC抑制剂、不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体以及药物流出支架。
15.如权利要求14的组合物，其中所述的药物流出支架包含多孔固体。
16.如权利要求15的组合物，其中所述的S-PKC活化剂是选自由胰岛素和胰岛素类似物组成的组中的至少一种。
17.如权利要求16的组合物，其中所述的胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
18.如权利要求16的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
19.如权利要求18的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
20.如权利要求16的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是选自由(S)-2，6-二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二盐酸盐水合物；4’ -N-苯甲酰基星形孢菌素；双吲哚基马来酰亚胺IX，甲磺酸盐；12-(2_氰基乙基)-6，7，12，13_四氢-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺和阿普卡生组成的组中的至少一种。
21.如权利要求16的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂选自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽组成的组中的至少一种SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 5, SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO 11、SEQ ID NO 12, SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ IDNO 17, SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQID NO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 30, SEQ ID NO 3USEQ ID NO 32, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO:35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ IDNO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQID NO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
22.如权利要求16的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQIDNO :25中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基，并且在其羧基末端处被酰胺化.
23.如权利要求16的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO 1中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基。
24.如权利要求23的组合物，其包含0.0001单位/L至0. I单位/L的胰岛素和I y M至IOOii M的所述肽。
25.如权利要求23的组合物，其包含0.0001单位/L的胰岛素和I y M的所述肽。
26.如权利要求14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25的组合物，其中所述的药物流出支架是海绵。
27.如权利要求26的组合物，其包含不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体，该药学上可接受的载体包含O. 2g/L KCl、0. 2g/L无水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4。
28.如由包括以下步骤的方法制得的药物组合物 a)提供δ-PKC活化剂、a -PKC抑制剂以及不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体；以及 b)混合所述δ-PKC活化剂、a -PKC抑制剂以及不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体； 由此制得药物组合物。
29.如权利要求28的组合物，其中所述的δ-PKC活化剂是选自由胰岛素和胰岛素类似物组成的组中的至少一种。
30.如权利要求29的药物组合物，其中所述的胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
31.如权利要求29的药物组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
32.如权利要求31的药物组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
33.如权利要求29的药物组合物，其中所述的α-PKC抑制剂是选自由(S)_2，6_二氨基-N-[(I-(I-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二盐酸盐水合物；4’-N-苯甲酰基星形孢菌素；双吲哚基马来酰亚胺IX，甲磺酸盐；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氢-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)马来酰亚胺和阿普卡生组成的组中的至少一种。
34.如权利要求29的药物组合物，其中所述的a-PKC抑制剂选自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽组成的组中的至少一种SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ IDNO1U SEQ ID NO12,SEQ ID NO13,SEQ ID NO14,SEQ ID NO :15、SEQ ID NO16,SEQID NO 17, SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO23,SEQ ID NO24,SEQ ID NO 26,SEQ ID NO27,SEQ ID NO28,SEQ ID NO:29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ IDNO 35, SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO 47, SEQ ID NO 48, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO 50, SEQ ID NO 5USEQ ID NO:52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
35.如权利要求29的药物组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO :25中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基，并且在其羧基末端处被酰胺化.
36.如权利要求29的药物组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO :1中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基。
37.如权利要求36的药物组合物，其包含0.0001单位/L至0. I单位/L的胰岛素和Iii M至IOOii M的所述肽。
38.如权利要求36的药物组合物，其包含0.0001单位/L的胰岛素和I y M的所述肽。
39.如权利要求28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38的药物组合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/LNaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4的水性载体。
40.组合物，其包含胰岛素或胰岛素类似物和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
41.如权利要求40的组合物，其中所述的胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
42.如权利要求40的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
43.如权利要求42的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
44.如权利要求40的组合物，其包含0.0001单位/L至0. I单位/L的胰岛素或胰岛素类似物。
45.如权利要求40的组合物，其包含0.0001单位/L的胰岛素或胰岛素类似物。
46.如权利要求40-45中任一项的组合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4的水性载体。
47.组合物，其包含0.0001单位/L至0. I单位/L的胰岛素和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
48.如权利要求47的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
49.如权利要求48的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
50.如权利要求47、48或49的组合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体是包含 0. 2g/L KCl、0. 2g/L 无水 KH2P04、8g/L NaCl 和 I. 15g/L 无水 Na2HPO4 的水性载体。
51.组合物，其包含S-PKC活化剂、a -PKC抑制剂和含有K+阳离子而不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
52.如权利要求51的组合物，其中所述的S-PKC活化剂是选自由胰岛素和胰岛素类似物组成的组中的至少一种。
53.如权利要求52的组合物，其中所述的胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
54.如权利要求52的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
55.如权利要求54的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
56.如权利要求52的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是选自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二盐酸盐水合物；4’ -N-苯甲酰基星形孢菌素；双吲哚基马来酰亚胺IX，甲磺酸盐；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氢-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)马来酰亚胺和阿普卡生组成的组中的至少一种。
57.如权利要求52的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂选自由具有以下中所示的氨基酸序列的肽组成的组中的至少一种SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:5, SEQ ID NO 6, SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 10, SEQ IDNO :11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQID NO 30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO36,SEQ ID NO37,SEQ ID NO 38,SEQ ID NO39,SEQ ID NO40,SEQ ID NO:41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ IDNO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
58.如权利要求52的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO 25中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基，并且在其羧基末端处被酰胺化.
59.如权利要求52的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO 1中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基。
60.组合物，其包含δ-PKC活化剂和含有K+阳离子而不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
61.如权利要求60的组合物，其中所述的δ-PKC活化剂是选自由胰岛素和胰岛素类似物组成的组中的至少一种。
62.如权利要求61的组合物，其中所述的胰岛素类似物是选自由赖脯胰岛素、天冬胰岛素、甘精胰岛素、内脏脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕榈酰基_，七铵盐组成的组中的至少一种。
63.如权利要求61的组合物，其中所述的胰岛素是选自由人胰岛素、牛胰岛素和猪胰岛素组成的组中的至少一种。
64.如权利要求63的组合物，其中所述的胰岛素是重组表达的。
65.组合物，其包含a-PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体。
66.如权利要求65的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是选自由(S)_2，6_二氨基-N-[(I-(I-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二盐酸盐水合物；4’-N-苯甲酰星形孢菌素；双吲哚基马来酰亚胺IX，甲磺酸盐；12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氢-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)马来酰亚胺和阿普卡生组成的组中的至少一种。
67.如权利要求65的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂选自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽组成的组中的至少一种SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 5, SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO .11、SEQ ID NO 12, SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ IDNO17,SEQ ID NO18,SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO2U SEQ ID NO :22、SEQID NO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 30, SEQ ID NO 3USEQ ID NO 32, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO:.35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ IDNO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQID NO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
68.如权利要求65的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQID NO 25中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基，并且在其羧基末端处被酰胺化.
69.如权利要求65的组合物，其中所述的a-PKC抑制剂是由SEQIDNO :1中所示的氨基酸序列组成的肽，其在其氨基末端处具有豆蘧酰化的氨基酸残基。
70.如权利要求69的组合物，其中所述的药物组合物包含Iy M至100 ii M的所述肽。
71.如权利要求70的组合物，其中所述的药物组合物包含IU M的所述肽。
72.如权利要求65-71中任一项的组合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L无水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L无水Na2HPO4的水性载体。
全文摘要
本公开涉及用于加速创伤愈合、增加皮肤创伤闭合以及减少皮肤创伤部位感染的组合物和方法。具体而言，本发明涉及包含δ-PKC活化剂、α-PKC抑制剂和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的组合物。本发明还涉及包含胰岛素或胰岛素类似物和不含Ca2+和Mg2+阳离子的药学上可接受的载体的组合物。
文档编号A61K45/06GK102755649SQ20121021981
公开日2012年10月31日 申请日期2008年7月30日 优先权日2007年7月30日
发明者E·布雷纳, I·索罗莫尼克, L·布赖曼-维克斯曼, O·莱维-哈查姆, T·滕宁鲍姆 申请人:希尔洛有限公司