电泳后分别用考马斯亮蓝和O.lmol/L舰溶液进行染色，结果 见附图2,附图2中A图为考马斯亮蓝染色后的结果，附图2中B图为O.lmol/L舰溶液染色后的 结果。a泳道为Marker，附图2中A图自上而下均为蛋白质条带，相对分子质量依次为250kDa， 130kDa，100kDa，70kDa，55kDa，附图2中B图无显色；b泳道为对照蛋白质牛血清白蛋白 (BSA)，附图2中A图显色，附图2中B图无显色;C泳道为重组腺病毒Ad5,根据相对分子质量可 得知附图2中A图中最上面的条带为Ad5的显色条带，下面的条带为蛋白质杂志带，附图2中B 图中无显色;d泳道为精制的阳G-AdS，附图2中A图无显色，附图2中B图显色。
[0035] 附图2可知，将C00H-PEG2000-C00H和重组腺病毒Ad5反应后，COOH-阳G2000-C00H 能连接在Ad5的表面使重组腺病毒发生阳G化，从而为下一步连接适配体提供了条件。
[0036] 实施例2: DUP-I-PEG-AdS 的合成
[0037] 取精制得到的阳G-Ad5,加入浓度为6.05咖的NHS溶液50化和浓度为12. IiiM的抓C 溶液50化，用MES缓冲液调节抑至6.0，在室溫下轻柔揽拌，解育Ih，W活化精制阳G-AdS中另 一个未反应的簇基。然后向反应液中加入浓度为3.03iiM的DUP-I适配体溶液10化L，用水定 容至400化，于37°C，揽拌、避光反应化(300r/min)，制备得到DUP-I-PEG-AdS。最后用分子截 留量为IOOKD的超滤离屯、管进行超滤离屯、，洗涂后得到精制的DUP-1-PEG-Ad5。将精制的 DUP-I-PEG-AdS用水稀释至ImL,检测溶液中DUP-I适配体的巧光强度，然后用DUP-I适配体 溶液巧光强度的标准曲线计算复合物中DUP-I适配体的含量。
[003引 实施例 3: A10-3.2/DUP-1-PEG-Ad5 的合成
[0039] 取精制得到的DUP-I-阳G-AdS，加入浓度为6. OSiiM的N服溶液50化和浓度为12. IiiM 的邸C溶液50化，用MES缓冲液调节抑至6.0，在室溫下轻柔揽拌，解育化，W活化精制DUP-I-PEG-AdS中其余未反应的簇基。然后用MES缓冲液调节反应液pH至7.0，加入浓度为3.03iiM的 AlO-3.2适配体溶液10化L，用水定容至40化L，于37°C，揽拌、避光反应化(300r/min)，制备 得到A10-3.2/DUP-1-阳G-Ad5。最后用分子截留量为IOOKD的超滤离屯、管进行超滤离屯、，洗 涂后得到精制的A10-3.2/DUP-1-阳G-Ad5。将精制的A10-3.2/DUP-1-PEG-Ad5用水稀释至 ImL,检测溶液中A10-3.2适配体的巧光强度，然后用A10-3.2适配体溶液巧光强度的标准曲 线计算复合物中A10-3.2适配体的含量。
[0040]实施例4:目标给药系统A10-3.2(D0X)/DUP-1-PEG-Ad5(ADDP-Ad5)的合成 [0041 ] 将精制的A10-3.2/DUP-1-阳G-AdS反应液稀释至ImL,根据DOX能嵌入到双链RNA适 配体A10-3.2中的最大量，于反应液中加入一定量的DOX，再加入50化L的无水DMSO，于室溫 下揽拌避光反应4她，然后经过超滤离屯、、洗涂后，得到目标给药系统410-3.2(00乂)/0^-1-PEG-AdS(ADDP-AdS)O
[0042] 实施例5:目标给药系统ADDP-AdS合成的确定
[0043] 分别测定精制得到的反应产物DP-AdS、ADP-Ad5和终产物ADDP-AdS的超滤洗涂液 的巧光强度，W及反应时加入相同量的巧光物质DUP-I适配体、A10-3.2适配体和DOX的巧光 强度，得到的数据见表1。由表1可知，反应产物DP-AdS的产率约为80.4%，ADP-AdS的产率约 为82.2%，反应终产物ADDP-AdS的超滤洗涂液的巧光强度很弱，几乎可W忽略，说明DOX的 巧光发生了巧灭，由此可知W最大量加入的DOX几乎全部嵌入到双链适配体A10-3.2中。
[0044] 表1相同浓度巧光物质的巧光强度对比
[0047] 实施例6:RNA/Peptide适配体序列设计及合成
[004引 RNA适配体AlO已经被应用于祀向PSMA阳性前列腺癌。相对于A10,其新一代优化序 列A10-3.2结构更简单，更容易化学合成，具有更高的祀向效率。在A10-3.2的y末端W氨基 修饰，目rs' -GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCU-(CH2)6-NH2-3'(并作2'-氣喀晚 修饰r，5/末端WFITC进行巧光标记；DUP-I的-末端WFI TC标记，即-FITC-FRPNRA孤YNTN，研究中用到的适配体序列见表2 dA10-3.2适配体和DUP-I适配体分别从广州 锐博生物科技有限公司和上海invi化Ogen公司购买，纯化产品经HPLC和质谱鉴定，质谱图 见附图3和附图4。
[0049]表2实验中用到的适配体序列
[0051 ]注:Apt:适配体;mAlO-3.2:修饰过的A10-3.2 ;mDUP-l:修饰过的DUP-I.
[0052]实施例:7:重组腺病毒扩增、纯化、滴度测定 [0化3] (1)、重组腺病毒的扩增：
[0化4] 用肥K293细胞进行重组腺病毒(含PTEN的重组腺病毒Ad5从北京VGTC基因技术有 限公司购买得到）的扩增，收集感染重组腺病毒后的细胞进行3次反复冻融，然后4°C， 500化pm离屯、IOmin，收集上清液W得到足够量的重组腺病毒。
[0化日](2)、重组腺病毒的纯化：
[0056]采用氯化飽(CsCl)密度梯度离屯、法纯化重组腺病毒(氯化飽密度分别为1.45g/mL 和1.25g/mL)。将收集的病毒条带盛于分子筛为25000道尔顿的纤维素醋膜中，4°C条件下透 析，去除氯化飽盐，得到纯化的重组腺病毒原液。
[0化7] (3)、重组腺病毒滴度检测：
[0化引分别采用C阳法和0D26D法检测腺病毒的滴度。
[0059] (4)八?6法测定腺病毒的滴度：
[0060] 复苏293细胞，用DMEM培养液培养，随后接种到96孔板，每孔293细胞浓度为IO5个/ mL，置37 °C 5 % C〇2培养箱中培养2地。2地后，待96孔板内的细胞长满后，用DMEM培养液将病 毒储备液按照10倍梯度稀释成：1〇- 7、1〇-8、1〇-9、1〇-"、1〇-11、1〇-12、10-U、IO-M共八个稀释度。 吸出96孔板中原有的细胞培养液，于96孔板的每行，从#1到#10,每孔分别加入10化L病毒稀 释液(每个稀释度做10个复孔），#11和#12为阴性对照（不加病毒），加入100化的DMEM培养 液，每一行为一个稀释度。37°C培养IOcU IOd后观察每一排中出现CPE的孔数，计算腺病毒滴 度。滴度可用Karber统计方法确定：1巧CID50 = -[x+0.5d-ds]。其中X-出现100%感染的最 高稀释度的对数;d-稀释间隔倍数的对数;S-出现100%感染的最高稀释度开始的各个稀释 度病变细胞比例之和。
[0061 ] (5)、0〇26日法测定病毒颗粒总数：
[0062] 4°C融化病毒原液，配制病毒裂解液(0.1%SDS，10mM IYis pH 7.4，lmM邸TA),将 病毒原液分别稀释2倍和5倍，56°C震荡培养lOmin，用分光光度计测定260nm处吸光值A260。 计算病毒滴度:腺病毒颗粒/mL=A260值X稀释倍数X 1〇12。
[0063] (6)、CPE法和0D26Q法计算重组腺病毒滴度结果
[0064] C阳法计算重组腺病毒滴度
[0065] 通过IOd后在倒置显微镜下观察96孔板中每一排细胞形态的变化，得出下表3结 果，根据Karber统计方法lgTCID50 = -[x+0.5d-ds]，得出重组腺病毒的滴度T=109'5ifU/ ITlL O
[0066] 表3 CPE法测定重组腺病毒滴度结果
[0068] 注:表中P值为每个稀释度出现CPE现象的百分率
[0069] 0D26日法计算重组腺病毒滴度
[0070] 重组腺病毒原液稀释2倍后，测得0〇26日二1.667，稀释5倍后，测得0〇26日=0.303，根 据公式腺病毒颗粒/mL = A260值X稀释倍数X 1〇12,算出腺病毒原液的颗粒数为2.425 X i〇i2yp/血。
[0071] 实施例8:盐酸阿霉素(00乂）、0^-1适配体、41