Rho激酶的苯并噻吩抑制剂的制作方法

专利名称：Rho激酶的苯并噻吩抑制剂的制作方法
本申请要求2006年7月20日提交的美国临时申请60/832,634和2007年5月3日提交的美国临时申请60/915,772的优先权的权益，其公开内容在此引作参考，如同将其全部内容写入本文。
本发明涉及新的苯并噻吩化合物和组合物及它们作为药物用于治疗疾病的应用。还提供了在人类或动物个体中抑制Rho激酶活性用于治疗疾病如眼科疾病的方法。
许多细胞信号转导事件激活小的单体GTP酶超家族的一个或多个成员。GTP酶的Rho亚家族(由RhoA、RhoB和RhoC组成)传递信号，通常是从细胞表面受体传递至在控制细胞骨架动力学和基因调节中起重要作用的效应器[Ridley，A.J.，2001，Trends Cell Biol.11471-477；Jaffe，A.B.和Hall，A.，2005，Annu Rev Cell Dev Biol.21247-269]。特别地，Rho介导的对细胞骨架的效应影响非肌肉细胞形状、平滑肌细胞收缩、细胞-细胞和细胞-基质粘附、胞内小泡运输、轴突和树突生长、血管构筑、免疫和炎症细胞迁移以及细胞分裂期间的卵裂沟的形态与功能[Bussey，H.，1996，Science.272224-225；Fukata，Y.等人，200 1，Trends Pharmnacol Sci.2232-39；Luo，L.，2000，NatRevNeurosci.1173-180；Hu，E.和Lee，D.，2003，Curr OpinInvestig Drugs.41065-1075；Bokoch，G.M.2005，Trends Cell Biol.15163-171；Wadsworth，P.，2005，Curr Biol.15R871-874]。
尽管Rho GTP酶循环是复杂的，但它可简要概括如下。与GDP离解抑制因子蛋白(GDI)复合的无活性的、GDP结合的Rho响应信号转导事件(如配体与细胞表面受体结合)而被募集至质膜。GDI被置换，由此该无活性的GDP结合的Rho被膜定位的鸟嘌呤核苷酸交换因子转化为有活性的GTP结合的Rho。接着GTP结合的Rho结合并激活质膜上的许多效应器。已鉴定了由Rho活性控制的许多蛋白质，包括多种蛋白质和脂质激酶[Kaibuchi，K.等人，1999，Annu Rev Biochem.68459-486；Bishop，A.L.和Hall，A.，2000，Biochem J.348241-255]。GTP酶激活蛋白刺激的Rho的固有GTP酶活性将Rho转化回无活性的、GDP结合的形式，于是可通过GDI从质膜提取GDP结合的Rho(但是在一些情况中，GDI可能提取GTP结合的Rho以熄灭信号或将GTP结合的Rho重定向至不同的隔室)[Sasaki T.和TakaiY.，1998，Biochem Biophys Res Commun.245641-645；Olofsson，B.，1999，CellSignal.11545-554；Schmidt，A.和Hall，A.，2002，Genes Dev.161587-1609；Moon，S.Y.和Zheng，Y.，2003，Trends Cell Biol.1313-22]。
在已鉴定的Rho效应器中，Rho关联含卷曲螺旋激酶(在此称为Rho激酶)已成为分子和细胞生物学研究中的热门研究主题，并在多个治疗领域作为药物靶点。Rho激酶是大约160kD分子量的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶，其含有氨基端激酶催化结构域、长的两性α螺旋(卷曲螺旋)结构域、活化的Rho结合结构域和被富含半胱氨酸的锌指样结构基元分开的羧基端血小板白细胞C激酶底物同源性结构域(促进与质膜磷酸肌醇结合)[Ishizaki，T.等人，1996，EMBO J.15，1885-1893；Fujisawa，K.等人，1996，J Biol Chem.27123022-23028；Matsui，T.等人，1996，EMBO J.152208-2216]。有两种已知的Rho激酶亚型，但是可能存在剪接变体。这些亚型被称为Rho激酶(ROK)α(本文称作ROCK2)和Rho激酶(ROK)β，也被称为p160ROCK(本文称作ROCK1)[Leung，T.等人，1996，Mol Cell Biol.165313-5327；Nakagawa，O.等人，1996，FEBS Lett.392189-193]。许多蛋白激酶受可逆的磷酸化事件控制，所述磷酸化事件使它们在活性状态和无活性状态之间转换。相反，Rho激酶通过与GTP结合的Rho的可逆结合从低的基底活性转换为高活性。活性Rho激酶然后磷酸化质膜附近的Rho信号转导的其他效应器。两种Rho激酶均以低至中度水平以最普遍的方式在哺乳动物组织中表达，但是在有些细胞类型中的表达是高度富集的。Rho激酶在它们的催化结构域中与蛋白激酶A和C家族共享功能同源性，并且Rho激酶的多种小分子抑制剂也特别地结合和抑制蛋白激酶A[Breitenlechner，C.等人，2003，Structure.111595-1607]。ROCK1在整个蛋白质结构上与ROCK2具有64％的序列同一性，并且其激酶结构域高度保守(90％同一性)。
作为Rho信号转导的效应器，Rho激酶直接涉及控制细胞骨架动力学、基因调节、细胞增殖、细胞分裂和细胞存活。Rho激酶的组成性激活突变体可通过截短羧基端区域(远至激酶结构域)产生，暗示了羧基端序列的重要负调节。在细胞中表达时，这些突变体产生与高活性的Rho激酶活性(例如增加的应力纤维形成和细胞-底物局部粘着)一致的表型。相反，缺失Rho激酶的催化结构域在细胞中造成转显性抑制效应[Amano，M.等人，1997，Science.2751308-1311；Leung，T.等人，1996，Mol Cell Biol.165313-5327；Amano，M.等人，1999，J Biol Chem.27432418-32424]。有数据与ROCK1和ROCK2在细胞中的可分离的功能一致，但是这些观察结果可能是细胞类型特异性的[Yoneda，A.等人，2005，J Cell Biol.170443-453]。尽管ROCK1的基因敲除导致由于新生儿脐膨出的围产期致死和ROCK2的基因敲除导致由于胎盘发育不良的胚胎致死的高发生率，但是没有一种单独的敲除与ROCK1或ROCK2对胚胎在发育期间的最正常的细胞行为的必要性一致[Shimizu，Y.等人，2005，J Cell Biol.168941-953；Thumkeo，D.等人，2003，Mol Cell Biol.235043-5055]。
Rho激酶可磷酸化多种底物以控制细胞骨架行为的不同方面[Riento，K.和Ridley，A.J.2003，Nat Rev Mol Cell Biol.4446-456]。许多研究已集中于控制肌球蛋白轻链(MLC)调节亚基。MLC调节亚基的磷酸化导致增加的肌动球蛋白活性(例如平滑肌细胞收缩或增加的非肌细胞张力纤维)。Rho激酶通过MLC调节亚基的直接磷酸化和通过肌球蛋白轻链磷酸酯酶的失活(通过其肌球蛋白结合亚基的磷酸化)刺激肌动球蛋白活性[Amano，M.等人，1996，J Biol Chem.27120246-20249；Kimura，K.等人，1996，Science.273245-248；Kureishi，Y.等人，1997，JBiol Chem.27212257-12260]。LIM激酶、埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)家族蛋白质和内收蛋白是Rho激酶的一些其他底物，且这些和其他蛋白的磷酸化改变细胞骨架功能的不同方面[Oshiro，N.等人，1998，J Biol Chem.27334663-34666；Kimura，K.等人，1998，J Biol Chem.2735542-5548；Matsui，T.等人，1998，J Cell Biol.140647-657；Fukata，Y.等人，1999，J Cell Biol.145347-361；Kosako，H.等人，1997，JBiol Chem.27210333-10336；Goto，H.等人，1998，J BiolChem.27311728-11736；Maekawa，M.等人，1999，Science.285895-898；Ohashi，K.等人，2000，J Biol Chem.2753577-3582]。
小分子化合物如Y-27632、Y-32885、Y-39983、HA-1077(法舒地尔)、羟基法舒地尔和法舒地尔的二甲基化的类似物(H-1152P或HMN-1152)已被证明直接抑制Rho激酶。这些Y化合物(它们是更具选择性的Rho激酶抑制剂)含有共同的吡啶基团，而法舒地尔及其类似物含有共同的异喹啉支架。已报告了与Y-27632、法舒地尔、羟基法舒地尔和H-1152P复合的ROCK1的激酶结构域的晶体结构(Jacobs，M.等人，2006，J Biol Chem.281260-268]。所有这些化合物均占据ATP-结合口袋的一部分，这与它们是可逆的ATP竞争性抑制剂的事实相符。
这些相同的Rho激酶抑制剂是细胞渗透性的，并可引起与丧失Rho激酶活性相符的细胞骨架功能和细胞行为的变化，类似于转显性抑制突变体的效应。在体外培养的细胞中和在体内生理学响应的组织中均观察到了效应[Nagumo，H.等人，2000，Am J Physiol Cell Physiol.278C57-C65；Sinnett-Smith，J.等人，2001，Exp Cell Res.266292-302；Chrissobolis，S.和Sobey，C.G.，2001，Circ Res.88774-779；Honjo，M.等人，2001，InvestOphthalmol Vis Sci.42137-144；Takahara，A.等人，2003，Eur JPharmacol.46051-57；Fournier，A.E.等人，2003，J Neurosci.231416-1423；Rikitake，Y等人，2005，Stroke.362251-2257；Slotta，J.E.等人2006，Inflamm Res.55364-367；Ying，H.等人，2006，Mol Cancer Ther.52158-2164]。Rho激酶的小分子抑制与体外及体内细胞行为的变化(例如血管平滑肌松弛、支气管平滑肌松弛、抑制免疫和炎症细胞迁移、抑制肿瘤细胞迁移、抑制试验诱导的纤维化、促进神经再生活性)之间的相关性支持Rho激酶是多种治疗适应证的重要药物靶点的主张。此外，现在更倾向于认为临床上有用的HMG辅酶A还原酶抑制剂(即“他汀(statin)”药物类)的一些“多效的”和有益的心血管效应是减少的Rho和由此降低的Rho激酶活性的结果，特别是在内皮细胞中[Eto，M.等人，2002，Circulation.1051756-1759；Rikitake，Y.和Liao，J.K.，2005，Circ Res.971232-1235；Kozai，T.等人，2005，Cardiovasc Res.68475-482；Girgis，R.E.等人，2007，Am J Physiol Lung CellMol Physiol.292L1105-L1110]。有趣的是，最近Rho激酶抑制已参与分离的人类胚胎干细胞的增强的存活和克隆率，其提示Rho激酶抑制剂用于干细胞治疗的效用[Watanabe，K.等人，2007，Nat Biotechnol.25681-686]。
已发现抑制Rho激酶的一些新化合物和药物组合物，以及合成和使用所述化合物的方法，包括通过给药所述化合物治疗患者中Rho激酶介导的疾病的方法。
本发明公开了一类由结构式I定义的化合物，其中某些可用于治疗Rho激酶介导的病症和疾患
A是任选取代的杂芳基； G1是任选取代的稠合双环杂芳基； G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在； m和p独立地为0、1、2、3或4； Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在； Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基； n是0、1或2； Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基； G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代； G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且 R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
根据本发明的某些化合物具有有用的Rho激酶抑制活性并可用于治疗或预防其中Rho激酶具有活性作用的疾病或疾患。因此，在宽泛的方面，本发明的某些实施方案还提供包含本文公开的一个或多个化合物以及药学可接受的载体的药物组合物，以及制备和使用所述化合物和组合物的方法。本发明的某些实施方案提供用于抑制Rho激酶的方法。本发明的其他实施方案提供在需要治疗的患者中治疗Rho激酶介导的病症的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的根据本发明的化合物或组合物。本发明还涵盖了本文公开的某些化合物用于制备用于治疗通过抑制Rho激酶改善的疾病或疾患的药物的用途。
在进一步的实施方案中，A选自含有至少一个环氮的任选取代的单环5至6元杂芳基或包含与六元环稠合的五元环且含有至少一个环氮的任选取代的双环杂芳基。
在更进一步的实施方案中，G1选自
X1是N或C(R6)； X2是N或C(R7)； X3是N或C(R8)； X4是N或C(R9)； X5是N或C(R10)； X6是N或C(R11)； X7是N或C(R12)； X8是N或C(R13)； X9是N或C(R14)； X10是N或C(R15)； Y是O或S；且 R4-R15独立地选自氢、卤素、低级烷基、环烷基、芳基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、低级卤代烷基、酰基、氨基、羧基、氰基和硝基，它们中任何一个均可被任选地取代。
在更进一步的实施方案中，A选自
其中任何一个均可被任选地取代。
在更进一步的实施方案中， G2是(CRaRb)mZ(CRcRd)p； m和p独立地为0、1或2； Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、C(O)以及不存在； Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；且 n是0或2。
在更进一步的实施方案中，其中G1是
在更进一步的实施方案中，A选自
在更进一步的实施方案中，本发明的化合物具有结构式II
其中 Y是O或S； G2是(CRaRb)mZ(CRcRd)p； m和p独立地为0、1或2； Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、C(O)以及不存在； Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；且 n是0或2； G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代； G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代； R16选自低级烯基、炔基、低级烷基、烷硫基、卤代烷基、杂烷基、羟烷基、卤素和氢；且 R17-R19独立地选自酰基、低级烯基、炔基、低级烷氧基、低级烷氧基烷基、低级烷基、烷硫基、酰氨基、氨基、氨基烷基、氨基羰基、羧基、卤代烷基、羟烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
在更进一步的实施方案中， Y是S； R16选自低级烷基和氢；且 R17-R19全部是氢。
在更进一步的实施方案中，G3选自芳基、杂环烷基、杂芳基，它们中任何一个均可被任选地取代。
在更进一步的实施方案中， 或者 m和p均为0；且 Z选自O、NH、S和C(O)； 或者 m是1； Z不存在；且 p是0。
在更进一步的实施方案中，R16选自甲基、乙基、杂烷基和卤素。
在更进一步的实施方案中，G4选自氢、卤素、烷氧基、氨基、烷基酰氨基、羧基、烷基羧基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基和杂环烷基烷基酰氨基，它们中任何一个均可被任选地取代。
在某些进一步的实施方案中，结构式I-IV化合物可用于抑制Rho激酶，用于治疗疾病。
在某些进一步的实施方案中，结构式I-IV化合物可与至少一种其他治疗剂组合给药。
如本文所使用，以下术语具有所指定的含义。
当公开了值的范围并使用“从n1至n2”(其中n1和n2为数字)的表示法时，除非另外指明，此表示法意在包括数字本身和它们之间的范围。此范围可以是端值间的整数或连续范围，且包括端值。例如，范围“从2至6个碳”意在包括二、三、四、五和六个碳，因为碳为整数单位。对比，例如，范围“从1至3μM(微摩尔)，”其意在包括1μM、3μM以及在其间的所有数字至任何位数的有效数字(例如，1.255μM、2.1μM、2.9999μM等)。
如本文所使用，术语“约”意在限定其修饰的数值，表明这样的值是误差范围内的变量。当没有详述特别的误差范围，如在数据图或表中给定平均值的标准差时，术语“约”应理解为表示可以包括所述值的范围，以及考虑有效数字，可以被数字的上下舍入(rounding up or down)所包括的范围。
如本文所使用，术语“酰基”单独或在组合中指连接到烯基、烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基或任何其他基团的羰基，其中连接至所述羰基的原子是碳。“乙酰基”(酰基的一种)指-C(O)CH3基团。“烷基羰基”或“烷酰基”指通过羰基连接到母体分子基团的烷基。这样的基团的实例包括甲基羰基和乙基羰基。酰基的实例包括甲酰基、烷酰基和芳酰基。
如本文所使用，术语“烯基”单独或在组合中指具有一个或多个双键并包含2至20个碳原子的直链或支链烃基。在某些实施方案中，所述烯基会包含2至6个碳原子。术语“亚烯基”指连接在两个或多个位置的碳碳双键系统，如亚乙烯基[(-CH＝CH-)，(-C::C-)]。合适的烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、2-甲基丙烯基、1，4-丁二烯基等。除非另外指明，术语“烯基”可以包括“亚烯基”基团。
如本文所使用，术语“烷氧基”单独或在组合中指烷基醚基团，其中术语烷基如下文所定义。合适的烷基醚基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
如本文所使用，术语“烷基”单独或在组合中指含有1至20个碳原子的直链或支链烷基。在某些实施方案中，所述烷基会包含1至10个碳原子。在进一步的实施方案中，所述烷基会包含1至6个碳原子。烷基可以任选地如本文所定义地被取代。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、壬基(noyl)等。如本文所使用，术语“亚烷基”单独或在组合中指连接在两个或多个位置的衍生自直链或支链饱和烃的饱和脂肪族基团，如亚甲基(-CH2-)。除非另外指明，术语“烷基”可以包括“亚烷基”基团。
如本文所使用，术语“烷基氨基”单独或在组合中指通过氨基连接到母体分子基团的烷基。合适的烷基氨基可以是单或二烷基化的，形成比如例如N-甲基氨基、N-乙基氨基、N，N-二甲基氨基、N，N-乙基甲基氨基等的基团。
如本文所使用，术语“烷叉(alkylidene)”单独或在组合中指其中碳碳双键的一个碳原子属于烯基所连接的基团的烯基。
如本文所使用，术语“烷硫基”单独或在组合中指烷基硫醚(R-S-)基团，其中术语烷基如上文所定义，且其中所述硫可以是被单次或双重氧化的。合适的烷基硫醚基的实例包括甲硫基、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、甲磺酰基、乙磺酰基等。
如本文所使用，术语“炔基”单独或在组合中是含有一个或多个三键并含有2至20个碳原子的直链或支链烃基。在某些实施方案中，所述炔基包含2至6个碳原子。在进一步的实施方案中，所述炔基包括2至4个碳原子。术语“亚炔基”指连接在两个位置的碳碳三键，如亚乙炔基(-C:::C-，-C≡C-)。炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、羟基丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-2-基等。除非另外指明，术语“炔基”可以包括“亚炔基”基团。
如本文所使用，术语“酰氨基”和“氨基甲酰基”单独或在组合中指通过羰基连接到母体分子基团的如下文所述的氨基，或反之亦然。如本文所使用，术语“C-酰氨基”单独或在组合中指-C(＝O)-N(R)2基团，其中R如本文所定义。如本文所使用，术语“N-酰氨基”单独或在组合中指RC(＝O)N(R’)-基团，其中R和R’如本文所定义。如本文所使用，术语“酰基氨基”单独或在组合中包括通过氨基连接到母体基团的酰基。“酰基氨基”基团的实例是乙酰氨基(CH3C(O)NH-)。
如本文所使用，术语“氨基”单独或在组合中指-N(R)(R’)或-N+(R)(R’)(R”)，其中R、R’和R”独立地选自氢、烷基、酰基、杂烷基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基，它们中任何一个本身可以被任选地取代。
如本文所使用，术语“氨基酸”单独或在组合中指形式为-NRCH(R’)C(O)OH的取代基，其中R通常为氢，但可以与N环化(如在氨基酸脯氨酸的情况)，且R’选自氢、烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、氨基、酰氨基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、氨基烷基、酰氨基烷基、羟烷基、硫醇、硫代烷基、烷硫基烷基和烷硫基，它们中任何一个可以被任选地取代。术语“氨基酸”包括所有天然存在的氨基酸以及合成的类似物。
如本文所使用，术语“芳基”单独或在组合中指含有一、二或三个环的碳环芳族系统，其中这样的环可以按侧链方式连接在一起或者可以被稠合。术语“芳基”包括如苄基、苯基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基、轮烯基、甘菊环基、四氢萘基和联苯基的芳族基团。
如本文所使用，术语“芳基烯基”或“芳烯基”单独或在组合中指通过烯基连接到母体分子基团的芳基。
如本文所使用，术语“芳基烷氧基”或“芳烷氧基”单独或在组合中指通过烷氧基连接到母体分子基团的芳基。
如本文所使用，术语“芳基烷基”或“芳烷基”单独或在组合中指通过烷基连接到母体分子基团的芳基。
如本文所使用，术语“芳基炔基”或“芳炔基”单独或在组合中指通过炔基连接到母体分子基团的芳基。
如本文所使用，术语“芳基烷酰基”或“芳烷酰基”或“芳酰基”单独或在组合中指衍生自芳基取代的烷烃羧酸(alkanecarboxylic acid)的酰基，如苯甲酰基、萘甲酰基、苯乙酰基、3-苯丙酰基(氢化肉桂酰基)、4-苯丁酰基、(2-萘基)乙酰基、4-氯氢化肉桂酰基等。
如本文所使用，术语芳氧基单独或在组合中指通过氧连接到母体分子基团的芳基。
如本文所使用，术语“苯并(benzo和benz)”单独或在组合中指衍生自苯的二价基团C6H4＝。实例包括苯并噻吩和苯并咪唑。
如本文所使用，术语“氨基甲酸酯”单独或在组合中指氨基甲酸的酯(-NHCOO-)，其可以从氮或酸末端连接到母体分子基团，且其可以任选地如本文所定义地被取代。
如本文所使用，术语“O-氨基甲酰基”单独或在组合中指-OC(O)NRR’基团，其中R和R’如本文所定义。
如本文所使用，术语“N-氨基甲酰基”单独或在组合中指ROC(O)NR’-基团，其中R和R’如本文所定义。
如本文所使用，术语“羰基”单独使用时包括甲酰基[-C(O)H]，在组合中使用时为-C(O)-基团。
如本文所使用，术语“羧基”指-C(O)OH、O-羧基、C-羧基或相应的“羧酸根”阴离子(如在羧酸盐中)。“O-羧基”基团指RC(O)O-基团，其中R如本文所定义。“C-羧基”基团指-C(O)OR基团，其中R如本文所定义。
如本文所使用，术语“氰基”单独或在组合中指-CN。
如本文所使用，术语“环烷基”，或可选地“碳环”单独或在组合中指饱和或部分饱和的单环、双环或三环烷基，其中每个环基团含有3至12个碳原子环成员，且其可任选地为如本文所定义的任选地被取代的苯并稠环系统。在某些实施方案中，所述环烷基会包含5至7个碳原子。这样的环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、八氢萘基、2，3-二氢-1H-茚基、金刚烷基等。如本文所使用，“双环”和“三环”均意在包括两种稠环系统(如十氢化萘、八氢化萘)和多环(多中心)饱和或部分不饱和型。后一类型的异构体的一般例示为双环[1，1，1]戊烷、樟脑、金刚烷和双环[3，2，1]辛烷。
如本文所使用，术语“酯”单独或在组合中指桥接两个在碳原子处连接的基团的羧基。
如本文所使用，术语“醚”单独或在组合中一般指桥接两个在碳原子处连接的基团的氧基。“醚”还可以包括聚醚，比如例如-RO(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2OR’、-RO(CH2)2O(CH2)2OR’、-RO(CH2)2OR’和-RO(CH2)2OH。
如本文所使用，术语“卤代”或“卤素”单独或在组合中指氟、氯、溴或碘。
如本文所使用，术语“卤代烷氧基”单独或在组合中指通过氧原子连接至母体分子基团的卤代烷基。
如本文所使用，术语“卤代烷基”单独或在组合中指其中一个或多个氢被卤素取代的具有上文所定义的含义的烷基。具体包括单卤代烷基，二卤代烷基和多卤代烷基。例如，单卤代烷基可以在基团中有一个碘、溴、氯或氟原子。二卤代和多卤代烷基可以有两个或多个相同的卤原子或不同的卤代基团的组合。卤代烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。“卤代亚烷基”指在两个或多个位置连接的卤代烷基。实例包括氟亚甲基(-CFH-)、二氟亚甲基(-CF2-)、氯亚甲基(-CHCl-)等。
如本文所使用，术语“杂烷基”单独或在组合中指完全饱和或含有1至3个不饱和度，由规定数目的碳原子和一至三个选自O、N和S的杂原子组成的稳定的直链或支链或环状烃基，或其组合，且其中氮和硫原子可任选地被氧化，氮杂原子可任选地被季铵化。杂原子O、N和S可以置于杂烷基的任何内部位置。上至两个杂原子可以相连，比如例如，-CH2-NH-OCH3。术语杂烷基可以包括醚。
如本文所使用，术语“杂芳基”单独或在组合中指3至7元不饱和杂单环或其中至少一个稠环是不饱和的稠合多环，其中至少一个原子选自O、S和N。在某些实施方案中，所述杂芳基会包含5至7个碳原子。该术语还包括稠合多环基团，其中杂环基与芳基稠合，其中杂芳基与其他杂芳基稠合，或者其中杂芳基与环烷基稠合。杂芳基的实例包括吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基、吡喃基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、吲唑基、苯并三唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、四氢喹啉基、四唑并哒嗪基、四氢异喹啉基、噻吩并吡啶基、呋喃并吡啶基、吡咯并吡啶基等。示例性的三环杂环基团包括咔唑基、苯并吲哚基(benzidolyl)、菲咯啉基、二苯并呋喃基、吖啶基、菲啶基、呫吨基等。
如本文所使用，术语“杂环烷基”和“杂环”可互换地单独或在组合中均指含有至少一个杂原子作为环成员的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的单环、双环或三环杂环基，其中每个所述杂原子可以独立地选自氮、氧和硫。在某些实施方案中，所述杂环烷基会包含1至4个杂原子作为环成员。在进一步的实施方案中，所述杂环烷基会包含1至2个杂原子环成员。在某些实施方案中，所述杂环烷基会在每个环中包含3至8个环成员。在进一步的实施方案中，所述杂环烷基会在每个环中包含3至7个环成员。在更进一步的实施方案中，所述杂环烷基会在每个环中包含5至6个环成员。“杂环烷基”和“杂环”意在包括糖、砜、亚砜、叔氮环成员的N-氧化物以及碳环稠环系统和苯并稠环系统；此外，两术语还均包括杂环被稠合到芳基(如本文所定义)或另一杂环基的系统。杂环烷基的实例包括氮丙啶基、吖丁啶基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯基、二氢异吲哚基、二氢异喹啉基、二氢噌啉基、二氢苯并二噁英基、二氢[1，3]噁唑并[4，5-b]吡啶基、苯并噻唑基、二氢吲哚基、二氢吡啶基、1，3-二噁烷基、1，4-二噁烷基、1，3-二氧戊环基、异吲哚啉基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、四氢吡啶基、哌啶基、硫吗啉基等。除非明确禁止，所述杂环烷基可以被任选地取代。
如本文所使用，术语“肼基”单独或在组合中指通过单键连接的两个氨基，即-N-N-。
如本文所使用，术语“氧肟酸”单独或在组合中指-C(O)ON(R)O(R′)，其中R和R’如本文所定义，或者指相应的“氧肟酸根”阴离子，包括任何相应的氧肟酸盐。氧戊酸根还包括-ON(R)O(O)CR’形式的反向(reverse)氧戊酸根。
如本文所使用，术语“羟基(hydroxy)”或同等的“羟基(hydroxyl)”单独或在组合中指-OH。
如本文所使用，术语“羟烷基”单独或在组合中指通过烷基连接到母体分子基团的羟基。
如本文所使用，术语“亚氨基”单独或在组合中指＝N-。
如本文所使用，术语“亚氨基羟基”单独或在组合中指＝N(OH)和＝N-O-。
术语“异氰酸基”指-NCO基团。
术语“异硫氰酸基”指-NCS基团。
短语“原子的直链”指独立地选自碳、氮、氧和硫的原子的最长直链。
如本文所使用，术语“低级”单独或在组合中指含有1至6且包括6个碳原子。
如本文所使用，术语“巯基”单独或在组合中指RS-基团，其中R如本文所定义。
如本文所使用，术语“硝基”单独或在组合中指-NO2。
如本文所使用，术语“氧基”或“氧杂”单独或在组合中指-O-。
如本文所使用，术语“氧代”单独或在组合中指＝O。
术语“全卤代烷氧基”指所有氢原子均被卤素原子取代的烷氧基。
如本文所使用，术语“全卤代烷基”单独或在组合中指其中所有氢原子均被卤素原子取代的烷基。
如本文所使用，术语“磷酰胺”单独或在组合中指其中一个或多个羟基已经被氮、氨基或酰氨基取代的磷酸酯基团[(OH)2P(O)O-]。
如本文所使用，术语“膦酸酯”单独或在组合中指ROP(OR′)(OR)O-形式的基团，其中R和R’选自氢、烷基、酰基、杂烷基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基，它们中任何一个本身可以被任选地取代。“膦酸酯”包括“磷酸酯[(OH)2P(O)O-]和相关的可形成盐的磷酸阴离子。
如本文所使用，术语“磺酸酯(sulfonate)”、“磺酸”和“磺酸的(sulfonic)”单独或在组合中指-SO3H基团及其在磺酸用于形成盐时的阴离子。
如本文所使用，术语“硫烷基”单独或在组合中指-S-。
如本文所使用，术语“亚硫酰基”单独或在组合中指-S(O)-。
如本文所使用，术语“磺酰基”单独或在组合中指-S(O)2-。
术语“N-磺酰氨基”指RS(＝O)2NR′-基团，其中R和R’如本文所定义。
术语“S-磺酰氨基”指-S(＝O)2NRR′基团，其中R和R’如本文所定义。
如本文所使用，术语“硫杂”和“硫基(thio)”单独或在组合中指-S-基团或其中氧被硫替代的醚。硫杂和硫基的定义中包括硫基的氧化衍生物，即亚硫酰基和磺酰基。
如本文所使用，术语“硫醇”单独或在组合中指-SH基团。
如本文所使用，术语“硫代羰基”单独使用时包括硫醛基-C(S)H，在组合使用时为-C(S)-基团。
术语“N-硫代氨基甲酰基”指ROC(S)NR′-基团，其中R和R’如本文所定义。
术语“O-硫代氨基甲酰基”指-OC(S)NRR′基团，其中R和R’如本文所定义。
术语“氰硫基”指-CNS基团。
术语“三卤代甲磺酰氨基”指X3CS(O)2NR-基团，其中X是卤素且R如本文所定义。
术语“三卤代甲磺酰基”指X3CS(O)2-基团，其中X是卤素。
术语“三卤代甲氧基”指X3CO-基团，其中X是卤素。
如本文所使用，术语“三取代的甲硅烷基”单独或在组合中指其三个自由价由本文在取代氨基定义下列出的基团取代的硅酮基团。实例包括三甲基甲硅烷基、叔丁二甲基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基等。
本文的任何定义可以与任何其他定义组合使用以描述复合结构基团。按照惯例，任何这样的定义的结尾元素均连接至母体基团。例如，复合基团烷基酰氨基会代表通过酰氨基连接至母体分子的烷基，术语烷氧基烷基会代表通过烷基连接至母体分子的烷氧基。
当基团被定义为“不存在”时，意思是没有所述基团。出现在两个其他基团之间的“不存在”的基团也可以理解为侧链基团的断裂。例如，如果在-(CH2)sG1G2G3中，元素G2不存在，则所述基团会为-(CH2)sG1G3。
术语“任选地取代”指先前基团可被取代或不被取代。当被取代时，“任选取代的”基团的取代基可以包括但不限于，单独或在组合中的一个或多个独立地选自以下基团或一组特别指定的基团的取代基低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷酰基低级杂烷基、低级杂环烷基、低级卤代烷基、低级卤代烯基、低级卤代炔基、低级全卤代烷基、低级全卤代烷氧基、低级环烷基、苯基、芳基、芳氧基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、氧代、低级酰氧基、羰基、羧基、低级烷基羰基、低级羧酸酯、低级酰胺基(lowercarboxamido)、氰基、氢、卤素、羟基、氨基、低级烷基氨基、芳基氨基、酰氨基、硝基、硫醇、低级烷硫基、低级卤代烷硫基、低级全卤代烷硫基、芳硫基、磺酸酯、磺酸、三取代甲硅烷基、N3、SH、SCH3、C(O)CH3、CO2CH3、CO2H、吡啶基、噻吩、呋喃基、低级氨基甲酸酯和低级脲。两个取代基可以连接在一起形成稠合的五、六或七元碳环或由零至三个杂原子组成的杂环，例如形成亚甲二氧基或亚乙二氧基。任选取代的基团可以是未取代的(例如-CH2CH3)、完全取代的(例如-CF2CF3)、单取代的(例如-CH2CH2F)或介于完全取代和单取代之间的任何水平的取代(如-CH2CF3)。如果列举取代基时未对取代进行限定，则取代和未取代形式均包括在内。当限定取代基为“取代的”时，则特别意指取代形式。此外，可以根据需要针对特定基团定义不同组的任选取代基；在这些种情况下，所述任选取代基将如所定义的通常直接在短语“任选地被......取代”中。
除非另外说明，独自出现且没有数字指定的术语R和术语R’指选自氢、羟基、卤素、烷基、环烷基、杂烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基(其中任何一个可以被任选地取代)的基团。如本文所定义，这样的R和R’基团应理解为被任选地取代。不论R基团是否指定了数字，每个R基团(包括R、R’和Rn，其中n＝(1，2，3，...n))、每个取代基和每个术语均应理解为独立于组中所有其他的选择。如果任何变量、取代基或术语(例如芳基、杂环、R等)在分子式或通用结构中出现超过一次，则其在每次出现的定义独立于其在其他出现的定义。本领域技术人员会进一步理解，某些基团可以从所记录的任何一端连接至母体分子或可占据元素链中的位置。因此，仅作为举例，不对称基团如-C(O)N(R)-可在碳或氮上连接至母体基团。
在本发明的化合物中存在不对称中心。这些中心根据手性碳原子周围的取代基的构型通过符号“R”或“S”来指定。要理解，本发明包括所有的立体化学异构形式，包括非对映异构、对映异构和差向异构形式，以及d-异构体和1-异构体，及它们的混合物。化合物的单个立体异构体可以从可商购的含有手性中心的原料合成制备，或通过制备对映异构体产物的混合物，然后分离，如转化成非对映异构体的混合物接着通过分离或重结晶、色谱技术、在手性色谱柱上直接分离对映异构体或本领域已知的其他合适的方法来制备。特定立体化学的起始化合物为可商购或可通过本领域已知的技术制备和拆分。此外，本发明的化合物可以存在几何异构体。本发明包括所有顺式(cis)、反式(trans)、顺(syns)、反(anti)、异侧(entgegen)(E)和同侧(zusammen)(Z)异构体以及它们的合适的混合物。此外，化合物可以按互变异构体存在，包含酮-烯醇互变异构体；本发明提供所有的互变异构体。此外，本发明的化合物可按非溶剂化形式以及与药学可接受的溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式存在。通常，就本发明的目的而言，认为溶剂化形式等同于非溶剂化形式。
术语“键”指两个原子或两个基团(当通过所述键连接的原子被认为是较大亚结构的部分时)之间的共价连接。除非另外指明，键可以是单键、双键和三键。分子图示中两原子之间的虚线指示在该位置可以存在或不存在额外的键。
如本文所使用，术语“疾病”意指通常与术语“病症”和“疾患”(如在医学疾患中)同义，且可以与之互换，因为其均反映身体或身体的一个部分的异常情况，所述异常情况损害正常的功能，并通常通过有区别的体征和症状显现。
术语“组合治疗”指给药两种或多种治疗剂，以治疗在本公开中描述的治疗学的疾患和病症。这样的给药包括以基本同时的方式共同给药这些治疗剂，如以具有固定比例的活性成分的单个胶囊，或以每种活性成分的多个、分离的胶囊。此外，这样的给药也包括以顺序方式使用每种类型的治疗剂。在两种情况下，治疗方案会在治疗本文所述的疾患和病症中提供药物组合的有益影响。
本文使用的“Rho激酶抑制剂”指在下文概述的Rho激酶测定中测量时，针对Rho激酶活性表现出的IC50不超过约100μM和更通常地不超过约50μM的化合物。“IC50”是将酶(例如Rho激酶)的活性降低至半数最大值水平的抑制剂浓度。已发现本发明的某些代表性化合物表现出针对Rho激酶的抑制。在某些实施方案中，在本文大所述的Rho激酶测定的测量中，化合物针对Rho激酶会显示出不超过约10μM的IC50；在进一步的实施方案中，化合物针对Rho激酶会显示不超过约5μM的IC50；在更进一步的实施方案中，化合物针对Rho激酶会显示不超过约1μM的IC50。在更进一步的实施方案中，化合物针对Rho激酶会显示不超过约200nM的IC50。
术语“治疗有效的”意在限定用于治疗疾病或病症的活性成分的量。该量会实现减轻或消除所述疾病和病症的目标。
如本文所使用，提及患者的“治疗”意在包括预防。术语“患者”指包括人类在内的所有哺乳动物。患者的实例包括人类、牛、狗、猫、山羊、绵羊、猪和兔。优选地，所述患者为人类。
术语“前药”指在体内变得更有活性的化合物。某些本发明化合物也可以作为前药存在，如Hydrolysis in Drug and Prodrug MetabolismChemistry，Biochemistry，and Enzymology(Testa，Bernard和Mayer，Joachim M.Wiley-VHCA，苏黎世，瑞士2003)中所述。本文所述的化合物的前药是所述化合物的结构修饰形式，其容易在生理条件下经历化学变化以提供所述化合物。此外，前药可以在离体环境中通过化学或生物化学的方法转化为所述化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂置于透皮贴剂储库(reservoir)中时，前药可缓慢转化为化合物。前药通常是有用的，因为在一些情况下，它们比所述化合物或母体药物更容易给药。例如，它们通过口服给药是可以生物利用的，而母体药物则不是。前药还可以在药物组合物中具有超过母体药物的改善的溶解度。本领域中已知多种前药衍生物，如依赖于前药水解分裂或氧化活化的那些。前药的非限制性实例是作为酯(所述“前药”)给药，但接着被代谢水解为羧酸，即其活性实体。其他的实例包括化合物的肽基衍生物。术语“治疗可接受的前药”指适合用于接触患者组织且不产生异常毒性、刺激和过敏反应，与合理的益处/风险比率相当且对它们的预期用途而言有效的前药或两性离子。
本发明的化合物可以作为治疗可接受的盐存在。本发明包括上述列举的化合物的盐形式，包含酸加成盐。合适的盐包括与有机和无机酸形成的盐。这样的酸加成盐一般会是药学可接受的。然而，非药学可接受的盐的盐可以被用于制备和纯化所讨论的化合物。也可以形成碱加成盐，且为药学可接受的。有关盐的制备和选择的更完整的讨论，参见PharmaceuticalSaltsProperties，Selection，and Use(Stahl，P.Heinrich.Wiley-VCHA，苏黎世，瑞士，2002)。
如本文所使用，术语“治疗可接受的盐”代表本发明的化合物的盐或两性离子形式，其为水或油溶性的或可分散的以及治疗可接受的(如本文所定义)。所述盐可以在化合物的最后分离和纯化过程中或单独地通过使游离碱形式的适当化合物与合适的酸反应来制备。代表性的酸加成盐包含乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、L-抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、二葡糖酸盐(digluconate)、甲酸盐、延胡索酸盐、龙胆酸盐、戊二酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐(hemisulfate)、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(羟乙基磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、DL-扁桃酸盐、均三甲苯磺酸盐(mesitylenesulfonate)、甲磺酸盐、亚萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、膦酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、焦谷氨酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、L-酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐(p-甲苯磺酸盐)和十一酸盐。而且，本发明化合物中的碱性基团可以被以下基团季铵化甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；癸基、十二烷基、十四烷基和甾基氯化物、溴化物、碘化物；以及苄基和苯乙基溴化物。可以用于形成治疗可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。也可以通过化合物与碱金属或碱土离子的配位作用来形成盐。因此，本发明包括了本文公开的化合物的钠盐、钾盐、镁盐和钙盐等。
碱加成盐可以在化合物的最后分离和纯化过程中通过使羧基与合适的碱(如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺进行反应来制备。治疗可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒的季胺阳离子如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苄胺、N，N-二苄基苯乙胺、1-二苯羟甲胺和N，N’-二苄乙烯二胺。其他用于形成碱加成盐的代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
虽然本发明的化合物可能作为原状化学品给药，但是也可能作为药物制剂提供它们。因此，本文提供的是包含一种或多种本发明的某些化合物，或其一种或多种药学可接受的盐、酯、前药、酰胺或溶剂合物，以及它们的一种或多种药学可接受的载体和任选的一种或多种其他治疗成分的药物制剂。在与所述制剂的其他成分相容和对其接受者无害的意义上，所述载体必须是“可接受的”。合适的制剂依赖于选择的给药路径。任何熟知的技术、载体和赋形剂均可作为本领域合适和理解的进行使用；如在Remington′sPharmaceutical Sciences中。本文公开的药物组合物可以按本领域已知的任何方式生产，如通过常规的混合、溶解、粒化、制造锭剂(dragee-making)、研细、乳化、胶囊化、包埋或压缩(compression)过程。
所述制剂包括适于口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、静脉内、关节内和髓内)、腹膜内、经粘膜、经皮、直肠和局部(包括皮肤、含服、舌下和眼内)给药的那些，尽管最合适的路径可依赖于例如，接受者的疾患和病症。所述制剂可以方便地以单位剂量形式呈现并可以通过药学领域任何公知的方法制备。通常，这些方法包括使本发明的化合物或其药学可接受的盐、酯、酰胺、前药或溶剂合物(“活性成分”)与组成一种或多种助剂的载体缔合的步骤。通常，所述制剂通过以下方法来制备使活性成分和液体载体或细分的固体载体或两者同时均匀且密切地缔合，然后，如果需要，将所述产品制成需要的制剂。
适于口服给药的本发明的制剂可以制成离散的单位，如各自含有预定量的活性成分的胶囊剂、扁囊剂或片剂；如散剂或颗粒剂；如在含水液体或非水液体中的溶液剂或混悬剂；或如水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。所述活性成分还可以制成推注剂(bolus)、药糖剂(electuary)或糊剂。
可口服使用的药物制剂包括片剂、明胶制备的推入配合式(push-fit)胶囊剂和由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制备的密封的软胶囊。可以任选地与一种或多种助剂通过压缩或模塑来制备片剂。压制片剂可以通过在合适的机器中压缩任选地与粘结剂、惰性稀释剂或润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的，自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分来制备。模制片可以通过在合适的机器中模塑用惰性液体稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物来制备。所述片剂可以任选地被包衣或刻痕(scored)并可以被配制以提供其中活性成分的缓释或控释。所有口服给药的制剂应在剂量上适于这样的给药。所述推入配合式胶囊剂可以包含活性成分与填充剂(如乳糖)、粘结剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)，以及和任选的稳定剂的混合物。在软胶囊剂中，活性化合物可以溶解或悬浮于合适的液体中(如脂肪油、液体石蜡或液态聚乙二醇)。此外，可以加入稳定剂。对锭芯提供合适的包衣。为此，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或锭剂包衣中加入染料或色素以鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合。
所述化合物可被配制成通过注射(如通过快速推注或连续输注)进行肠胃外给药。用于注射的制剂可以与添加的防腐剂制成单位剂量形式，如在安瓿中或在多剂量容器中。所述组合物可以采用如在油性或水性载体(vehicle)中的混悬剂、溶液剂或乳剂形式，并可以包含配制剂如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。所述制剂可以制成在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并可以按粉末形式或冷冻干燥(冻干)状态储存，其只需要直接在使用前加入无菌液体载体，如盐水或无菌无热原水。即用注射溶液剂和混悬剂可以从上文所述种类的无菌散剂、颗粒剂和片剂制备。
用于肠胃外给药的制剂包括活性化合物的含水和非含水(油性)无菌注射溶液剂，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和赋予所述制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及含水和非含水无菌混悬剂，其可以包括助悬剂和增稠剂。合适的亲脂溶剂或载体包括脂肪油(如芝麻油)、或合成的脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)、或脂质体。含水注射混悬剂可以包含增加所述混悬剂粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，所述混悬剂也可以包含合适的稳定剂或增加化合物溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。
除前述制剂以外，所述化合物还可以配制为储库制剂(depotpreparation)。这样的长效制剂可以通过植入(如皮下或肌内)或通过肌内注射给药。因此，例如，所述化合物可以同合适的聚合材料或疏水材料(例如作为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂进行配制，或可以配制为微溶性衍生物，如作为微溶性盐。
对于含服或舌下给药，所述组合物可以采取以常规方式配制的片剂、锭剂、软锭剂或凝胶剂的形式。这样的组合物可以包含在调味基质(flavoredbasis)(如蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的活性成分。
所述化合物也可被配制成直肠组合物，比如，例如包含常规栓剂基质的栓剂或滞留型灌肠剂，所述常规栓剂基质如可可脂、聚乙二醇或其他甘油酯。
本发明的某些化合物可以局部给药，即通过非全身给药。这包括本发明的化合物外部应用至表皮或口腔以及这样的化合物滴注至耳、眼和鼻，以便所述化合物不会明显进入血流。相反，全身给药指口服、静脉内、腹膜内和肌内给药。
适于局部给药的制剂包括适用于穿透皮肤到达炎症位点的液体或半液体制剂，如凝胶剂、擦剂、洗剂、乳膏剂、软膏剂或糊剂，以及适于给药至眼、耳或鼻的滴剂。用于局部给药的活性成分可以占所述制剂的，例如0.001％至10％w/w(按重量计)。在某些实施方案中，活性成分可以占多达10％w/w。在其他实施方案中，其可以占少于5％w/w。在某些实施方案中，所述活性成分可以占2％w/w至5％w/w。在其他实施方案中，其可以占所述制剂的0.1％至1％w/w。
用于局部或经皮给药的凝胶剂通常可以包含挥发性溶剂、不挥发性溶剂和水的混合物。在某些实施方案中，缓冲溶剂系统的挥发性溶剂组分可以包含低级(C1-C6)烷基醇、低级烷基二醇和低级二醇聚合物。在进一步的实施方案中，所述挥发性溶剂是乙醇。认为挥发性溶剂组分充当渗透促进剂，且当其蒸发时也在皮肤上产生冷却效应。所述缓冲溶剂系统的非挥发性溶剂的部分选自低级烷撑二醇和低级二醇聚合物。在某些实施方案中，使用丙二醇。所述非挥发性溶剂减缓所述挥发性溶剂的蒸发并降低所述缓冲溶剂系统的蒸气压。该非挥发性溶剂组分的量和所述挥发性溶剂的量一样，由使用的药物化合物或药物确定。当所述系统中的非挥发性溶剂太少时，所述药物化合物可能由于挥发性溶剂的蒸发而结晶，而过量时则可能由于药物从溶剂混合物的过少释放而导致生物利用度不足。所述缓冲溶剂系统的缓冲组分可以选自本领域常用的任何缓冲液；在某些实施方案中，使用水。成分的通常比例为约20％的非挥发性溶剂、约40％的挥发性溶剂和约40％的水。所述局部组合物中但加入一些任选的成分。这些包括但不限于螯合剂和胶凝剂。合适的胶凝剂可以包括但不限于，半合成的纤维素衍生物(如羟丙基甲基纤维素)和合成的聚合物，以及化妆品(cosmeticagents)。
洗剂包括那些适合施用至皮肤或眼的。眼洗剂可以包含任选地含有杀菌剂的无菌水溶液，并可以通过与制备滴剂类似的方法来制备。施用至皮肤的洗液或擦剂还可包含加快干燥和冷却皮肤的试剂(如乙醇或丙酮)和/或增湿剂(如甘油)或油(如蓖麻油或花生油)。
乳膏剂、软膏剂或糊剂是外用的活性成分的半固体制剂。它们可以借助于合适的机器，将单独或在含水或非含水流体的溶液或悬浮液中的细分的或粉末形式的活性成分与油脂性或非油脂性基质混合制得。所述基质可以包含烃如硬、软或液体石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；胶浆剂；天然来源如杏仁、玉米、花生、蓖麻或橄榄的油；羊毛脂或它们的衍生物，或脂肪酸(如硬脂酸或油酸)以及醇(如丙二醇)或大粒凝胶。所述制剂可以掺入任何合适的表面活性剂如阴离子、阳离子或非离子型表面活性剂，如脱水山梨糖醇酯或其聚氧化乙烯衍生物。还可以包括助悬剂如天然树胶、纤维素衍生物或无机材料(如硅酸盐质硅石(silicaceous silicas))，以及其他成分(如羊毛脂)。
滴剂可以包含无菌水性或油性溶液或悬浮液，并可通过将活性成分溶解在合适的杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其他合适的防腐剂(且在某些实施方案中，包括表面活性剂)的水性溶液中来制备。然后所得溶液可通过过滤来澄清，转移至合适的容器，然后将所述容器密封并通过高压灭菌或在98-100℃下保持半小时来灭菌。可选地，所述溶液可以通过过滤灭菌并通过无菌技术转移至容器。适合包括在滴剂中的杀菌剂和杀真菌剂的实例是硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、苯扎氯铵(0.01％)和乙酸氯己啶(0.01％)。制备油性溶液的合适溶剂包括甘油、稀释的醇和丙二醇。
用于口中局部给药(如含服或舌下)的制剂包括包含在调味基质(如蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的活性成分的锭剂，以及包含在调味基质(如凝胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分的软锭剂。
对于通过吸入给药，可方便地从吹入器、喷雾加压包(nebulizerpressurized pack)或递送喷雾剂的其他方便的方式递送化合物。加压包可包含合适的推进剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体。就加压气溶胶而言，剂量单位可以通过提供阀以递送计量的量来确定。可选地，对于通过吸入或吹入的给药，根据本发明的化合物可以采取干粉组合物的形式，例如所述化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。所述粉末组合物可以制成在例如，胶囊剂、弹射剂(cartridge)、明胶剂或泡罩包(blister pack)中的单位剂量形式，所述粉末可以借助于吸入器或吹入器进行给药。
优选的单位剂量制剂是包含如下文所述的活性成分的有效剂量或其适当部分的制剂。
应理解，除上文特别提到的成分外，上文描述的制剂可以包括与讨论的制剂类型有关的本领域其他常规试剂，例如适合口服给药的制剂可以包括矫味剂。
可以通过口服或经注射以每天0.1至500mg/kg的剂量给药化合物。用于成人的剂量范围通常是每天5mg至2g。以离散单位提供的片剂或其他成品形式可以方便地包含在这样的剂量下有效的一种或多种化合物的量或作为其多倍，例如包含5mg至500mg的单位，通常约10mg至200mg。
可以与载体材料组合以生成单一剂量形式的活性成分的量会根据受治疗的宿主和给药的特定模式而不同。
可按多种模式给药所述化合物，例如口服、局部给药或通过注射。向患者给药的化合物的精确量会由主治医生负责。任何特定患者的具体剂量水平会取决于多种因素，包括使用的具体化合物的活性、年龄、体重、体质、性别、饮食、给药时间、给药路径、排泄速率、药物组合、所治疗的精确病症，以及所治疗的适应证或疾患的严重性。同样，给药路径可以根据疾患和其严重性而变化。
在某些情况下，将至少一种本文描述的化合物(或其药学可接受的盐、酯或前药)与另一治疗剂组合给药会是合适的。仅作为实例，如果接受一种本文化合物的患者出现的副反应之一是高血压，则将抗高血压剂和最初的治疗剂组合给药会是合适的。或者，仅作为示例，可以通过给药辅药来增强本文所述化合物之一的治疗效果(即所述辅药自身可能只有极小的治疗益处，但其与另一治疗剂组合可增强对患者的总治疗效果)。或者，仅作为示例，可以通过给药一种本文所述的化合物和也具有治疗益处的另一治疗剂(其也包括治疗方案)来增加患者体验的益处。仅作为示例，在包括给药本文所述的化合物之一的糖尿病治疗中，可通过同时向所述患者提供用于糖尿病的另一治疗剂来得到增加的治疗益处。在任何情况下，不论所治疗的疾病、病症或疾患如何，患者体验到的总益处可以为两种治疗剂的简单加合，或者患者可体验到协同的益处。
在任何情况下，多种治疗剂(其中至少一种是本发明的化合物)可以按任何顺序给药或甚至同时给药。如果同时给药，所述多种治疗剂可按单个统一的形式或以多重形式提供(仅作为示例，作为一个药丸或两个单独的药丸)。治疗剂中的一种可以按多重剂量给药，或者二者均可以按多重剂量给药。如果不是同时给药，所述多个剂量之间的定时可以是几分钟至四周范围内的任意持续时间。
因此，在另一方面，本发明提供在需要这样的治疗的人类或动物个体中治疗Rho激酶介导的病症的方法，所述方法包括向所述个体组合给药有效减轻或阻止个体中的所述病症的量的本发明化合物和至少一种本领域已知的用于治疗所述病症的其他试剂。在一个相关方面，本发明提供包含至少一种本发明的化合物和一种或多种用于治疗Rho激酶介导的病症的其他试剂的组合的治疗组合物。
本发明的化合物可用于治疗Rho激酶介导的疾病、病症和疾患。在某些实施方案中，所述化合物可用于治疗急性和慢性疼痛和炎症。本发明的化合物可用于治疗患者的神经病、神经性疼痛或炎性痛如反射交感性营养不良/灼性神经痛(神经损伤)、周围神经病(包括糖尿病性神经病变)、顽固性癌痛、复杂的区域性疼痛综合征和压迫性神经病(腕管综合征(carpel tunnel syndrome))。所述化合物也可用于治疗急性带状疱疹(herpes zoster)(带状疱疹(shingles))伴随的疼痛、疱疹后神经痛(PHN)和相关的疼痛综合征如眼痛。所述化合物还可用作治疗疼痛的镇痛药如手术镇痛药，或者作为发热治疗中的解热药。疼痛适应证包括但不限于各种外科手术的术后痛(包括心脏术后痛)、牙痛/拔牙、癌症引起的疼痛、肌肉痛、乳腺痛、皮肤损伤引起的疼痛、下腰痛、各种病因学的头痛(包括偏头痛)等。所述化合物还可用于治疗疼痛相关的病症如触觉异常性疼痛和痛觉过敏。所述疼痛可以是体因性的(感受伤害的或神经性的)、急性和/或慢性的。本发明的Rho激酶抑制剂还可用于其中会传统地给药NSAID、吗啡或芬太尼阿片制剂(fentanyl opiates)和/或其他阿片类镇痛药的疾患。
此外，本发明化合物可用于治疗或预防需要延长的阿片类镇痛药的患者的阿片耐受性，以及摄入苯二氮

类的患者的苯二氮

耐受性，及其他成瘾行为，如尼古丁成瘾、酒精中毒和进食障碍。此外，本发明的化合物和方法可用于治疗或预防药物戒断症状，例如治疗或预防阿片、酒精或烟成瘾的戒断症状。
此外，本发明的化合物可用于治疗胰岛素抵抗和通常与放大的炎症信号相关的其他代谢性疾病，如动脉粥样硬化。
本发明包括使用新的选择性Rho激酶抑制剂治疗或预防呼吸疾病或疾患的治疗方法，其包括在医学上用于预防和治疗呼吸疾病或疾患的治疗方法，所述呼吸疾病或疾患包括哮喘疾患，包括变应原诱发的哮喘、运动诱发的哮喘、污染诱发的哮喘、寒冷诱发的哮喘和病毒诱发的哮喘；哮喘相关疾病，如气道高反应性和小气道疾病；慢性阻塞性肺病，包括正常气流(normal airflow)的慢性支气管炎、气道阻塞的慢性支气管炎(慢性阻塞性支气管炎)、肺气肿、哮喘性支气管炎和大疱病；以及涉及炎症的其他肺病，包括细支气管炎、支气管扩张、囊性纤维化病、饲鸽者病(pigeon fancier’sdisease)、农民肺、急性呼吸窘迫综合征、肺炎、局限性肺炎、误吸或吸入性损伤、肺脂肪栓塞、肺酸中毒炎症、急性肺水肿、急性高山病、急性肺动脉高血压、新生儿的持续性肺动脉高压、围产期吸入综合征、肺透明膜病、急性肺血栓栓塞症、肝素-鱼精蛋白反应、脓毒症、哮喘持续状态、缺氧、呼吸困难、呼吸过度、充气过度、低氧血和咳嗽。此外，本文公开的化合物会用于治疗变应性病症如迟发型超敏反应、变应性接触性皮炎、变应性鼻炎和慢性鼻窦炎。
本发明化合物可以治疗的其他病症或疾患包括炎症和相关病症。本发明的化合物可用作抗炎剂，其具有有害副反应显著更低的额外益处。所述化合物可以用于治疗关节炎，包括但不限于类风湿性关节炎、脊椎关节病、痛风性关节炎、骨关节炎、少年关节炎、急性风湿关节炎、肠病性关节炎、神经病性关节炎、银屑病关节炎、反应性关节炎(莱特尔综合征)和化脓性关节炎，以及自身免疫疾病，包括系统性红斑狼疮、溶血综合征、自身免疫性肝炎、自身免疫性神经病、白癜风(自体免疫性甲状腺炎)、桥本甲状腺炎、贫血症、肌炎(包括多肌炎)、脱发、肺出血肾炎综合征(Goodpasture′ssyndrome)、垂体炎(hypophytis)和肺纤维化。
所述化合物也可以用于治疗骨质疏松症和其他相关骨疾(bonedisorder)。
这些化合物也可以用于治疗胃肠疾患，如反流性食管炎、痢疾、炎性肠病、局限性肠炎、胃炎、肠易激综合征、格雷夫斯病(甲状腺机能亢进)、坏死性小肠结肠炎和溃疡性结肠炎。所述化合物也可以用于治疗肺炎症，如与病毒感染和囊性纤维化病有关的肺炎症。
此外，本发明的化合物还可单独或与常规免疫调节药组合用于器官移植患者。在所述患者中要被治疗的疾患的实例包括移植物抗宿主反应(即移植物抗宿主病)、同种异体移植物排斥(例如急性同种异体移植物排斥和慢性同种异体移植物排斥)、移植再灌注损伤和早期移植排斥(如急性同种异体移植物排斥)。
又进一步，本发明化合物可用于治疗瘙痒症和白癜风(vitaligo)。
本发明的化合物还可用于治疗疾病中的组织损伤，所述疾病如血管疾病、偏头痛、结节性动脉周围炎、甲状腺炎、再生障碍性贫血、霍奇金病、硬皮病(sclerodoma)、风湿热、I型糖尿病、肌神经接点疾病(包括重症肌无力)、白质病(包括多发性硬化)、结节病、肾炎、肾病综合征、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、肾小球肾炎、再灌注损伤、胰腺炎、间质性膀胱炎、贝赫切特综合征、多肌炎、牙龈炎、牙周炎(periodontis)、超敏反应、损伤后出现的肿胀、缺血(包括心肌缺血、心血管缺血和心脏停搏继发的缺血)、肝硬化、感染性休克、内毒素性休克、葛兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、中风、缺血再灌注损伤、多脏器功能障碍、再狭窄(包括冠状动脉搭桥手术后的再狭窄)等。
本发明的化合物还可用于治疗神经系统的某些疾病和病症。其中Rho激酶抑制可能有效的中枢神经系统病症包括皮质性痴呆包括阿尔茨海默病和轻度认知障碍(MCI)、中风引起的中枢神经系统损伤、缺血包括脑缺血(病灶缺血、血栓形成的中风和全心缺血(例如继发性心脏停搏)和创伤。其中Rho激酶抑制可能有效的神经变性病症包括病症中的神经变性或神经坏死，所述病症例如缺氧、低血糖症、癫痫和以下情况中枢神经系统(CNS)创伤(如脊髓和颅脑损伤)、高压氧惊厥和中毒、痴呆(例如早老年性痴呆)，以及艾滋病相关的痴呆、恶病质、西登哈姆舞蹈症、亨廷顿跳舞病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、多发性硬化、科尔萨科夫综合征和涉及脑血管病症的痴愚。其中Rho激酶抑制可能被证明有效的更多病症包括中枢神经系统和外周神经系统的神经病(包括，例如IgA神经病、膜神经病和特发性神经病)、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、横贯性脊髓炎、Gullain-Barre病、脑炎和神经系统癌症。其中Rho激酶抑制可能发现有效的CNS功能紊乱包括睡眠障碍、精神分裂症、抑郁症、与月经前期综合征(PMS)有关的抑郁或其他症状，以及焦虑。
此外，本发明化合物还可用于抑制Rho激酶活性以缓解全身性病症，所述全身性病症包括由多种试剂诱导的脓毒性和/或中毒性失血性休克；包括作为与细胞因子如TNF、IL-1和IL-2的治疗；以及包括作为移植治疗中短期免疫抑制的辅药。
可通过本发明的化合物治疗的其他病症或疾患包括癌症的预防或治疗，所述癌症如结肠直肠癌和乳腺、肺、前列腺、膀胱、子宫颈和皮肤的癌症。本发明的化合物可以用于治疗和预防的瘤形成，包括但不限于脑癌、骨癌、白血病、淋巴瘤、上皮细胞衍生的瘤形成(上皮癌)(如基底细胞癌)、腺癌、胃肠癌如唇癌、口腔癌、食管癌、小肠癌和胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、肺癌、乳腺癌和皮肤癌(如扁平细胞和基底细胞癌)、前列腺癌、肾细胞癌和其他已知的影响整个机体上皮细胞的癌症。所述瘤形成可以选自胃肠癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌、肺癌、乳腺癌和皮肤癌(如扁平细胞和基底细胞癌)。本发明的化合物和方法也可以用于治疗伴随放射治疗出现的纤维化。本发明的化合物和方法可以用于治疗具有腺瘤性息肉的个体，包含那些具有家族性腺瘤性息肉病(FAP)的个体。此外，本发明的化合物和方法可以用于预防息肉在具有FAP风险的患者中形成。
本发明的化合物可以用于治疗眼病，如干眼、青光眼、角膜新生血管化、视神经炎、干燥综合征(Sjogren’s syndrome)、视网膜神经节变性、眼缺血、视网膜炎、视网膜病变、葡萄膜炎、眼畏光(ocular photophobia)和治疗与眼组织急性损伤有关的炎症和疼痛。特别地，所述化合物可以用于治疗青光眼性视网膜病变和/或糖尿病性视网膜病变。所述化合物也可以用于治疗眼科手术(如白内障手术和屈光手术)的术后炎症或疼痛。
本发明的化合物可用于治疗经期痉挛、痛经、早产、子宫内膜异位症、腱炎、滑囊炎、皮肤相关疾患(如银屑病、湿疹、烧伤、晒斑、皮炎)、胰腺炎、肝炎、扁平苔藓、巩膜炎、硬皮病、皮肌炎等。可以使用本发明的化合物的其他疾患包括糖尿病(I型或II型)、心肌炎、病理性血管发生和主动脉瘤。
此外，本发明的化合物可用于治疗心血管疾病，如咽峡炎、冠状动脉血管痉挛、心肌梗死、冠脉缺血、充血性心力衰竭、心脏同种异体移植物血管病变、静脉移植病和血管再狭窄、缺血再灌注损伤、脑动脉血管痉挛、中风、脑缺血、原发性高血压、肺动脉高压、肾性高血压和其他继发性高血压病症、动脉粥样硬化和勃起功能障碍。
本发明的化合物也可部分或完全地用于共同治疗，代替其他常规抗炎疗法，如与甾族化合物、NSAID、COX-2选择性抑制剂、5-脂氧合酶抑制剂、LTB4拮抗剂和LTA4水解酶抑制剂用于共同治疗。当与抗菌剂或抗病毒剂组合治疗时，本发明的化合物也可以用于预防组织损伤。
自hES细胞产生的分化细胞可用于治疗退行性疾病，其症状是由缺失一些特定的细胞类型引起的。已从小鼠ES(mES)细胞产生特定类型的神经元，并且类似的选择性分化方法已应用于hES细胞。然而，hES细胞在技术上比mES细胞难培养得多，显示了有问题的性质(如生长缓慢和对营养物质白血病抑制因子(LIF)不敏感)。此外，hES细胞在细胞分离和离解后易受细胞凋亡攻击。它们经历大量细胞死亡，特别是在完全离解后，离解的hES细胞的克隆率一般≤1％。因此，难以(如果不是不可能)在离解培养中使用hES细胞，所述离解培养对诸如基因转移和分化诱导后的克隆分离的操作是重要的。细胞离解后人类胚胎干(hES)细胞的不良存活是研究的障碍，阻碍了如亚克隆的操作。
最近的证据表明添加Rho激酶的选择性抑制剂可使hES细胞能在不利的培养条件如离解和悬浮下像mES细胞那样生长和分化。Rho激酶抑制已显示显著地减少离解诱导的凋亡、增加克隆率(从约1％至约27％)和促进hES细胞中基因转移后的亚克隆。Rho激酶抑制赋予的克隆率的改善可对分离相对稀少的克隆(例如，用于同源重组的克隆)以及还对再克隆hES细胞以获得一致的细胞质量特别有利。此外，用Rho激酶的选择性抑制剂处理的离解的hES细胞即使在无血清悬浮(SFEB)培养中也受保护使之免于凋亡，形成漂浮的聚集体，并存活和分化，如SFEB-培养的小鼠ES细胞的行为。
存在许多产生或衍生hES细胞的方法。例如，组织相容的单性生殖的人类胚胎干细胞(phESC)可衍生自人类单性生殖的胚泡。预期上文公开的Rho激酶抑制剂的效用和下文的方法会在任何hES细胞上适用，不考虑所述hES细胞的来源，其均显示典型的hES细胞形态和/或性质。
因此，本发明涵盖本文公开的某些化合物和组合物的用途用于降低人类胚胎干细胞的凋亡；用于提高人类胚胎干细胞的存活；用于提高人类胚胎干细胞在基因转移后的克隆率；以及用于增加培养的人类胚胎干细胞的分化。在进一步的实施方案中，所述防止人类胚胎干细胞凋亡和/或所述提高人类胚胎干细胞的存活发生在离解培养中，比如例如无血清悬浮(SFEB)培养。
除了用于人类治疗，本发明的化合物和制剂也可用于宠物、外来动物(exotic animal)和家畜(包括哺乳动物、啮齿目动物等)的兽医治疗。更优选的动物包括马、狗和猫。
制备化合物的通用合成方法 下述路线可用于实践本发明。
路线1
实施例1-2可使用路线1中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线2
实施例3-12可使用路线2中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线3
实施例13-14可使用路线3中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线4
实施例15可使用路线4中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线5
实施例16可使用路线5中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线6
实施例17可使用路线6中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线7
实施例18-28可使用路线7中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线8
实施例29-31可使用路线8中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线9
实施例32-77可使用路线9中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线10
实施例78可使用路线10中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线11
实施例79-90可使用路线11中阐述的下述通用合成操作进行合成。
路线12
实施例92可使用路线12中阐述的下述通用合成操作进行合成。
本发明通过下列实施例进一步阐述。
实施例1
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基硼酸 在-78℃下15分钟内，向在4∶1 THF/甲苯中的2-溴-5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩(1g，3.8mmol)和三异丙基硼酸酯(0.85g，4.56mmol)的溶液中加入正丁基锂(4.56mol，2.8mL在己烷中的1.6M溶液)。将该混合物逐渐升温至室温并搅拌30分钟。通过加入盐酸水溶液(2M)同时剧烈搅拌10分钟终止反应。用THF稀释反应混合物，然后加入固体NaCl(10g)。该混合物用EtOAc萃取，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，粗产物通过用10％甲醇(在二氯甲烷中)洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供0.73g(85％产率)灰白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99(d，1H)、7.87(d，1H)、7.39(dd，1H)、2.73(s，3H)。
步骤2
2-氯-4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶 向在3∶1THF/水中的5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基硼酸(0.3g，1.3mmol)和2，4-二氯嘧啶(0.2g，1.3mmol)的溶液加入Na2CO3的水溶液(1.6mL，2M)。将该混合物脱气三次并回充氮气，然后一次性加入Pd(Ph3P)2Cl2(0.091g0.13mmol)。接着将反应混合物加热至70℃，保持2小时。LCMS确定反应完成。将容器冷却至室温，并用乙酸乙酯(100mL)稀释。有机层用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。浓缩滤液，粗产物通过用在己烷中的0-50％乙酸乙酯洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供灰白色固体(0.22g，56％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(d，1H)、7.81-7.77(m，2H)、7.56(d，1H)、7.41(dd，1H)、2.77(s，3H)。
步骤3
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向在EtOH(3.4mL)中的2-氯-4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶的溶液加入在压力管中的NH4OH(0.26mL，28％在水中)。密封该反应容器，加热至80℃过夜。将该反应混合物用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。浓缩滤液，通过用0-50％乙酸乙酯(在己烷中)洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供灰白色固体(0.085g，45％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，1H)、8.01-7.97(m，2H)、7.45(dd，1H)、6.98(d，1H)、6.80(s，br，2H)、2.65(s，3H)；LCMS(M+1)+278.93。
实施例2
4-(苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例1中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中苯并[b]噻吩-2-基硼酸替代了该程序步骤1中的5-氯苯并[b]噻吩-2-基硼酸。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.37(s，1H)、8.34(d，1H)、8.02-8.00(m，1H)、7.93-7.91(m，1)、7.47-7.40(m，2H)、7.35(d，1H)LCMS(M+1)+227.83。
实施例3
4-(3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基苯并呋喃-2-基)丙-2-烯-1-酮 向20mL螺口小瓶中充入1-(3-甲基苯并呋喃-2-基)乙酮(174mg，1.00mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(3mL)，然后将其置于100℃油浴中并搅拌16h，接着蒸发。粗产物通过硅胶层析法(用在己烷中的EtOAc洗脱)纯化，得到作为浅黄色固体的产物(161mg，70％)。LCMS(M+1+)230.09。
步骤2
4-(3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺 向20mL螺口小瓶中充入(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基苯并呋喃-2-基)丙-2-烯-1-酮(153mg，0.667mmol)、盐酸胍(191mg，2.00mmol)、K2CO3(277mg，2.00mmol)和2-甲氧基乙醇(3.3mL)，然后将其置于130℃油浴中，搅拌1.5h。浓缩反应物，用H2O(10mL)调成浆，通过过滤收集所得固体物质，用H2O(10mL)洗涤。将滤饼溶解于甲醇、过滤并蒸发得到作为灰白色固体的产物(125mg，83％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.34(d，1H)、7.71(m，1H)、7.60(m，1H)、7.41(m，1H)、7.31(m，1H)、7.00(d，1H)、6.72(bs，2H)、2.70(s，3H)。LCMS(M+1+)226.18。
实施例4
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶 标题化合物类似于如实施例1中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中4-溴吡啶替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(d，2H)、7.77-7.73(m，2H)、7.45-7.43(m，2H)、7.35(dd，1H)、2.49(s，3H)LCMS(M+1)+259.38。
实施例5
3-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶 标题化合物类似于如实施例1中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(按R.Robinson等人的J.Am.Chem.Soc.1956，78，1247中的描述制备)替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.22(s，1H)、8.31(d，1H)、8.12(d，2H)、7.99(d，1H)、7.85(s，2H)、7.40(d，1H)、7.2-7.15(m，1H)、2.41(s，3H)；LCMS(M+1)+300.63。
实施例6
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶 标题化合物类似于如实施例1中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中4-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(按Org.Lett.2003，5，5023-5025中的描述制备)替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.96(s，1H)、8.33(d，1H)、8.06(d，2H)、7.94(d，1H)、7.60-7.59(m，1H)、7.46(dd，1H)、7.19(d，1H)、6.51-6.50(m，1H)、2.40(s，3H)；LCMS(M+1)+300.64。
实施例7
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶-2-胺 步骤1
2-氯-4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶 向在3∶1THF/水中的5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基硼酸(0.3g，1.3mmol)和2-氯-4-碘吡啶(0.32g，1.3mmol)的溶液中加入Na2CO3的水溶液(1.6mL，2M)。将该混合物脱气三次并回充氮气，然后一次性加入Pd(Ph3P)2Cl2(0.091g，0.13mmol)。搅拌该反应混合物，加热至70℃，保持2小时，直至LCMS确定反应完成。该反应混合物用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。真空浓缩滤液，以提供粗产物，该粗产物通过用0-50％乙酸乙酯(在己烷中)洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供黄色固体(0.31g，79％产率)。LCMS(M+1)+293.76。
步骤2
4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶-2-胺 向在THF中的2-氯-4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶(0.05g，0.17mmol)的溶液中加入Pd2(dba)3(4.9mg，0.009mmol)和联苯基-2-基二环己基膦(7.1mg，0.02mmol)。将该反应混合物脱气三次并回充氮气。一次性加入LHMDS(0.22mmol，0.22mL的1M THF溶液)。搅拌该混合物，加热至65℃，保持4小时。冷却该反应混合物，用水稀释。用乙酸乙酯(25mL)将其萃取三次，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。浓缩滤液，通过用30-100％乙腈(在水中，存在0.1％TFA)洗脱的反相C-18柱层析法纯化，以提供灰白色固体(0.006g，13％产率)。LCMS(M+1)+274.87。
实施例8
6-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-4-胺 标题化合物类似于如实施例7中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中4，6-二氯嘧啶替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50(s，1H)、8.03(d，1H)、7.98(d，1H)、7.59(s，2H)、7.47(dd，1H)、6.90(s，1H)、2.62(s，3H)LCMS(M+1)+278.02。
实施例9
6-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2，4-二胺 标题化合物类似于如实施例7中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中6-氯嘧啶-2，4-二胺替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。LCMS(M+1)+291.09。
实施例10
5-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-1H-吲唑 标题化合物类似于如实施例7中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中5-溴-1H-吲唑替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.17(s，1H)、7.99(d，1H)、7.95(s，1H)、7.86(d，2H)、7.67(d，1H)、7.53(dd，1H)、7.40(dd，1H)、2.42(s，3H)；LCMS(M+1)+298.96。
实施例11
3-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例7中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-溴吡啶-2-胺替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.04-7.99(m，2H)、7.89(d，1H)、7.86(d，1H)、7.43(dd，1H)、7.05(dd，1H)、2.29(s，3H)LCMS(M+1)+275.01 实施例12
3-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)吡嗪-2-胺 标题化合物类似于如实施例7中描述的4-(5-氯-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-溴吡嗪-2-胺替代了该程序步骤2中的2，4-二氯嘧啶。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.04(d，2H)、7.92(d，1H)、7.88(d，1H)、7.84(d，1H)、7.40(dd，1H)、2.32(s，3H)LCMS(M+1)+275.99。
实施例13
4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
1-(4-溴苯硫基)丙-2-酮 向500mL圆底烧瓶中加入在Et2O(80mL)中的4-溴苯硫醇(9g，47.62mmol)、吡啶(20g，253.16mmol)的溶液。向该反应混合物中分几批加入1-溴丙-2-酮(6.9g，51.49mmol)，让所得溶液在室温下搅拌。然后过滤该混合物，用0.2N盐酸(100mL)洗涤过滤的固体两次。滤液经MgSO4干燥，浓缩，通过用10∶1石油醚/乙酸乙酯洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供10g(80％产率)作为白色固体的产物。
步骤2
5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩 向500mL圆底烧瓶中加入在含水H2SO4(250mL)中的1-(4-溴苯基硫代)丙-2-酮(12.2g，49.80mmol)。将所得溶液加热至110℃，保持10小时。后处理将该反应混合物用二氯甲烷(100mL)萃取三次，用Na2CO3(20％水溶液)洗涤、经Na2SO4干燥，浓缩。粗产物通过用10∶1石油醚/乙酸乙酯洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供作为黄色油的8g(42％产率)的产物。
步骤3
1-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮 向250mL圆底烧瓶中加入在CS2(10mL)中的5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩(5g，21.81mmol)的溶液。向该混合物中加入AlCl3(5.9g，43.79mmol)，然后在0℃滴加乙酰氯(2.1g，26.48mmol)。搅拌所得溶液，让其升温至室温，保持3小时。通过加入水/冰(20mL)终止该反应，通过加入盐酸(5％水溶液)将pH调节至4。所得混合物用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，经MgSO4干燥，浓缩。粗产物通过用10∶1石油醚/乙酸乙酯洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供3.5g(51％产率)作为白色固体的标题化合物。
步骤4
(E)-1-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮 向100mL圆底烧瓶中充入(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(3.5g，13.11mmol)和DMFDMA(10mL)。将所得溶液加热至80℃，过夜。浓缩残留物以提供2.5g(59％产率)作为黄色固体的产物。该产物不经进一步纯化用于下一步 步骤5
4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向100mL圆底烧瓶中充入(E)-1-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮(1.5g，4.66mmol)、乙醇钠(1.8g，26.47mmol)和盐酸胍(1.5g，15.71mmol)和EtOH(50mL)的溶液。所得混合物回流36小时。过滤该混合物，并浓缩滤液以提供0.8g(54％产率)作为黄色粉末的标题化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.36(d，1H)、8.10(s，1H)、7.95(d，1H)、7.57(d，1H)、6.98(d，1H)、6.79(s，2H)、2.66(s，3H)。LCMS(M+1)+321.00。
实施例14
4-(3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向10mL圆底烧瓶中充入按实施例13中的描述制备的4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.05g，0.15mmol)和THF(0.8mL)，然后冷却至-78℃。在-78℃下，15分钟内向所得混合物滴加正丁基锂(0.39mmol，0.24mL在己烷中的1.6M溶液)。后处理在-78℃下用甲醇终止该反应，暖至室温并浓缩。粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化(用在水(0.1％TFA)中的10-100％乙腈洗脱)，以提供0.02g(53％产率)浅黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，1H)、7.99-7.91(m，2H)、7.46-7.44(m，2H)、7.06(d，1H)、2.70(s，3H)。LCMS(M+1)+242.03。
实施例15
4-(3-溴苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
3-溴苯并[b]噻吩 向2L圆底烧瓶中充入苯并[b]噻吩(50g，373.13mmol)、CH2Cl2(800mL)和NaOAc(62g，756.10mmol)。在0℃，3小时内向其中滴加Br2(34g，212.50mmol)和CH2Cl2(700mL)的溶液。所得溶液搅拌1小时，同时将温度保持在0℃。通过TLC(EtOAc/石油醚＝1∶100)监控反应进程。后处理所得混合物用饱和NaHSO3(200mL)洗涤三次。合并有机层，经MgSO4干燥，浓缩，并通过使用1∶1000EtOAc/石油醚的急骤层析法纯化。得到70g(88％)作为无色油的产物。
步骤2
(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)丙-2-烯-1-酮 向1000mL圆底烧瓶中充入3-溴苯并[b]噻吩(30g，141.51mmol)和CS2(500mL)。分几批向此溶液加入AlCl3(37.6g，284.85mmol)。在0℃伴随搅拌，向上述溶液滴加乙酰氯(11.2g，143.59mmol)。所得溶液搅拌1.5小时，同时在冰浴中保持温度为0℃。通过TLC(EtOAc/石油醚＝1∶5)监控反应进程。后处理然后通过加入1000g H2O/冰并搅拌10分钟终止反应混合物的反应。含水层用CH2Cl2(300mL)萃取三次。合并的有机层用盐水(200mL)洗涤三次，经MgSO4干燥，浓缩，以提供22g(62％)作为淡黄色固体的产物。
步骤3
4-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向500mL圆底烧瓶中充入1-(3-溴苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(20g，78.74mmol)和DMFDMA(200mL)。所得溶液在回流下搅拌15小时。通过TLC(EtOAc/石油醚＝10∶1)监控反应进程。后处理冷却反应混合物，此时形成固体。过滤该固体并用己烷(100mL)洗涤三次。得到20g作为黄色固体的产物，其不经进一步纯化直接使用。
步骤4
4-(3-溴苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向500mL圆底烧瓶中充入1-(3-溴苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮(20g，64.72mmol)、乙醇(300mL)和胍(9.5g，161.02mmol)。所得溶液在回流下搅拌1小时。通过TLC(EtOAc/石油醚＝1∶1)监控反应进程。后处理通过蒸发除去一半的溶剂，得到浆液。通过过滤分离固体，然后用80mL冷乙醇洗涤三次，以提供20.5g(94.6％)的标题化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.45(d，1H)、8.09(d，1H)、7.88(m，1H)、7.64(m，1H)、7.60-7.54(m，2H)、6.90(s，2H)。LCMS(M+1)+306.10。
实施例16
4-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
1-(4-氯苯硫基)丁-2-酮 向100mL圆底烧瓶中充入4-氯苯硫醇(7g，48.28mmol)、K2CO3(115g，833.33mmol)和DMF(80mL)。在0℃下向该反应混合物滴加1-溴丁-2-酮(7.4g，49.01mmol)。所得溶液在室温下搅拌2小时。后处理该反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释、用水(400mL)洗涤三次、经MgSO4干燥、过滤和浓缩。粗产物通过用EtOAc/PE(1/30)洗脱的硅胶层析法纯化，以提供5g(48％产率)作为无色油的标题化合物。
步骤2
5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩 向500mL三颈圆底烧瓶中充入在1-氯苯(300mL)中的多聚磷酸(50g)。向其中滴加1-(4-氯苯硫基)丁-2-酮(21g，97.67mmol)，同时回流。所得溶液回流过夜。冷却反应物，通过加入KOH(50％水溶液)将pH调节至7。该混合物用EtOAc(300mL)萃取三次，经MgSO4干燥，过滤并浓缩。粗产物通过用EtOAc/PE(1/100)洗脱的硅胶柱纯化，得到17g(89％产率)作为白色固体的标题化合物。
步骤3
1-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮 向500mL三颈圆底烧瓶中充入在CS2(125mL)中的5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩(8.5g，10.26mmol)和乙酰氯(800mg，10.26mmol)。在0℃下分几批向该混合物中加入AlCl3(1.4g，10.37mmol)。让所得溶液在0℃搅拌过夜。后处理将反应物倾至200g冰水上，用二氯甲烷(50mL)萃取三次，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，浓缩。粗产物通过用1∶10EtOAc/PE洗脱的硅胶柱层析法纯化。获得1g(41％产率)白色固体标题化合物。
步骤4
(E)-1-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮 在室温下向100mL圆底烧瓶中充入1-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(1g，4.20mmol)和DMFDMA(10mL)。所得溶液回流1小时。后处理该混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥。该反应提供1.1g(92％产率)作为黄色固体的标题化合物。该产物不经进一步纯化用于下一步。
步骤5
4-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向100mL圆底烧瓶中充入乙醇(20mL)。在室温下分小份向其中加入Na(150mg，6.52mmol)，然后加入盐酸胍(450mg，4.74mmol)。向所得混合物滴加在乙醇(40mL)中的(E)-1-(5-氯-3-乙基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮(1.2g，4.10mmol)。将该反应混合物加热至回流，持续3小时。后处理浓缩该混合物，中和，通过从乙醇重结晶纯化，以提供1g(84％产率)作为白色固体的标题化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.37(d，1H)、8.01(dd，2H)、7.46(s，1H)、6.92(d，1H)、6.82(s，2H)、3.17(q，2H)、1.26(t，3H)LCMS(M+H)+290 实施例17
4-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
(4-氯苯基)(2，2-二乙氧基乙基)硫烷 向3L圆底烧瓶中充入4-氯苯硫醇(72.5g，500mol)、K2CO3(138g，1.00mol)和DMF(0.5L)。在0℃，3小时内向此混合物中滴加在DMF(250mL)中的2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(138g，0.60mol)的溶液。该反应在0℃下搅拌2h。后处理该混合物用EtOAc(750mL)稀释，用水(500mL)洗涤三次，经MgSO4干燥。蒸馏(66-68℃，在17mm Hg)粗产物以除去过多的2-溴-1，1-二乙氧基乙烷。剩余的残留物通过用1∶60EtOAc/PE洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供90g(55％产率)作为浅黄色油的标题化合物。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ::7.24-7.35(m，4H)4.63-4.69(m，1H)、3.50-3.75(m，4H)、3.12(d，2H)、1.19-1.28(m，6H)。
步骤2
5-氯苯并[b]噻吩 向25mL圆底烧瓶中充入(4-氯苯基)(2，2-二乙氧基乙基)硫烷(500mg，1.92mmol)和氯苯(2mL)。在5分钟内将所得混合物滴加至沸腾的在氯苯(5mL)中的多聚磷酸(1g)。后处理将该混合物倾至冰水(25mL)上，用EtOAc(25mL)萃取三次，用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩该混合物，通过用PE洗脱的SiO2急骤层析法纯化，以提供290mg(90％产率)作为灰白色固体的标题化合物。
步骤3
3-溴-5-氯苯并[b]噻吩 在0℃下，5分钟内，将在二氯甲烷(5mL)中的Br2(160mg，1.00mmol)的溶液滴加至充有在二氯甲烷(10mL)中的5-氯苯并[b]噻吩(169mg，1.00mmol)和NaOAc(164mg，2.00mmol)的25mL圆底烧瓶中。在5分钟内将所得混合物滴加至沸腾的在氯苯(5mL)中的多聚磷酸(1g)中。后处理将该混合物倾入10％NaHSO3水溶液(20mL)中，用EtOAc(20mL)萃取三次，经MgSO4干燥。浓缩该混合物，以提供0.247g(99％产率)作为浅黄色固体(mp84℃)的标题化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ::7.45-7.56(m，1H)、7.76-7.77(d，1H)、7.99-8.18(m，2H)。
步骤4
1-(3-溴-5-氯苯并[b]噻吩-2-基)乙酮 向25mL圆底烧瓶中充入3-溴-5-氯苯并[b]噻吩(148mg，0.60mmol)和CS2(5mL)。向所得混合物中加入AlCl3(0.153g，0.60mmol)，然后在0℃下滴加(10分钟)在CS2(1mL)中的乙酰氯(55mg，0.70mmol)。所得溶液在0℃下搅拌3小时。后处理该混合物用水(5mL)洗涤，通过加入盐酸(10％水溶液)将pH调节至4。所得混合物用EtOAc(10mL)萃取三次，并经MgSO4干燥。浓缩该混合物，以提供0.17g(98％产率)作为浅黄色固体的标题化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ::8.17-8.20(d，1H)、7.93-7.94(d，1H)、7.66-7.70(dd，1H)、2.78(s，3H)。
步骤5
1-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮 向用氮气吹洗的50mL圆底烧瓶中充入1-(3-溴-5-氯苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(1.2g，4.14mmol)、K2CO3(1.72g，12.45mmol)、苯基硼酸(600mg，4.92mmol)、EtOH(5mL)、Pd[(PPh3)]4(600mg，0.52mmol)和甲苯(20mL)。将该混合物回流4小时。后处理该混合物用水(5mL)洗涤，通过加入盐酸(1M水溶液，10mL)将pH调节至7，用EtOAc(10mL)萃取三次，经MgSO4干燥。浓缩粗材料(crude material)，通过用EtOAc/PE(1/25)洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供0.68g(57％产率)作为白色固体的标题化合物。
步骤6
(E)-1-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮 在室温下向25mL圆底烧瓶中充入1-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(240mg，0.84mmol)和DMFDMA(6mL)。所得溶液回流12h。后处理该混合物用EtOAc(10mL)稀释，用水(50mL)洗涤三次，经MgSO4干燥，浓缩，以提供0.25g(87％产率)的黄色固体。该粗产物不经进一步纯化用于下一步。
步骤7
4-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 在室温下将盐酸胍(2.09g，21.88mmol)加至充有新鲜制备的在乙醇(50mL)中的EtONa(21.91mmol)的溶液的100mL圆底烧瓶中。将所得溶液回流0.5小时。冷却并过滤该溶液以除去氯化钠。向该滤液中加入(E)-1-(5-氯-3-苯基苯并[b]噻吩-2-基)-3-(二甲氨基)丙-2-烯-1-酮(2.5g，7.31mmol)。所得溶液回流4小时，然后冷却并过滤。过滤固体用冷乙醇(10mL)洗涤三次，以提供1.9g(80％产率)作为浅黄色固体的标题化合物。1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.13(d，1H)、8.02(d，1H)、7.42～7.61(m，6H)、7.23(d，1H)、6.84(s，2H)、5.96(d，1H)；LCMS(M+H)+338。
实施例18
4-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
4-甲基噻吩-2-甲醛 向氮气下的1000mL圆底烧瓶中充入乙醚(500mL，无水)和nBuLi(163mL，325mmol)，然后冷却至0℃，在15分钟内向其中滴加3-甲基噻吩(28.4mL，295mmol)。将此溶液在室温搅拌2hr。向该阴离子中滴加溶解在乙醚(100mL，无水)中的DMF(30mL，384mmol)的溶液。所得溶液在室温下搅拌过夜。通过TLC(20％乙酸乙酯/己烷)监控反应进程。后处理将该混合物倾至冰上，用HCl(1N水溶液)、NaHCO3(1N水溶液)、盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，在高真空下蒸馏。在92℃收集产物，具有30.6g的质量，82％产率。NMR指示其含有17％的3-甲基异构体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.87(s，1H)、7.58(s，1H)、7.37(s，1H)、2.33(s，3H)。
步骤2
2，2-二乙氧基-N-((4-甲基噻吩-2-基)亚甲基)乙胺 向安装有迪安-斯达克榻分水器的100mL圆底烧瓶中充入4-甲基噻吩-2-甲醛(5.93mL，55mmol)、2，2-二乙氧基乙胺(6.31g，50mmol)和甲苯(30mL)。将所得溶液回流过夜，在此时间中已收集理论量的水。在真空下将反应物浓缩成油，其不经进一步纯化用于下一步。
步骤3
3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶 向500mL圆底烧瓶中充入多聚磷酸(216g)，加热至120℃，在15分钟内缓慢向其中加入2，2-二乙氧基-N-((4-甲基噻吩-2-基)亚甲基)乙胺(55mmol，前一步的粗品)，同时剧烈搅拌。所得黑色混合物在此温度下再搅拌20分钟。通过TLC(40％乙酸乙酯/己烷，Rf＝0.4)监控反应进程。后处理该混合物倾至冰上(放热)，用乙醚(2x200mL)萃取并弃去乙醚。用浓的NaOH/水的浆液小心地使剩下的水溶液变成碱性(强烈放热)，同时在冰浴上冷却。所得溶液用乙醚(4x500mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过急骤层析法(30至80％乙酸乙酯/己烷，梯度洗脱)纯化。这得到棕色油，其在在高真空下干燥过夜之后固化(1.95g，两步达18％产率)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.12(s，1H)、8.53(d，1H)、7.61(d，1H)、7.33(s，1H)、2.46(s，3H)。LCMS(M+1)+150.11。
步骤4
1-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)乙酮 向在氮气氛下的50mL圆底烧瓶中充入二异丙胺(1.90mL，13.4mmol)、THF(27mL，无水)，冷却至0℃，用正丁基锂(8.4mL，13.4mmol)处理。处于此温度10分钟后，一次性加入溶解在THF(7mL，无水)中的3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶(1.00g，6.7mmol)。将所得深绿色/黄色溶液搅拌1小时，然后用N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1.38g，13.4mmol)处理并在室温再搅拌2小时。通过TLC(40％乙酸乙酯己烷，Rf＝0.2)监控反应进程。后处理用NH4Cl(1N水溶液)终止反应混合物的反应，用乙醚(2x100mL)萃取，用MgSO4干燥，过滤并浓缩成浆液。通过过滤从该浆液中分离固体，用乙醚清洗并在高真空下干燥，得到作为褐色固体的产物(0.60g，47％产率)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.18(s，1H)、8.61(d，1H)、7.73(d，1H)、2.75(s，3H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1)+192.12。
步骤5
(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮 向10mL圆底烧瓶中充入1-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)乙酮(191mg，1.0mmol)和二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(3mL)。所得溶液在80℃油浴中搅拌过夜。通过LCMS监控反应进程。后处理将反应物冷却至室温，形成固体，然后用乙醚稀释并超声得到浆液。通过过滤分离该固体，然后用乙醚清洗，并在高真空下干燥，得到作为亮黄色固体的产物(218mg，89％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.10(s，1H)、8.55(d，1H)、7.80(d，1H)、7.65(d，1H)、5.62(d，1H)、3.19(s，1H)、2.96(s，1H)、2.71(s，3H)。
步骤6
4-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)嘧啶-2-胺 向10mL圆底烧瓶中充入(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基噻吩并[2，3-c]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(123mg，0.5mmol)、盐酸胍(143mg，1.5mmol)、K2CO3(207mg，1.5mmol)和2-甲氧基乙醇(2.0mL)。所得混合物在130℃油浴中加热1.5hr。通过LCMS监控反应进程。后处理浓缩反应物，用水稀释，用2％甲醇/二氯甲烷(3x30mL)萃取，经MgSO4干燥，过滤并浓缩成浆液。通过过滤分离固体，用二氯甲烷清洗并在高真空下干燥，得到作为淡黄色粉末的标题化合物(76mg，63％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(s，1H)、8.52(d，1H)、8.39(d，1H)、7.86(d，1H)、7.05(d，1H)、6.87(s，2H)、2.66(s，3H)。LCMS(M+1)+243.09。
实施例19
2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-羧酸 向用氮气吹洗并回充的50mL三颈圆底烧瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(1.2g，3.72mmol)和THF(10mL)的溶液。在-78℃下向其中滴加正丁基锂(4.5mL，2.5M，在己烷中)。然后用CO2(固体)饱和该反应混合物并在-78℃搅拌3小时。接着通过加入浓盐酸(0.94mL，12M)终止反应，浓缩并用EtOAc(20mL)萃取三次。粗产物在甲醇中重结晶，得到0.2g(20％产率)作为黄色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ::8.37(s，1H)、8.32(d，1H)、7.98(d，1H)、7.79(d，1H)、6.95(d，1H)、6.72(s，2H)、2.69(s，3H)LCMS(M+1)+286 实施例20
N-(3-乙酰氨基苯基)-2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-甲酰胺 向50mL圆底烧瓶中充入2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-羧酸(0.020g，0.07mmol)、N-(3-氨基苯基)乙酰胺(0.016g，0.1mmol)、TEA(0.020g，0.20mmol)、HATU(0.038g，0.1mmol)和DMF。让所得混合物在室温下搅拌2小时。后处理该混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥。粗材料通过用10-100％乙腈(在水中，存在0.1％TFA)洗脱的C18反相半制备性HPLC纯化，提供20mg(69％产率)作为灰白色固体的标题化合物。LCMS(M+1)+417.91。
实施例21
2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基-N-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[b]噻吩-5-甲酰胺 标题化合物类似于N-(3-乙酰氨基苯基)-2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-甲酰胺进行制备，其中4-(2-吗啉代乙氧基)苯胺替代了实施例20中描述的N-(3-氨基苯基)乙酰胺。LCMS(M+1)+490.04。
实施例22
1-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-羰基)吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯 标题化合物类似于如实施例20中描述的N-(3-乙酰氨基苯基)-2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-甲酰胺进行制备，其中吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯替代了N-(3-氨基苯基)乙酰胺。LCMS(M+1)+453.98。
实施例23
(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)(3-氨基吡咯烷-1-基)甲酮 向5mL圆底烧瓶中充入在二氯甲烷(1mL)和三氟乙酸(1mL)中的1-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-羰基)吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(0.006g，0.013mmol)。所得混合物在室温搅拌过夜。浓缩该混合物，将其溶解在甲醇(1mL)中。粗产物通过用10-100％乙腈(在水中，存在0.1％TFA)洗脱的反相C18柱层析法纯化，提供3mg(38％产率)作为灰白色固体的标题化合物。LCMS(M+1)+353.95。
实施例24
4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向微波反应容器中在THF(0.3mL)中的4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.01g，0.03mmol)的溶液加入Pd(PPh3)2Cl2(0.002g，0.003mmol)和CuI(0.001g，0.006mmol)。将该混合物脱气并回充氮气三次。在室温下一次性向该混合物中加入苄基溴化锌(II)(0.0015g，0.12mL THF溶液，0.5M)。在150℃微波5分钟。后处理该反应物用水(2mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥。真空浓缩所述物质以提供粗产物，该粗产物通过用30-100％乙腈(在水中，存在0.1％TFA)洗脱的反相C18柱层析法纯化。这提供3mg(29％产率)作为灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(d，1H)、7.77(d，1H)、7.35(dd，1H)、7.28-7.16(m，7H)、4.14(s，2H)、2.79(s，3H)；LCMS(M+1)+332.30。
实施例25
4-(5-(4-甲氧基苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(4-甲氧基苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.33(d，1H)、7.74(d，1H)、7.58(d，1H)、7.23(dd，1H)、7.14(d，2H)、6.98(d，1H)、6.84(d，2H)、5.21(s，2H)、4.07(s，2H)、3.78(s，3H)、2.68(s，3H)。LCMS(M+1)+362.61。
实施例26
4-(5-(3-甲氧基苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(3-甲氧基苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(d，1H)、7.74(d，1H)、7.60(d，1H)、7.23-7.20(m，3H)、6.99(d，1H)、6.81(d，1H)、6.76-6.75(m，1H)5.07(s，2H)、4.09(s，2H)、3.77(s，3H)、2.68(3H)。LCMS(M+1)+362.20。
实施例27
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯酚 标题化合物类似于3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氧基)苯酚进行制备，其中4-(5-(3-甲氧基苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺替代了实施例82中描述的4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.23(s，1H)、8.32(d，1H)、7.84(d，1H)、7.75(s，1H)、7.22(d，1H)、7.05(t，1H)、6.95(d，1H)、6.74(s，2H)、6.68(d，1H)、6.60(s，1H)、6.54(d，1H)、3.98(s，2H)、2.64(s，3H)。LCMS(M+1)+348.13。
实施例28
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯基乙酸酯 向20mL螺口小瓶中充入3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯酚(0.02g，0.057mmol，在实施例27中制备)、K2CO3(0.008g，0.057mmol)、DMF(1.1mL)和乙酸酐(0.006g，0.057mmol)。该反应混合物然后在室温下搅拌16h，通过LCMS监控进程。后处理该反应混合物用EtOAc(3x50mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥和蒸发。粗材料通过用在己烷中的EtOAc洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供作为灰白色固体的标题化合物(22mg，98％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，1H)、7.82-7.78(m，2H)、7.36(dd，1H)、7.28(d，1H)、7.10(t，1H)、6.72(d，1H)、6.65-6.60(m，2H)、4.06(s，2H)、2.80(s，3H)；LCMS(M+1)+348.04。
实施例29
4-(3-甲基-5-(3-(2-吗啉代乙氧基)苄基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向8mL螺口小瓶中充入3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯酚(35mg，0.10mmol，按实施例27中的描述制备)、2-吗啉代乙醇(0.024mL，0.20mmol)、三苯基膦(52mg，0.20mmol)、THF(1mL)和偶氮二羧酸二叔丁酯(46mg，0.20mmol)，然后搅拌16h并蒸发。向残留物中加入CH2Cl2(1mL)和TFA(0.5mL)，将该混合物搅拌2h，然后蒸发至干燥。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，以提供作为微黄色(faintly yellow)固体的产物(双TFA盐，33mg，48％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.27(bs，1H)、7.82(m，2H)、7.35(m，2H)、7.26(m，1H)、6.94(m，1H)、6.87(m，2H)、4.34(m，2H)、4.12(s，2H)、4.01(bs，2H)、3.80(bs，2H)、3.59(m，2H)、3.54(bs，2H)、3.25(bs，2H)、2.82(s，3H)。LCMS(M+1+)461.22。
实施例30
4-(5-(3-(2-(二甲氨基)乙氧基)苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例29中的4-(3-甲基-5-(3-(2-吗啉代乙氧基)苄基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中2-(二甲氨基)乙醇替代了2-吗啉代乙醇。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(m，1H)、7.82(m，2H)、7.37(m，1H)、7.33(m，1H)、7.26(m，1H)、6.94(m，1H)、6.88(m，2H)、4.30(m，2H)、4.13(s，2H)、3.55(m，2H)、2.94(s，6H)、2.83(s，3H)。LCMS(M+1+)419.17。
实施例31
4-(5-(3-(3-氨基丙氧基)苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例29中的4-(3-甲基-5-(3-(2-吗啉代乙氧基)苄基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-羟基丙基氨基甲酸叔丁酯替代了2-吗啉代乙醇。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(m，1H)、7.81(m，2H)、7.36(m，1H)、7.32(m，1H)、7.22(m，1H)、6.83(m，3H)、4.10(s，2H)、4.07(m，2H)、3.12(m，2H)、2.82(s，3H)、2.11(m，2H)。LCMS(M+1+)405.19。
实施例32
4-(5-(氨基(3-甲氧基苯基)甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-腈 向50mL圆底烧瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(1.28g，4.00mmol，按实施例13中的描述制备)、氰化锌(258mg，2.20mmol)、双(三叔丁基膦)钯(90mg，0.18mmol)和锌(52mg，0.80mmol)，然后抽空并回充氮气。加入N，N-二甲基乙酰胺(20mL)，用氮气冲洗三遍，使反应容器真空。将该混合物置于95℃油浴中并搅拌16h。冷却之后，通过硅藻土(Celite)过滤反应混合物。向滤液中加入3N NH4OH(1.6mL)和H2O(80mL)。所得混合物搅拌2.5h。形成固体物质，通过过滤收集该固体物质，用水(60mL)洗涤并风干。将所得固体溶解在热的THF(50mL)中并过滤。浓缩滤液，通过用EtOAc和己烷洗脱的硅胶层析法纯化，以提供作为浅黄色固体的标题化合物(650mg，61％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(m，1H)、8.37(m，1H)、8.20(m，1H)、7.28(m，1H)、7.02(m，1H)、6.84(bs，2H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1+)267.08。
步骤2
4-(5-(氨基(3-甲氧基苯基)甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向20mL螺口小瓶中充入2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-腈(67mg，0.25mmol)和THF(1.25mL)。向其中加入3-甲氧基苯基溴化镁的溶液(1.0M，1.25mL，1.25mmol)。将反应容器置于70℃油浴中并搅拌16h，然后让其冷却。小心地加入甲醇(2mL)，然后加入NaBH4(28mg，0.74mmol)，将该反应混合物搅拌1h，然后蒸发，在H2O(20mL)和EtOAc(3x 30mL)之间分配。合并的有机相经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过用10％甲醇(在CH2Cl2中)洗脱的硅胶层析法纯化，以提供被未知杂质污染的作为薄膜的标题化合物(45mg)。LCMS(M+1+)377.13。
步骤3
(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)(3-甲氧基苯基)甲基氨基甲酸叔丁酯 向8mL螺口小瓶中充入不纯的4-(5-(氨基(3-甲氧基苯基)甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(43mg，0.11mmol)、三乙胺(0.032mL，0.23mmol)、甲醇(0.5mL)和THF(0.5mL)。加入二碳酸二叔丁酯(25mg，0.11mmol)，该反应混合物搅拌1h，然后蒸发并将粗产物通过用10％甲醇和CH2Cl2洗脱的硅胶层析法纯化，以提供作为薄膜的标题化合物(32mg，59％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.32(m，1H)、8.04(bd，1H)、7.89(m，2H)、7.41(m，1H)、7.20(m，1H)、6.94(m，3H)、6.76(m，3H)、5.93(bd，1H)、3.70(s，3H)、2.65(s，3H)、1.39(bs，9H)。LCMS(M+1+)477.25。
步骤4
4-(5-(氨基(3-甲氧基苯基)甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向25mL圆底烧瓶中充入(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)(3-甲氧基苯基)甲基氨基甲酸叔丁酯(10mg，0.021mmol)、CH2Cl2(2mL)和TFA(1mL)。搅拌75分钟后，将该反应混合物蒸发至干燥，得到作为黄色薄膜的标题化合物(双TFA盐，7.7mg，48％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.95(b、3H)、8.36(m，1H)、8.10(m，1H)、8.03(m，1H)、7.48(m，1H)、7.36(m，1H)、7.14(m，1H)、7.04(m，2H)、6.93(m，2H)、5.78(bm，1H)、3.75(s，3H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1+)377.14。
实施例33
4-(5-(氨基甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向50mL圆底烧瓶中充入在THF(20mL)中的2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-腈(500mg，1.88mmol，按实施例32中的描述制备)的溶液。向该混合物中加入LiAlH4(300mg，7.89mmol)。将所得混合物加热至60℃，保持过夜。冷却至室温后，通过加入10mL水/冰终止该反应混合物的反应。所得溶液用EtOAc(50mL)萃取三次，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，以提供作为白色固体的产物0.5g(91％产率)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.31(d，1H)、7.85(s，1H)、7.83(d，1H)、7.43(d，1H)、7.05(d，1H)、3.95(s，2H)、2.76(s，3H)。
实施例34
N-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺 向50mL圆底烧瓶中充入在DMF中的4-(5-(氨基甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.025g，0.09mmol，按实施例33中的描述制备)、噻吩-2-羧酸(0.013g，0.1mmol)、TEA(0.018g，0.18mmol)和HATU(0.051g)。让所得混合物在室温下搅拌4h。后处理该混合物用水(50mL)洗涤，用EtOAc(25mL)萃取三次，用盐水(50mL)洗涤，经干燥Na2SO4。浓缩该混合物，通过用10-100％乙腈(在水中，存在0.1％TFA)洗脱的反相C18柱层析法纯化，提供作为灰白色固体的产物10mg(27％产率)。LCMS(M+1)+380.90。
实施例35
N-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-2-(2-羟基苯基)乙酰胺 标题化合物类似于如实施例34中描述的N-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺进行制备，其中2-(2-羟基苯基)乙酸替代了该程序中的噻吩-2-羧酸。LCMS(M+1)+404.92。
实施例36
N-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-2，5-二甲氧基苯甲酰胺 标题化合物类似于如实施例34中描述的N-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)噻吩-2-甲酰胺进行制备，其中2，5-二甲氧基苯甲酸替代了该程序中的噻吩-2-羧酸。LCMS(M+1)+434.94。
实施例37
4-(5-(2-甲氧基苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(2-甲氧基苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.73(d，1H)、7.63(d，1H)、7.28(dd，1H)、7.26-7.20(m，2H)、7.08(dd，1H)、6.98(d，1H)、6.90-6.86(m，2H)5.13(s，2H)、4.11(s，2H)、3.84(s，3H)、2.67(s，3H)。LCMS(M+1)+361.80。
实施例38
4-(5-(2，5-二甲氧基苄基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(2，5-二甲氧基苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.34(d，1H)、7.73(d，1H)、7.62(d，1H)、7.28(dd，1H)、6.82(d，1H)、6.73-6.66(m，2H)5.10(s，2H)、4.08(s，2H)、3.79(s，3H)、3.71(s，3H)、2.67(s，3H)。LCMS(M+1)+391.83。
实施例39
4-(3-甲基-5-(3-(三氟甲基)苄基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(3-(三氟甲基)苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(d，1H)、7.78(d，1H)、7.59(d，1H)、7.50-7.47(m，4H)、7.21(d，1H)、6.99-6.97(m，1H)5.12(s，2H)、4.18(s，2H)、2.68(s，3H)。LCMS(M+1)+400.03. 实施例40
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苄腈 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(3-氰基苄基)溴化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.36(d，1H)、7.78(d，1H)、7.57(d，1H)、7.52-7.26(m，4H)、7.19(d，1H)、6.99(d，1H)5.08(s，2H)、4.15(s，2H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1)+357.04。
实施例41
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸 向25mL圆底烧瓶中充入3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苄腈(0.040g，0.11mmol，在实施例40中制备)、甲醇(2.2mL)和NaOH水溶液(2M，2.3mL)，然后回流过夜。后处理浓缩反应物，悬浮于EtOH，通过加入浓盐酸水溶液将pH调节至5。形成白色沉淀，所述沉淀通过过滤收集，用EtOH洗涤，然后通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(0.02g、48％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，1H)、7.78-7.73(m，3H)、7.72-7.70(m，1H)、7.46-7.36(m，3H)、7.26(m，1H)、4.20(s，2H)、2.80(s，3H)；LCMS(M+1)+375.02。
实施例42
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸甲酯 向烧瓶中充入3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸(16.0mg，0.0426mmol，按实施例41中的描述制备)、(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M在Et2O中的溶液，4.9mg，0.0426mmol)和THF∶甲醇(0.5mL，1∶1)。所得混合物在室温下搅拌过夜。浓缩该混合物，然后通过用10％甲醇和二氯甲烷洗脱的SiO2急骤层析法纯化，以提供7.2mg(43％产率)作为灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.38(d，1H)、7.89-7.78(m，4H)、7.59(d，1H)、7.44(t，1H)、7.39(d，1H)、6.97(d，1H)、6.73(s，2H)、4.18(s，2H)、3.81(s，3H)、2.64(s，3H)。LCMS(M+1)+390.11。
实施例43
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸异丙酯 向5mL圆底烧瓶中充入在中的1.0M H2SO4溶液中的按实施例41中的描述制备的3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸(24.4mg，0.0650mmol)。所得混合物在92℃下搅拌过夜。后处理该混合物用EtOAc(50mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤，用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥。浓缩该混合物，然后通过用10％甲醇和二氯甲烷洗脱的SiO2急骤层析法纯化，提供5.9mg(22％产率)作为灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.38(d，1H)、7.94-7.75(m，4H)、7.56(d，1H)、7.41(t，1H)，7.36(d，1H)、7.01(d，1H)、5.20(m，1H)、4.18(s，2H)、2.67(s，3H)、1.35(d，6H)。LCMS(M+1)+418.18。
实施例44
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)苯甲酰胺 向20mL螺口小瓶中充入3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸(0.050g，0.13mmol，在实施例41中制备)、4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯胺(0.029g，0.1mmol)、三乙胺(0.026g，0.26mmol)、HATU(0.049g，0.13mmol)和DMF。搅拌2h后，LCMS分析显示反应完成。后处理加入水，然后该混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(30mg，35％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.20(d，1H)、7.83(s，2H)、7.76(dd，1H)、7.61-7.59(m，2H)、7.49-7.38(m，3H)、7.29(d，1H)、7.02-6.99(m，2H)、4.38(t，2H)、4.21(s，2H)、4.10-3.70(m，4H)、3.63(t，2H)、3.62-3.57(m，2H)、2.80(s，3H)；LCMS(M+1)+580.17。
实施例45
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺 向烧瓶中充入在DMF(0.2mL)中的3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯甲酸(9.8mg，0.0261mmol，按实施例41中的描述制备)、4-吗啉代苯胺(5.1mg，0.0287mmol)、HATU(10.9mg，0.0287mmol)、三乙胺(7.9mg，0.0783mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。后处理该混合物用EtOAc(50mL)稀释，用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥。粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为白色固体的产物(单TFA盐，2.4mg，17％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(s，1H)、8.35(d，1H)、7.91-7.84(m，3H)、7.75(d，1H)、7.59(m，2H)、7.48-7.35(m，3H)、7.06(d，1H)、6.93(d，2H)、4.17(s，2H)、3.73(t，4H)、3.06(t，4H)、2.70(s，3H)。LCMS(M+1)+536.12。
实施例46
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-甲氧基苯基)苯甲酰胺 标题化合物类似于3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺进行制备，其中对甲氧基苯胺替代了实施例45中描述的4-吗啉代苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(d，1H)、7.84(m，3H)、7.79(d，1H)、7.54-7.41(m，5H)、7.32(d，1H)、6.91(d，2H)、4.24(s，2H)、3.79(s，3H)、2.83(s，3H)。LCMS(M+1)+481.01。
实施例47
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)苯甲酰胺 标题化合物类似于3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺进行制备，其中N，N-二乙基乙二胺替代了实施例45中描述的4-吗啉代苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，1H)、7.84-7.69(m，4H)、7.51-7.30(m，4H)、4.24(s，2H)、3.72(t，2H)、3.37-3.26(m，6H)、2.82(s，3H)、1.33(t，6H)。LCMS(M+1)+474.63。
实施例48
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(3-吗啉代乙基)苯甲酰胺 标题化合物类似于3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺进行制备，其中2-吗啉代乙胺(2-morpholinoethylamime)替代了实施例45中描述的4-吗啉代苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，1H)、7.84-7.71(m，4H)、7.51-7.32(m，4H)、4.22(s，2H)、4.05(m，2H)、3.76(t，2H)、3.65(m，2H)、3.38(t，2H)、3.26(m，2H)、2.83(s，3H)。LCMS(M+1)+488.62。
实施例49
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(3-吗啉代丙基)苯甲酰胺 标题化合物类似于3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺进行制备，其中4-(3-氨基丙基)-吗啉替代了实施例45中描述的4-吗啉代苯胺。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.25(d，1H)、7.84-7.68(m，4H)、7.49-7.32(m，4H)、4.21(s，2H)、4.05-4.03(m，2H)、3.76(t，2H)、3.48(t，2H)、3.20(t，2H)、3.15-3.10(m，2H)、2.83(s，3H)、2.05(m，2H)。LCMS(M+1)+502.64。
实施例50
(3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮 标题化合物类似于3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)甲基)-N-(4-吗啉代苯基)苯甲酰胺进行制备，其中1-甲基哌嗪替代了实施例45中描述的4-吗啉代苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.35(d，1H)、7.91-7.85(m，2H)、7.46-7.26(m，5H)、7.06(d，1H)、4.14(s，2H)、3.29(m，4H)、3.04(m，4H)、2.79(s，3H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1)+458.17。
实施例51
4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向20mL螺口小瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.128g，0.4mmol，在实施例13中制备)、3-甲氧基苯胺(0.1g，0.8mmol)、t-BuONa(0.19g，2mmol)、1，3-双(2，6-二异丙基苯基)氯化咪唑鎓(0.034g，0.08mmol)和Pd2(dba)3(0.023g，0.04mmol)。将此混合物脱气并回充氮气三次，然后加热至95-100℃，保持过夜。通过LCMS监控反应进程。后处理冷却至室温后，加入水(10mL)，该混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过用10％甲醇(在CH2Cl2中)洗脱的硅胶层析法纯化，以提供作为黄色固体的标题化合物(70mg，48％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.31(d，2H)、8.09(s，1H)、7.79(d，1H)、7.50(d，1H)、7.20(dd，1H)、7.13(t，1H)、6.92(d，1H)、6.73(s，2H)、6.69-6.63(m，2H)、6.39(dd，1H)、3.70(s，3H)、2.57(s，3H)；LCMS(M+1)+363.02。
实施例52
3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯酚 标题化合物类似于3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氧基)苯酚进行制备，其中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺替代了实施例82中描述的4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.27(d，1H)、7.69(d，1H)、7.53(d，1H)、7.23(d，1H)、7.20(d，1H)、7.04(t，1H)、6.99(d，1H)、6.62(t，1H)、6.59(dd，1H)、6.31(dd，1H)、2.65(s，3H)。LCMS(M+1)+349.05。
实施例53
4-(3-甲基-5-(3-苯氧基苯基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-苯氧基苯胺替代了3-甲氧基苯胺。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.24(d，1H)、7.74(d，1H)、7.76(d，1H)、7.37-7.33(m，2H)、7.28-7.19(m，3H)、7.10(t，1H)、7.07-7.02(m，2H)、6.86(dd，1H)、6.75(t，1H)、6.49(dd，1H)、2.72(s，3H)。LCMS(M+1)+425.00。
实施例54
4-(3-甲基-5-(3-(三氟甲氧基)苯基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-(三氟甲氧基)苯胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.63(s，1H)、8.34(d，1H)、7.88(d，1H)、7.57(d，1H)、7.32(t，1H)、7.24(d，1H)、7.09-6.96(m，4H)、6.72(d，1H)、2.61(s，3H)。LCMS(M+1)+416.86。
实施例55
4-(5-(3-(苄氧基)苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-(苄氧基)苯胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.34(d，1H)、7.81(d，1H)、7.51(d，1H)、7.43-7.02(m，9H)、6.70-6.69(m，2H)、6.48(dd，1H)、5.05(s，2H)、2.62(s，3H)。LCMS(M+1)+439.03。
实施例56
N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)甲基磺酰胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中N-(3-氨基苯基)甲基磺酰胺替代了3-甲氧基苯胺。LCMS(M+1)+425.95。
实施例57
N1-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)苯-1，3-二胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中苯-1，3-二胺替代了3-甲氧基苯胺。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.51(s，1H)、8.34(d，1H)、7.87(d，1H)、7.54(d，1H)、7.25-7.22(m，2H)、7.02(d，1H)、6.94-6.92(m，2H)、6.60(d，1H)、2.63(s，3H)。LCMS(M+1)+348.04。
实施例58
N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)乙酰胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中N-(3-氨基苯基)乙酰胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.22(d，1H)、7.74(d，1H)、7.66(s，2H)、7.31-7.29(m，2H)、7.18(t，1H)、6.86(dd，2H)、2.78(s，2H)、2.10(s，3H)。LCMS(M+1)+390.04。
实施例59
N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)-4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺 向4mL螺口小瓶中充入N1-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)苯-1，3-二胺(0.050g、0.14mmol，在实施例57中制备)、4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酸(0.036g，0.14mmol)、三乙胺(0.042g，0.42mmol)、HATU(0.053g，0.13mmol)和DMF。反应混合物搅拌过夜，通过LCMS监控进程。后处理加入水并将该混合物用EtOAc(3x25mL)萃取。合并的有机相用水、盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(29mg，35％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.21(d，1H)、7.96-7.94(m，2H)、7.77-7.75(m，2H)、7.68(d，1H)、7.35(dd，1H)、7.32(d，1H)、7.24(d，1H)、7.13-7.05(m，2H)、6.92-6.89(m，1H)、4.48(t，2H)、4.06-4.05(m，2H)、3.82(m，2H)、3.67(t，2H)、3.59(m，2H)、3.32(m，2H)、2.80(s，3H)；LCMS(M+1)+581.18。
实施例60
4-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基氨基甲酰基)苯基乙酸酯 标题化合物类似于实施例59中N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)-4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺进行制备，其中4-乙酰氧基苯甲酸替代了4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酸。LCMS(M+1)+510.05。
实施例61
N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)-4-羟基苯甲酰胺 向4mL螺口小瓶中充入4-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基氨基甲酰基)苯基乙酸酯(0.020g，0.039mmol，在实施例60中制备)和甲醇(0.8mL)。加入NaOH水溶液(2M、0.03mL)，该反应混合物搅拌过夜。后处理浓缩反应物，通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(9mg，49％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.23(s，1H)、7.83-7.74(m，4H)、7.69(d，1H)、7.33(dd，1H)、7.28(d，1H)、7.22(d，1H)、7.06-7.04(m，1H)、6.90-6.84(m，3H)、2.80(s，3H)；LCMS(M+1)+468.01。
实施例62
4-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基氨基甲酰基)苯甲酸甲酯 标题化合物类似于实施例60中N-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基)-4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酰胺进行制备，其中4-(甲氧基羰基)苯甲酸替代了4-(2-吗啉代乙氧基)苯甲酸。LCMS(M+1)+510.10。
实施例63
4-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基氨基甲酰基)苯甲酸 向4mL螺口小瓶中充入4-(3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)苯基氨基甲酰基)苯甲酸甲酯(0.010g，0.019mmol，在实施例62中制备)和THF(0.4mL)。加入在水(0.1mL)中的LiOH(0.5mg)，该反应混合物搅拌过夜。后处理蒸发至干燥后，粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为橙色固体的标题化合物(4mg，41％产率)。LCMS(M+1)+496.01。
实施例64
4-(3-甲基-5-(吡啶-2-基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中吡啶-2-胺替代了3-甲氧基苯胺。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.31(d，1H)、8.10-8.03(m，3H)、7.88(d，1H)、7.50(dd，1H)、7.32(d，1H)、7.24(d，1H)、7.05(t，1H)、2.84(s，3H)。LCMS(M+1)+334.02。
实施例65
4-(3-甲基-5-(吡啶-3-基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中吡啶-3-胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.35(d，1H)、8.30(d，1H)、8.14(d，1H)、8.08(ddd、1H)、7.98(d，1H)、7.82(s，1H)、7.81(dd，1H)、7.44(dd，1H)、7.30(d，1H)、2.82(s，3H)。LCMS(M+1)+334.02。
实施例66
4-(3-甲基-5-(吡啶-4-基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中吡啶-4-胺替代了3-甲氧基苯胺。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.32(d，1H)、8.19-8.17(m，2H)、8.06(d，1H)、8.80(d，1H)、7.45(d，1H)、7.26(d，1H)、7.13(m，2H)、2.81(s，3H)。LCMS(M+1)+334.01。
实施例67
4-(5-(5-甲氧基吡啶-3-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向在1，4-二噁烷(2mL)中的4-(5-氨基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(199mg，0.560mmol，按实施例72中的描述制备)的脱气溶液，按顺序加入3-溴-5-甲氧基吡啶(105mg，0.560mmol)、t-BuONa(269mg，2.80mmol)、1，3-双(2，6-二异丙基苯基)氯化咪唑鎓(47.6mg，0.112mmol)和Pd2(dba)3(32.2mg，0.0560mmol)。然后将此混合物脱气并回充氮气三次。所得混合物加热至95℃并搅拌过夜。通过LCMS确定完成后，将该反应物冷却至室温并通过加入水(10mL)终止反应。然后用乙酸乙酯(100mL)萃取该混合物三次，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥。过滤所得混合物，浓缩滤液，通过用10％甲醇和二氯甲烷洗脱的硅胶柱层析法纯化，提供140.4mg(69％产率)作为红色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.28(m，1H)、7.91(m，1H)、7.78(m，1H)、7.68(m，1H)、7.57(m，1H)、7.26(m，1H)、7.08(m，1H)、7.00(m，1H)、3.83(s，3H)、2.66(s，3H)。LCMS(M+1)+364.13 实施例68
5-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)吡啶-3-醇 标题化合物类似于3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氧基)苯酚进行制备，其中4-(5-(5-甲氧基吡啶-3-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺替代了实施例82中描述的4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.29(m，1H)、7.81(m，1H)、7.77(s，1H)、7.57(m，1H)、7.25(m，1H)、7.02(m，2H)、2.68(s，3H)。LCMS(M+1)+350.14。
实施例69
4-(3-甲基-5-(苯基氨基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中苯胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.33(d，2H)、7.82(d，1H)、7.51(d，1H)、7.26-7.21(m，3H)、7.12-7.10(m，3H)、7.02(m，2H)、6.82(t，1H)、2.61(s，3H)。LCMS(M+1)+333.10。
实施例70
4-(5-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-胺替代了3-甲氧基苯胺。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.22(d，1H)、7.70(d，1H)、7.42(d，1H)、7.26(d，1H)、7.18(dd，1H)、6.67-6.62(m，2H)、6.64(d，1H)、5.91(s，2H)、2.74(s，3H)。LCMS(M+1)+377.03。
实施例71
5-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)烟酸 标题化合物类似于实施例51中4-(5-(3-甲氧基苯基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中5-氨基烟酸替代了3-甲氧基苯胺。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ8.60(s，2H)、8.51-8.46(m，2H)、8.29(d，1H)、8.01(d，1H)、7.88(s，1H)、7.49(dd，1H)、7.40(d，1H)、2.86(s，3H)；LCMS(M+1)+377.98。
实施例72
4-(5-氨基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
4-(5-(二苯基亚甲基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向20mL螺口小瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，0.3mmol，在实施例13中制备)、二苯基甲基亚胺(0.11g，0.62mmol)、Cs2CO3(0.29g，0.9mmol)、BINAP(0.028g，0.045mmol)、Pd(OAc)2(0.010g，0.015mmol)和甲苯(1.5mL)。然后将此混合物脱气并回充氮气三次，然后加热至100℃，保持过夜。后处理该反应物用水(10mL)稀释，用EtOAc(3x50mL)、盐水萃取，经Na2SO4干燥，蒸发，以提供粗产物，其不经进一步纯化用于下一步。
步骤2
4-(5-氨基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向20mL螺口小瓶中充入4-(5-(二苯基亚甲基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，0.24mmol)、THF(2.4mL)和盐酸水溶液(1M，2.3mL)，然后搅拌6h。通过LCMS监控反应进程。后处理该反应混合物用EtOAc(3x50mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为棕色固体的标题化合物(51mg，83％产率)。LCMS(M+1)+257.04。
实施例73
N-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺 向20mL螺口小瓶中充入4-(5-氨基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，0.39mmol，在实施例72中制备)、3，4，5-三甲氧基苯甲酸(0.083g，0.39mmol)、三乙胺(0.11g，1.12mmol)DMF和HATU(0.15g，0.39mmol)。反应混合物搅拌过夜，LCMS分析显示完全转化为产物。后处理加入水，该混合物用EtOAc(3x25mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗材料通过用在己烷中的EtOAc洗脱的硅胶柱层析法纯化，以提供作为黄色固体的标题化合物(0.13g，76％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.31(s，1H)、8.36-8.35(m，2H)、7.96(d，1H)、7.78(dd，1H)、7.32(s，2H)、7.05(d，1H)、3.87(s，6H)、3.73(s，3H)、2.67(s，3H)；LCMS(M+1)+451.06。
实施例74
4-(5-(2-甲氧基嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
4-(5-(2-氯嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向50mL圆底烧瓶中充入4-(5-氨基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.5g，1.95mmol，在实施例72中制备)、2，4-氯嘧啶(0.29g，1.95mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.25g、1.95mmol)和EtOH(6.5mL)，然后加热至80℃，持续16h。LCMS分析显示完全转化为产物。后处理冷却至室温后，加入水，固体材料通过过滤收集并用水洗涤。从热的异丙醇中重结晶粗产物，以得到作为黄色固体的标题化合物(0.42g，58％产率)。LCMS(M+1)+368.98。
步骤2
4-(5-(2-甲氧基嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向25mL圆底烧瓶中充入4-(5-(2-氯嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，1.95mmol)、THF(1.35mL)和NaOMe(1.35mmol，25％w/w溶液，在THF中)。所得混合物加热回流过夜。后处理冷却至室温后，加入水，该混合物用EtOAc(3x25mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。从热的异丙醇中重结晶粗材料，以提供作为黄色固体的标题化合物(0.06g，61％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.36(s，1H)、8.31(d，1H)、8.04-7.99(m，2H)、7.67(d，1H)、7.25(d，1H)、6.67(d，1H)、4.02(s，3H)、2.81(s，3H)；LCMS(M+1)+364.99。
实施例75
4-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氨基)嘧啶-2-醇 向20mL螺口小瓶中充入4-(5-(2-甲氧基嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.05g，0.14mmol，在实施例74中制备)和CH2Cl2(1.4mL)，然后冷却至-78℃。滴加BBr3(0.31g，1.23mmol)，让该反应混合物升温至室温，保持过夜。后处理该反应混合物用NaHCO3水溶液终止反应，然后用CH2Cl2(3x25mL)萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为黄色固体的标题化合物(0.009g，19％产率)。LCMS(M+1)+351.02。
实施例76
N4(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)-N2-甲基嘧啶-2，4-二胺 向微波容器中充入4-(5-(2-氯嘧啶-4-基氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，0.27mmol，在实施例74步骤1中制备)、甲胺(2.7mmol)和异丙醇(1.35mL)，然后密封，在100℃下微波照射10分钟。后处理加入水，该混合物用EtOAc(3x25mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗材料通过C18反相半制备性HPLC纯化，以提供作为黄色固体的标题化合物(0.050g，51％产率)。LCMS(M+1)+364.01。
实施例77
N4-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)-N2-(2-(二乙基氨基)乙基)嘧啶-2，4-二胺 标题化合物类似于实施例76中N4-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)-N2-甲基嘧啶-2，4-二胺进行制备，其中N1，N1-二乙基乙烷-1，2-二胺替代了甲胺。LCMS(M+1)+449.06。
实施例78
4-(5-((3-甲氧基苯基)(甲基)氨基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向8mL可穿入(pierceable)螺口小瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(128mg，0.400mmol，按实施例13中的描述制备)、3-甲氧基-N-甲基苯胺(0.105mL，0.803mmol)、三(二苄叉丙酮)二钯(0)(23mg，0.025mmol)、1，3-双(2，6-二异丙基苯基)氯化咪唑鎓(34mg，0.080mmol)和叔丁醇钠(192mg，2.00mmol)，然后抽空并回充氮气(3x)。加入二噁烷(2mL，无水)，向该反应混合物鼓入氮气约10分钟。密封该反应容器，在95℃油浴中搅拌16h，然后让其冷却，接着通过硅藻土过滤。蒸发滤液，粗产物通过用甲醇(在CH2Cl2中)洗脱的硅胶层析法纯化，然后进一步通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为橙色固体的产物(单TFA盐，1.1mg，0.6％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(m，1H)、7.78(m，1H)、7.53(m，1H)、7.24(m，2H)、7.16(m，1H)、6.56(m，3H)、3.73(s，3H)、3.37(s，3H)、2.76(s，3H)。LCMS(M+1+)377.00。
实施例79
4-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 步骤1
1-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮 向250mL圆底烧瓶中充入在甲苯(50mL)中的1-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(1.34g，4.98mmol，按实施例12中的描述制备)、苯酚(470mg，4.99mmol)、K3PO4(2.12g，9.99mmol)、Pd(OAc)2(100mg，0.450mmol)、2-(二叔丁基膦基)联苯(220mg，0.740mmol)。所得混合物在回流和氮气氛中搅拌24小时，通过TLC(EtOAc/石油醚＝1/50)监控。冷却该反应混合物并过滤。浓缩滤液，通过用EtOAc/石油醚(1/50)洗脱硅胶柱进行纯化，以获得0.32g(23％)作为白色固体的产物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.79-7.62(m，1H)、7.45-7.00(m，7H)、2.66(s，3H)、2.63(s，3H)。
步骤2
(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)丙-2-烯-1-酮 向10mL圆底烧瓶中充入1-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)乙酮(320mg，1.13mmol)和DMFDMA(5mL)。所得溶液在回流下搅拌24小时。浓缩残留物，以提供作为黄色固体的产物(350mg)。该产物不经进一步纯化使用。
步骤3
4-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向25mL圆底烧瓶中充入新鲜制备的EtONa(322mg，4.13mmol)、盐酸胍(396mg，4.15mmol)和乙醇(5mL)的溶液。所得混合物在回流下搅拌0.5小时，然后冷却至室温并过滤以除去氯化钠。向该滤液加入(E)-3-(二甲氨基)-1-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)丙-2-烯-1-酮(350mg，1.04mmol)，然后将其在回流下搅拌4小时。反应通过用EtOAc/TEA(1mL/1滴)洗脱的TLC监控。过滤后，冷却反应混合物，形成固体。通过过滤分离该固体，用乙醇(2mL)洗涤。通过用EtOAc洗脱的急骤层析法的纯化提供了作为白色固体的产物(136mg，39％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，1H)、7.99(d，1H)、7.54-6.97(m，8H)、6.80(s，2H)、2.61(s，3H)。LCMS(M+1)+334.10。
实施例80
4-(3-甲基-5-(3-硝基苯氧基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于4-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-硝基苯酚替代了实施例79中描述的苯酚。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.36(m，1H)、8.10(m，1H)、7.98(m，1H)、7.68(m，3H)、7.52(m，1H)、7.28(m，1H)、7.00(m，1H)、6.81(s，2H)、2.64(s，3H)。LCMS(M+1)+379。
实施例81
4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于4-(3-甲基-5-苯氧基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中3-甲氧基苯酚替代了实施例79中描述的苯酚。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，1H)、7.99(d，1H)、7.55(d，1H)、7.28(t，1H)、7.17(dd，1H)、6.97(d，1H)、6.61(t，1H)、6.58-6.52(m，1H)、3.74(s，3H)、2.62(s，3H)。LCMS(M+1)+391。
实施例82
3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氧基)苯酚 向5mL圆底烧瓶中充入4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(15.8mg，0.0435mmol，按实施例81中的描述制备)和二氯甲烷(0.5mL)。所得溶液在氮气氛下冷却至-78℃，向其中滴加BBr3(98.0mg，0.391mmol)。反应物在室温下搅拌过夜。后处理该混合物倾至冰水(25mL)上，用EtOAc(25mL)萃取三次，用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥。浓缩该混合物，通过用10％甲醇和二氯甲烷洗脱的SiO2急骤层析法纯化，以提供11.2mg(74％产率)作为灰白色固体的标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.55(s，1H)、8.34(d，1H)、7.97(d，1H)、7.52(d，1H)、7.14(m，2H)、6.96(d，1H)、6.76(s，2H)、6.49(d，1H)、6.42(d，1H)、6.35(s，1H)、2.62(s，3H)。LCMS(M+1)+350.01。
实施例83
4-(5-(3-甲氧基苯硫基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 在氮气氛下向10mL圆底烧瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(96mg，0.3mmol，参见实施例13)、3-甲氧基苯硫醇(37μL，0.3mmol)、二异丙基乙胺(209μL，1.2mmol)、4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(17mg，0.03mmol)、Pd2(dba)3(13.7mg，0.015mmol)和二噁烷(1.0mL，无水)。所得混合物在98℃油浴中加热3小时。通过LCMS监控反应进程。后处理浓缩反应物，通过急骤层析法(梯度洗脱，30-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到作为淡黄色粉末的标题化合物(102mg，90％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(d，1H)、7.99(m，2H)、7.40(d，1H)、7.25(t，1H)、6.98(d，1H)、6.79(m，4H)、3.69(s，3H)、2.64(s，3H)。LCMS(M+1)+379.99。
实施例84
3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基硫代)苯酚 在氮气氛下向10mL圆底烧瓶中充入4-(5-(3-甲氧基苯硫基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(33mg，0.081mmol，实施例83中描述)、二氯甲烷(0.36mL)，冷却至-78℃，用BBr3(31μL，0.327mmol)处理。让所得混合物缓慢升温至室温，搅拌过夜。通过LCMS监控反应进程。后处理该反应物用乙酸乙酯稀释，用NaHCO3(1N水溶液)洗涤，浓缩，通过C18半制备性反相HPLC纯化。产物是淡黄色粉末(4.3mg，33％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.55(bs，1H)、8.36(d，1H)、8.00(d，1H)、7.99(s，1H)、7.43(m，1H)、7.12(t，2H)、6.70(d，1H)、6.62(m，1H)、6.57(m，1H)、2.66(s，3H)。LCMS(M+1)+366.12。
实施例85
3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基硫代)苯甲酸甲酯 标题化合物类似于4-(5-(3-甲氧基苯硫基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(实施例83)进行制备，其中3-巯基苯甲酸甲酯替代了该程序最后一步中的3-甲氧基苯硫醇。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.39(d，1H)、7.98(s，1H)、7.91(s，1H)、7.87(d，1H)、7.85(d，1H)、7.42(m，2H)、7.32(t，1H)、7.00(d，1H)、5.11(bs，2H)、3.89(s，3H)、2.68(s，3H)。LCMS(M+1)+408.15。
实施例86
3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基硫代)苯甲酸 将含有NaOH(5.6mg，0.243mmol)、水(100μL)、甲醇(700μL)和THF(700μL)的溶液的10mL圆底烧瓶用3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基硫代)苯甲酸甲酯(33mg，0.081mmol，实施例85中描述)处理。所得混合物在室温下搅拌3小时。通过LCMS监控反应进程。后处理该反应物用柠檬酸(1M水溶液)中和，用水(1mL)稀释，浓缩直至形成固体。通过过滤分离该固体，用水和醚清洗，在高真空下干燥，得到作为淡黄色粉末的产物(22mg，69％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ13.11(s，1H)、8.35(d，1H)、8.05(m，2H)、7.77(d，1H)、7.71(s，1H)、7.46(m，3H)、6.98(d，1H)、6.79(s，2H)、2.64(s，3H)。LCMS(M+1)+394.13。
实施例87
(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基)(苯基)甲酮 向25mL圆底烧瓶中充入2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-腈(0.010g、0.037mmol，在实施例32步骤1中制备)和THF，然后冷却至0℃。加入苯基锂(0.148mmol)，该反应混合物搅拌1h。后处理加入甲醇，将该混合物在EtOAc(2x10mL)和盐水之间分配。合并的有机相经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(2mg，15％产率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.32-8.31(m，2H)、8.07(dd，1H)、7.90(dd，1H)、7.84-7.82(m，2H)、7.70-7.66(m，1H)、7.59-7.55(m，2H)、7.30(d，1H)、2.82(s，3H)；LCMS(M+1)+345.81。
实施例88
4-(3-甲基-5-苯基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向微波容器中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.015g，0.047mmol，在实施例13中制备)、苯基硼酸(0.0086g，0.07mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.003g，0.005mmol)、Na2CO3水溶液(2M，0.060mL)和3∶1的THF和水的混合物(0.47mL)。然后将此混合物脱气并回充氮气三次，然后密封所述容器，在100℃下微波照射10分钟。通过LCMS监控反应进程。后处理加入水(2mL)，该混合物用EtOAc(2x10mL)萃取，合并的有机相用水和盐水洗涤，然后经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(2mg，41％产率)。LCMS(M+1)+317.93。
实施例89
4-(5-((3-甲氧基苯基)乙炔基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向10mL圆底烧瓶中充入4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.1g，0.31mmol，在实施例13中制备)、Pd(PPh3)2Cl2(0.022g，0.031mmol)、CuI(0.012g，0.062mmol)和THF(1.5mL)。将此混合物脱气三次并回充氮气，充入1-乙炔基-3-甲氧基苯(0.041g，0.31mmol)。该反应混合物回流过夜，通过LCMS监控反应进程。后处理用水(2mL)稀释，用EtOAc(100mL)萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(52mg，47％产率)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.37(m，1H)、8.13(s，1H)、8.04(d，1H)、7.60-7.58(m，1H)、7.36-7.32(m，1H)、7.16-6.98(m，4H)、3.79(s，1H)、2.52(s，3H)；LCMS(M+1)+372.00。
实施例90
4-(5-(3-甲氧基苯乙基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 向25mL圆底烧瓶中充入4-(5-((3-甲氧基苯基)乙炔基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.02g，0.05mmol，在实施例89中制备)、Pd/C(0.006g，10％德古萨型)和甲醇(5mL)。该反应混合物用氮气吹洗，然后用氢气冲洗，搅拌过夜。后处理该反应混合物通过硅藻土过滤，蒸发。粗产物通过C18反相半制备性HPLC纯化，得到作为灰白色固体的标题化合物(15mg，75％产率)。LCMS(M+1)+380.18。
实施例91
4-(5-溴-3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例13中描述的4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中4-溴苯酚替代了该程序步骤1中的4-溴苯硫醇。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.38(m，1H)、7.74(m，1H)、7.47(m，1H)、7.38(m，1H)、7.18(m，1H)、5.13(bs，2H)、2.68(s，3H)。LCMS(M+1)+304.05。
实施例92
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并呋喃-5-基)甲基)苯酚 步骤1
4-(5-(3-甲氧基苄基)-3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺 标题化合物类似于如实施例24中描述的4-(5-苄基-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行制备，其中(3-甲氧基苄基)氯化锌(II)替代了苄基溴化锌(II)，且4-(5-溴-3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺替代了4-(5-溴-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺。LCMS(M+1)+346.20。
步骤2
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并呋喃-5-基)甲基)苯酚 标题化合物类似于3-(2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-基氧基)苯酚进行制备，其中4-(5-(3-甲氧基苄基)-3-甲基苯并呋喃-2-基)嘧啶-2-胺替代了实施例82中描述的4-(5-(3-甲氧基苯氧基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.35(m，1H)、7.58(m，1H)、7.54(m，1H)、7.30(m，1H)、7.08(m，2H)、6.68(m，1H)、6.60(m，1H)、6.56(m，1H)、3.96(s，2H)、2.69(s，3H)。LCMS(M+1)+332.21。
实施例93
3-((2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并呋喃-5-基)甲基)苯酚 使用BBr3对如实施例32中的描述制备的4-(5-(氨基(3-甲氧基苯基)甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺进行如实施例82中所描述的去甲基化，以提供标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.64(br，1H)、8.92(bm，3H)、8.36(m，1H)、8.09(m，1H)、8.03(m，1H)、7.45(m，1H)、7.23(m，1H)、7.02(m，1H)、6.93(m，1H)、6.83(m，1H)、6.74(m，1H)、5.72(m，1H)、2.70(s，3H)。LCMS(M+1)+363.17。
实施例94
实施例93是可商购的。
通过平行合成制备的化合物 本发明通过下列路线阐述 路线12
实施例94-327可使用如路线12中阐述的下列通用合成程序合成。
起始核4-(5-(氨基甲基)-3-甲基苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺按实施例33中的描述制备。其中R-COOH是选择用来提供实施例91-324的羧酸，实施例91-324通过通用程序1制备。
路线13
实施例328-570可使用路线13中阐述的下列通用合成程序合成。
起始核2-(2-氨基嘧啶-4-基)-3-甲基苯并[b]噻吩-5-羧酸如实施例19中所描述的进行制备。其中选择1°胺和2°胺用来提供实施例325-567，其通过通用程序2制备。
通用条件 通用条件1 将在DMF(8μL)中的羧酸单体(4μmol)转移至384孔板的各孔中，然后用在DMF(18μL)中的核(1.8μmol)和Et3N(6.0μmol)的溶液处理，接着用在DMF(8μL)中的HATU(2.0μmol)溶液处理。将该反应板热封，在室温下振荡16小时。在真空下除去溶剂。测试前通过LCMS分析产物纯度。
通用条件2 将在DMF(8μL)中的胺单体(4μmol)转移至384孔板的各孔中，然后用在DMF(30μL)中的核(4.0μmol)和Et3N(8.8μmol)的溶液处理，接着用在DMF(10μL)中的HATU(4.4μmol)溶液处理。将该反应板热封，在室温下振荡16小时。在真空下除去溶剂。测试前通过LCMS分析产物纯度。
本发明进一步通过下列实施例阐述。
本文使用简化的分子输入线进入系统(Simplified Molecular Input LineEntry System)，或SMILES来表示下述化合物。SMILES是嵌入(built into)所有主要的商品化化学结构绘图软件包的现代化学表示系统，由DavidWeininger和Daylight Chemical Information Systems，Inc.开发。SMILES文本字符串的解释不需要软件，有关如何将SMILES翻译成结构的解释可在Weininger，D.，J.Chem.Inf.Comput.Sci.1988，28，31-36中找到。本文使用的所有SMILES串以及许多IUPAC名称是使用CambridgeSoft′sChemDraw 10.0生成的。
下述化合物通常可以使用上述方法制备。期望的是制得的这些化合物会与已在上述实施例中制得的化合物具有相似的活性。
CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC＝CN64 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝CC＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝CC＝CN64 NC1＝NC＝CC(C2＝C(CC)N3C＝CN＝CC3＝N2)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)N6C＝CN＝CC6＝N5 NC1＝NC＝CC(C2＝C(CC)N3C＝CC＝CC3＝N2)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)N6C＝CC＝CC6＝N5 CC1＝C2C＝CN＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝CN＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C2C＝CN＝CN2C＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝CN＝CN5C＝C4C6＝NON＝C6N NC1＝NC＝CC(C2＝CN3C＝NC＝CC3＝C2CC)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝CN6C＝NC＝CC6＝C5CC CC1＝C2C＝CC＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝CC＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N NC1＝NC＝CC(C2＝NN3C＝CC＝CC3＝C2CC)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝NN6C＝CC＝CC6＝C5CC CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC(OC)＝CN64 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝CC(OC)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝CC(OC)＝CN64 CC1＝C2C＝C(OC)N＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(OC)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C2C＝C(OC)C＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(OC)C＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC(NC)＝CN64 CC1＝C2C＝C(NC)N＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(NC)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)OC3＝CN＝CC＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)OC6＝CN＝CC＝C64 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC＝NC＝C3O2)＝CC＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)C6＝CC＝NC＝C6O5 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝CN＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)SC6＝CN＝CN＝C64 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝CN＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)SC6＝CC＝CN＝C64 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝NC＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)SC6＝CC＝NC＝C64 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝NC＝CC＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)SC6＝NC＝CC＝C64 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝NC＝NC＝C3S2)＝CC＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)C6＝NC＝NC＝C6S5 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CN＝CN＝C3S2)＝CC＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)C6＝CN＝CN＝C6S5 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(CC4＝CC＝CC＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(CC8＝CC＝CC＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC4＝CC＝CC＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(OC8＝CC＝CC＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(SC4＝CC＝CC＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(SC8＝CC＝CC＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(S(C4＝CC＝CC＝C4)(＝O)＝O)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(S(C8＝CC＝CC＝C8)(＝O)＝O)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CC＝CC＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CC＝CC＝C8)＝CN75 CC1＝C2C＝C(CC3＝CC＝CC＝C3)N＝CN2N＝C 1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(CC7＝CC＝CC＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(OC3＝CC＝CC＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(OC7＝CC＝CC＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(SC3＝CC＝CC＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(SC7＝CC＝CC＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(S(C3＝CC＝CC＝C3)(＝O)＝O)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(S(C7＝CC＝CC＝C7)(＝O)＝O)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(NC3＝CC＝CC＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(NC7＝CC＝CC＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(CC4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CN31.CC5＝C(C6＝ NON＝C6N)N＝C7C＝NC(CC8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(OC8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(SC4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(SC8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(S(C4＝CC＝CC(O)＝C4)(＝O)＝O)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(S(C8＝CC＝CC(O)＝C8)(＝O)＝O)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(CC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(CC8＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(OC8＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(SC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(SC8＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(CC4＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(CC8＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC4＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(OC8＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(SC4＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(SC8＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CC＝CC(C(NC)＝O)＝C8)＝CN75 CC1＝C2C＝C(CC3＝CC＝CC(O)＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(CC7＝CC＝CC(O)＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(OC3＝CC＝CC(O)＝C3)N＝CN2N＝C 1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(OC7＝CC＝CC(O)＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(SC3＝CC＝CC(O)＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(SC7＝CC＝CC(O)＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C2C＝C(NC3＝CC＝CC(O)＝C3)N＝CN2N＝C1C4＝NC(N)＝NC＝C4 CC5＝C6C＝C(NC7＝CC＝CC(O)＝C7)N＝CN6N＝C5C8＝NON＝C8N CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(CC4＝CN＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(CC8＝CN＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OC4＝CN＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(OC8＝CN＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(SC4＝CN＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(SC8＝CN＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(S(C4＝CN＝CC(O)＝C4)(＝O)＝O)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(S(C8＝CN＝CC(O)＝C8)(＝O)＝O)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CN＝CC(O)＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CN＝CC(O)＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NC4＝CN＝CC＝C4)＝CN31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)N＝C7C＝NC(NC8＝CN＝CC＝C8)＝CN75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(CC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CN＝C(CC8＝CC＝CC(OC)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝C(CC4＝CN＝CC(C(O)＝O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CC＝C(CC8＝CN＝CC(OC)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(CC4＝CN＝CC(C(O)＝O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CN＝C(CC8＝CN＝CC(OC)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(NC4＝CC＝CC(C(O)＝O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CN＝C(NC8＝CC＝CC(OC)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝C(CC4＝CN＝CC(O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CN＝C(CC8＝CC＝CC(O)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(CC4＝CN＝CC(O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CN＝C(NC8＝CC＝CC(O)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝C(NC4＝CNC＝N4)C＝C31 CC5＝C(C6＝CC＝NC(N)＝N6)SC7＝CC＝C(CC8＝CNN＝C8)C＝C75 NC1＝NC＝CC(C2＝C(CC)N3C＝C(NC4＝CNN＝C4)N＝CC3＝N2)＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)N7C＝C(NC8＝CNC＝N8)N＝CC7＝N6 CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NCCCO)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC(NCCCO)＝CN64 CC1＝C2C＝C(NCCCO)N＝CN2N＝C 1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(NCCCO)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(OCCCO)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC(OCCCO)＝CN64 NC1＝NC＝CC(C2＝C(CC)N3C＝C(OCCO)N＝CC3＝N2)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)N6C＝C(OCCO)N＝CC6＝N5 NC1＝NC＝CC(C2＝C(CC)N3C＝C(NCCO)N＝CC3＝N2)＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)N6C＝C(NCCO)N＝CC6＝N5 CC1＝C2C＝C(NCCO)N＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(NCCO)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C2C＝C(OCCCO)N＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(OCCCO)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C2C＝C(OCCO)N＝CN2N＝C 1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(OCCO)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C(C2＝NC(N)＝NC＝C2)N＝C3C＝NC(NCC(N)CO)＝CN31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)N＝C6C＝NC(NCC(N)CO)＝CN64 CC1＝C2C＝C(NCC(N)CO)N＝CN2N＝C1C3＝NC(N)＝NC＝C3 CC4＝C5C＝C(NCC(N)CO)N＝CN5N＝C4C6＝NON＝C6N CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)OC3＝CN＝C(OC4＝CC＝CC(O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)OC7＝CN＝C(OC8＝CC＝CC(O)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)OC3＝CN＝C(OC4＝CN＝CC(O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)OC7＝CN＝C(OC8＝CN＝CC(O)＝C8)C＝C75 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)OC3＝CN＝C(NCCO)C＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)OC6＝CN＝C(NCCO)C＝C64 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)OC3＝CN＝C(NCCCO)C＝C31 CC4＝C(C5＝NON＝C5N)OC6＝CN＝C(NCCCO)C＝C64 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝NC(OC4＝CC＝CC(O)＝C4)＝NC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝NC(OC8＝CC＝CC(O)＝C8)＝NC＝C7S6 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝NC(OCCCO)＝NC＝C3S2)＝CC＝N1 NC4＝NON＝C4C5＝C(CC)C6＝NC(OCCCO)＝NC＝C6S5 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N)C4＝CC＝CC(OC)＝C4)＝CC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N)C8＝CC＝CC(OC)＝C8)＝CC＝C7S6 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N)C4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N)C8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CC＝C7S6 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N)C4＝CC＝CC(OC)＝C4)＝NC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N)C8＝CC＝CC(OC)＝C8)＝NC＝C7S6 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N)C4＝CC＝CC(O)＝C4)＝NC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N)C8＝CC＝CC(O)＝C8)＝NC＝C7S6 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(C(N)C4＝CC＝CC(O)＝C4)C＝C31 CC5＝C(C6＝NON＝C6N)SC7＝CN＝C(C(N)C8＝CC＝CC(O)＝C8)C＝C75 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N)C4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CC＝C3O2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N)C8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CC＝C7O6 NC1＝NC(C2＝C(CC)C3＝CC(C(N(C)C)C4＝CC＝CC(O)＝C4)＝CC＝C3S2)＝CC＝N1 NC5＝NON＝C5C6＝C(CC)C7＝CC(C(N(C)C)C8＝CC＝CC(O)＝C8)＝CC＝C7S6 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CN＝C(C(N4CCOCC4)C5＝CC＝CC(O)＝C5)C＝C31 CC6＝C(C7＝NON＝C7N)SC8＝CN＝C(C(N9CCOCC9)C％10＝CC＝CC(O)＝C％10)C＝C86 CC1＝C(C2＝CC＝NC(N)＝N2)SC3＝CC＝C(C(N4CCNCC4)C5＝CC＝CC(O)＝C5)C＝C31 CC6＝C(C7＝NON＝C7N)SC8＝CC＝C(C(N9CCNCC9)C％10＝CC＝CC(O)＝C％10)C＝C86 在下列测定中阐述了实施例1-570中的化合物作为Rho激酶抑制剂的活性。预期上文列出的其他化合物(其尚未制得或测试)在此测定中也具有活性。
生物活性测定 体外Rho激酶测定 下文描述的Rho激酶生物化学测定依赖于与底物和ATP温育后该激酶消耗的总ATP的基于萤火虫萤光素酶的间接测量。将含有0.82μg/ml重组的N-末端GST-标记的人类Rho激酶1(ROCK1，氨基酸1-535，InvitrogenInc.，目录号PV-3691)或重组的N-末端GST-标记的人类Rho激酶2(ROCK2，氨基酸1-552，Invitrogen Inc.，目录号PV3759)、100μg/ml S6肽底物(与人类40S核糖体蛋白质S6的氨基酸218-249有关，且适合用于ROCK1或ROCK2，例如Upstate/Millipore Inc.，目录号12-420)和3μM ATP的25μl Rho激酶测定缓冲液(20mM Tris-HCL[pH 7.5]、10mM MgCl2、0.4mM CaCl2、0.15mM EGTA、0.1mg/ml牛血清白蛋白)分配至384多孔不透明板的孔中。所述板在约200xg下离心30秒。在DMSO中的240n1测试化合物通过被动针转移(passive pin transfer)分配至各个孔。此体外激酶反应的滞后期允许在反应引发后不久加入化合物。让反应在30℃下温育2小时。密封测定板，并维持在湿润环境中。2小时后，分配25μl easylite蛋白激酶测定试剂(Perkin-Elmer，Inc.)。在室温(约22℃)下再温育10分钟后，在Molecular Devices Analyst多模式平板读取仪或其他合适的平板读取仪上测量发光活性。激酶抑制导致更少的ATP消耗，因此增加发光信号。使用无任何测试化合物的DMSO测量阴性对照活性。阳性对照是2-甲基-1-(4-甲基异喹啉-5-基磺酰基)全氢化-1，4-二氮杂

盐酸化物(aka H-1152P，HCl盐)。测量效能作为阳性对照活性的百分数。50％抑制的化合物浓度(IC50)通过剂量响应测定来测量。在一些情况下，激酶反应和化合物测试在1536多孔板中在类似的条件下进行，按比例相应调整测定体积。符号NT表示未测试的被引用的实施例。
表1.生物学活性 体内测定 有意识食蟹猴的激光的(高血压的)眼中的急性IOP响应 可在用0.1％丙美卡因光学角膜麻醉(light corneal anesthesia)后使用阿尔孔气动测量仪(Alcon Pneumatonometer)确定眼内压(IOP)。每次测量后用生理盐水洗眼。基线IOP测量后，将测试化合物按30pL一等分份滴注至仅九只食蟹猴的右眼。将载体滴注至另外六只动物的右眼。随后的IOP测量在1、3和6小时进行，IOP的峰值降低报告于下述表2中，作为IOP降低占化合物的每个给定浓度的对照的百分比。NT指示未在给定浓度测试该化合物。
表2.
本文使用的测定的更详细的描述，可参见May等人的“Evaluation of theOcular Hypotensive Response of Serotonin 5-HT1A and 5-HT2Receptor Ligandsin Conscious Ocular Hypertensive Cynomolgus Monkeys”，J.of Pharmacologyand Experimental Therapeutics，第306(1)卷，第301-309页(2003)，其公开内容在此引作参考，如同将其完整写入本文。
从上文的描述，本领域技术人员可以容易地确定本发明的本质特征，并可在不背离其主旨和范围的情况下，进行本发明的多种变化和修饰以使其适应多种用法和条件。
权利要求
1.抑制Rho激酶的方法，其包括将Rho激酶与结构式I的化合物或其盐、酯或前药接触，
其中
A是任选取代的杂芳基；
G1是任选取代的稠合双环杂芳基；
G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在；
m和p独立地为0、1、2、3或4；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；
n是0、1或2；
Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且
R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
2.抑制Rho激酶的方法，其包括将Rho激酶与选自实施例1至571的化合物接触。
3.在需要治疗的患者中治疗Rho激酶介导的疾病的方法，其包括给药治疗有效量的结构式I的化合物或其盐、酯或前药，
其中
A是任选取代的杂芳基；
G1是任选取代的稠合双环杂芳基；
G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在；
m和p独立地为0、1、2、3或4；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；
n是0、1或2；
Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且
R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述Rho激酶介导的疾病选自咽峡炎、冠状动脉血管痉挛、心肌梗死、冠脉缺血、充血性心力衰竭、心脏同种异体移植物血管病变、静脉移植病和血管再狭窄、缺血再灌注损伤、移植再灌注损伤、脑动脉血管痉挛、中风、脑缺血、原发性高血压、肺动脉高压、肾性高血压、继发性高血压病症、动脉粥样硬化、支气管哮喘、急性或慢性阻塞性肺疾病、急性或慢性炎性肺病、勃起功能障碍、神经变性病症、阿尔茨海默病、多发性硬化、脑或脊髓损伤、疾病或创伤相关的神经病、神经性疼痛、自身免疫性疾病、慢性肌肉骨骼炎性疾病、类风湿性关节炎、骨关节炎、慢性炎性肠病、局限性肠炎、溃疡性结肠炎、急性或慢性炎性痛、骨质疏松、骨疾病、癌症、病理性血管生成疾病和眼科疾病。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述Rho激酶介导的疾病是眼科疾病。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述眼科疾病选自升高的眼内压和青光眼。
7.在需要治疗的患者中治疗Rho激酶介导的疾病的方法，其包括给药治疗有效量的选自实施例1至571的化合物。
8.治疗Rho激酶介导的疾病的方法，其包括给药
a.治疗有效量的结构式I的化合物或其盐、酯或前药，
其中
A是任选取代的杂芳基；
G1是任选取代的稠合双环杂芳基；
G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在；
m和p独立地为0、1、2、3或4；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；
n是0、1或2；
Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且
R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代；和
b.另一治疗剂。
9.用于下述用途的方法
a.减少人类胚胎干细胞的凋亡；
b.增加人类胚胎干细胞的存活；
c.增加人类胚胎干细胞在基因转移后的克隆率；和
d.加强培养的人类胚胎干细胞的分化
所述方法的任何一种均包括将至少一个人类胚胎干细胞与有效量的结构式I的化合物或其盐、酯或前药接触，
其中
A是任选取代的杂芳基；
G1是任选取代的稠合双环杂芳基；
G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在；
m和p独立地为0、1、2、3或4；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；
n是0、1或2；
Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且
R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
10.结构式I的化合物或其盐、酯或前药，
其中
A是任选取代的杂芳基；
G1是任选取代的稠合双环杂芳基；
G2选自(CRaRb)mZ(CRcRd)p以及不存在；
m和p独立地为0、1、2、3或4；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、N(Re)SO2、SO2N(Re)、C(O)、任选取代的环烷基以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；
n是0、1或2；
Ra、Rb、Rc和Rd独立地选自氢、烷基、氨基、氨基烷基、酰氨基烷基、氨基烷基羧基、羧基烷基、卤代、杂环烷基、杂环烷基烷基、羟烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基羧基；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；且
R1选自烷基、烷基羰基、亚烷基、炔基、氨基、烷基氨基、羰基、环烷基、酯、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
11.如权利要求10所述的化合物或其盐、酯或前药，其中
A选自含有至少一个环氮的任选取代的单环5至6元杂芳基或包含与六元环稠合的五元环并且含有至少一个环氮的任选取代的双环杂芳基。
12.如权利要求11所述的化合物或其盐、酯或前药，其中G1选自
X1是N或C(R6)；
X2是N或C(R7)；
X3是N或C(R8)；
X4是N或C(R9)；
X5是N或C(R10)；
X6是N或C(R11)；
X7是N或C(R12)；
X8是N或C(R13)；
X9是N或C(R14)；
X10是N或C(R15)；
Y是O或S；且
R4-R15独立地选自氢、卤素、低级烷基、环烷基、芳基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、低级卤代烷基、酰基、氨基、羧基、氰基和硝基，它们中任何一个均可被任选地取代。
13.如权利要求12所述的化合物或其盐、酯或前药，其中A选自
其中任何一个均可被任选地取代。
14.如权利要求13所述的化合物或其盐、酯或前药，其中
G2是(CRaRb)mZ(CRcRd)p；
m和p独立地为0、1或2；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、C(O)以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；且
n是0或2。
15.如权利要求14所述的化合物或其盐、酯或前药，其中G1是
16.如权利要求15所述的化合物或其盐、酯或前药，其中A选自
17.如权利要求16所述的化合物或其盐、酯或前药，其具有结构式II或其盐、酯或前药，
其中
Y是O或S；
G2是(CRaRb)mZ(CRcRd)p；
m和p独立地为0、1或2；
Z选自O、N(R1)、S(O)n、N(Re)CO、CON(Re)、C(O)以及不存在；
Re选自氢和任选取代的C1-C4烷基；且
n是0或2；
G3选自低级烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂芳基、低级烷氧基、低级烷硫基、酰基、羧基、磺酰胺、羟基以及不存在，它们中任何一个均可被任选地取代；
G4选自氢、卤素、烷基、烷氧基、氨基、氨基烷基、酰氨基、酰氨基烷基、烷基酰氨基、氨基烷基羧基、羧基、烷基羧基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基、杂环烷基烷基酰氨基、芳基、芳基烷氧基、芳基酰氨基、芳基烷基、芳基酰基、芳基羧基、杂芳基烷基和脲，它们中任何一个均可被任选地取代；
R16选自低级烯基、炔基、低级烷基、烷硫基、卤代烷基、杂烷基、羟烷基、卤素和氢；且
R17-R19独立地选自酰基、低级烯基、炔基、低级烷氧基、低级烷氧基烷基、低级烷基、烷硫基、酰氨基、氨基、氨基烷基、氨基羰基、羧基、卤代烷基、羟烷基和氢，它们中任何一个均可被任选地取代。
18.如权利要求17所述的化合物或其盐、酯或前药，其中
Y是S；
R16选自低级烷基和氢；且
R17-R19全部为氢。
19.如权利要求18所述的化合物或其盐、酯或前药，其中G3选自芳基、杂环烷基、杂芳基，它们中任何一个均可被任选地取代。
20.如权利要求19所述的化合物或其盐、酯或前药，其中或者
m和p均是0；且
Z选自O、NH、S和C(O)；
或者
m是1；
Z不存在；且
p是0。
21.如权利要求20所述的化合物或其盐、酯或前药，其中R16选自甲基、乙基、杂烷基和卤素。
22.如权利要求21所述的化合物或其盐、酯或前药，其中G4选自氢、卤素、烷氧基、氨基、烷基酰氨基、羧基、烷基羧基、杂环烷基烷基、杂环烷基烷氧基、杂环烷基烷基羧基和杂环烷基烷基酰氨基，它们中任何一个均可被任选地取代。
23.化合物，其选自实施例3-93和95-571。
24.如权利要求10所述的化合物，其用作药物。
25.如权利要求10所述的化合物，其用于制备用于预防或治疗通过抑制Rho激酶进行改善的疾病或疾患的药物。
26.药物组合物，其包含权利要求10所述的化合物和药学可接受的载体。
全文摘要
本发明涉及可用作Rho激酶抑制剂用于治疗或预防疾病的化合物和方法。
文档编号C07D407/04GK101790527SQ200780035062
公开日2010年7月28日 申请日期2007年7月20日 优先权日2006年7月20日
发明者穆罕德默·卡尔曼, 艾伦·J.·博尔夏特, 特拉维斯·G.·库克, 罗伯特·L.·戴维斯, 伊丽莎白·M.m.·加尔迪内, 詹姆斯·W.·马莱哈, 斯图尔特·A.·诺布尔, 托马斯·J.·普林斯 申请人:凯利普西斯公司