8)、Alexa Flour594 (619)、HiLyte Fluor TR (622)、ATT0590 (624)、MFP590 (624)、DY-610 (630)、DY480XL (630)、ATT0610 (634)、DY_615 (Ml)、C-藻蓝素（C-Phycocyanin) (M7)、ATT〇62〇 (M3)、Alexa-633(647)、Phycocianin (650)、DY-481XL (650)、ATT0633 (657)、DY-630 (657)、DY-632 (657)、DY-633 (657)、MFP631 (658)、DyLight633 (658)、NorthernLights637 (658)、 DY-631 (658)、DY-634 (658)、APC(别藻蓝蛋白，Allophycocyanin) (660)、APC-XL (660)、 DY-520XL (664) ^ Alexa-647 (668) ^ Cy5 (667) ^ DY-521XL (668) ^ 0yster645 (669) ^ Quantum Red (670)、DY-635 (671)、DY-636 (671)、DY-647 (673)、DyLight647 (673)、 HiLyte Fluor (647)、 DyLight649 (674)、 HiLyte Plus647 (674)、 0yster650 (674)、 DY-648 (674)、DY-650 (674)、PerCP (675)、DY-652 (675)、DY-649 (676)、DY-651 (678)、 0yster656 (679)、ATT0655 (684)、Alexa-660 (690)、Cy5.5 ^94)、DY-677 ^94)、DY-678 (698)、HiLyte Fluor680 (699)、DY-675 (699)、DY-676 (699)、IRDye700DX (700)、 Alexa-680 (702)、DY-681 (708)、DY-680 (709)、DY-682 (709)、DyLight680 (715)、Alexa Fluor700 (723)、DY-700 (730)、DY-701 (731)、DY-730 (758)、DY-732 (759)、DY-734 (759)、DY-731 (760)、DY-752 (772)、DY-750 (776)、DyLight750 (778)、HiLyte Fluor750 (778)、DY-749 (778)、HiLyte Plus750 (779)、APC7 (779)、DY-751 (779)、DyLight800 (794)、IRDye800CW (800)、DY-780 (800)、DY-781 (800)、DY-782 (800)、DY-776 (801)、 DY_777 (8〇l)、IRDye8〇0 (8〇6)等。
[0041] 稀土类络合物： ATBTA-EU3+ (616)等。
[0042] 荧光蛋白： Sirius (424)、CFP (505)、AcGFP (505)、EGFP (509)、EYFP (527)、YFP (527)、 ZsYellow (539)、mOrange (562)、DsRed2 (582)、AsRed2 (592)、mRFPl (607)、mCherry (610)、HcRed (6l8)、mRasberry (625)、mPlum (649)等。
[0043] 例如，在将蓝色的聚苯乙烯胶乳颗粒用作可见区着色颗粒时，蓝色聚苯乙烯胶 乳颗粒在600~700nm附近具有吸收峰，因此，例如可以使用在比这还低的波长区、例如 450nm~550nm附近、优选500nm附近具有荧光波长的荧光色素。作为这样的荧光色素，例如 可以举出荧光波长为521nm的荧光素。另外，在将红色的聚苯乙烯胶乳颗粒用作可见区着 色颗粒时，红色聚苯乙烯胶乳颗粒在500~550nm附近具有吸收峰，因此，例如可以使用在比 这还高的波长区、例如600nm~700nm附近具有荧光波长的荧光色素。作为这样的荧光色素， 例如可以举出荧光波长为616nm的ATBTA-EU'
[0044] 本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒，可通过人的肉眼识别颜 色，且自荧光色素发出荧光。将不溶性载体颗粒用于免疫测定时，使抗原或抗体结合于不溶 性载体颗粒，并使受验者样本中的抗体或抗原结合，对形成了抗原与抗体的复合物的不溶 性载体颗粒进行回收或累积，根据不溶性载体颗粒的存在的有无，测定受验者样本中的抗 体或抗原的存在。将本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒用于免疫测定 时，也可以通过以目视确认颜色的目视判定来测定抗体或抗原的存在，还可以通过用荧光 检测装置测定自不溶性载体发出的荧光，来测定抗体或抗原的存在。
[0045] 关于使抗原或抗体结合于用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒，可以通 过与使荧光色素结合于不溶性载体颗粒的方法同样的方法，使不溶性载体颗粒的官能团与 抗原或抗体的官能团结合。另外，也可以通过物理吸附使抗原或抗体结合于不溶性载体颗 粒。
[0046] 本发明也包含制备上述用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的方法，该 制备方法包括下述工序：（i)测定可见区着色不溶性载体颗粒的吸收光谱的工序，（ii)确 定该可见区着色不溶性载体颗粒吸收少的波长区的工序，（iii)选择发出该波长区的荧光 的荧光色素的工序，以及（iv)用所选择的荧光色素标记上述可见区着色不溶性载体颗粒 的工序。
[0047] 利用本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的免疫测定不受限 定，可举出免疫色谱法、凝聚法等，优选免疫色谱法。免疫色谱法可以采用公知的免疫色谱 法用装置通过公知的方法进行。本发明也包含利用用荧光色素标记的可见区着色不溶性载 体颗粒的免疫测定方法。该方法包含：使用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒结 合于包含待测定的抗原或抗体的抗原抗体复合物，通过目视观察不溶性载体颗粒的着色、 和/或测定自不溶性载体颗粒发出的荧光，由此确定抗原抗体复合物的存在。即，基于用荧 光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的颜色或荧光，对抗原或抗体进行测定。测定既 包含定性测定也包含定量测定。
[0048]例如，在对受验者样本中的抗原进行检测的免疫色谱法中，在硝酸纤维素膜等适 当的固相支撑体上的规定位置（检测部位）将与作为被检测物质的抗原能够特异性地结合 的抗体固相化，于该固相支撑体上利用毛细管现象，使结合有待检测的、抗体特异性地结合 的抗原的不溶性载体颗粒与被检测物质的复合物展开移动于固相支撑体上，所述不溶性载 体颗粒为本发明的用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒。这时，在将不溶性载体 颗粒与被检测物质混合后，既可以在固相支撑体上的规定位置（样本添加部位）添加混合 物，也可以预先在固相支撑体上将不溶性载体颗粒固相化（标记部位），用所添加的样本液 体使不溶性载体颗粒溶解，使不溶性载体颗粒与被检测物质形成复合物。该结果，固相化的 抗原-作为被检测物质的抗体-用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒的复合物形 成于固相支撑体的检测部位。通过目视或荧光检测装置测定检测部位的用荧光色素标记的 可见区着色不溶性载体颗粒的存在，由此可以检测被检测物质。测定受验者样本中的抗体 时，在固相支撑体上将待测定的、抗体特异性地结合的抗原固相化，且可以使该抗原结合在 用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒上。
[0049] 本发明的方法中的被检测物质不受限定，例如可举出HIV、肝炎病毒、流感病毒等 病毒，金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、肠出血性大肠杆菌等细菌等。样本也不受限定，可以使 用采集自受验者（subject)的咽喉或鼻腔擦拭液、咽或鼻腔洗出液、鼻腔吸引液、唾液、血 清、血浆、便、便悬浮液、尿、或培养液等。
[0050] 并且，本发明也包含检测用免疫测定试剂盒，所述检测用免疫测定试剂盒包含结 合有被检测物质的抗原或抗体的、用荧光色素标记的可见区着色不溶性载体颗粒。该试剂 盒进一步包含免疫色谱法用的装置、小册子（brochure)等。 实施例
[0051] 通过以下的实施例具体地说明本发明，本发明并不受这些实施例限定。实施例的 记载中，"％"表示"重量％"。
[0052] 实施例1使用具有羧基作为官能团的着色聚苯乙烯颗粒来制备用荧光色素标记 的可见区着色荧光颗粒 1.铕螯合物荧光标记剂的结合 用10mM HEPES (pH7.0)的缓冲液将具有羧基作为官能团的多种颜色的着色聚苯 乙烯颗粒（参照表1及图1~3)稀释为0. 1%，在其中加入作为铕螯合物荧光标记剂的 ATBTA-Eu3+ (东京化成工业株式会社），使ATBTA-Eu3+为0. lmg/mL。搅拌后，加入碳二亚胺 使之为1%并搅拌，于室温下反应1小时。在7000g下离心30分钟后，除去上清液，再浮游 于 50mM Tris (ρΗ9· 0)、3%BSA 中。
[0053] 2.氨基荧光素荧光标记剂的结合 用10mM HEPES (ρΗ7.0)的缓冲液将具有羧基作为官能团的多种颜色的着色聚苯乙烯 颗粒（参照表1及图1~3)稀释为0. 1%，在其中加入6-氨基荧光素（东京化成工业株式会 社），使6-氨基焚光素为0. lmg/mL。搅拌后，加入碳二亚胺使之为1%并搅拌，于室温下反 应1小时。在7000g下离心30分钟后，除去上清液，再浮游于50mM Tris (pH9. 0)、3%BSA 中。
[0054] 将所使用的可见区着色聚苯乙烯胶乳颗粒示于表1中，将各颗粒的吸收光谱示于 图1~3中。
3.测定结合铕螯合物荧光标记剂的聚苯乙烯颗粒的荧光强度 将1.中所制备的结合铕螯合物荧光标记剂的聚苯乙烯颗粒用50mMTris (pH9.0)、 3%BSA稀释为0. 01%，将100 μ L加入到96孔的FluoroNunc plate的孔中，使用荧光多功 能微孔版检测仪（fluorescence plate reader) (MTP-650FA;电晕电气株式会社制造） 在340nm ex/615nm em下对焚光强度进行了测定。作为对照，同时也对只是50mM Tris (pH9. 0)、3%BSA、未结合铕螯合物荧光标记剂的可见区着色聚苯乙烯颗粒进行了测定。
[0056] 该结果，与50mM Tris (pH9. 0)、3%BSA的荧光强度相比较，未结合铕螯合物荧光标