z calcd. for 270. 0528 (C15HltlO5). 1H NMR(600MHz, Acetone) δ 12. 22(d, J = 10. 6Hz, 1H), 12. 10 (d, J = 11. 4Hz, 1H), 7. 58 (d, J =I. 0Hz, 1H), 7. 27 (d, J = 2. 4Hz, 1H), 7. 16 (d, J = 0. 7Hz, 1H), 6. 68 (d, J = 2. 4Hz, 1H), 2. 49 (s, 4H).
[0049] 13C NMR(151MHz, Acetone) δ 190. 92, 182. 99, 182. 72, 181. 30, 165. 51, 148. 72, 124 .09, 120. 62, 108. 77, 107. 98, 80. 50, 25. 33, 13. 70.
[0050] 化合物 2 :橙色粉末。ESI-MS:m/z calcd. for 284. 0685 (C16H12O5). 1H NMR (600MHz, DMS0) 5l3.24(s,lH),7.43(d,J = l.lHz,lH),7.21(d,J = 2. 3Hz, 1H), 7. 13 (s, 1H), 6. 85 (d, J = 2. 3Hz, 1H), 3. 91 (s, 2H), 2. 40 (s, 2H). 13C NMR(151MHz, DMS0) δ 186. 79, 182. 76, 164. 92, 163. 91, 162. 17, 147. 07, 137. 27, 132. 50, 124 .63, 119. 57, 114. 85, 113. 12, 107. 42, 105. 44, 56. 79, 21. 84.
[0051] 化合物 3 :白色针状结晶。ESI-MS:m/z calcd. for 154. 0630 (C8HltlO3). 1H NMR (600MHz, MeOD) δ 6. 86 (dq, J = 15. 7, 6. 9Hz, 1H), 6. 41 (m, 1H), 6. 03 (s, 1H), 4. 70 (d, J = 2. 6Hz, 1H),4. ll(d, J = 2. 7Hz, 1H), 1.96(dd, J = 6.9, I. 6Hz, 3H). 13C NMR(151MHz, MeOD) δ 205. 49, 170. 71, 141. 75, 126. 31, 125. 81, 82. 29, 77. 98, 49. 33, 49. 18, 49. 04, 48. 90, 48. 7 6, 48. 62, 48. 47, 19. 39.
[0052] 化合物 4 :黄色粉末。ESI-MS:m/z calcd for 384. 9882 (C16H11Cl2O7). 1H MMR(600MHz，DMS0)Sll.78(s，lH)，10.16(s，lH)，6.95(d，J = 2.1Hz，lH)，6.73(d，J = 2. 0Hz，1H)，3. 67(d，J = 8. 3Hz，3H)，3. 45(s，9H)，2. 45(s，1H). 13C NMR(151MHz，DMS0) δ 199 .84, 170. 39, 165. 19, 158. 19, 156. 15, 154. 68, 141. 29, 127. 47, 124. 91, 111. 80, HO. 83, 107 .00, 103. 15, 99. 08, 55. 60, 51. 83, 18. 39.
[0053] 上述4个化合物的结构式为：
[0054]
onu r?
[0055] 实施例4、蜻蜓肠道共生土曲霉（Aspergillus terreus QT122)的发酵液对反枝苋 和稗草幼根生长的抑制作用：
[0056] 吸取5mL发酵液（土曲霉QT122发酵液）于铺有滤纸的培养皿使滤纸饱和。同时 将阳性对照2, 4-D用丙酮配置成100 μ g/mL，吸取5mL于铺有滤纸的培养皿中使滤纸饱和， 溶剂挥发后加入5mL的无菌水。选取催芽的反枝苋和稗草种子（每皿10粒）放在滤纸上， 每个处理3个重复。然后放在28°C、70%相对湿度、定时光照（12h光照，12h黑暗）条件的 人工气候培养箱培养。2d后测量种子根长，以平均根生长抑制率表示结果。计算公式为： 平均根生长抑制率（％)=[(对照平均根长一处理平均根长）/对照平均根长]X100%。
[0057] 表1 土曲霉（Aspergillus terreus QT122)发酵液对反枝苋和稗草幼根的抑制效 果
[0058]
[0059] 备注说明：表1中CK为空白对照；2, 4-D为阳性对照；供试浓度为100 μ g/mL。
[0060] 实验结果见表1 ;表1中的结果表明，土曲霉（Aspergillus terreus QT122)发 酵液对反枝苋和稗草幼根的生长抑制率分别为78. 5%和68. 5%，其结果稍弱于阳性对照 对反枝苋和稗草幼根的生长抑制率。因此本发明提供的土曲霉（Aspergillus terreus QT122)菌株具有被开发为微生物源除草剂的潜力。
[0061] 实施例5、蜻蜓肠道共生土曲霉（Aspergillus terreus QT122)的代谢产物对反枝 苋和稗草幼根生长的抑制作用：
[0062] 将发酵液粗提物和代谢产物分别用丙酮配制成lOOug/mL的溶液，分别吸取5mL于 铺有滤纸的培养皿中使滤纸饱和，溶剂挥发后加入5mL的无菌水，阳性对照用丙酮做同样 的处理。选取催芽的反枝苋和稗草种子（每皿10粒）放在滤纸上，每个处理3个重复。然 后放在28°C、70%相对湿度、定时光照（12h光照，12h黑暗）条件的人工气候培养箱培养。 2d后测量种子根长，以平均根生长抑制率表示结果。计算公式为：平均根生长抑制率（％ ) =[(对照平均根长一处理平均根长）/对照平均根长]X 100%。
[0063] 所得结果如下表2和表3所示。
[0064] 表2 土曲霉（Aspergillus terreus QT122)发酵液粗提物对反枝苋和稗草幼根的 抑制效果
[0065]
[0067] 备注说明：表2中CK为空白对照；2, 4-D为阳性对照；供试浓度为100 μ g/mL。
[0068] 根据表2中结果表明，土曲霉（Aspergillus terreus QT122)菌株发酵液的粗 提物对稗草幼根的生长抑制率大于79%，与阳性对照基本相当；而与阳性对照的结果相比 较，其对反枝苋幼根的生长同样有着很好的抑制作用，抑制率大于68%。
[0069] 表3 土曲霉（Aspergillus terreus QT122)代谢产物对反枝苋和稗草幼根的抑制 效果
[0070]
[0071] 备注说明：表3中CK为空白对照；2, 4-D为阳性对照；供试浓度为100 μ g/mL。
[0072] 实验结果见表3。表中结果表明，与阳性对照实验结果相比较，土曲霉 (Aspergillus terreus QT122)菌株的代谢产物对反枝苋和稗草幼根生长的抑制作用以化 合物3的效果最佳，抑制率高达80%以上；而化合物4对反枝苋和稗草幼根的生长也有着 较好的抑制作用，抑制率均大于60% ;化合物1和2对反枝苋和稗草幼根的生长都有着中 等强度的抑制活性。
[0073] 对比例1 :将如下所述的现有的土曲霉按照实施例2进行液体发酵，所得的发酵液 按照实施例4所述进行实验，所得结果如下表4所示；
[0074] 土曲霉A :为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的海绵共附生土曲 霉 PF26(CGMCC NO. 5208);
[0075] 土曲霉B :为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的土曲霉 ZRV2011P5(CGMCC NO. 8746)；
[0076] 土曲霉C :为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的土曲霉 SNGB9003(CGMCC N0.0 569)；
[0077] 土曲霉D :为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的土曲霉 ZSOl (CGMCC NO. 6413)。
[0078] 表4、各种发酵液对反枝苋和稗草幼根的抑制效果
[0079]
[0080] 备注说明：表4中CK为空白对照；2, 4-D为阳性对照，且供试浓度为100 μ g/Ml。
[0081] 对比例实验结果见表4。表中结果表明，在同等实验条件的情况下，各种现有的 土曲霉发酵液对反枝苋和稗草幼根生长的抑制活性与阳性对照相比，只有本发明的土曲霉 (Aspergillus terreus QT122)菌株的发酵液效果显著，均与阳性对照相当；而土曲霉A、B、 C、D的发酵液对反枝苋和稗草幼根生长的抑制活性较弱，抑制率均小于40%。
[0082] 综合实施例4、实施例5以及对比例1的实验结果表明，蜻蜓肠道共生土曲霉 (Aspergillus terreus QT122)菌株的发酵液和代谢产物具有很好的除草活性，因此对开 发新型微生物源除草剂具有重要的价值和潜力。
[0083] 最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发 明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容 直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
L 土曲霉QT122,其特征是：为Aspergillus terreus QT122,其保藏编号为：CCTCC M2015240。
2. 土曲霉QT122发酵液的制备方法，其特征是包括以下步骤： 1) 、活化好的土曲霉（Aspergillus terreus QT122)接入麦芽液体培养基中，于 27. 5~28. 5°C、160~180rpm/min的条件下培养2~3d，得种子液； 2) 、将种子液按照1 %~2%体积比的接种量接入麦芽液体培养基中，于27. 5~ 28. 5°C、160~180rpm/min的条件下培养6~8d，得土曲霉QT122发酵液。
3. 利用土曲霉QT122发酵液制备土曲霉QT122代谢产物的方法，其特征是包括以下步 骤： 1) 、将土曲霉QT122发酵液利用纱布进行过滤，得滤液； 将滤液经乙酸乙酯萃取后，真空减压浓缩干燥，得土曲霉QT122发酵液粗提物； 2) 、将土曲霉QT122发酵液粗提物用硅胶柱层析进行粗分，采用二氯甲烷/甲醇进行梯 度洗脱，所述二氯甲烷与甲醇的体积比依次为：1〇〇:〇, 100:1，100:2, 100:4, 100:8, 100:16， 100:32 ;进而相应得到7个馏分：F1~F7 ; 3) 、将Fl和F2分别进行如下操作：浓缩后用甲醇重结晶；总共得到4个土曲霉QT122 代谢产物。
4. 依据权利要求3所述方法制备而得的4种土曲霉QT122代谢产物，其特征是分别具 有如下结构式：
5. 土曲霉QT122的用途，其特征是：用于抑制反枝苋或稗草幼根的生长。
6. 根据权利要求5所述的土曲霉QT122的用途，其特征是：土曲霉QT122发酵液、土曲 霉QT122发酵液粗提物、土曲霉QT122代谢产物均能用于抑制反枝苋或稗草幼根的生长。
7. 对反枝苋和稗草的幼根生长具有抑制活性的生物农药，其特征是：该生物农药中含 有以下任意一种：土曲霉QT122发酵液、土曲霉QT122发酵液粗提物、土曲霉QT122代谢产 物。
【专利摘要】本发明公开了一种土曲霉QT122，为Aspergillus terreus QT122，其保藏编号为：CCTCC M 2015240。本发明还同时公开了土曲霉QT122发酵液、土曲霉QT122发酵液粗提物、土曲霉QT122代谢产物的制备方法。本发明还同时公开了土曲霉QT122的用途，土曲霉QT122发酵液、土曲霉QT122发酵液粗提物、土曲霉QT122代谢产物均能用于抑制反枝苋或稗草幼根的生长。土曲霉QT122发酵液、土曲霉QT122发酵液粗提物、土曲霉QT122代谢产物可用于制备对反枝苋和稗草的幼根生长具有抑制活性的生物农药。CCTCC NO： M 201524020150417
【IPC分类】C12R1/66, C07C49/597, C12N1/14, A01N63/04, A01N45/02, A01N35/06, C07C69/92, C07C50/18, A01N37/10
【公开号】CN104893986
【申请号】CN201510261549
【发明人】张应烙, 卢贻会
【申请人】浙江师范大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月21日