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【主权项】
1. 一种包含核酸分子的可调节的基因表达构建体； 其中所述核酸分子包含两个或更多个调节序列，每个所述调节序列编码包含对效应物 化合物做出应答的核糖开关的RNA分子，每个所述核糖开关可操作地连接到各个编码区； 其中每个编码区编码用于调节各个生长调节剂化合物的作用的各个调节剂化合物；且 其中将每个调节序列中的核糖开关选择成对相同效应物化合物做出应答以触发它的 各个调节剂化合物的表达。2. 在权利要求1中要求保护的可调节的基因表达构建体，其中所述核酸分子是质粒， 或是附加体DNA，或是染色体DNA。3. 在权利要求1中要求保护的可调节的基因表达构建体，其中所述构建体包含两个或 更多个核酸分子，其中每个核酸分子包含至少一个调节序列。4. 在权利要求1中要求保护的可调节的基因表达构建体，其中所述核糖开关是天然存 在的核糖开关、嵌合的核糖开关、经工程改造的核糖开关、合成的核糖开关或重组的核糖开 关。5. -种在体内选择遗传编码序列的方法，所述遗传编码序列编码至少一种调节效应物 化合物的作用的一级调节剂化合物，所述方法包括：在有至少两种生长调节剂化合物存在 下培养宿主微生物的表达文库，每种生长调节剂化合物通常能够阻止所述微生物的增殖， 所述表达文库表达可能表达所述一级调节剂化合物的DNA片段的文库；和在所述文库中选 择增殖的微生物； 其中所述一级调节剂化合物 -实现底物向所述效应物化合物的化学转化，且将所述底物提供给所述微生物；或者 -将所述效应物化合物转运进所述微生物中，和 其中所述宿主微生物包含可调节的基因表达构建体，所述可调节的基因表达构建体包 含核酸分子，所述核酸分子包含至少两个调节序列，每个所述调节序列编码包含可操作地 连接到各个编码区的核糖开关的RNA分子，其中每个核糖开关响应于所述效应物化合物的 存在而调节它的各个编码区的表达，且每个编码区编码各个二级调节剂化合物用于调节各 个所述生长调节剂化合物的作用， 由此使所述文库中产生期望的一级调节剂化合物的微生物能够在有所述至少两种生 长调节剂化合物存在下增殖。6. 在权利要求5中要求保护的方法，其中所述宿主微生物的表达文库包含许多产生潜 在一级调节剂化合物群体的宿主细胞，其中所述许多宿主细胞： -是单一细胞类型的细胞的文库，其中基本上每个宿主细胞包含编码至少一种潜在一 级调节剂化合物的克隆的核酸片段或突变的天然基因组；或者 -是不同细胞类型的细胞，其中基本上每个宿主细胞包含编码至少一种潜在一级调节 剂化合物的天然核酸片段。7. 在权利要求5中要求保护的方法，其中在生长培养基中使所述宿主微生物与所述底 物接触，所述生长培养基包含至少两种抗生素化合物作为所述生长调节剂化合物，对每种 抗生素化合物的抗性在每个可操作地连接的编码区中编码，使得每个可操作地连接的编码 区编码一种抗生素化合物的抗性。8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述编码区编码赋予抗生素抗性的各种酶。9. 根据权利要求5所述的方法，其中所述宿主微生物包含编码至少两种一级调节剂化 合物的一种或多种核酸分子，每种一级调节剂化合物能够催化多步化学转化反应的至少一 个反应，且其中所述化学转化反应中的至少一个产生所述效应物化合物。10. 根据权利要求5所述的方法，其中所述微生物宿主细胞包含编码至少两种潜在一 级调节剂化合物的一种或多种核酸分子，其中至少一种一级调节剂化合物会实现底物向所 述效应物化合物的化学转化，且至少一种一级调节剂化合物将所述底物转运进所述微生物 中。11. 微生物宿主细胞的文库，所述微生物宿主细胞适合用在从潜在一级调节剂化合物 群体中选择一级调节剂化合物的方法中，每个所述宿主细胞包含： a) 编码至少一种潜在一级调节剂化合物的至少一种核酸分子， 其中所述一级调节剂化合物 -实现底物向所述效应物化合物的化学转化，且将所述底物提供给所述微生物；或者 -将所述效应物化合物转运进所述微生物中；和 b) 至少一种可调节的基因表达构建体，其包含编码至少两个或更多个调节序列的核酸 分子，每个所述调节序列编码包含可操作地连接到各个编码区的核糖开关的RNA分子，所 述编码区编码各个二级调节剂化合物用于调节各个生长调节剂化合物的作用，其中每个核 糖开关响应于效应物化合物的存在而调节它的各个编码区的表达。12. -种微生物宿主细胞，其中所述宿主细胞包含至少一种根据权利要求1所述的可 调节的基因表达构建体和编码至少一种一级调节剂化合物的至少一种核酸分子，其中所述 一级调节剂化合物 -实现底物向所述效应物化合物的化学转化；或者 -将化合物从细胞外空间转运至细胞内空间，其中所述转运蛋白化合物是所述底物或 是所述效应物化合物。13. 在权利要求12中要求保护的微生物宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌细胞、微 生物细胞、植物细胞、酵母细胞或动物细胞。14. 一种产生一级调节剂化合物生产菌株的方法，其中通过转基因方法将所选择的遗 传编码序列或根据权利要求5-10中的任一项选择的序列引入微生物宿主细胞中由此产生 生产菌株，其中所述生产菌株生产一种或多种所述一级调节剂化合物。
【专利摘要】本发明涉及一种包含核酸分子的可调节的基因表达构建体，所述核酸分子包含两个或更多个调节序列，所述调节序列编码包含对效应物化合物做出应答的核糖开关的各个RNA分子，所述核糖开关可操作地连接到各个编码区，所述编码区编码用于调节各个生长调节剂化合物的作用的各个调节剂化合物，且将每个调节序列中的核糖开关选择成对相同效应物化合物做出应答以触发它的各个调节剂化合物的表达。本发明还涉及一种使用可调节的基因表达构建体从宏基因组文库中选择一级调节剂化合物的方法，所述一级调节剂化合物实现底物向所述效应物化合物的化学转化或将所述效应物化合物转运进包含可调节的基因表达构建体的微生物中。
【IPC分类】C12N15/67, C40B40/02, C12N15/63, C12N15/10, C40B40/06, C12Q1/68
【公开号】CN105392899
【申请号】CN201480038738
【发明人】汉斯·贾斯帕·吉尼, 莫滕·萨默
【申请人】比奥森蒂亚有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2014年5月20日
【公告号】CA2912980A1, EP2999795A1, US20160186187, WO2014187829A1