专利名称：高比活耐热N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA-AIO6及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种高比活耐热N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA-Aioe及其编码基因与应用。
背景技术：
群体感应(quorum sensing, QS)是细菌的一种调控机制，指细菌通过感应特定信号分子的浓度来感知周围环境中自身或其它细菌的数量，并调整相关基因的表达以适应环境的变化，这些特定的信号分子(又称为自诱导物)。革兰氏阴性细菌中典型的QS系统包括负责信号产生的IuxI类基因、反应调节因子IuxR类基因和LuxR蛋白结合区luxbox。革兰氏阴性菌群体感应系统中最典型的一类信号分子是N-酰基-高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones，AHLs)类化合物。细菌细胞通过产生AHLs进行信息交流，调控某些特定生理性状的表达。随着对QS系统的深入研究，发现多种革兰氏阴病原细菌的重要生理过程，包括毒性因子在内的次生代谢物的产生等均受QS系统的调控。如对人类主要条件致病菌铜绿假单胞菌芯片分析表明，在基因组中300多个基因受QS系统调控，其中包括了形成胞外蛋白酶、毒素和脂肪酶等致病因子表达的基因。再如引起植物软腐病的重要致病菌胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)中，QS系统调控了包括合成和分泌能降解植物细胞壁的水解酶的表达及其它与寄主植物互作的毒性因子的产生。因此可以利用QS系统作为细菌病害防治的新靶点。目前已将干扰QS系统中AHL信号分子的合成作为生物防治革兰氏阴性病原菌的新靶标。而利用QS调控系统控制细菌病害的途径之一是寻找能降解信号分子的酶，使AHL 信号分子不能达到调控的临界浓度以阻断细菌间的信息交流从而防止病原菌的感染。目前已报道的N-酰基高丝氨酸内酯酶，比活力较低且耐热性较差，限制了其应用价值。因此，发掘比活力更高、耐热性更好的新酶，成为目前研究的一个重要方向。
发明内容
本发明公开了一种高比活耐热N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA-AIOe及其编码基因与应用。本发明所提供的蛋白(AiiA_AI06蛋白)，来自苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)，具有N-酰基高丝氨酸内酯酶功能，为如下(a)或(b)或(c)(a)序列表中序列1自N末端第2至沈9位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有N-酰基高丝氨酸内酯酶功能的由序列1衍生的蛋白质。为了使(a)或(b)或(c)中的AiiA-Aioe蛋白便于纯化，可在由序列表中序列1
3所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列
权利要求
1.一种蛋白质，为如下(a)或(b)或(c)(a)序列表中序列1自N末端第2至269位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有N-酰基高丝氨酸内酯酶功能的由序列1衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于它为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA 分子1)序列表中序列2自5’末端第4至807位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2自5’末端第4至810位核苷酸所示的DNA分子；3)序列表中序列2所示的DNA分子；4)在严格条件下与1)或幻或幻限定的DNA序列杂交且编码具有N-酰基高丝氨酸内酯酶活性的蛋白的DNA分子；5)与1)或幻或幻限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码具有N-酰基高丝氨酸内酯酶活性的蛋白的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体为将权利要求2 或3所述基因插入载体pET18a(+)的多克隆位点得到的重组质粒。
6.如权利要求4所述的重组菌，其特征在于所述重组菌为将权利要求4或5所述重组表达载体导入大肠杆菌得到的重组菌；所述大肠杆菌优选为大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)。
7.如权利要求6所述的重组菌，其特征在于所述重组菌为大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)BL21pED8a(+)/aiia_AI06，其保藏号为 CGMCC No. 4621。。
8.扩增权利要求2或3所述基因全长或其任意片段的引物对。
9.权利要求1所述蛋白在降解N-酰基高丝氨酸内酯中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述N-酰基高丝氨酸内酯为C4-HSL、 C6-HSL、 C7-HSL、 C8-HSL、 C 10-HSL、3-oxo-C6_HSL、3-oxo-C8_HSL、3-oxo-C14_HSL、 3-oxo-C10-HSL、3-hydroxy-C12-HSL 和 3-hydroxy-C14_HSL 中的至少一种；所述降解的温度为0°C -50°C，优选为30°C ；所述降解的pH值为6. 0-9. 0，优选为8. 0。
全文摘要
本发明公开了一种高比活耐热N-酰基高丝氨酸内酯酶AiiA-AIO6及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有N-酰基高丝氨酸内酯酶活性的由序列1衍生的蛋白质。本发明提供的AiiA-AIO6蛋白，是一种新的N-酰基高丝氨酸内酯酶，该酶比活力高、耐热，具有较强的蛋白酶抗性和较好的降解各种底物的能力，可作为一种新型的生防酶制剂。
文档编号A01P1/00GK102212508SQ20111008256
公开日2011年10月12日 申请日期2011年4月1日 优先权日2011年4月1日
发明者何夙旭, 周志刚, 张宇婷, 张美超, 徐俐, 曹雅男, 毛玮, 霍凤敏 申请人:中国农业科学院饲料研究所