专利名称：化合物异甘草次苷及其制备和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的化合物异甘草次苷的结构及制备和用途。
技术背景甘草酸是中药甘草的主要成分，具有抗炎、抗病毒、抗过敏等作用。甘草酸在酶作用下能水解失去-一个葡萄糖醛酸基得到甘草次苷，具有更高的甜味性能以及生物利用度。天然甘草酸主要为e体，在一定条件下能转化得到a体的18a-甘草酸。构象分析表明18a-H与C30上的羧基不在同一平面，而18(3-H与其处 在同一平面。由于位阻效应，前者的亲脂性大于后者，在体内易于与受体蛋白结合，a体结构中D/E环为 反式构型，与泼尼松龙相似，易于与类固醇激素的靶细胞受体结合，其抗毒、抗炎作用远大于P体(Amagaya S,丄Pharmacobio-Dyn., 1984, 7(12): 923 928)。根据甘草酸及其衍生物的结构特点，利用酶法对18a -甘草酸进行生物转化，使其失去一个葡萄糖醛酸 基获得的异甘草次苷，具有甘草次苷和18a-甘草酸两者优点。异甘草次苷具有较强的甜味性能，其甜度为 甘草酸的5-6倍，且具有相似的口味。目前，有关异甘草次苷的生产方法尚未有报道。 发明内容本发明的目的是提供了一种新的化合物异甘草次苷。 本发明的另一目的是提供了化合物异甘草次苷的制备和用途。为了达到上述目的，本发明利用酶法对18a-甘草酸进行转化，使其在含e-葡萄糖醛酸苷酶的酶制剂 作用以及适宜的反应条件下，水解失去一分子葡萄糖醛酸基，得到一种新的化合物异甘草次苷。本发明提供的异甘草次苷为五环三萜类化合物，又名18。-单葡萄糖醛酸基甘草次酸(3P-D -monoglucuronyl-18a-glyCyrrhetinicacid),分子式为C36H54O10，是甘草次苷的差向异构体，其结构的差异 在于C-18位氢的构型。异甘草次苷化学名为18 a -氢-20 {5 -羧基-l卜氧-正齐敦果烷-12烯-3 P -基-2-O-e -D-吡喃葡萄糖醛酸，其化学结构式为(数字为碳原子编号)<formula>formula see original document page 3</formula>其结构鉴定由电喷雾电离质谱(ESI-MS)可知化合物的分子离子峰为647.5，结合其核磁共振碳谱(13C-NMR) 以及氢谱(1H-NMR)得出分子式为C36H540一从氢谱上看，甲基区有7个甲基氢信号，为三萜化合物角 甲基特征信号；不饱和区具有烯烃信号，糖基质子特征区3.0-4.2范围内，化学位移5 4.173 (双峰，偶合 常数〗=7.73)为e-糖基三萜皂苷。DEPT (无畸变极化转移增强)-135、 DEPT-90和13C-NMR可以看山分 子有36个碳原子，其中7个CH3, 9个CH2， 10个CH和10个C。低场部分的碳信号198.804为a , p-不 饱和酮基的特征信号，为苷元C11;羧基特征信号179.580是苷元未成盐的羧基信号，为C30;羧基信号 171.863则为糖基部分C6'，与30位羧基相比，糖基羧基因成盐而向髙场移动。季碳峰166.166是烯键季 碳特征信号，为C13; 123.164是烯键叔碳特征信号，为C12。次甲基105.579是糖基上p构型端基碳的 特征信号，为C1';次甲基峰87.760是3位叔碳信号，与甘草次酸相比，因成苷后的苷化位移作用而移向 低场，由于糖基化作用达到9，表明0-C-3键为p构型。Cll (198.804)、 C12 (123.164)、 C13 ( 166.166) 与分子中含有a， p-不饱和酮基一致，其中烯键信号C12 (123.164)、 C13 (166.166)为18a-齐敦果烯的特 征信号(18(3-齐敦果烯的特征信号在低场4 5， C12 (127.399)、 C13 (170.001))，说明样品为18a-齐敦 果烷的衍生物。次甲基信号76.718、 74.789、 73.993、 72.094为吡喃葡萄糖C2' C5'的CHOH特征信号， 加之羧基信号171.863和p型端基碳信号105.579，说明糖基为P-D-吡喃葡萄糖。通过二维核磁HMBC (异 核多键相关谱)，HSQC (异核单量子相干谱)，H-HCOSY (氢氢化学位移相关谱)进一步确认，确定了该 化合物为3-p-0 (p-D-枇喃葡萄糖醛酸基)-18a-甘草次酸，命名为异甘草次苷。经系统文献检索发现该化 合物为一新化合物，属三萜皂苷类化合物。
图1为异甘草次苷的电喷雾质谱图。图2为异甘草次苷的'H- NMR谱图。 图3为异甘草次苷的BC-NMR谱图。 图4为异甘草次苷的DEPT谱图。本发明所述化合物的制备方法将18 a -甘草酸溶于水中，配成浓度0. 02 -200g/L、 pH值在3-10的底物溶液，加入P -葡萄糖醛酸 苷酶制剂后于温度10-8(TC的条件下反应0.2-130h，反应结束后，用止丁醇萃取，减压蒸馏得到异甘草次 苷粗品，经大孔吸附树脂分离纯化、重结晶得到异甘草次苷。本发明所述的异甘草次苷，按常规的甜度测量方法进行测量，其甜度大大超过大然甘草酸，可作为天 然甜味剂用于食品中。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步说明，但其并不限制本发明的保护范围。
实施例1在50mL的具塞三角瓶中，加入10mL的20g/L的18a-甘草酸溶液(pH6.0)，再加入0.2g猪肝酶 粉(含e-葡萄糖醛酸苷酶)，盖紧磨口瓶塞，在50"(〕、 120r/min的水浴摇床上反应24h。反应结束后， 调节反应液pH为2-3，用正T醇萃取2-3次，合并萃取液，旋转蒸发除去有机溶剂，得0.16g粗异甘草次 苷，HPLC法测定纯度为72% 。实施例2根据实施例1制备的粗异甘草次苷，用85%的冰醋酸重结晶3-5次，得到0.12g异甘草次苷，其甜度 约为蔗糖的900倍。其^-NMR和'3C-NMR信号的归属(DMSO-d6，内标TMS， 303 K)如下表No.ScsHNo.scsH138.5330.960， 2.4451931.5701.416， 1.525225.6451.59， 1.7532041.755-387.7603.057 (dd， 1H， J=4.3Hz ，2128.5621.783， 1.384J=11.6Hz)439.187-2235.4571.509， 1.261 (d, lH,J=9.9Hz)554.4000.748 (s, 1H)2327.6820.982 (s， 3H)617.1821.635， 1.345 (d, lH,J=10.9Hz)2416.6450.772 (s, 3H)733.3091.623， 1.4202516.5561.103 (s， 3H)843.504-2618.3641.043 (s， 3H)960.0302.279 (s, 1H)2720.5001.328 (s， 3H)1036.314-2815.8220.648 (s， 3H)11199.082-2920.7631.162 (s, 3H)12123.1645.335 (s, 1H)30179.580-13166.166-r105.5794.173 (d， 1H， J=7.73Hz)1444,825-2,73.9932.9731526.4291.894， 1.2103,76.7183.1261636.8331.635， 1.34(d， 1H, J=10.9Hz)4,72.0943.1491735.2465,74.7893.367 (d， J = 8.3Hz)1839.6772.267(d， 1H， J=l 1.9Hz)6,171.863-
权利要求
1.化合物异甘草次苷，它是五环三萜类化合物，分子式为C36H54O10，化学名为18α-氢-20β-羧基-11-氧-正齐敦果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸，其化学结构式为
2. 权利要求1中所述化合物的制备方法，其特征在干将18a-甘草酸溶于水中，配成浓度0.02 -200g/L、 pH值在3-10的底物溶液，加入e -葡萄糖醛酸苷酶制剂后于温度10-8(TC的条件下反应0. 2-130h，反应结 束后，用正丁醇萃取，减压蒸馏得到异甘草次苷粗品，经大孔吸附树脂分离纯化、重结晶得到异甘草次苷。
3. 权利要求1中所述化合物的用途，其特征在于异甘草次苷作为甜味剂使用。
全文摘要
本发明公开了一种五环三萜类化合物异甘草次苷及其制备和用途，化学名为18α-氢-20β-羧基-11-氧-正齐敦果烷-12-烯-3β-基-2-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸。其制备方法是在一定浓度和pH值的18α-甘草酸溶液中，加入酶制剂后于适宜的条件下反应，生成异甘草次苷。反应结束后，用正丁醇萃取，大孔吸附树脂分离纯化、重结晶的方法得到异甘草次苷。本发明公开异甘草次苷是一种新化合物，具有显著的甜味特性。
文档编号A23L1/236GK101113161SQ20061016130
公开日2008年1月30日 申请日期2006年12月20日 优先权日2006年12月20日
发明者卢定强, 晖 李, 欧阳平凯, 肖洁瑾 申请人:南京工业大学