专利名称：：人rhbdd1基因的用途及其相关药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物
技术领域：
，更具体地涉及人RHBDDl基因的用途及其相关药物。
背景技术：
：RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是生物进化中一项保守的防御机制，于1998年首先发现(FireA,XuS,MontgomeryMK,KostasSA,DriverSE,MelloCC.Potentandspecificgeneticinterferencebydouble-strandedRNAinCaenorhabditiselegans.Nature.1998；391(6669):806-11.)其本质是由双链RNA介导的与之同源的mRNA特异性降解，进而抑制相应基因表达的过程。由于其基因抑制效果确切，具有级联式放大效应和高穿透性等特点，因而在恶性肿瘤的研究中具有很好的应用前景(AngajiSA,HedayatiSS,PoorRH,MadaniS,PoorSS,PanahiS.ApplicationofRNAinterferenceintreatinghumandiseases.JGenet.2010；89(4):527-37.)。研究表明，长度为21_23nt的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.)。因此，通过适当的技术生产特异性的siRNA并使其能有效地作用于靶基因的mRNA,即能实现基因沉默的目的。将外源性DNA导入真核细胞并进行转录和表达的方式主要包括非病毒载体系统的细胞转染和以病毒为载体的细胞感染方式。慢病毒载体是在人免疫缺陷病毒(HIV-1)基础上改造成的病毒载体系统，能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒介导的基因表达或RNAi作用持续且稳定，目的基因可整合到宿主细胞基因组中，随细胞基因组的分裂而分裂，并能有效感染并整合到非分裂细胞中。鉴于慢病毒载体介导的外源基因可以在动物体内实现长期稳定的表达，同时不引起明显的免疫反应，慢病毒载体已经成为研究基因功能的强有力的工具(HeroldMJ,vandenBrandtJ,SeiblerJ,ReichardtHM.1nducibleandreversiblegenesilencingbystableintegrationofanshRNA-encodinglentivirusintransgenicrats.ProcNatlAcadSciUSA.2008Nov25；105(47):18507-12.)。Rhomboid家族包含多种膜蛋白，是一类丝氨酸蛋白酶，在原核生物和真核生物之间广泛保守，发挥着重要的调节功能(KooninEV，MakarovaKS,RogozinIB，DavidovicL，LetellierMC，PellegriniL.Therhomboids:anearlyubiquitousfamilyofintramembraneserineproteasesthatprobablyevolvedbymultipleancienthorizontalgenetransfers.GenomeBiol.2003；4(3):R19.)。目前，对果妮Rhomboid蛋白酶的作用已经研究的比较深入。果蝇Rhomboidsl-3具有调节EGF受体信号，控制生长和发育的功能(LeeJR,UrbanS，GarveyCF，FreemanM.RegulatedintracellularligandtransportandproteolysiscontrolEGFsignalactivationinDrosophila.Cell.2001；107(2):161-71.UrbanS，LeeJRiFreemanM.Drosophilarhomboid-1definesafamilyofputativeintramembraneserineproteases.Cell.2001；107(2):173-82.)。果蝇Rhomboid7被发现与精子发生有关(McQuibbanGA，LeeJR,ZhengL，JuusolaM，FreemanM.Normalmitochondrialdynamicsrequiresrhomboid_7andaffectsDrosophilalifespanandneuronalfunction.CurrBiol.2006；16(10):982-9.)。酵母的Rhomboid蛋白酶被发现在线粒体膜重塑中发挥重要功能(McQuibbanGA，SauryaS，FreemanM.Mitochondrialmembraneremodellingregulatedbyaconservedrhomboidprotease.Nature.2003；423(6939):537-41.)。脊椎动物的Rhomboid基因可分为三类:(1)活性的细胞Rhomboid，包括RHBDL2、RHBDL4和RHBDDl；(2)无活性的细胞Rhomboid，包括RHBDD5和RHBDD6；(3)线粒体Rhomboid,又称为PARL(UrbanS.Rhomboidproteins!conservedmembraneproteaseswithdivergentbiologicalfunctions.GenesDev.2006；20(22):3054-68.)。这些蛋白酶参与重要的信号途径，比如，RHBDL2具有裂解血栓调节蛋白(thiOmbomodulin)和受体酪氨酸激酶配体(ephrinB3)的作用(Lohi0，UrbanS，FreemanM.Diversesubstraterecognitionmechanismsforrhomboids;thrombomoduliniscleavedbyMammalianrhomboids.CurrBiol.2004；14(3):236-41.PascallJC，BrownKD.1ntramembranecleavageofephrinB3bythehumanrhomboidfamilyprotease,RHBDL2.BiochemBiophysResCommun.2004Apr23；317(1):244-52.)。线粒体内膜PARL与细胞凋亡相关(GottliebE.0PAlandPARLkeepalidonapoptosis.Cell.2006；126(I):27-9.CipolatS，RudkaT，HartmannD，CostaV，SerneelsL，CraessaertsK，MetzgerK，FrezzaC，AnnaertW，DfAdamioL，DerksC，DejaegereT，PellegriniL，DfHoogeR，ScorranoL，DeStrooperB.MitochondrialrhomboidPARLregulatescytochromecreleaseduringapoptosisviaOPAl—dependentcristaeremodeling.Cell.2006；126(1):163-75.HillRB，PellegriniLThePARLfamilyofmitochondrialrhomboidproteases.SeminCellDevBiol.2010；21(6):582-92.)。人RHBDDl基因(rhomboiddomaincontainingI)是一个新发现的Rhomboid家族成员，在睾丸中高表达，参与促凋亡蛋白BIK的裂解。在人胚肾细胞(HEK293T)中过表达或敲减RHBDDl基因，分别导致降低或增强的BIK介导的细胞凋亡。因此，RHBDDl作为一种丝氨酸蛋白酶调节BIK介导的细胞凋亡活性(WangY，GuanX,FokKLiLiS，ZhangXiMiaoS，ZongS，KoideSS,ChanHCiWangLAnovelmemberoftheRhomboidfamily，RHBDDl，regulatesBIK-mediatedapoptosis.CellMolLifeSc1.2008；65(23):3822-9.)。人RHBDDl基因的同源基因，mRHBDDl和rRHBDDl也发现在小鼠和大鼠的卵巢组织中高表达。而且，发现mRHBDDl通过调节精子的凋亡而参与调节精子发生过程(WangY，SongW，LiS，GuanX，MiaoS，ZongS，KoideSS,WangLGC-1mRHBDDlknockdownspermatogoniacellslosetheirspermatogeniccapacityinmouseseminiferoustubules.BMCCellBiol.2009；10:25.)。然而，人RHBDDl基因是否与肿瘤细胞的凋亡有关以及在肿瘤发生和进展中的作用尚无文献报道。故人RHBDDl基因在肿瘤中作用还有待于进一步的研究。
发明内容本发明的目的在于公开与人RHBDDl基因相关的治疗方法及药物。本发明第一方面，公开了将人RHBDDl基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物，或者将人RHBDDl基因用于制备肿瘤诊断药物。人RHBDDl基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容:其一，将人RHBDDl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其二，将人RHBDDl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将人RHBDDl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标具体是指:将人RHBDDl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞产生RNA干扰作用的靶标，从而能降低肿瘤细胞人RHBDDl基因的表达水平。所述将人RHBDDl基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指JfARHBDDl基因作为作用对象对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进人RHBDDl基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如之后所述的人RHBDDl基因小分子干扰RNA即是以人RHBDDl基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤细胞增殖作用的药物。诸如抗体药物，小分子药物等也可将RHBDDl基因作为作用对象。所述将人RHBDDl基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将人RHBDDl基因表达产物作为一项肿瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。所述的肿瘤可以为其肿瘤细胞的增殖与人RHBDDl基因的表达相关的任一种肿瘤，更进一步的，为一种恶性肿瘤，例如选自:肝癌、舌鳞状细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌和肺癌。所述肿瘤治疗药物可以为小分子化学药，抗体药，也可以为核酸类药物。进一步的，所述肿瘤治疗药物能降低人RHBDDl基因的表达水平从而抑制肿瘤细胞的增殖。采用前述肿瘤治疗药物治疗肿瘤的方法，主要是通过降低人RHBDDl基因的表达水平抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗目的的。具体的，治疗时，将能有效降低人RHBDDl基因表达水平的物质给药于患者。进一步的，所述的能有效降低人RHBDDl基因表达水平的物质，包括能够特异性沉默人RHBDDl基因表达的小分子干扰RNA(siRNA)。该小分子干扰RNA(siRNA)可以起到特异性沉默肿瘤细胞中内源RHBDDl基因的表达的作用。进一步的，所述小分子干扰RNA以选自SEQIDNO:1_33之任一的序列作为特异性沉默人RHBDDl基因表达的靶点序列。所述小分子干扰RNA以选自SEQIDNO:1_33之任一的序列作为特异性沉默人RHBDDl基因表达的靶点序列是指:该小分子干扰RNA能与SEQIDNO:1_33中的任一种序列所编码的mRNA片段特异性结合，并特异性沉默人RHBDDl基因的表达。进一步的，所述能够特异性沉默人RHBDDl基因表达的小分子干扰RNA(siRNA)经由慢病毒载体表达。具体而言，这个过程包括:将编码所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的DNA片段克隆入慢病毒载体获得人RHBDDl基因干扰慢病毒载体，进而利用该人RHBDDl基因干扰慢病毒载体经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒后，感染肿瘤细胞并最终表达所述siRNA。人RHBDDl基因干扰慢病毒载体为将编码所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的DNA片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人RHBDDl基因小分子干扰RNA。进一步的，所述的慢病毒载体可选自:pLK0.1-purο,pLK0.1-CMV-tGFP,pLK0.1-puro-CMV-tGFP,pLK0.1-CMV-Neo,pLK0.l_Neo、pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.1-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.l-puro-CMV-TagRFP、pLK0.l-puro-CMV-TagFP635,pLK0.1-puro-UbC-TurboGFP、pLK0.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG_3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任一种慢病毒载体，本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体。慢病毒载体可在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒。本发明第二方面，公开了一种分离的人RHBDDl基因小分子干扰RNA(siRNA)靶标片段，其序列为SEQIDNO:1-33中任意一条序列。所述分离的人RHBDDl基因小分子干扰RNA(siRNA)靶标片段可应用于人RHBDDl基因小分子干扰RNA的筛选与制备。本发明第三方面，公开了一种人RHBDDl基因小分子干扰RNA(siRNA)，能够特异性沉默人RHBDDl基因的表达。所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA以选自SEQIDNO:1-33之任一的序列作为特异性沉默人RHBDDl基因表达的靶点序列。进一步的，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQIDN0:l_33中之任一序列编码的RNA。所述正义RNA片段和反义RNA片段存在于两条不同的RNA链上或者存在于同一条RNA链上。所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15_27个核苷酸；较佳的，长度均为19-23个核苷酸；最佳的，长度均为19、20或者21个核苷酸。进一步的，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，包括正义RNA片段、茎环片段和反义RNA片段，正义RNA片段和反义RNA片段中间由茎环片段分隔；其中，正义RNA片段和反义RNA片段互补，正义RNA片段的序列选自SEQIDNO:1_33之任一。所述茎环片段结构包括6个或9个碱基。进一步的所述茎环片段的序列选自以下任一:UUCAAGAGA、AUG、CCC,UUCG,CCACC,CTCGAG,AAGCUU,CCACACC。本发明具体列举了以UUCAAGAGA为茎环。如实施例列举的，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的序列为SEQIDNO:34:GCUGGGAUUCU腳UGGACUAUUCAAGAGAUA⑶CCAACAAGAAUCCCAGC。本发明第四方面，公开了一种人RHBDDl基因干扰核酸构建体，包含编码前述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达前述人RHBDDl基因小分子干扰RNA。所述的人RHBDDl基因干扰核酸构建体可以是将编码前述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入已知载体获得。进一步的，所述人RHBDDl基因干扰核酸构建体为人RHBDDl基因干扰慢病毒载体，为将编码所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人RHBDDl基因小分子干扰RNA。所述慢病毒载体可以选自:pLK0.1-purο,pLK0.1-CMV-tGFP,pLK0.1-puro-CMV-tGFP,pLK0.1-CMV-Neo,pLK0.l_Neo、pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.1-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.l-puro-CMV-TagRFP、pLK0.l-puro-CMV-TagFP635、pLK0.l-puro-UbC-TurboGFP、pLK0.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG_3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任一。本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体构建的人RHBDDl基因干扰核酸构建体,命名为pGCSIL-GFP-RHBDD1-shRNA。进一步的，编码所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的基因片段的序列含有SEQIDNO:1-33中之任一序列及其互补序列。本发明的人RHBDDl基因小分子干扰RNA可用于抑制肿瘤细胞的增殖，进一步地可以用作治疗或诊断肿瘤的药物或制剂。人RHBDDl基因干扰核酸构建体则可用于制备所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA。当用作治疗肿瘤的药物或制剂时，是将安全有效量的人RHBDDl基因小分子干扰RNA施用于哺乳动物。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。本发明第五方面，公开了一种人RHBDDl基因干扰慢病毒，由前述人RHBDDl基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。该慢病毒可感染肿瘤细胞并产生人RHBDDl基因小分子干扰RNA，从而抑制肿瘤细胞的增殖。本发明第六方面，还公开了一种药物组合物，含有治疗有效量的人RHBDDl基因小分子干扰RNA或人RHBDDl基因干扰慢病毒。进一步的，所述药物组合物含有I99wt%如前所述的人RHBDDl基因小分子干扰RNA或人RHBDDl基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在制备这些组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可以胶囊或药囊形式存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可以是固体、半固体或液体材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、灭菌注射溶液等。合适的赋形剂的例子包括:乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、等。制剂还可包括:湿润剂、乳化剂、防腐剂(如羟基苯甲酸甲酯和丙酯)、甜味剂等。综上所述，本发明设计了针对人RHBDDl基因的33个RNAi靶点序列，构建相应的RHBDDlRNAi载体，其中编码序列SEQIDNO:21的RNAi载体pGCSIL-GFP-RHBDDl-shRNA能够显著下调RHBDDI基因在mRNA水平和蛋白水平的表达。使用慢病毒(lentivirus，简写为Lv)作为基因操作工具将针对RHBDDl基因的shRNA序列高效导人肝癌H印G2细胞、人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人胰腺癌Panc-1细胞、人胃癌SGC7901细胞和人肺癌％D细胞，降低RHBDDl基因的表达水平，显著抑制上述肿瘤细胞的增殖能力。因此慢病毒介导的RHBDDl基因沉默是恶性肿瘤潜在的临床非手术治疗方式。本发明提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人RHBDDl基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中RHBDDl基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。图1表示pGCSIL-GFP质粒DNA图谱图2表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人肝癌H印G2、人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人胰腺癌Panc-1细胞、人胃癌SGC7901细胞和人肺癌％D细胞5天后，与对照慢病毒侵染组相比，RHBDDlmRNA的表达水平显著降低。图3表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞4天后，显著抑制细胞增殖。图4表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人肝癌H印G2细胞5天后，显著抑制细胞增殖。图5表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人肺癌％D细胞5天后，显著抑制细胞增殖。图6表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人乳腺癌MCF-7细胞5天后，显著抑制细胞增殖。图7表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人胃癌SGC7901细胞5天后，显著抑制细胞增殖。图8表示RHBDDl-shRNA慢病毒侵染人胰腺癌Panc-1细胞5天后，显著抑制细胞增殖。图9使用RHBDDl抗体在肿瘤组织样本上的免疫组化检测结果a、b乳腺癌，d、c胰腺癌，e、f胃癌具体实施例方式本发明基于Rhomboid家族相关的研究,认为RHBDDl作为一个新发现的Rhomboid家族成员可能参与了恶性肿瘤的发生和发展。本发明涉及了一组针对人RHBDDl基因的小分子干扰RNA(siRNA)序列、RNA干扰载体和RNA干扰慢病毒。选取人RHBDDlmRNA编码区序列作为siRNA的靶位点，根据靶位点中连续的10-30(优选15-27，更优选19-23)个碱基序列设计siRNA靶点序列。通过基因克隆，构建表达上述siRNA的核酸构建体，包装表达上述siRNA的慢病毒。细胞实验证明，上述siRNA序列能够特异性沉默人肿瘤细胞中内源RHBDDl基因的表达。发明人发现，采用RNAi方法下调人RHBDDl基因的表达后可有效地抑制肿瘤细胞的增殖，这一研究成果表明RHBDDl基因是原癌基因，可作为肿瘤治疗的靶点。发明人进一步合成和测试了多种针对RHBDDl基因的siRNA，筛选出了可有效抑制RHBDDl的表达进而抑制人肝癌H印G2细胞、人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人胰腺癌Panc-1细胞、人胃癌SGC7901细胞和人肺癌％D细胞增殖和生长的siRNA，在此基础上完成了本发明。本发明提供了一系列干扰人RHBDDl基因的小干扰RNA(siRNA)序列，构建了可特异性沉默RHBDDl基因表达的慢病毒。本发明研究发现，针对人RHBDDl基因设计的小干扰RNA及表达人RHBDDlsiRNA的慢病毒，稳定并特异地下调RHBDDl基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞的增殖。本发明表明RHBDDl基因可促进肿瘤细胞生长，有望成为肿瘤早期诊断和治疗的靶点。而且，通过RNAi方式沉默RHBDDl基因的表达，可作为抑制肿瘤发展的有效手段。本发明的设计思路为:本发明通过如下方法来筛选获得一种人RHBDDl(NM_032276)基因RNAi慢病毒:从Genbank中调取人RHBDDl基因序列；预测siRNA位点；合成针对RHBDDl基因的有效的siRNA序列，两端含酶切位点粘端的双链DNAOligo;慢病毒载体双酶切后与双链DNAOligo连接，构建表达RHBDDl基因siRNA序列的RNAi质粒；将RNAi质粒和慢病毒包装需要的辅助载体(PackingMix,Sigma-aldrich公司)共转染人胚肾细胞293T,包装产生病毒颗粒，即可制得高效沉默RHBDDl基因的慢病毒。基于上述方法，本发明提供了33个干扰RHBDDl基因的有效靶点(具体如SEQIDNO1-33所示)，构建了特异干扰人RHBDDl基因的慢病毒。同时本发明还公开一种人RHBDDl基因的RNAi慢病毒及其制备与应用。本研究发现，利用慢病毒介导的RNAi方法，在降低肿瘤细胞中内源性RHBDDl基因的表达后，可以有效抑制肿瘤细胞的增殖和生长。本研究表明，RHBDDl基因是一个原癌基因，可促进肿瘤细胞增殖，在肿瘤发生和发展中具有重要的生物学功能，RHBDDl基因可以为肿瘤治疗的靶标，慢病毒介导的RHBDDl基因特异性沉默可作为肿瘤治疗的一种新手段。下面结合实施例进一步阐述本发明。应理解，实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照常规条件，如[美]Sambrook.J等著；黄培堂等译。分子克隆试验指南，第三版。北京:科学出版社2002中所述的条件或者制造商建议的条件进行或配置。实施例1:针对人RHBDDl基因RNAi慢病毒的制备1.筛选针对人RHBDDl基因的有效的siRNA靶点从Genbank调取RHBDDl(NM_032276)基因信息；利用上海吉凯基因化学技术有限公司的设计软件Genechem设计针对RHBDDl基因的有效的siRNA靶点。在RHBDDl基因的编码序列(CDS)区域内，每隔一个碱基起始获得33个碱基的序列，表I列出了其中33条针对RHBDDl基因的有效siRNA靶点序列。表I靶向于人RHBDDl基因的siRNA靶点序列[qq73]权利要求1.人RHBDDl基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤为其肿瘤细胞的增殖与人RHBDDl基因的表达相关的任一种肿瘤。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤选自:肝癌、舌鳞状细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌和肺癌。4.一种分离的人RHBDDl基因小分子干扰RNA靶标片段，其序列为SEQIDN0:l_33中任意一条序列。5.一种人RHBDDl基因小分子干扰RNA，能够特异性沉默人RHBDDl基因的表达，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA以选自SEQIDNO:1_33之任一的序列作为特异性沉默人RHBDDl基因表达的靶点序列。6.如权利要求4所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQIDNO:1_33中之任一序列编码的RNA。7.如权利要求6所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15-27个核苷酸。8.如权利要求6所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段中间由茎环片段分隔。9.如权利要求8所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述茎环片段的序列选自以下任一:UUCAAGAGA、AUG、CCC、UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU、CCACACC。10.如权利要求4所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的序列为SEQIDNO:34。11.一种人RHBDDl基因干扰核酸构建体，包含编码权利要求5-10任一权利要求所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达人RHBDDl基因小分子干扰RNA。12.如权利要求11所述人RHBDDl基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述人RHBDDl基因干扰核酸构建体为人RHBDDl基因干扰慢病毒载体。13.如权利要求12所述人RHBDDl基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述慢病毒载体选自:pLK0.1-purο,pLK0.1-CMV-tGFP、pLK0.l-puro-CMV-tGFP、pLK0.1-CMV-Neo,pLK0.l-Neo、pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.l-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.1-puro-CMV-TagRFP,pLK0.l-puro-CMV_TagFP635、pLK0.1-puro-UbC-TurboGFP,pLK0.l-puro-UbC-TagFP635>pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG-3xLac0>pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T_DEST、pLenti6-GW/U6_laminshrna、pcDNAl.2/V5-GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5_DEST、pGCSIL-GFP或pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ中的任一。14.一种人RHBDDl基因干扰慢病毒，由权利要求11_13任一权利要求所述人RHBDDl基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。15.一种药物组合物，含有治疗有效量的权利要求5-10任一权利要求所述人RHBDDl基因小分子干扰RNA或权利要求14所述人RHBDDl基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。16.如权利要求15所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗肿瘤，所述的肿瘤为其肿瘤细胞的增殖与人RHBDDl基因的表达相关的任一种肿瘤。17.如权利要求16所述药物组合物，其特征在于，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自肝癌、舌鳞状细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌和肺癌之任一。全文摘要本发明公开了人RHBDD1基因的用途及其相关药物。本发明公开了人RHBDD1基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明还进一步构建了人RHBDD1基因小分子干扰RNA、人RHBDD1基因干扰核酸构建体、人RHBDD1基因干扰慢病毒并公开了他们的用途。本发明提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人RHBDD1基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中RHBDD1基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。文档编号C12N15/113GK103157115SQ20121000512公开日2013年6月19日申请日期2012年1月10日优先权日2011年12月19日发明者朱向莹,韩海雄,孙琴,谭畅,杨敏,高博,沈浩,金杨晟,瞿红花,曹跃琼申请人:上海吉凯基因化学技术有限公司