含有蛋白酶抑制物的组合物、包含前者的组合物和用于产生和使用前者的方法

含有蛋白酶抑制物的组合物、包含前者的组合物和用于产生和使用前者的方法
【专利摘要】本发明提供了用于口服施用治疗性蛋白的方法和组合物、改善的蛋白酶抑制物制备物，用于产生前者的方法，和包含前者的组合物。
【专利说明】含有蛋白酶抑制物的组合物、包含前者的组合物和用于产 生和使用前者的方法
[0001] 本申请要求2012年2月1日提交的美国临时申请61/632, 868和2012年3月6 日提交的美国临时申请61/634, 753的权益，所述文献通过引用方式完整并入本文。

【技术领域】
[0002] 本申请提供了用于口服施用治疗性蛋白的方法和组合物、改善的蛋白酶抑制物制 备物，用于产生所述组合物的方法，和包含所述组合物的组合物。

【背景技术】
[0003] 基于蛋白质/肽的药物一般易在胃肠道中降解和/或不被从小肠以生物活性形式 有效吸收到血流中。正在开发用于基于蛋白质的药物（如胰岛素）的口服递送制剂（Ziv等 人，1994 ;Nissan 等人，2000, Kidron 等人，2004, Eldor 等人，2010A，Eldor 等人，2010B)。 一种此类口服胰岛素产品安排了 II期试验的测试并且目前正在就IND状态评审。
[0004] 源自大豆（Glycine max)的胰蛋白酶抑制物可容易获得并且认为它们对人类消费 是安全的。所述胰蛋白酶抑制物包括由抑制胰蛋白酶的KTI (Kunitz胰蛋白酶抑制物）和 抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的BBI (Bowman-Birk抑制物）组成的SBTI (大豆胰蛋白酶抑 制蛋物）。这类胰蛋白酶抑制物可获自，例如美国Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.。用于制 备BBI的方法描述在，例如US7, 404, 973中。
[0005] 发明概述
[0006] 发明人已经发现在药物组合物中使用时，市售SBTI制备物产生高度可变的结果。 据推测，KTI和BBI的活性应当是各自优化的，以改善药物组合物的活性。为此目的，从商 业来源获得SBTI作为KTI和BBI的独立制备物。但是，发现这些制备物均遭受另一种活性 污染。使问题复杂化的是，发现制备物，特别是在大规模制备物中，BBI活性存在明显变异 性，这一点通过防止肠道酶降解蛋白质（例如胰岛素）的可变能力得到印证。
[0007] 因此，根据本申请描述的某些实施方案，开发了纯化SBTI的改进方法，其中将每 种产物按其自身规格制备达到高水平活性，并且使高分子量（MW)杂质的水平最小化。根据 其他实施方案，该方法避免使用PEG和第二色谱步骤并且以较高产率为特征。根据其他实 施方案，该产物特别合适用于药物组合物（例如口服施用治疗性蛋白的组合物）中。此外， 根据其他实施方案，KTI活动和BBI活性的完全分离允许更精确调节包含治疗性蛋白和BBI 和/或KTI的药物组合物的抗胰蛋白酶活性和抗胰凝乳蛋白酶活性，从而获得药物组合物 的更稳健和/或可重复更高的体内活性。
[0008] 进一步发现需要乳化剂以便利地制备含有肽/蛋白质的药物的大规模制备物。然 而，需要根据经验检验添加特定乳化剂是否可以在不影响制剂的口服功效情况下有效的防 止在基于油的制备物中的沉淀。所描述的其他实施方案因此涉及特定乳化剂或乳化剂组合 与改进的SBTI -起存在于含有治疗性肽和治疗性蛋白质的基于油的药物组合物中。
[0009] 术语"蛋白质"和"肽"在本文中互换使用。除非明确地指出限制，否则这两种术 语的任一个均不旨在对存在的氨基酸的数目加以限制。

【专利附图】

【附图说明】
[0010] 以下图是说明性例子并且不意在视为限制要求保护的发明。
[0011] 图I. SBTI纯化的流程图。A. SBTI中间生产。B.产生BBI和KTI的下游纯化。
[0012] 图2.DEAE琼脂糖凝胶?(S印harose?)柱分离的色谱图。在DEAE柱洗脱期间收集 0. 3L级分。
[0013] 图3.纯化的BBI和KTI的SDS-PAGE分析。进行电泳，扫描凝胶，并且使用 ImageScanner?III 和 ImageQuant?TL(二者均来自 General Electric)定量条带。将每毫 升1毫克（mg/ml)的样品加载于20% Phastgel?上。泳道1 :对照（老旧SBTI制备物）。 泳道2 :纯化的KTI，条带量=100%。泳道3 :纯化的BBI，下部条带量=89. 2%，上部条带 量=10. 8%。
[0014] 图4.使用改进的流程的小规模柱层析运行报道。方框、圆圈和三角形分别表示电 导率曲线、pH和OD 28tl。垂直轴：电导率曲线（毫西门子）、pH和OD28tl (任意单位）。水平轴： 柱体积和级分编号。
[0015] 图5.来自图4中所示层析的级分的20% SDS-PAGE。A.从左至右显示级分4-18 和汇集的级分5-11。"C"指现有技术的胰蛋白酶抑制物（Sigma-Aldrich目录号T9003)。 B.从右至左显示级分6-15,包括洗液+通流物（flowthrough) (W+FT)和标准物（来自大豆 (Glycine max)的胰蛋白酶抑制物；"ST"）。
[0016] 图6.仅额外纯化BBI的步骤的SDS-PAGE分析。ST =标准物（见图5图注），2mg/ ml。泳道：1 :来自柱的BBI汇集物。2 :30KDa过滤的渗透物。3 :1:40稀释的30KDa过滤的 截留物质。4:1:4稀释的5KDa浓缩的截留物质。
[0017] 图7.仅纯化BBI的lmg/ml终产物的SDS-PAGE分析。ST =标准物（见图5图 注），lmg/ml〇
[0018] 图8.下游纯化BBI和KTI的改进方案的流程图。
[0019] 图9.使用替代工序的柱层析运行报告。
[0020] 图10.相对于标准物（通道3)，使用替代工序（泳道1-2)纯化的BBI的两份重复 样品与标准物（泳道3)的SDS-PAGE分析。
[0021] 图11.各种乳化剂制剂的检验结果。泡沫形成评分为1-5,其中1表示无泡沫，5 表示因泡沫而见不到液体。对于混悬试验，数字1-5分别表示完全相分离；具有一些较大油 泡的部分相分离；小油泡，乳状稠度；起初无泡，稍后相分离；和稳定乳液。
[0022] 图12.施用含有多种乳化剂的口服胰岛素制剂后的血糖曲线。A.制剂A(左上）、 B(左下）、C(右上）和D(右下）。B.制剂E(左）和F(右）。
[0023] 图13.患者记录薄。A.血糖记录。B.调查问卷。
[0024] 图14.低血糖评审薄。对记录的低血糖的每次出现给予分数，同时根据经受的神 经低血糖症状或缺少神经低血糖症状给予额外的评分。症状的定义的例子如下：视觉，目艮 不能凝视、视力受损、复视；行为，不能睡眠、易怒、压力大、神经、"喜卧懒动（want to sit down and do nothing)";其他神经学，头晕、眩晕、虚弱、疲劳、犯困、行走或说话困难、反应 迟缓、运动技巧迟缓、丧失平衡；意识模糊，不能进行简单算术、感觉"寂寞"。即便也存在一 些神经低血糖症状，但如果存在充分警示即将发生低血糖的自主症状，则不给予分数。对需 要外部帮助以确认或处理这个事件，给予额外分数。
[0025] 图15.用各种剂量口服胰岛素治疗的受试者中的葡萄糖反应。
[0026] 实施方案的具体描述
[0027] 在一个方面，提供从大豆产品分离的BBI，根据在多种实施方案中通过十二烷基硫 酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)、亮蓝染色或成像仪定量法的测量，其中所述BBI是 至少85%纯的。在某些实施方案中，大豆产品是大豆粉。
[0028] 在又一个方面，提供从大豆粉分离的BBI，其中通过BCA (双喹啉-4-羧酸）测定法 测量，BBI的蛋白质含量大于95%。
[0029] 在又一个方面，提供从大豆粉分离的BBI，其中BBI含有小于0. 1 %的高分子量杂 质，例如，通过SDS-PAGE和成像仪定量法所测定。
[0030] 在其他实施方案中，分离的BBI中存在的抗胰蛋白酶活性对抗胰凝乳蛋白酶活 性的比率在1.5:1和1:1之间，包括1.5:1和1:1。在更具体的实施方案中，该比率可 以在1. 4:1-1. 1:1之间，包括1. 4:1和1. 1:1。在更具体的实施方案中，该比率可以在 1. 35:1-1. 2:1之间，包括1. 35:1和1. 2:1。在更具体的实施方案中，该比率可以是1. 28:1。
[0031] 除非另外指明，否则将本文中提及的抗胰凝乳蛋白酶活性利用具有40BTEE单位/ mg胰凝乳蛋白酶活性的胰凝乳蛋白酶测量，并且以每mg的测试蛋白抑制的胰凝乳蛋白酶 的mg数（mg抑制的胰凝乳蛋白酶/mg测试蛋白）表示。BTEE指N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙 酯（见Sigma-Aldrich第B6125号产品说明）。
[0032] 除非另外指明，否则将本文中提及的抗胰蛋白酶活性利用具有10, 000ΒΑΕΕ单位 /mg胰蛋白酶活性的胰蛋白酶测量，并且以每mg的测试蛋白抑制的胰蛋白酶的mg数（mg 抑制的胰蛋白酶/mg测试蛋白）表示。BAEE指Na-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯溶液（见 Sigma-Aldrich第B4500号产品说明）。例如，在常见的测定法中，一单位对应于将胰蛋 白酶活性减少一个苯甲酰基-L-精氨酸乙酯单位（BAEE-U)的抑制物的量。一个BAEE-U 是在ρΗ7· 6和25°C将253nm处吸光度增加0· 001/分钟的酶量。参见，例如，1(.0抑冊，1 Laskowski, 1966, J. Biol. Chem. 241:3955 ;和 Y. Birk, 1976, Meth. Enzymol. 45:700。
[0033] 本领域技术人员理解，在BBI与药物组合物的一种或多种其他组分混合之前，通 常对关于其蛋白质含量、杂质水平或效力的上述每种纯度要求进行评定。
[0034] 在再一个方面，提供从大豆粉分离的KTI3,其中所述KTI3是至少85%纯的，如在 多种实施方案中通过SDS-PAGE、亮蓝染色或成像仪定量法所测量。
[0035] 在又一个方面，提供从大豆粉分离的KTI3,其中KTI3的蛋白质含量大于95%，如 通过BCA测定法所测量。
[0036] 在又一个方面，提从大豆粉分离的KTI3,其中KTI3含有小于0. 1%的高分子量杂 质，例如，如通过SDS-PAGE和成像仪定量法所评定。
[0037] 本领域技术人员理解，在KTI3与药物组合物的一种或多种其他组分混合之前，通 常对关于其蛋白质含量、杂质水平或效力的上述每种纯度要求进行评定。
[0038] 在某些实施方案中，含有KTI3的药物组合物还包含在其与药物组合物的一种或 多种其他组分混合之前满足至少一种以上纯度要求的BBI。
[0039] 在某些实施方案中，配制上述的药物组合物用于口服施用。在更具体的实施方案 中，该药物组合物还包含抵抗胃中降解的包衣。在甚至更具体的实施方案中，该包衣是pH 敏感胶囊或可选地，是软明胶胶囊。
[0040] 在其他实施方案中，上述的药物组合物还包含达100千道尔顿的治疗性蛋白作为 活性成分活性成分。在其他实施方案中，活性成分活性成分是对人消化道中降解或失活敏 感的非蛋白质分子。
[0041] 在另一个实施方案中，提供一种包含基于油的液态制剂的口服药物组合物，其中 所述基于油的液态制剂包含达100千道尔顿（kDa)的治疗性蛋白、二价阳离子螯合剂和分 离的BBI。在其他实施方案中，该液态制剂基本上由达IOOkDa的治疗性蛋白、二价阳离子螯 合剂、分离的BBI和油组成。在其他实施方案中，该液态制剂基本上由达IOOkDa的治疗性 蛋白、二价阳离子螯合剂、分离的BBI、油和乳化剂组成。在其他实施方案中，该液态制剂基 本上由达IOOkDa的治疗性蛋白、二价阳离子螯合剂、分离的BBI、油和两种乳化剂组成。 [0042] 在另一个方面，提供一种包含基于油的液态制剂的口服药物组合物，其中所述基 于油的液态制剂包含达100千道尔顿（kDa)的治疗性蛋白、二价阳离子螯合剂和源自大豆 的BBI，其中所述液态制剂含有小于0. 05%的分子量大于30, 000的源自大豆的物质。
[0043] 在另一个方面，提供一种包含基于油的液态制剂的口服药物组合物，其中基于油 的液态制剂包含达IOOkDa的治疗性蛋白和二价阳离子螯合剂，并且所述液态制剂具有至 少抑制50mg胰凝乳蛋白酶/ml液态制剂的抗胰凝乳蛋白酶活性。在其他实施方案中，该液 态制剂具有至少抑制35、40、45、55或60mg胰凝乳蛋白酶/ml液态制剂的抗胰凝乳蛋白酶 活性。在另外的实施方案中，该液态制剂具有抑制35-70、40-70、45-70、50-70或40-60mg 胰凝乳蛋白酶/ml液态制剂的抗胰凝乳蛋白酶活性。在其他实施方案中，该液态制剂还包 含至少抑制25mg胰蛋白酶/ml液态制剂的抗胰蛋白酶活性。在其他实施方案中，该液态制 剂还包含至少抑制30、35、40、45或50mg胰蛋白酶/ml液态制剂的抗胰蛋白酶活性。或者， 该液态制剂还包含抑制25-50、30-50、35-50、25-40或25-45mg胰蛋白酶/ml液态制剂的抗 胰蛋白酶活性。
[0044] 在另一个方面，提供一种用于制备药物组合物的方法，包括以下步骤：(a)提供 分离的BBI、达100千道尔顿的治疗性蛋白和二价阳离子螯合剂的制备物；和（b)将所述 分离的BBI、治疗性蛋白和螯合剂混合至基于油的液态制剂中。可以将分离的BBI的鉴定 (identity)、纯度和效力的本文所述每个实施方案并入该方法。此外，可以将其他成分的和 可以存在的额外成分的本文所述每个实施方案并入该方法。在其他实施方案中，提供通过 这种方法制备的药物组合物。
[0045] 在另一个方面，提供用于制备药物组合物的方法，包括将分离的BBI、达100千道 尔顿的治疗性蛋白和二价阳离子螯合剂混合至基于油的液态制剂中的步骤。可以将分离的 BBI的鉴定、纯度和效力的本文所述每个实施方案并入该方法。此外，可以将其他成分的和 可以存在的额外成分的本文所述每个实施方案并入这种方法。在其他实施方案中，提供通 过这种方法制备的药物组合物。
[0046] 如本文所用的"液体"指在20°C的粘度为1-1000 (包含1和1000)毫帕斯卡秒的 组合物。例如，鱼油在环境条件下是液体。该术语包括基于油的溶液、悬液及其组合。
[0047] 如本文所用的"分离的'?ΒΙ指相对于其他组分而言富含BBI的制备物。在更具体 的实施方案中，BBI指Bowman-Birk抑制物；Uniprot编号P01055 [2013年1月28日获得的 数据库])。
[0048] BBI的代表性前体序列是：
[0049] MVVLKVCLVL LFLVGGTTSA NLRLSKLGLL MKSDHQHSND
[0050] DESSKPCCDQ CACTKSNPPQ CRCSDMRLNS CHSACKSCIC
[0051] ALSYPAQCFC VDITDFCYEP CKPSEDDKEN(SEQ ID NO:1)〇
[0052] 这110个残基当中，残基1-19是信号肽，20-39是前肽并且成熟链BBI链由残基 40-110(71 个 AA)组成。
[0053] 在多个实施方案中，在所述的方法和组合物中利用的BBI的制备物是至少85%、 90 %、92 %、94 %或95 %纯的，如通过SDS-PAGE、亮蓝染色或成像仪定量法（例如根据本文 所述的方案）所评定。在药物组合物的情况下，该值涉及在BBI与药物组合物的一种或多 种其他组分混合之前BBI的特征。在可选实施方案中，可以利用SDS-PAGE和银染法，任选 地随后利用成像仪定量法。
[0054] 在其他实施方案中，分离的881具有至少0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3或1.411^抑 制的胰凝乳蛋白酶/mg抑制物的抗胰凝乳蛋白酶活性。在其他实施方案中、抗胰凝乳蛋白 酶活性处于 〇· 8-1. 8、0· 9-1. 8、I. O-L 8、I. 1-1. 8、L 2-1. 8、L 3-1. 8 或 L 4-1. 8mg 抑制的胰 凝乳蛋白酶/mg抑制物的范围内。在更具体的实施方案中，该活性是0. 8-1. 8mg抑制的胰 凝乳蛋白酶/mg抑制物。在其他实施方案中，该活性处于0. 8-1. 5mg抑制的胰凝乳蛋白酶/ mg抑制物的范围内。在药物组合物的情况下，该值涉及在BBI与药物组合物的一种或多种 其他组分混合之前BBI的特征。
[0055] 在多种实施方案中，BBI制备物含有5 %或更少的KTI，如通过SDS-PAGE、亮蓝染色 或成像仪定量法（根据本文所述的方案）所评定。在可选实施方案中，可以利用SDS-PAGE 和银染法。
[0056] 在其他实施方案中，分离的BBI具有至少抑制0. 8、0. 9、1. 0、1. 1、1. 2、1. 3或I. 4mg 胰凝乳蛋白酶/mg抑制物的抗胰凝乳蛋白酶活性。在其他实施方案中，抗胰凝乳蛋白酶活 性为抑制 〇· 8-1. 8、0· 9-1. 8、I. 0-1. 8、I. 1-1. 8、1. 2-1. 8、1. 3-1. 8 或 1. 4-1. 8mg胰凝乳蛋白 酶/mg抑制物。在更具体的实施方案中，该活性是抑制0. 8-1. 8mg胰凝乳蛋白酶/mg抑制 物。在其他实施方案中，该活性为抑制0.8-1. 5mg胰凝乳蛋白酶/mg抑制物。在药物组合 物的情况下，该值涉及在BBI与药物组合物的一种或多种其他组分混合之前BBI的特征。
[0057] 在多种实施方案中，BBI制备物含有5 %或更少的KTI，如通过SDS-PAGE、亮蓝染色 或成像仪定量法（根据本文所述的方案）所评定。在可选实施方案中，可以利用SDS-PAGE 和银染法。
[0058] 在更具体的实施方案中，如本文所用的KTI指KTI3(Uniprot编号P01070 ;2013年 1月3日获得数据库）。KTI3的代表性前体序列是：
[0059] MKSTIFFLFL FCAFTTSYLP SAIADFVLDN EGNPLENGGT YYILSDITAF
[0060] GGIRAAPTGN ERCPLTVVQS RNELDKGIGT IISSPYRIRF IAEGHPLSLK
[0061] FDSFAVIMLC VGIPTEffSVV EDLPEGPAVK IGENKDAMDG
[0062] WFRLERVSDD EFNNYKLVFC PQQAEDDKCG DIGISIDHDD
[0063] GTRRLVVSKN KPLVVQFQKL DKESLAKKNH GLSRSE(SEQ ID N0:2)〇
[0064] 以上序列当中，残基1-24是信号肽，206-216是前肽，成熟KTI链由残基 25-205(181 个 AA)组成。
[0065] 在其他实施方案中，BBI制备物的蛋白质含量大于95%，通过BCA测定法测量（例 如使用Micro BCA蛋白质分析试剂盒[目录号#23225，Thermo Scientific Rockford，IL])。 在药物组合物的情况下，该值涉及它与药物组合物的一种或多种其他组分混合之前的特 征。在其他实施方案中，BBI制备物含有小于0.1%的1?分子量杂质（换而言之，分子量大 于30, 000的物质）。在其他实施方案中，BBI已经在不使用聚乙二醇（PEG)的情况下分离。
[0066] 在其他实施方案中，在所描述的方法和组合物中的分离的BBI是重组BBI，例如已 经工程化以表达BBI的微生物（如细菌）产生并随后分离的BBI。在另外的实施方案中， BBI是合成性BBI。合成性BBI的例子是已经在无细胞装置如肽合成仪中产生的BBI。肽合 成仪，例如自动肽合成仪，是本领域熟知的并且是商业可获得的。本文还提供包含合成BBI 的药物组合物。本文还提供包含合成性BBI的药物组合物。
[0067] 在某些实施方案中，描述的BBI是所描述的方法和组合物中的唯一蛋白酶抑制 物。尽管较低效力的SBTI需要额外的蛋白酶抑制物，例如抑蛋白酶肽（aprotinin)，以有效 地在人消化道中保护某些治疗性蛋白，但是认为描述的分离的BBI能够减少在这个方面对 额外蛋白酶抑制物的需求。
[0068] 额外的蛋白酶抑制物
[0069] 在某些实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的基于油的液态制剂还包含 不同于分离的BBI的胰蛋白酶抑制物。在其他实施方案中，在所描述的方法和组合物中利 用的基于油的液态制剂还包含不同于分离的KTI3的胰蛋白酶抑制物。根据本申请公开的 内容，本领域技术人员理解，可以利用多种胰蛋白酶抑制物。在胰蛋白酶抑制物是蛋白质的 情况下，大小一般将达l〇〇kDa。
[0070] 如本文所用，术语"胰蛋白酶抑制物"指能够抑制胰蛋白酶对底物的作用的任何物 质。可以使用本领域熟知的测定法测量某物质抑制胰蛋白酶的能力。
[0071] 本领域已知的一些胰蛋白酶抑制物对胰蛋白酶特异，而其他则抑制胰蛋白酶和其 他蛋白酶如胰凝乳蛋白酶。胰蛋白酶抑制物可以源自动物来源或植物来源：例如大豆、玉 米、利马豆和其他豆类、南瓜（squash)、向日葵、牛和其他动物的胰和肺、鸡和火鸡的卵清、 基于大豆的婴儿配方食品和哺乳动物血液。胰蛋白酶抑制物也可以是微生物来源的：例如， 抗痛素（antipain);见，例如，H. Umezawa, 1976, Meth. Enzymol. 45, 678。胰蛋白酶抑制物也 可以是精氨酸模拟物或赖氨酸模拟物或其他合成性化合物：例如芳基胍、苯甲脒、3, 4-二 氯异香豆素、二异丙基氟磷酸酯、甲磺酸加贝酯或苯基甲磺酰氟。如本文所用，精氨酸模拟 物或赖氨酸模拟物是能够与胰蛋白酶的P 1袋结合和/或干扰胰蛋白酶活性部位功能的化 合物。
[0072] 在某些实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的额外胰蛋白酶抑制物选 自：利马豆胰蛋白酶抑制物、抑蛋白酶肽（又称作胰腺胰蛋白酶抑制物或碱性胰腺胰蛋白 酶抑制物[ΒΡΤΙ] ;Uniprot编号Ρ00974[2013年1月2日访问数据库])、Kazal抑制物（胰 分泌性胰蛋白酶抑制物）、Kazal抑制物（胰分泌性胰蛋白酶抑制物）、卵类粘蛋白、a 1抗 胰蛋白酶、皮质醇结合球蛋白、中心素（[SERPINA9/GCET1 (生发中心B细胞表达的转录物 I) ]、PI_6 (Sun 等人 1995)、PI_8 (Sprecher 等人 1995)、Bomapiru进化枝 A 丝氨酸蛋白酶抑 制蛋白[例如 Serpina3(NCBI 基因 ID :12)、Serpina6(NCBI 基因 ID :866)、Serpinal2(NCBI 基因 ID :145264)、SerpinalO (NCBI 基因 ID :51156)、Serpina7(NCBI 基因 ID :6906)、 Serpina9(NCBI 基因 ID :327657)、Serpinall (NCBI 基因 ID :256394)、Serpinal3(NCBI 基因 ID :388007)、Serpina2 (NCBI 基因 ID :390502)和 Serpina4 (NCBI 基因 ID :5104)]、 Yukopin(Serpinbl2 ;基因 ID :89777)、抗痛素、苯甲脒、3, 4-二氯异香豆素、二异丙基氟磷 酸酯和甲磺酸加贝酯。在其他实施方案中，选择以上抑制物之一。
[0073] 抑蛋白酶肽的代表性前体序列是：
[0074] MKMSRLCLSV ALLVLLGTLA ASTPGCDTSN QAKAQRPDFC
[0075] LEPPYTGPCK ARIIRYFYNA KAGLCQTFVY GGCRAKRNNF
[0076] KSAEDCMRTC GGAIGPffENL(SEQ ID N0:3)〇
[0077] 这100个残基当中，残基1-21是信号肽，22-35和94-100是前肽并且成熟链BBI 链由残基36-93 (58个AA)组成。
[0078] 在其他实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的基于油的液态制剂包含分 离的BBI和分离的KTI两者，在更具体的实施方案中包含分离的BBI和分离的KTI3两者。 如本文所用的"分离的KTI"指相对于其他组分富含KTI的制备物。在多种实施方案中，在 所述的方法和组合物中利用的KTI制备物是至少85%纯的，如通过SDS-PAGE、亮蓝染色或 成像仪定量法（例如根据本文所述的方案）所评定。在其他实施方案中，KTI制备物的蛋 白质含量大于95%，如通过BCA测定法所测量。在药物组合物的情况下，这些值涉及在KTI 与药物组合物的一种或多种其他组分混合之前KTI的特征。在其他实施方案中，KTI制备 物含有5 %或更少的BBI，如通过SDS-PAGE所评定。在其他实施方案中，KTI制备物含有小 于0. 1 %高分子量杂质（换而言之，分子量大于30, 000的物质）。在其他实施方案中，KTI 已经在不使用PEG的情况下分离。
[0079] 在仍更具体的实施方案中，所描述的方法和组合物包含所描述的BBI和KTI，在更 具体的实施方案中包含BBI和KTI3,作为仅有的蛋白酶抑制物。在其他实施方案中，所描述 的方法和组合物包含KTI和抑蛋白酶肽，在更具体的实施方案中包含KTI3和抑蛋白酶肽， 作为仅有的蛋白酶抑制物。在其他实施方案中，分离的BBI、分离的KTI和抑蛋白酶肽均存 在于该基于油的液态制剂中。
[0080] 在其他实施方案中，分离的KTI3具有至少抑制0. 8、0. 9、1. 0、1. 1、1. 2或I. 3mg 胰蛋白酶/mg抑制物的活性。在其他实施方案中，KTI3的活性为抑制0. 8-1. 8、0. 9-1. 8、 1. 0-1. 8、1. 1-1. 8、1. 2-1. 8或I. 3-1. 8mg胰蛋白酶/mg抑制物。在更具体的实施例中， KTI3的活性是抑制0. 8-1. 7mg胰蛋白酶/mg抑制物。在其他实施方案中，该活性是抑制 0. 8-1. 4mg胰蛋白酶/mg抑制物。
[0081] 在其他优选实施方案中，分离的KTI是重组KTI，例如由已经工程化以表达KTI的 微生物（如细菌）产生的KTI。在其他仍优选的实施方案中，KTI是合成性KTI。合成性KTI 的例子是已经在无细胞装置如肽合成仪中产生的KTI。
[0082] 其他实施方案涉及所述药物组合物中存在的抗胰凝乳蛋白酶活性对组合物的抗 胰蛋白酶活性的比率。在一些实施方案中，这个参数在1.5:1和1:1之间，包括1.5:1和 1:1。在更具体的实施方案中，该比率可以在1. 4:1-1. 1:1之间，包括1. 4:1和1. 1:1。在更 具体的实施方案中，该比率可以在1. 35:1-1. 2:1之间，包括1. 35:1和1. 2:1。
[0083] 在某些实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的BBI和/或KTI (如果存在 的话）已经随防腐剂一起储存。在其他实施方案中，BBI和/或KTI已经在不使用防腐剂 的情况下制备并储存。
[0084] 在某些实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的BBI和/或KTI (如果存在 的话）从大豆粉获得。术语"大豆粉"指从大豆（Glycine max)物种获得的粉末。在其他 实施方案中，可以利用来自大豆属（Glycine)的任何物种。用于获得大豆粉的方法是本领 域熟知的。所述的方法被认为适用于任何类型的大豆粉，而无论它怎样产生。
[0085] 治疗件蛋白
[0086] 在一些实施方案中，用于本文所述的组合物和方法的治疗性蛋白在纳入所述的药 物组合物中之前分离。在这个方面，"分离"排除将治疗性蛋白作为含有大量掺杂性蛋白质 的均化组织制备物或其他形式提供。分离的蛋白质或肽的优选例子是重组蛋白或肽。一个 甚至更优选的实施方案是合成性蛋白质，换而言之在无细胞装置中产生的蛋白质。本领域 技术人员根据本申请公开的内容理解，野生型和突变的治疗性蛋白均可以利用。
[0087] 某些蛋白质和肽已知是胰蛋白酶和/或胰凝乳蛋白酶的特异性抑制物，包括但不 限于本文所述的作为胰蛋白酶抑制物和/或胰凝乳蛋白酶抑制物的那些。这类蛋白质不旨 在用作所述组合物中的治疗性组分，并且从本文所用的"治疗性蛋白"定义排除。
[0088] 本领域技术人员根据本申请公开的内容理解，多种治疗性蛋白可以用于所描述的 方法和组合物中。在某些实施方案中，治疗性蛋白的大小是达100千道尔顿（kDa)，一般在 I-IOOkDa之间，包括1和lOOkDa。在更具体的实施方案中，该大小是达90kDa。在其他实施 方案中，该大小是达80kDa。在其他实施方案中，该大小是达70kDa。在其他实施方案中，该 大小是达60kDa。在其他实施方案中，该大小是达50kDa。优选地，该大小在l-90kDa之间， 包括1和90kDa。在其他实施方案中，该大小在l-80kDa之间，包括1和80kDa。在其他实 施方案中，该大小在WOkDa之间，包括1和70kDa。在其他实施方案中，该大小在l-60kDa 之间，包括1和60kDa。在其他实施方案中，该大小在l-50kDa之间，包括1和50kDa。
[0089] 适用于本文中的治疗性蛋白包括经修饰（即，通过非氨基酸部分与蛋白质共价连 接）的衍生物。例如，但不限于，该蛋白质包括已经例如通过用已知保护基团/封闭基团糖 基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化或衍生化所修饰的蛋白质。高分子量PEG可以在采用 或不采用多功能接头的情况下，通过PEG与其N末端或C末端的位点特异性连接或通过赖 氨酸残基上存在的ε-氨基，与治疗性蛋白连接。另外，衍生物可以含有一个或多个非经典 氨基酸。
[0090] 在某些更具体的实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用的治疗性蛋白选自 胰岛素、流感血凝素、流感神经氨酸酶、胰高血糖素、干扰素 Y、干扰素 β、干扰素 α、生长 激素、促红细胞生成素、GLP-I、GLP-I类似物、粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、肾素、生长激 素释放因子、甲状旁腺激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、降钙素、促黄体激素、胰高血糖素、 凝血因子（例如，因子VII、因子VIIIC、因子DC、组织因子（TF)和凝血酶）、抗凝血因子 (例如蛋白质C)、心钠素 （atrial natriuretic factor)、表面活性蛋白A(SP-A)、表面活性 蛋白B(SP-B)、表面活性蛋白C(SP-C)、表面活性蛋白D(SP-D)、纤维蛋白溶酶原激活物（例 如，尿激酶或人尿或组织型纤维蛋白溶酶原激活物（t-PA))、铃蟾肽（bombesin)、造血生长 因子（又称作集落刺激因子，多种）、肿瘤坏死因子（TNF)蛋白（例如，TNF-α、TNF-β、 TNFβ -2、4_1BBL)、脑啡肽酶、RANTES(活化时受调节、通常由T-细胞表达和分泌）、人巨噬 细胞炎性蛋白（MIP-1-α)、血清白蛋白、缪勒管抑制物质、松弛素、小鼠促性腺素释放激素、 DNA酶、抑制素、活化素、血管内皮生长因子（VEGF)、神经营养因子（例如，脑衍生神经营养 因子[BDNF])、神经营养蛋白-3、-4、-5或-6(NT-3、NT-4、NT-5或NT-6)、神经生长因子、血 小板衍生的生长因子（PDGF)、成纤维细胞生长因子（例如，a -FGF和β -FGF)、转化生长因 子（TGF)(例如，TGF-α 和 TGF-β、包括 TGF-1、TGF-2、TGF-3、TGF-4 和 TGF-5)、胰岛素样 生长因子-I和-Π (IGF-I和IGF-II)、des (l-3)-IGF-I (脑IGF-I)、胰岛素样生长因子结 合蛋白（包括 IGFBP-l、IGFBP-2、IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5 和 IGFBP-6)、角质形成细胞生 长因子、骨诱导因子、骨形态发生蛋白（BMP)-2、BMP-7、集落刺激因子（CSF)(例如，M-CSF和 GM-CSF)、白介素（IL)(例如IL-I至IL-13和IL-15、IL-18和IL-23)、超氧化物歧化酶、衰 变加速因子、趋化因子家族成员（例如嗜酸性粒细胞趋化因子（eotaxin)和MCP-1)和补体 因子（例如C3和C5)。
[0091] 在仍更具体的实施方案中，治疗性蛋白是胰岛素。可选地，治疗性蛋白可以是 GLP-I抑制物。在一个更具体的实施方案中，治疗性蛋白是胰高血糖素样肽。在其他实施 方案中，胰岛素和艾塞那肽（exenatide)存在于所描述的组合物中。在其他实施方案中，该 液态制剂基本上由胰岛素、艾塞那肽、二价阳离子螯合剂、分离的BBI和油组成。在其他实 施方案中，该液态制剂基本上由胰岛素、艾塞那肽、二价阳离子螯合剂、分离的BBI、至少一 种乳化剂和油组成。在另外的实施方案中，该液态制剂基本上由胰岛素、艾塞那肽、二价阳 离子螯合剂、分离的KTI3、抑蛋白酶肽和油组成。在另外的实施方案中，该液态制剂基本上 由胰岛素、艾塞那肽、二价阳离子螯合剂、分离的KTI3、抑蛋白酶肽、至少一种乳化剂和油组 成。
[0092] 本领域技术人员根据本申请公开的内容理解，多种类型的胰岛素适用于所描述的 方法和组合物。示例性胰岛素蛋白质包括但不限于野生型和突变的胰岛素蛋白，包括合成 人胰岛素、合成牛胰岛素、合成猪胰岛素、合成鲸胰岛素和胰岛素的金属复合物，如胰岛素 的锌复合物、鱼精蛋白锌胰岛素和珠蛋白锌。
[0093] 也可以利用多种类别的胰岛素，例如速效胰岛素、慢胰岛素、半慢胰岛素、特慢胰 岛素、NPH胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素或以上类型胰岛素的两种或更多种 的组合。
[0094] 在一个特别优选的实施方案中，所描述的方法和组合物的胰岛素是野生型人胰岛 素 （Uniprot ID P01308;SEQ ID N0:4)。110个氨基酸当中，第1-24氨基酸是信号肽，第 25-54氨基酸形成胰岛素 B链，第57-87氨基酸形成C肽，并且第90-110氨基酸形成胰岛 素 A链。在一个优选的实施方案中，人胰岛素作为重组蛋白在细菌细胞中产生。在另一个 优选实施方案中，合成产生人胰岛素。
[0095] GLP-I类似物在本领域中也称作GLP-I模拟物。本领域技术人员根据本申 请公开的内容理解，所描述的组合物可以包含至少一种以下GLP-I类似物：艾塞那肽 (Byetta? ;CAS 编号 141732-76-5 ;SEQ ID NO:5)、利西拉来（Iixisenatide) (CAS 编号 320367-13-3)、利拉鲁肽（CAS 编号 204656-20-2)、艾塞那肽-9(CAS 编号 133514-43-9)、 AC3174 ([Leu (14)]促膜岛素分泌肤-4，Amylin Pharmaceuticals, Inc.)、他司鲁泰 (CAS 编号 275371-94-3)、阿必鲁肽（albiglutide) (CAS 编号 782500-75-8)、索马鲁肽 (semaglutide) (CAS编号 910463-68-2)、LY2189265(dulaglutide? ;CAS编号 923950-08-7) 和CJC-1134-PC (与重组人白蛋白缀合的修饰艾塞那肽-4类似物，由ConjuChem?制造）。 全部CAS记录均在2011年12月19日访问。因此，在某些实施方案中，所描述的方法或组 合物利用任一种上文列出的GLP-I类似物。在其他实施方案中，选择上文列出的GLP-I类 似物之一。根据本文中展示的研究结果，本领域技术人员理解，其他GLP-I类似物也可以用 于所描述的方法和组合物中。
[0096] 乳化剂
[0097] 本文中提及乳化剂和去垢剂的"重量/重量"百分比利用制剂中油基础物（oil base)(例如鱼油）的量作为分母；因此，将500mg鱼油中的60mg Gelucir视为12% w/w，而 无论其他组分的重量。类似地，将与500mg鱼油混合的50mg Tween-80视为10% Tween-80。
[0098] 在某些实施方案中，除治疗性蛋白，螯合剂和BBI之外，在所描述的方法和药物组 合物中利用的基于油的液态制剂，或在其他实施方案中，存在的每种基于油的液态制剂还 包含脂肪酸的聚乙二醇（PEG)酯，例如单酰甘油、二酰甘油、三酰甘油的PEG酯或其混合物。 在更具体的实施方案中，PEG酯可以作为以下的混合物提供：(a)游离单酰甘油、游离二酰 甘油、游离三酰甘油或其混合物；和（b)脂肪酸的PEG酯，例如单酰甘油、二酰甘油、三酰甘 油的PEG酯或其混合物。在这个方面，术语"单酰甘油"、"二酰甘油"和"三酰甘油"各自不 必指单个化合物，而可以包括化合物的混合物，例如具有长度不同的脂肪酸的单酰甘油、二 酰甘油或三酰甘油的混合物。在某些优选的实施方案中，在所描述的方法和组合物中利用 的单酰甘油，二酰甘油或三酰甘油，例如用来生成PEG酯的那些，来自通常视为安全（GRAS) 的油源。GRAS油的例子是椰油、玉米油、花生油、大豆油、Myvacet9-45(C-18脂肪酸的二乙 酰化单酰甘油）。（a)的更具体实施方案是(： 8_(：18单酰甘油、二酰甘油和三酰甘油的混合物。 组分（b)的更具体实施方案是一种或多种C 8-CliJg肪酸的PEG单酯和二酯的混合物。
[0099] 在更具体的实施方案中，除脂肪酸的PEG酯之外，液态制剂还包含游离PEG。在仍 更具体的实施方案中，除PEG酯和游离PEG之外，存在额外的非离子型去垢剂，例如基于聚 山梨醇酯的去垢剂。
[0100] 在所述方法和组合物的仍更具体的实施方案中，液态制剂包含：(a) C8-C18单酰甘 油、二酰甘油和三酰甘油的混合物；(WC8-C18脂肪酸的混合物的PEG-32单酯和二酯；和（c) 游离PEG-32。在甚至更具体的实施方案中，组分（a)对组分（b) + (c)的总和的重量/重量 比在10:90-30:70之间（包括10:90和30:70);更具体地在15:85-25:75之间（包括15:85 和25:75);更具体地是20:80。在某些实施方案中，组分（a)-(c) -起占基于油的液态制剂 的8-16%重量/重量（包括8%和16% )。在更具体的实施方案中，该量是9-15% (包括 9%和15%)。在更具体的实施方案中，该量是10-14% (包括10%和14%)。在更具体的 实施方案中，该量是11-13 % (包括11 %和13 %)。在更具体的实施方案中，该量是12 %。
[0101] 在其他实施方案中，除治疗性蛋白、螯合剂和BBI之外，在所描述的方法和药物组 合物中利用的基于油的液态制剂还包含自乳化组分。尽管自乳化组分的一些实施方案是前 述段落中描述的组分的混合物，但是这些混合物不限制本文所用的术语"自乳化组分"的定 义。本文所用的"自乳化组分"指自发形成乳液的组分。一般，与含水介质接触时，这类组 分将形成乳液，形成细分散体，即微乳液（SMEDDS)。这类组分的某些实施方案包括三酰甘油 和高亲水 / 亲油平衡值（HLB;见 Griffin WC :Griffin WC: "Calculation of HLB Values of Non-Ionic Surfactants, "J Soc Cosmetic Chemists 5:259(1954))表面活性剂的三醜甘 油混合物。自乳化组分的其他实施方案具有蜡状、半固态稠度。
[0102] 优选地，在所描述的方法和组合物中利用的自乳化组分的HLB是10或更大。在其 他实施方案中，HLB在11-19之间（包括端值）。在其他实施方案中，它在12-18之间（包括 端值）。在其他实施方案中，它在12-17之间（包括端值）。在其他实施方案中，它在12-16 之间（包括端值），表示水包油（0/W)乳化剂。在其他实施方案中，它在13-15之间（包括 端值）。在其他实施方案中，它是14。自乳化组分的仍更具体的实施方案具有12-16(包括 端值）的HLB并且包含与PEG、游离三酰甘油和游离PEG结合的中等链和长链三酰甘油。在 其他实施方案中，自乳化组分具有12-16(包括端值）的HLB并且由与PEG、游离三酰甘油和 游离PEG结合的中等链和长链三酰甘油的混合物组成。在其他实施方案中，自乳化组分具 有14的HLB并且包含与PEG、游离三酰甘油和游离PEG结合的中等链和长链三酰甘油。在 其他实施方案中，自乳化组分具有14的HLB并且由与PEG、游离三酰甘油和游离PEG结合的 中等链和长链三酰甘油的混合物组成。
[0103] 某些更具体的实施方案利用包含（a)单酰甘油、二酰甘油、三酰甘油或其混合物； 和（b)脂肪酸的聚乙二醇（PEG)酯的自乳化组分。在这个方面，术语"单酰甘油"、"二酰甘 油"和"三酰甘油"均不需要指单个化合物，而可以包括化合物的混合物，例如具有不同长度 的脂肪酸的单酰甘油、二酰甘油或三酰甘油的混合物。更具体的实施方案是C 8-C18单酰甘 油、二酰甘油和三酰甘油的混合物。组分（b)的更具体实施方案是C8-C liJg肪酸的混合物 的PEG单酯和二酯的混合物。
[0104] 在其他更具体的实施方案中，自乳化组分还包含游离PEG。
[0105] 用于所描述的组合物和方法中的某些PEG部分含有5-100个单体。在更具体的实 施方案中，PEG可以含有15-50个单体。在仍更具体的实施方案中，PEG可以含有25-40个 单体。在更具体的实施方案中，PEG可以含有32个单体。
[0106] 在所述方法和组合物的仍更具体的实施方案中，本文中所用的自乳化组分包含： (a) C8-C18单酰甘油、二酰甘油和三酰甘油的混合物；(b) C8-C18脂肪酸的混合物的PEG-32单 酯和二酯；和（c)游离PEG-32 ;并且组分（a)对组分（b) + (c)的重量/重量比是20:80。在 某些实施方案中，这种组分占基于油的液态制剂的8-16%重量/重量（包括端值）。在更 具体的实施方案中，该量是9-15% (包括端值）。在更具体的实施方案中，该量是10-14% (包括端值）。在更具体的实施方案中，该量是11-13% (包括端值）。在更具体的实施方 案中，该量是12%。
[0107] 符合上述的自乳化组分的例子是Gelucire?44/14、Gelucire?53/10和 GeluCireTM50/13。更具体的实施方案是GeluCire TM44/14。后缀44和14分别指其熔点和 其亲水/亲油平衡值（HLB)。通过利用PEG-32对氢化椰油（中等链和长链三酰甘油）的聚 乙二醇解获得 Gelucire?44/14(Gattefoss6 SAS，Saint-Priest,法国）。它的亲水 / 亲油 平衡值为14。它由C8-C18单酰甘油、二酰甘油和三酰甘油的限定混合物（20% w/w) ;PEG-32 单酯和二酯以及游离PEG-32(80%W/w)组成。存在的主要脂肪酸是月桂酸，平均占总脂肪 酸含量的45%。它是由处于120A层状相具有螺旋构象的PEG酯部分和处于六方堆积的 酰基甘油部分组成的固态分散体。Gelu CireTM44/14的模拟胃肠道脂解作用的主要产物是 PEG-32单酯和二酯。在更具体的实施方案中，所描述的组合物包含约12% GeluCire44/14 作为唯一乳化剂，或在其他实施方案中，连同另一种乳化剂。在其他实施方案中，所描述的 组合物包含约 12% Gelucire44/14 和约 10% Tween-80。
[0108] 非离子型去垢剂
[0109] 在某些实施方案中，除自乳化组分之外，在所描述的方法和药物组合物中利用的 基于油的液态制剂还包含非离子型去垢剂。在某些实施方案中，非离子型去垢剂选自聚山 梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-80、聚桂醇400 (lauromacrogol400)、硬脂酸聚乙 二醇40酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯40、60、65和80、 蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素、正辛基葡糖苷、正-十二烷基葡糖苷、正-十二 烷基麦芽糖苷、辛酰-N-甲基葡萄糖酰胺、癸酰基-N-甲基葡萄糖酰胺、Trit 〇n?-X-100、 Trit〇nTM-X-114、ThesitTM、异十三酰基聚（乙二醇醚） n、3-[(3-胆酰胺丙基）二甲基氨 基]_1_丙横酸盐（CHAPS)、3_[(3_胆醜胺丙基）二甲基氨基]_2_轻-1-丙横酸盐（CHAPSO) 和N-十二烷基=N，N-二甲基-3-氨基-1-丙磺酸酯。在其他实施方案中，选择上文列出 的非离子型去垢剂之一。
[0110] 在某些更具体的实施方案中，在所描述的方法和组合物中使用的非离子型去垢剂 是基于聚山梨醇酯的去垢剂。基于聚山梨醇酯的去垢剂的例子是通过聚乙氧基化脱水山梨 糖醇与脂肪酸共价结合所衍生的去垢剂。基于聚山梨醇酯的去垢剂的更具体实施方案是聚 山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40和聚山梨醇酯-80。
[0111] 例如，聚山梨醇酯80 (Tween-80)是从聚乙氧基化脱水山梨糖醇和油酸衍生并具 有以下结构的非离子型去垢剂：
[0112]

【权利要求】
1. 包含基于油的液态制剂的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制剂包含达 100千道尔顿的治疗性蛋白、二价阳离子的螯合剂和分离的BBI。
2. 根据权利要求1所述的口服药物组合物，其中，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝 胶电泳（SDS-PAGE)测量，所述BBI已经纯化到至少85%的纯度。
3. 根据权利要求1所述的口服药物组合物，其中，通过BCA(二羧基二喹啉）的测定法， 所述BBI已经纯化到大于95%的蛋白质含量。
4. 根据权利要求1所述的口服药物组合物，其中，所述BBI含有小于0. 1 %高分子量杂 质。
5. 根据权利要求1所述的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制剂还包含不同 于所述BBI的胰蛋白酶抑制物。
6. 根据权利要求5所述的口服药物组合物，其中，所述胰蛋白酶抑制物是KTI3。
7. 根据权利要求6所述的口服药物组合物，其中，通过SDS-PAGE测量，所述KTI3已经 纯化到至少85 %的纯度。
8. 根据权利要求6所述的口服药物组合物，其中，所述KTI3已经纯化到通过BCA测定 法所测量的大于95%的蛋白质含量。
9. 根据权利要求6所述的口服药物组合物，其中，所述KTI3含有小于0. 1%高分子量 杂质。
10. 包含基于油的液态制剂的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制剂包含达 100千道尔顿的治疗性蛋白和二价阳离子的螯合剂，并且所述液态制剂具有抑制至少40mg 胰凝乳蛋白酶/ml液态制剂的抗胰凝乳蛋白酶活性。
11. 根据权利要求10所述的口服药物组合物，其中，所述液态制剂还包含抑制至少 20mg胰蛋白酶/ml液态制剂的抗胰蛋白酶活性。
12. 根据权利要求1-11中任一项所述的口服药物组合物，其中，所述治疗性蛋白选 自：胰岛素、流感血凝素、流感神经氨酸酶、胰高血糖素、干扰素 Y、干扰素 β、干扰素 α、 生长激素、促红细胞生成素、GLP-1、GLP-1类似物、粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、肾素、 生长激素释放因子、甲状旁腺激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、降钙素、促黄体激素、胰高 血糖素、凝血因子、抗凝血因子、心钠素、表面活性蛋白A(SP-A)、表面活性蛋白B(SP-B)、 表面活性蛋白C(SP-C)、表面活性蛋白D(SP-D)、纤维蛋白溶酶原激活物、铃蟾肽、造血生 长因子（集落刺激因子，多种）、肿瘤坏死因子（TNF)蛋白、脑啡肽酶、RANTES(活化时受 调节，通常是T-细胞表达和分泌）、人巨噬细胞炎性蛋白（MIP-1-α )、血清白蛋白、缪勒 管抑制物质、松弛素、小鼠促性腺素释放激素、DNA酶、抑制素、活化素、血管内皮生长因子 (VEGF)、神经营养因子、神经营养蛋白-3、神经营养蛋白-4、神经营养蛋白-5或神经营养蛋 白-6 (NT-3、NT-4、NT-5或NT-6)、神经生长因子、血小板衍生的生长因子（PDGF)、成纤维细 胞生长因子、转化生长因子（TGF)、胰岛素样生长因子-I和胰岛素样生长因子-II (IGF-I和 IGF-II)、des(l-3)-IGF-I (脑 IGF-I)、胰岛素样生长因子结合蛋白 l(IGFBP-l)、IGFBP-2、 IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5、IGFBP-6、角质形成细胞生长因子、骨诱导因子、骨形态发生蛋 白（BMP)-2、BMP-7、集落刺激因子（CSF)、白介素（IL)、超氧化物歧化酶、衰变加速因子、趋 化因子家族成员和补体因子。
13. 根据权利要12求所述的口服药物组合物，其中，所述治疗性蛋白选自胰岛素和 GLP-1类似物。
14. 根据权利要求1-13中任一项所述的口服药物组合物，其中，所述螯合剂是EDTA。
15. 根据权利要求中1-14任一项所述的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制 剂还包含单酰甘油、二酰甘油、三酰甘油或其混合物的聚乙二醇（PEG)酯。
16. 根据权利要求15所述的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制剂还包含游 离的PEG。
17. 根据权利要求15所述的口服药物组合物，其中，所述PEG酯作为以下的混合物提 供：(a)单酰甘油、二酰甘油、三酰甘油或其混合物；和（b)脂肪酸的聚乙二醇（PEG)酯。
18. 根据权利要求17所述的口服药物组合物，其中所述混合物的部分（a)包含C8-C18 单酰甘油、二酰甘油和三酰甘油。
19. 根据权利要求17所述的口服药物组合物，其中，所述混合物的部分（b)包含C8-C18 脂肪酸的混合物的PEG单酯和二酯。
20. 根据权利要求17所述的口服药物组合物，其中，所述混合物的部分（a)包含C8-C18 单酰甘油、二酰甘油和三酰甘油；所述混合物的部分（b)包含C8-C18脂肪酸的混合物的 PEG-32单酯和二酯；所述基于油的液态制剂还包含（c)游离PEG-32 ;并且所述混合物的部 分（a)对所述混合物的部分（b)和（c)的总和的重量/重量比在10:90和30:70之间，包 括端值。
21. 根据权利要求20所述的口服药物组合物，其中，（a)、(b)和（c) 一起占所述基于油 的液态制剂的8-16%重量/重量，包括端值。
22. 根据权利要求15-21中任一项所述的口服药物组合物，还包括非离子型去垢剂。
23. 根据权利要求22所述的口服药物组合物，其中，所述非离子型去垢剂是基于聚山 梨醇酯的去垢剂。
24. 根据权利要求23所述的口服药物组合物，其中，所述基于聚山梨醇酯的去垢剂是 聚山梨醇酯80。
25. 根据权利要求24所述的口服药物组合物，其中，所述聚山梨醇酯80占所述基于油 的液态制剂的3-10%重量/重量，包括端值。
26. 根据权利要求1-25中任一项所述的口服药物组合物，其中，所述油是鱼油。
27. 根据权利要求1-26中任一项所述的口服药物组合物，其中，所述基于油的液态制 剂是无水的。
28. 根据权利要求1-27中任一项所述的口服药物组合物，还包含抵抗胃中降解的包 衣。
29. 根据权利要求28所述的口服药物组合物，其中，所述包衣是pH敏感胶囊。
30. 根据权利要求28所述的口服药物组合物，其中，所述包衣是软明胶胶囊。
31. 根据权利要求1-30中任一项所述的口服药物组合物，用于向受试者口服施用治疗 性蛋白。
32. 根据权利要求1-30中任一项所述的口服药物组合物在制备向受试者口服施用治 疗性蛋白的药物中的用途。
33. 向受试者口服施用治疗性蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：向受试者施用根 据权利要求1-30中任一项所述的口服药物组合物，由此向受试者口服施用治疗性蛋白。
【文档编号】A61K9/08GK104244969SQ201380018355
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年1月31日 优先权日:2012年2月1日
【发明者】亚伯拉罕·赫斯赫克 申请人:奥拉姆德有限公司