1.定点突变LDLR基因的方法,为采用CRISPR/Cas9方法进行定点突变,其特征在于:所述CRISPR/Cas9方法中使用的LDLR基因靶序列为靶序列1或靶序列2,所述靶序列1为如下B1)、B2)或B3):
B1)序列表中序列3的核苷酸序列;
B2)与B1)限定的DNA序列具有75%或75%以上同一性的由B1)衍生的DNA序列;
B3)在严格条件下与B1)限定的DNA序列杂交的由B1)衍生的DNA序列;
所述靶序列2为如下C1)、C2)或C3):
C1)序列表中序列4的核苷酸序列;
C2)与C1)限定的DNA序列具有75%或75%以上同一性的由C1)衍生的DNA序列;
C3)在严格条件下与C1)限定的DNA序列杂交的由C1)衍生的DNA序列。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述定点突变LDLR基因的方法,包括向受体动物细胞中导入靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因与Cas9的编码基因,得到LDLR基因被定点突变的动物细胞。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因通过表达载体3导入所述受体动物细胞中,所述表达载体3为含有所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因的表达盒的表达载体;
所述Cas9的编码基因通过表达载体2导入所述受体动物细胞中,所述表达载体2为含有所述Cas9的编码基因的表达盒的表达载体。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于:所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的序列为将序列表中序列5或序列6中的T替换为U得到的序列;所述靶向LDLR基因靶序列的gRNA的编码基因为序列表中序列5或序列6所示的DNA分子。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:所述受体动物细胞为下述H1或H2:
H1、哺乳动物细胞;
H2、猪细胞。
6.下述任一产品:
P1、权利要求1-3中任一所述gRNA;
P2、权利要求1-3中任一所述gRNA的编码基因;
P3、含有权利要求1-3中任一所述gRNA的编码基因的表达盒;
P4、含有权利要求1-3中任一所述gRNA的编码基因的重组载体。
7.定点突变LDLR基因的成套试剂,其特征在于:所述成套试剂由权利要求6所述产品和下述M1-M3中的任一种组成;
M1、Cas9的编码基因;
M2、含有Cas9的编码基因的表达盒;
M3、含有Cas9的编码基因的表达载体。
8.下述任一应用:
X1、权利要求1所述LDLR基因靶序列在定点突变LDLR基因中的应用;
X2、权利要求6所述产品在定点突变LDLR基因中的应用;
X3、权利要求7所述成套试剂在定点突变LDLR基因中的应用。
X4、权利要求1所述LDLR基因靶序列在制备LDLR基因定点突变动物模型中的应用;
X5、权利要求6所述产品在制备LDLR基因定点突变动物模型中的应用;
X6、权利要求7所述成套试剂在制备LDLR基因定点突变动物模型中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于:所述动物为哺乳动物。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:所述哺乳动物为猪。