一种鸽性别分子鉴定方法及所用引物对与流程

文档序号:12249854阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于鸽性别分子鉴定的引物对,其上游引物和下游引物的碱基序列分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

2.一种鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)、提取待测对象的DNA作为模板并用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示引物进行PCR扩增;

2)、将步骤1)中PCR扩增得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳并通过电泳结果鉴定鸽性别。

3.如权利要求2所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,所述步骤1)中,DNA提取自待测对象的羽毛的毛囊。

4.如权利要求3所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,毛囊DNA的提取步骤包括:

采集羽毛,取羽根部位并剪碎,经裂解缓冲液和蛋白酶K预处理后,用苯酚氯仿法抽取DNA。

5.如权利要求4所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,采集得到的羽毛放入生理盐水或无水乙醇中冷藏保存。

6.如权利要求4所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,当羽毛样品量较少时,将裂解缓冲液和蛋白酶K预处理后得到的含DNA的混合液直接用于后续的PCR反应;

或将裂解缓冲液和蛋白酶K预处理步骤替换为用Chelex 100作为介质溶解消化毛囊DNA。

7.如权利要求2所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,在步骤1)所述PCR扩增的反应体系中,上游引物和下游引物的浓度为7~13μM,DNA模板的浓度≥100ng/μl。

8.如权利要求2所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,在步骤1)所述PCR扩增的反应程序中,退火温度为50℃~58℃,反应循环次数为30~40个循环。

9.如权利要求2所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,在步骤2)中,所述琼脂糖凝胶电泳采用的为1.5%~2.5%的琼脂糖凝胶。

10.如权利要求2~9任一项所述的鸽性别的分子鉴定方法,其特征在于,在步骤2)的电泳结果中,同时扩增出482bp和380bp目的条带的模板对应的为雌性鸽子;只扩增出482bp目的条带的模板对应的为雄性鸽子。

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