一种大豆蛋白酶抑制剂的纯化方法与流程

文档序号:12399405阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大豆蛋白酶抑制剂的纯化方法,其特征在于:该方法包括如下步骤:

(1)活性炭吸附脱色过程:将一定量的活性炭加入水解液,在40℃~60℃下搅拌1.5h~2.5h后过滤离心,去除活性炭;

(2)超滤:料液用4kDa~2kDa 的超滤膜于40℃~60℃, 0.lMPa~0.2MPa 对料液超滤30min~50min ;

(3)凝胶排阻色谱分离

1)凝胶层析柱的制备

称取10g Sephadex LH-20用250mL洗脱液在沸水浴中加热搅拌3h,加热过程中需不断补充洗脱液,静置过夜,充分溶涨,得到凝胶悬浮液;

先在层析柱内加入约1/3柱高的洗脱液,关闭出口,在搅拌下将凝胶悬浮液LH-20缓慢注入柱子中,待自然沉降1-2cm后,打开出口,继续加入凝胶悬浮液加到所需高度为止,并在胶面上加一片有机膜以保护胶面,最终柱体积为2*30cm;

2)上柱:将一定体积的大豆蛋白水解上清液以3.0ml/min速度通过交联羟丙基葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20,用二次水洗脱,合并流出液;

(4)蛋白酶抑制剂的真空冷冻干燥:在真空度15~20mbar,制冷温度-45~-55℃下,分别对凝胶层析柱分离得到三酶水解混合肽进行真空冷冻约24~30h,便可得到大豆蛋白酶抑制剂 。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,活性炭的量为1g/L蛋白质水解液,吸附时间为1.5h~2.5h。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,4kDa~ 2kDa 的超滤膜于40℃~60℃,O.lMPa~O.2MPa 对料液超滤30min~50min。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)的1)中,所制备的凝胶层析柱为Sephadex LH-20。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中,所用洗脱液为50mmol/L三羟甲基氨基甲烷/HCl+0.lmol/L氯化钠(pH=8.O)。

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