人类多能性类胚胎干细胞先驱细胞的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种类胚胎干细胞先驱细胞群，该细胞群是通过系统性筛选人类间叶基质干/先驱细胞并通过选自于由CD34、CD117、CD133、CD201及GloboH所组成的群组的细胞抗原进行细胞分选，而从人类组织中分离，以及将该分选的细胞培养于添加至少一或多种类固醇及一或多种生长因了的培养基中。本发明的细胞会表达CD34并于初代具有球状细胞聚落生成，且会表现表达多能性类胚胎干细胞(ESCs)的特征。
【专利说明】人类多能性类胚胎干细胞先驱细胞
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一群前驱/先驱细胞，其特别富集有多能性类胚胎干细胞间叶共同前 驱细胞（mesenchymal common progenitor cells,MCPCs)群，亦涉及富集这些细胞的方法。
【背景技术】
[0002] 在再生医学中，鉴别出高度安全且有效的干细胞来源，为发展生物材料，用以修复 及更新损坏及具缺陷的组织的第一步。人类胚胎干细胞（hESCs)可保持为未分化的状态； 但当将其培养于适当环境中时，便会开始自发地分化为多种不同型态的细胞。这一重要的 启示，在于胚胎干细胞的培养可作为生产多种不同细胞型态的来源。然而，这种方法却非有 效率的方法，原因在于仍须控制胚胎干细胞的分化(参阅：干细胞：科学进度及未来研究方 (n](Stem Cells:Scientific Progress and Future Research Directions)。 Department of Health and Human Sevice，2001 年 6 月）。
[0003] 间叶干细胞或MSCs为多能性干细胞，可分化为多种不同的细胞型态。MSCs可从胎 盘、脂肪组织、肺、骨髓、牙髓及血液分离。已知MSCs于活体外或活体内可分化的细胞型态 包括成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞及β-胰岛细胞。从骨髓中可发现稀少的MSCs， 在10, 000有核细胞中占约1个。虽然该MSCs并非永生的，但这些细胞在培养时，具可增殖 数倍的能力，且仍维持其生长及分化多向的潜能。Pittenger等人(科学284, 143(1999)) 公开了分离的间叶(干）细胞都一致表达 SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、 CD124及其它许多表面蛋白；然而这些间叶细胞不表达造血细胞系的其它标记，包括脂多 醣体受器⑶14、⑶34,及白血球共同抗原⑶45。MSCs可通过许多分子(包含⑶44及⑶105) 的表达以及不表达造血性标记⑶34、⑶45及⑶14来鉴定。
[0004] 报导指出，羊膜的间叶基质细胞及人类绒毛膜的间叶基质细胞可从胎盘中分离。 这些细胞的表面抗原表达，如下表A所示，显示其无法表达⑶45、⑶34、⑶14及HLA-DR (Parolini 等人，干细胞 26:300-311，2008)。
[0005] 表A.羊膜的间叶基质细胞及人类绒毛膜的间叶基质细胞于2-4代时，其特定抗原 的表达
[0006]
【权利要求】
1. 一种富集化的多能性人类间叶共同先驱细胞(MCPCs)群，其被鉴定为具有至少以下 特征 ：CD14+、CD34+、CD117+、CD133 +(AC133+)、CD20Γ、Nestin+、SSEA3+、SSEA4 +及GloboH+的 间叶基质干/先驱细胞。
2. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其特征在于，该MCPCs具有下列特征中至少 一个：CD44+、CD54+、CD56+、CD105+、CD146+ 及 PDGFR+。
3. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其特征在于，其从人类体细胞组织分离。
4. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其为具有以下特征：CD14+，CD34+，CD117+，C D133+(AC133+)，CD201+，Nestin.，SSEA3+，SSEA4+，GloboH.，CD44+，CD54+，CD56+，CD105+，CD146+ 及TOGFR+的间叶基质干/先驱细胞。
5. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其分离自一人类体细胞组织。
6. 根据权利要求5所述的富集化的细胞群，其中该人类体细胞组织选自于由羊膜、绒 毛膜、脐带、子宫内膜、齿龈、骨髓及脂肪所组成的群组。
7. 根据权利要求6所述的富集化的细胞群，其中该人类体细胞组织为羊膜。
8. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其具有分化成外胚层细胞、中胚层细胞及 内胚层细胞的潜力。
9. 根据权利要求1所述的富集化的细胞群，其具有脂肪生成分化、成骨生成分化、软骨 生成分化、神经生成分化、心肌生成分化、内皮分化及肝分化的潜力。
10. -种制备如权利要求1的富集化的细胞群的方法，包含： 通过系统性筛选人类间叶基质干/先驱细胞，接着以选自于由⑶34、⑶117、⑶133、 CD201及GloboH及其组合所组成的群组的细胞抗原进行细胞分选，以从人类体细胞组织中 分离；以及 培养于添加至少一或多种类固醇及一或多种生长因子的培养基中。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中该人类体细胞组织选自于由羊膜、绒毛膜、脐 带、子宫内膜、齿龈、骨髓及脂肪所组成的群组。
12. 根据权利要求10所述的方法，其中该细胞分选为一荧光活化细胞分选（FACS)流式 细胞仪术。
13. 根据权利要求10所述的方法，其中该类固醇选自于皮质类固醇、胆固醇及其组合 所组成的群组。
14. 根据权利要求10所述的方法，其中该生长因子选自于由表皮生长因子（EGF)、纤 维母细胞生长因子（FGF)、类胰岛素生长因子（IGF)、胰岛素、血小板衍生生长因子（PDGF)、 IL-6、血小板生成素（TP0)及其组合所组成的群组。
15. -种组合物，其包含包埋于褐藻胶中的如权利要求1所述的富集化的细胞群。
16. -种用于干细胞培养的细胞供养层，其包含如权利要求1所述的富集化的细胞群。
17. -种干细胞小生境，其包含种在一支架上的如权利要求1所述的富集化的细胞群。
【文档编号】C12N5/077GK104204190SQ201180057856
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2011年10月18日 优先权日:2010年10月18日
【发明者】丹尼尔·子弼·施 申请人:尚翔股份有限公司