专利名称：康布瑞汀化合物的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，特别是有机磷酸酯类前体药物的一种新的制备方法。
背景技术：
1971年Folkman最早提出肿瘤生长是血管依赖性的。肿瘤血管内皮细胞增殖速度较正常组织中的内皮细胞增殖速度大约高50倍以上。因此使用血管抑制因子对肿瘤血管有相对特异性作用，而对正常组织内的血管不会造成明显影响(可能会干扰妊娠和月经的新生血管)。随着1982年第一个血管生成抑制剂的发现，1984年第一个血管生成活性蛋白的纯化等一系列工作的完成，上述观点为越来越多的证据所支持，并使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略。
康瑞汀即Combretastatin A-4(CA4)为南非Combretum caffrum树干中提取分离的具有抗肿瘤活性的二苯乙烯类化合物(US 4,996,237)。由于该化合物溶解性差，因此不宜直接用于药物组合物的制备。后来的研究发现，Combretastatin A-4经磷酸化产生前体药Combretastatin A-4磷酸二钠(CA4P)(US 5,561,122)，其溶解性增强，体内抗肿瘤活性大大提高。CA4P在体内迅速去磷酸化生成CA4，血浆半衰期为30min。CA4直接作用于内皮细胞，诱导增殖的内皮细胞凋亡，从而抑制血管生成。
Combretastatin A-4磷酸二钠(CA4P)的化学名称为3，4，5，4′-四甲氧基-顺式-二苯乙烯-3’-O-磷酸二钠，其结构式如下 由Combretastatin A-4制备CA4P，根据文献报道，有下列两种方法1、用双-(2、2、2-三氯乙基)磷酰氧酯和CA4反应，随后用锌和醋酸还原，再和碳酸氢钠或者氢氧化钠成盐得产品(WO 99/35150)；2、CA4和三氯氧磷或者三溴氧磷反应，再和碳酸氢钠或者氢氧化钠成盐得产品(CN 1465580)；第一种制备CA4P方法的原料较贵，条件苛刻，不易产业化大生产；第二种方法是“一锅法”，虽然简单，但由于CA4P极易溶于水，最后CA4P和无机盐很难分离，造成产品质量控制困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的CA4P的制备方法，该方法既能提高CA4P二钠盐质量，又能降低生产成本，易于工业化大生产。
本发明提供的CA4P合成路线如下
其中，R为(1)R＝But、Ph3C等烷基；(2)R＝CH2CH2Cl，CNCH2CH2、2，2，2-Cl3CCH2等烷基；(3)R＝p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、p-NO2C6H4CH2、o-NO2C6H4CH2等芳基或芳基甲基。
具体步骤为1、将氧氯化磷溶于惰性溶剂中，冷却至0℃以下，滴加醇或者酚，然后自然升温至室温反应3-4小时，先用减压蒸掉溶剂，再用油泵减压蒸出产品，制得磷酰二卤(II)。
2、将磷酰二卤(II)溶于惰性溶剂中，冷却至0℃以下，在氮气保护下，滴加CA4的惰性溶液，再加入适量的除酸剂，滴加完毕，然后升温于20-50℃反应16-24小时，将反应物倒入冰水中，用有机溶剂提取出中间体，减压蒸掉溶剂，重结晶得磷酸二酯(III)。
所述的除酸剂为三烷基胺、吡啶、无机碱等，优选的为三乙胺。
3、将磷酸二酯(III)溶于惰性溶剂中，根据R基的不同，选择适宜的去除R取代基的方法，于30-100℃反应。再和碳酸氢钠或者氢氧化钠在甲醇中成盐，过滤，滤液加入丙酮析出白色固体，过滤，减压干燥即制得CA4P(I)。
所述的去除R取代基的方法分别为(1)、R＝But、Ph3C等烷基时，可采用酸水解的方法脱除；
(2)、R＝CH2CH2Cl，CNCH2CH2、2，2，2-Cl3CCH2等烷基时，可采用碱水解的方法脱除；(3)、R＝p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、p-NO2C6H4CH2、o-NO2C6H4CH2等芳基或芳基甲基时，可采用还原(Zn/醋酸，H2/Pd等)的方法脱除。
以上所述的惰性溶剂可选用二氯甲烷、丙酮、甲苯、四氢呋喃等，优选的为二氯甲烷。
本发明的优点和积极效果1、本发明所用的磷酰二卤容易制备，可以产业化大生产；2、本发明制备CA4P二钠盐的过程中，中间体和最终产品的质量都很容易控制；3、本发明所用原料易得，价格低廉，制得的CA4P二钠盐成本较低。
4、本发明所用操作方法简便，易于工业化大生产。
现结合实施例，对本发明作进一步描述。
实施例1叔丁氧磷酰二氯的制备将氧氯化磷30.7g(0.2mol)、二氯甲烷20ml加入100ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，滴加叔丁醇14.8g(0.2mol)，然后自然升温至室温反应3小时，先减压蒸掉溶剂，再用油泵减压蒸出产品32.3克，收率84.5％。
实施例22-氯乙氧磷酰二氯的制备将氧氯化磷30.7g(0.2mol)、二氯甲烷20ml加入100ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，滴加2-氯乙醇16.1g(0.2mol)，然后自然升温至室温反应3.5小时，先用减压蒸掉溶剂，再用油泵减压蒸出产品29.8克，收率75.5％。
实施例3对硝基苯氧磷酰二氯的合成将氧氯化磷30.7g(0.2mol)、二氯甲烷20ml加入100ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，滴加对硝基苯酚27.8g(0.2mol)的二氯甲烷溶液，然后自然升温至室温反应3小时，先用减压蒸掉溶剂，石油醚重结晶得产品36.6克，收率71.5％。
实施例4(O-叔丁)-CA4磷酸酯的合成将叔丁氧磷酰二氯19.1g(0.1mol)、二氯甲烷200ml加入1000ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，在氮气保护下滴加CA431.6g(0.1mol)的二氯甲烷溶液200ml，再加入三乙胺6ml溶于10ml二氯甲烷的溶液，滴加完毕，然后升温于20-50℃反应16小时，将反应倒入冰水中，分出有机层，水层用200ml二氯甲烷再提取一次，合并有机层，用水洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸掉溶剂，油状物用乙酸乙酯和石油醚1∶1重结晶，得白色产品43.5克，收率92.5％。
实施例5(O-2-氯乙基)-CA4磷酸酯的合成将2-氯乙氧磷酰二氯19.7g(0.1mol)、二氯甲烷200ml加入1000ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，在氮气保护下滴加CA431.6g(0.1mol)的二氯甲烷溶液200ml，再加入三乙胺6ml溶于10ml二氯甲烷的溶液，滴加完毕，然后升温于20-50℃反应20小时，将反应倒入冰水中，分出有机层，水层用200ml二氯甲烷再提取一次，合并有机层，用水洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸掉溶剂，油状物用乙酸乙酯和石油醚1∶1重结晶，得产品43.1克，收率90.5％。
实施例6(O-对硝基苯基)-CA4磷酸酯的合成将对硝基苯氧磷酰二氯25.6g(0.1mol)、二氯甲烷200ml加入1000ml的反应瓶中，冷却至0℃以下，在氮气保护下滴加CA431.6g(0.1mol)的二氯甲烷溶液200ml，再加入三乙胺6ml溶于10ml二氯甲烷的溶液，滴加完毕，然后升温于20-50℃反应24小时，将反应倒入冰水中，分出有机层，水层用200ml二氯甲烷再提取一次，合并有机层，用水洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸掉溶剂，油状物用乙酸乙酯和石油醚1∶1重结晶，得产品48.9g克，收率91.5％。
实施例7CA4P的合成将(O-叔丁)-CA4磷酸酯42.3g(0.09mol)，甲醇600ml加入1000ml的反应瓶中，通入干燥的氯化氢气体适量，升温于30-50℃反应18-22小时，过滤，减压蒸掉溶剂，油状物用乙酸乙酯重结晶，得CA4磷酸酯，过滤，减压干燥，用2N的氢氧化钠在甲醇中成盐，过滤，滤液加入丙酮析出白色固体，过滤，减压干燥，得白色产品34.1克，收率86％，熔点198-200℃(分解点)。
1H NMR(DMSO，400MHz)3.60(s，6H，3，5-OCH3)，3.63(s，3H，4’-OCH3)，3.69(s，3H，4-OCH3)，6.35(s，2H，H-2，6)，6.58(br s，2H，H-1a，1a’)，6.80(d，J＝8.4Hz，H-5’)，6.85(dd，1H，J＝2，12.8Hz，H-6’)，7.45(d，J＝2Hz，H-2’).
ESI MSm/z 463.1(M+Na)，441.1(M+H)，419.1(M-Na+H，基峰).
实施例8CA4P的合成将(O-2-氯乙基)-CA4磷酸酯42.9g(0.09mol)，甲醇600ml加入1000ml的反应瓶中，加入2N的氢氧化钠，升温于65℃反应4小时，过滤，滤液加入丙酮析出白色固体，过滤，减压干燥，得白色固体34.9克，收率88％，熔点198-200℃(分解点)。核磁共振氢谱测试结果与实施例7的结果一致。
实施例9CA4P的合成将(O-对硝基苯基)-CA4磷酸酯48.2g(0.1mol)，乙醇600ml加入1000ml的反应瓶中，加入锌粉30克，控温于20-50℃缓慢滴加冰乙酸60ml，控制外温于100℃回流3小时，过滤，减压蒸掉溶剂，油状物用乙酸乙酯重结晶，得CA4磷酸酯，过滤，减压干燥，和2N的氢氧化钠在甲醇中成盐，过滤，滤液加入丙酮析出白色固体，过滤，减压干燥，得白色固体33.3克，收率84％，熔点198-200℃(分解点)。核磁共振氢谱测试结果与实例7的结果一致。
权利要求
1.一种Combretastatin-A4磷酸酯二钠盐(CA4P，I)的制备方法，以Combretastatin A-4为原料，其特征在于先制备磷酰二卤(II)，然后经两步反应制得CA4P(I)，合成路线为 其中，R为(1)R＝But、Ph3C等烷基；(2)R＝CH2CH2Cl，CNCH2CH2、2，2，2-Cl3CCH2等烷基；(3)R＝p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、p-NO2C6H4CH2、o-NO2C6H4CH2等芳基或芳基甲基；具体步骤为(1)、将氧氯化磷溶于惰性溶剂中，冷却至0℃以下，滴加醇或者酚，然后自然升温至室温反应3-4小时，先用减压蒸掉溶剂，再用油泵减压蒸出产品，制得磷酰二卤(II)；(2)、将磷酰二卤(II)溶于惰性溶剂中，冷却至0℃以下，在氮气保护下，滴加CA4的惰性溶液，再加入适量的除酸剂，滴加完毕，然后升温于20-50℃反应16-24小时，将反应物倒入冰水中，用有机溶剂提取出中间体，减压蒸掉溶剂，重结晶得磷酸二酯(III)；(3)、将磷酸二酯(III)溶于惰性溶剂中，根据R基的不同，选择适宜的去除R取代基的方法，于30-100℃反应。再和碳酸氢钠或者氢氧化钠在甲醇中成盐，过滤，滤液加入丙酮析出白色固体，过滤，减压干燥即制得CA4P(I)；所述的去除R取代基的方法分别为a、R＝But、Ph3C等烷基时，可采用酸水解的方法脱除；b、R＝CH2CH2Cl，CNCH2CH2、2，2，2-Cl3CCH2等烷基时，可采用碱水解的方法脱除；c、R＝p-NO2C6H4、o-NO2C6H4、p-NO2C6H4CH2、o-NO2C6H4CH2等芳基或芳基甲基时，可采用还原(Zn/醋酸，H2/Pd等)的方法脱除。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的惰性溶剂是指二氯甲烷，丙酮，甲苯，四氢呋喃。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的惰性溶剂是二氯甲烷。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2所用的除酸剂是指三烷基胺，吡啶，无机碱。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于步骤2所用的除酸剂是三乙胺。
全文摘要
本发明提供了一种Combretastatin－A4磷酸酯二钠盐的新制备方法。该方法以Combretastatin A－4为原料，先制备磷酰二卤(II)，然后Combretastatin A－4与磷酰二卤(II)反应制得磷酸二酯(III)，再经水解、成盐两步反应制得CA4P(I)。本发明克服了现有技术的不足，既能提高CA4P二钠盐质量，又能降低生产成本，同时操作方法简便，易于工业化大生产。
文档编号C07F9/09GK1737004SQ20051005700
公开日2006年2月22日 申请日期2005年4月6日 优先权日2005年4月6日
发明者马世宁, 贺清凯, 蔡中文, 左小勇 申请人:西南合成制药股份有限公司